甲硝唑透皮吸收实验

一、实验目的：

1、寻找良好的助渗剂促进甲硝唑透皮吸收。

二、实验依据：

甲硝唑具有具广谱抗厌氧菌和抗原虫的作用，一般都作为片剂供药用，但其具有体外经皮渗透性，通过添加促进其透皮吸收的助渗剂应该能制备良好的透皮吸收药。不同的助渗剂的作用原理不同，作用效果也不一样，例如：氮酮作用原理是改变脂质双分子层致密性，对细胞内蛋白质无作用；冰片冰片的促进机理与细胞膜类脂分子运动有序程度有关；薄荷醇破坏角化细胞间质，造成角质层裂解剥落，使细胞间隙扩大，致皮肤外来的药物阻滞作用减小。通过实验比较，寻找好的助渗剂。

三、仪器设备和实验材料

1、动物家兔，雄性，体重2.0kg左右

2、药品和试剂甲硝唑氮酮冰片薄荷醇

3、仪器装置紫外分光光度计透皮装置

四、实验步骤

1、标准曲线的制定：精密称取甲硝唑10mg，用生理盐水配成10.0mg/100ml储备液。然后用生理盐水稀释此液成下列浓度42.0，34.0，26.0，18.0，10.0，2.0ug/ml，分别在277nm 波长测定吸光度（A）。以吸光度（A）为纵坐标，以浓度（mg、ml）为横坐标，求得甲硝唑回归方程为：

y=0.00273+0.0153x,r=0.999。

2、离体皮肤和制备：将家兔腹部的毛小心剪去，处死后立即剥离已去毛皮肤，去掉皮下组织，用生理盐水反复冲洗，直至无浑浊出现为止，用生理盐水纱布覆盖，置于冰箱冷冻室保存，供第二天使用。

3、释放液和接受液的制备释放液为1.0mg.ml`1的甲硝唑生理盐水溶液，接受液为生理盐水。

4、助渗剂的配制氮酮、冰片、薄荷醇分别用75%的乙醇和2%的吐温-80配成溶液。

5、皮肤的预处理皮肤在常温下解冻后，固定在扩散池上，分别加入不同的促进剂10ul，预处理12h。

6、透皮实验用已制好的兔皮在透皮装置上进行体外透皮实验，释放液用0.5ml，接受液5ml，实验温度在31°C，震荡次数为150次/分，扩散面积为0.5cm^2。于2、4、8、12、24h分别吸收接受液4ml，同时补加4ml的生理盐水。用752型紫外分光光度计陈德良甲硝唑的A值，测定波长为277nm。

7、结果处理将测得甲硝唑的A值代入标注曲线方程求得浓度，再按Dn=Cn’V=VCn+V’∑ n-1计算出每次接受池中的甲硝唑的渗透量。

由fick’s第一定律知道，在扩散到稳态后，单位皮肤药物的累计渗透量为：M=CV=DkCoh^-1t

其中药物的渗透系数P=Dh^-1,将累积药物两对时间t

进行现行回归拟合，此直线斜率即为渗透系数p。

8、统计方法采用方差分析进行统计处理。

五：实验结果预测

氮酮的助渗作用最好，因为其原理是改变脂质双分子层致密性，皮肤的保护作用主要体现在细胞膜上。

六本实验的创新点

甲硝唑一般作为片剂使用，方便但是15— 30%病例出现不良反应，以消化道反应最为常见，包括恶心、呕吐、食欲不振、腹部绞痛。改为皮肤给药方式能在局部起到作用，能避免这些不良反应。探讨片剂的皮肤给药方式就是本实验的亮点。七参考文献

李达泰冰片和氮酮对甲硝唑透皮吸收作用的比较中国临床医药研究杂志2003年总第92期

张恩娟范开华氮酮及丙二醇对甲硝唑溶液体外经皮渗透性的影响华西药学杂志。