MD PACIFIC 淋巴细胞分离液说明书

MD PACIFIC 淋巴细胞分离液说明书

主要用途：

淋巴细胞分离试剂是一种旨在通过葡聚糖和泛影酸钠混合液，达到特定比重，然后离心分层以获得纯化完整的单核细胞/淋巴细胞的权威而经典的技术方法。可以被用于动物（大鼠、小鼠等）单核细胞/淋巴细胞的分离、鉴定、染色、标记、培养、

DNA萃取、线粒体分离、细胞因子测定和细胞流式仪分析等研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，分离出色，性能

稳定，细胞活性保证。

技术背景：

全血溶液含有血清、各种蛋白因子、无核血红细胞、血小板、多核白细胞和单核白细胞等。为了获得纯化完整的单核白细胞

/淋巴细胞，采用Boyum（1968）的离心技术，可以方便快速地从全血和骨髓中分离。

产品内容：

淋巴细胞分离液（200）毫升

产品说明书1份

产品特点：

-密度变化率依照

Ficoll400泛影酸和氢氧化钠。-最佳分离溶液的密度为参照具体产品的标签-生理学参数-在

低粘度时高密度-无菌-即用型-溶液产品规格

检测标准：

热源检测结果：＜0.5EU∕ml

无菌检测结果：已检测

应用

人外周血中分离出淋巴细胞的最佳试剂。这种分离液同样可被用作从其它途径分离人的淋巴细胞，包括骨髓血细胞、脐带血

细胞及组织匀浆。

实验步骤

实验开始前，室温预热淋巴细胞分离液。然后进行下列操作。（注：上述方法适用于从外周血中分离淋巴细胞。如从骨髓、脐带及组织匀浆中分离，需要先去除红细胞后再进行上述步骤分离淋巴细胞。

1．准备无菌的锥形离心管

2．加入淋巴细胞分离液

3. 用hank’s 液或用户自备的PBS缓冲液1：1比例（如果全血样本粘稠，可适当增大比例）稀释抗凝过的全血样品。

3．小心沿着管壁，接近分离液层面，非常缓慢地加入新鲜的稀释过的全血样品在淋巴分离液上面。

（注意：切记不要搅浑淋巴细胞分离液）

4．小心放进台式离心机离心30分钟，速度为400g

5．小心取出离心管，切记不要震动

6．可见，最上层为淡红色透明血浆，其次为薄薄的致密白色环

状层，然后为离心液层，最后为红色沉淀在管底的红细胞层。7．小心抽掉白色环状层以上三分之二血浆液，切记不要搅动白色环状层

8．用无菌塑料吸管小心吸取白色环状层液体

9．移入到新的无菌的锥形离心管

10．加入用户自备的PBS缓冲溶液

11．轻柔上下倾倒混匀

12．放进台式离心机离心10分钟

13．小心倒掉上清液

14．用手指轻弹离心管至下，使白细胞颗粒群松动

15．（选择步骤）加入毫升用户自备的淋巴细胞完全培养液，进行细胞培养

16．（选择步骤）或加入毫升用户自备的白细胞冻存液，放进－80℃冻存

17．（选择步骤）或即刻进行各种后续实验（包括白细胞分离、鉴定、染色、标记、DNA萃取、线粒体分离、细胞因子测

定和细胞流式仪分析等）

分离图例

Ficoll-Paque

Ficoll-Paque

注意事项

1. 上述方法适用于从外周血中分离淋巴细胞。如从骨髓、脐带

及组织匀浆中分离，需要先去除红细胞后再进行上述步

骤分离淋巴细胞。

2. 所有操作均须无菌状态下进行。

3. 细胞分离液启封后应置4℃保存避免微生物污染。

4. 细胞分离液从冰箱取出后，不可立即使用，需待溶液温度升到室温时，摇匀后使用。

5. 操作时，在室温下进行（18-25℃）。

6. 组织，血液，细胞要求新鲜，避免冷冻和冷藏。

7. 全血样品采集须使用血液抗凝液。

8. 如果血液出现凝块，不宜进行分离操作。

9. 美德太平洋公司生产的细胞分离产品属于敏光型的。因此在运输和贮藏过程中应注意避光保温。由于各品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响分离效果，用户可以调节离心转数，调节离心的时间，

摸索最佳的分离条件（具体分离条件各实验室自定）。

保存方式

18-25℃避光保存。启封后置4℃保存。本品为真空包装，未启封前置于10℃以下易出现白色结晶，影响分离效果。

保存期限为2年。

天津美德太平洋科技有限公司

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