染色体数目众多的植物玻片制片技术
实验一 物染色体压片技1.
实验一植物染色体压片技术一、实验原理:植物染色体压片技术是利用化学或物理的方法,将具有分裂能力的细胞保持原有的分裂状态,并对其染色体进行染色,压片后观察它的染色体分裂的一种方法。
二、实验目的:植物染色体压片技术是细胞遗传学和细胞分类学等研究中应用最为普遍的基本技术,是其他新技术所不能完全取代的,是从事染色体研究的工作者首先应该掌握的一项基本的实验方法。
三、材料的制备:黑麦根尖(2n=14根尖材料的制备:1.浸泡:大、油、壳→浸泡24h(23~25℃;小、裸的不浸泡。
2. 发根:将材料放入具有团粒结构条件的土壤中培养(锯木屑、土壤、砾石、麦杆、谷草;最适温度(23~32℃;培养24h→再放入0~4℃冰处理1~7天。
目的:(1使分裂速度减慢,根尖长度整齐一致;(2调节工作时间。
再将材料从冰箱中取出又放回最适温度条件下培养1~2天;待根尖长度为1.5~2Cm即可处理。
3. 愈伤材料的制备:(适合春、夏两季用刀片将树杆割去保护组织露出伤口,用75﹪乙醇消毒包裹一天,再用50~75ppm赤霉素处理;几天后长出白色幼嫩的愈伤组织即可固定。
四、预处理:1. 方法:(化学和物理两种(1 化学方法:(适合所有生物a. 秋水仙素0.05~0.2﹪(白色粉末,易溶于水的巨毒药品;b. 0.002M 8-羟基喹啉(淡黄色晶体,用少量的乙醇溶解再稀释,对禾本科植物的随体表现很清楚;C.а-溴萘饱和液(淡黄色的乳浊液,易溶于乙醇和苯;难溶于水,100ml水中倒入1~2滴剧烈的振动5分钟;(以上abc三种药剂在15~18℃温度下处理3~5hd. 对二氯苯饱和液(淡黄色的晶体,难溶于水;具有强烈的腐蚀性,只能处理1~1.5h。
(2 物理方法:(适合禾本科作物,本次实验所采用冰水混合物在0~4℃温度下处理24h。
预处理的目的破坏或抑制纺锤体形成;增加中期图象,改变细胞质的粘度,使染色体缩短变粗,易于染色体的显带及研究。
五、固定:卡诺氏Ⅰ 3︰1 (乙醇︰醋酸;卡诺氏Ⅱ 6︰3︰1 (5︰3︰2(乙醇︰氯仿︰醋酸;固定的目的利用药剂迅速杀死正在分裂的细胞,使之保持细胞中的染色体处于被固定前的原有状态。
植物染色体压片法
第一部分植物染色体压片法一实验目的1. 学习并掌握根尖处理、染色、压片及制片观察的方法。
2. 观察有丝分裂各时期染色体的形态变化，了解有丝分裂全过程。
二实验原理高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎尖生长点及幼叶等器官的分生组织(分生区)，其中根尖是最常用的材料：①根尖取材容易，操作和鉴定也比其它器官与组织方便；②实验室内采用种子萌发后所长出的新鲜幼嫩根尖，不受植物生长季节的影响和限制，并且可以大量获得；③对于某些珍贵而又稀少的试验材料，取用自然条件下生长植株的根尖，比取用茎尖、花器等对材料的伤害要小得多；④采用实验室内种子发根，切取根尖后的种苗通常还可以进行正常种植，利于后续研究进行。
有丝分裂期在整个细胞周期中所占的时间相对较短，有丝分裂制片的主要目的是进行染色体鉴定，希望观察到更多分裂相，尤其是分裂中期相，通常要对材料进行不同的预处理。
预处理主要通过抑制和破坏纺锤丝的形成来获得更多的中期分裂相；同时，预处理还可改变细胞质的粘度，促使染色体缩短和分散，便于压片和观察。
常用的预处理有物理法、化学法、混合处理法等。
植物细胞的细胞壁对细胞形态和结构起支撑和保护作用，分生组织的细胞壁结构将分生细胞结合成一个整体，因此在压片之前需要采用适当方法软化或部分分解细胞壁使细胞间易于分离，这一操作称为解离。
同时，解离也可适当清除部分细胞质，使细胞质背景趋于透明化，便于观察染色体。
常用的解离方法主要有酸解法和酶解法。
酸解法：步骤简便、容易掌握。
根尖分生组织经过酸解和压片后，呈单细胞。
酸解法广泛用于染色体计数、核型分析和染色体畸变的观察及相关分析。
酶解法：常用于染色体显带技术或姊妹染色单体交换研究。
通过解离和压片，分生细胞的原生质体能够从细胞壁里压出，使染色体周围不带有细胞质或仅有少量细胞质，让后续制片处理直接作用于染色体。
在普通光学显微镜下观察染色体形态结构还需要对材料进行染色，通常采用染色体染色效果好而细胞质着色少的碱性染料、酸性染料或孚尔根试剂染色。
植物染色体的标本制备
植物染色体的标本制备目前，国内外常用的植物染色体制片技术可以分为两种，即压片技术和去壁低渗技术。
Belling(1921)提出植物染色体压片技术后，压片已成为植物染色体研究中最广泛应用的常规技术；但是由于植物细胞有坚实的细胞壁，染色体很难象动物染色体那样平整地贴在载玻片上，Omura 和Kurata(1978)把植物原生质体技术应用到水稻染色体研究之中，用纤维素酶、果胶酶和0.075mol.L-1氯化钾处理取得了一定的进展，陈瑞阳等人（1979、1982）提出了植物染色体标本制备的酶解去壁低渗技术，并在多种植物上得到广泛应用，成为当今植物染色体研究中的重要方法。
压片技术和去壁低渗技术在取材和预处理要求及其操作都是相同的，即两者的材料基础条件是相同的，但它们所采用的染色体分散方法是不同的。
压片法是以人工外加机械压力使染色体分散，而去壁低渗法是用酶分解细胞壁，低渗液使细胞膜吸胀、水表面张力使染色体分开。
两种技术各有其优缺点，前者操作快速简便、省材省时，后者染色体易于展开、且真实不变形，尤其是对成熟细胞多的植物组织，如芽、愈伤组织等材料有独到效果，本实验主要介绍去壁低渗染色体制片技术。
一、实验原理植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。
二、实验目的根尖染色体压片法，是观察植物染色体最常用的方法，也是研究染色体组型、染色体分带、染色体畸变和姊妹染色单体交换的基础。
学习醋酸洋红染色的具体操作方法，掌握植物有丝分裂制片技术，通过大量的制片观察，能比较快速准确地判断细胞有丝分裂前、中、后、末期的染色体图象，并对其典型制片照像。
三、实验材料大蒜（Aillumsativum）、洋葱（Aillumcepa）的鳞基或蚕豆（Viciafaba）的种子。
四、实验内容1、植物染色体制片技术训练，独立完成植物根尖、茎尖及幼叶的取材、预处理、固定、制片、染色等染色体制片全过程，并获得图象清晰、完整、高度分散的染色体典型图象制片；2、染色体显微照相技术训练，用生物摄影显微镜，摄制某新资源植物种典型的染色体图象照片40张，并从中挑选确定清晰的图片；3、细胞有丝分裂典型时期识别技能训练，通过大量的染色体图象观察，能比较快速准确地判断细胞有丝分裂前、中、后、末各个时期的。
常规压片法制作植物染色体玻片标本
常规压片法制作植物染色体玻片标本一、实验目的1、了解植物细胞周期中染色体的动态变化。
2、学习植物染色体常规压片技术。
二、实验原理植物染色体的常规压片技术是观察染色体常用的方法。
该技术以生长、分裂比较旺盛的植物根尖细胞为材料，经预处理、固定、解离、染色、压片等程序，就可以观察到较多的处于有丝分裂中期的细胞和染色体。
三、实验材料洋葱鳞茎或蚕豆种子。
四、实验器具及药品恒温培养箱，恒温水浴锅，显微镜，解剖器，载玻片及盖玻片，白瓷盘，秋水仙素，甲醇，冰醋酸，盐酸，乙醇，改良石炭酸品红（卡宝品红）。
卡宝品红染色液的配制：先配母液A 和B。
母液A：称取3 克碱性品红，溶解于100 毫升的70％酒精中（此液可长期保存）。
母液B：取母液A10 毫升，加入90 毫升的5％石碳酸水溶液，充分混匀，置37℃温箱温溶2-4小时（2 周内使用）。
母液C：取母液B55 毫升，加入6 毫升冰醋酸和6 毫升37％的甲醛。
充分混匀。
染色液：取母液C10—20 毫升，加入80—90 毫升45％的醋酸和1.0 克山梨醇（sorbitol）。
此染色液初配好时颜色较浅，放置二周后，染色能力显著增强，在室温下不产生沉淀而较稳定。
常温下可保存2年。
五、实验说明1.根尖由于取材方便，是观察植物染色体最常用的材料，有些植物种子难以发芽，或仅有植株而无种子，也可以用茎尖作为材料。
2.植物细胞分裂周期的长短不尽相同，通常在十到几十小时之间，温度明显地影响分裂周期，对于一个不太熟悉的实验材料，最好在特定温度下长根，掌握有丝分裂高峰期，以便得到更多的有丝分裂的细胞。
3.前处理的目的是降低细胞质的粘度，使染色体缩短分散，防止纺锤体形成，让更多的细胞处于分裂中期，一般在分裂高峰前，把根尖放到药剂中处理3—4 小时。
可处理的药剂很多，如秋水仙素、对二氯苯、8-羟基喹啉等。
4.解离的目的是使分生组织细胞间的果胶质分解，细胞壁软化或部分分解，使细胞和染色体容易分散压平，解离方法有酸解法和酶解法。
植物染色体制片
实验结果
9
实验报告
❖ 在制片的过程中有哪些需要注意的问题？ ❖ 为什么在压片前需要先经过酸水解？ ❖ 植物染色体制备和动物染色体制备的相同
点和主要区别。
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植物根尖染色体标本的制备
1
Hale Waihona Puke 目的要求❖ 掌握植物染色体标本的制备技术
2
实验原理
❖ 制备植物细胞的染色体标本，在取材上必 须选择细胞分裂较旺盛，而且取材较方便 的组织作为实验材料。如植物的根尖。
3
实验用品
1、器材：显微镜、水浴锅、载玻片、盖玻片、 镊子、刀片、烧杯等。
2、试剂： 0.1%秋水仙素；Carnoy固定液；1mol/L HCL；
改良苯酚品红 3、实验材料： 洋葱根尖
4
预处理：切取长约5mm的植物根尖，浸入 0.1%秋水仙素中，室温下处理3~6小时
将根尖放入1mol/L的盐酸中，60℃水浴， 恒温条件下解离10~15min。
解离后倒出HCl，水洗2次，每次3~5min。将 材料直接浸入改良苯酚品红中，盖上盖玻片。
用镊子或铅笔轻轻敲打，使根尖细胞分散开。
实验二植物染色体制片及有丝分裂观察
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ遗传学实验
植物染色体制片及有丝分裂观察
实验目的：
① 学习并掌握植物染色体玻片标本的制作方法; ② 观察植物细胞有丝分裂过程及各个时期的染色 体行为；
预习要求
实验目的
• 学习并掌握植物染色体玻片标 本的制作方法;
预习要求
流程: 材料要求,取材方法,实验 流程和各操作步骤实施原因 发根→预处理→固定→解离→ 低渗→ 软化→染色→压片→镜 检
解离的目的？如何判断解 离的效果？其他的解离方 法？
5 软化：将解离好的根尖冲洗后，放入45%醋酸 中软化10min左右。
请问解离与软化 的目的是什么？
6 染色：切取1-2mm的分生区，用改良苯酚品 红染液染色10-20min。
为保证染色的 充分要注意哪 些问题？
7 压片：盖上盖玻片，在酒精灯上烤片。然后 固定盖玻片，用铅笔垂直、用力敲击盖片几下，将 材料压成一层细胞。
取材时间？
• 2 预处理：将剪取的新鲜材料于0.02%秋水仙素溶 液中室温下处理3-4h。
预处理的目的？ 还有其他方法吗？
实验步骤：
3 固定：将经过预处理和未经预处理的材料冲 洗后转移至卡诺氏固定液中，室温下处理24h。水 洗放入70%乙醇中保存。
固定的作用？固定剂的组 成？对固定剂配制的要求？
4 解离：将冲洗后的根尖放入0.1mol/L的HCl 中， 60℃下处理8-10min（可视具体情况而定）。
实验材料
• 洋葱、大蒜的鳞茎，玉米、蚕豆的种子等。本实 验选用大蒜。
实验用品
• 用具：显微镜、剪刀、镊子、解剖针、载玻片、 盖玻片、水浴锅、酒精灯、铅笔、吸水纸等。 • 药品：蒸馏水、卡诺氏固定液、45%醋酸、秋水 仙素、改良苯酚品红染液等。
实验03低温诱导植物细胞染色体数目的变化
实验03 低温诱导植物细胞染色体数目的变化目的要求通过观察低温诱导植物染色体数目的变化，了解自然界出现多倍体的原因实验原理用低温处理植物分生组织细胞，能够抑制纺锤体的形成，以致影响染色体被拉向两极，使细胞也不能正常分裂。
结果，植物细胞染色体数目发生变化。
材料用具洋葱或大葱、蒜均为二倍体，卡诺氏液，改良苯酚品红染液，盐酸溶液，体积分数为95%的酒精溶液载玻片、盖玻片培养皿、滤纸、纱布、烧杯、镊子、剪刀实验步骤1）培养根尖：将洋葱放在装满清水的广口瓶，让洋葱的根尖接触水面。
（2）低温诱导：待洋葱长出1cm左右的不定根时，将整个装置放入冰箱的低温室（4℃），诱导培养36小时。
（3）固定细胞形态：剪去诱导处理的根尖约0.51cm，放入卡诺氏液中浸泡0.51小时，以固定细胞形态，然后用体积分数约95％的酒精冲洗2次。
（4）制作装片：取固定好的根尖，进行解离、漂洗、染色和制片4个步骤，具体操作方法与“观察根尖有丝分裂”实验相同。
（5）观察装片：先用低倍镜寻找染色体形态较好的分裂相。
视野中既有正常的二倍体细胞，也有染色体数目发生改变的细胞，发生染色体数目变化的细胞中染色体数目可能为正常细胞的二倍。
确认某个细胞发生染色体数目变化后、再用高倍镜观察。
(1)低温和秋水仙素诱导染色体数目加倍的原理：有丝分裂前期，低温和秋水仙素都能抑制纺锤体的形成；后期，着丝粒分裂后染色体数目加倍；末期，由于没有纺锤体，染色体不能被牵拉到细胞两极，细胞无法实现一分为二，从而使得细胞内的染色体数目加倍。
当温度恢复正常或秋水仙素被细胞代谢消耗完全之后，染色体数目加倍的细胞又通过正常的有丝分裂产生更多的染色体数目加倍的子代细胞。
(2)两次漂洗的对比：①时间不同：第一次漂洗在固定之后解离之前，第二次漂洗在解离之后染色之前；②试剂不同：第一次用95%酒精漂洗，第二次用清水漂洗；③目的不同：第一次是为了洗去多余的卡诺氏液，第二次是为了洗去多余的解离液。
玻片标本制作技术
一些含有矿物质的比较坚硬的动物组织要作成玻片标本时，常把材料 直接放在砂石上磨成薄片，此法即为磨片法。如珊瑚的骨骼、软体动 物的贝壳，脊椎动物的硬骨、角以及牙齿等都可以用此法制成玻片标 本。
第二节 植物材料玻片标本制作技术
一、常用实验种子植物的制片方 法
(一)洋葱表皮装片 (二)洋葱根尖纵切片(示细胞有丝分裂)
不是所有的情缘都能拥有，不是所有的爱，都能 携手同行，不是所有的故事，都可以写下完美的 结局……
最近很流行的一段话： “如果我用
你待我的方式来待你，恐怕你早已 离去！” 这句话，适合任何关系 ! 凡事换个角度，假如你是我，未必 能有我大度。
男人是条狼， 选对了保护你， 选错了折磨你！
女人是条蛇，选对了缠着你， 选错了毒死你！
磨片法第二节第二节植物材料玻片标本制作技术植物材料玻片标本制作技术一常用实验种子植物的制片方一洋葱表皮装片二洋葱根尖纵切片示细胞有丝分裂洋葱根尖细胞南瓜茎纵切片蚕豆幼根横切三蚕豆根横切片四南瓜茎纵切片及横切片二常用实验孢子植物的制片方法三细菌三型涂片四地钱生殖托纵切片第三节第三节动物材料玻片标本制作技术动物材料玻片标本制作技术一草履虫装片二水螅的整体装片和横切片三涡虫的整体装片及切片四蛔虫横切片五果蝇唾液腺染色体的制片六脊髓的神经细胞涂片七骨密质磨片草履虫接合生殖装片水螅带芽整体装片果蝇唾液腺染色体人类脊髓神经细胞
二、非切片法
1.涂片法
是一种将游离的细胞，动、植物中比较疏松的组织均匀地涂布在载玻片上的 一种制片方法。涂片材料有单细胞生物、小形藻类、血液，含有细菌的 培养液以及精巢、花药等
2.压片法
将植物或动物比较疏松的材料，如花药、根尖、水螅，蠕虫的精巢、果蝇 (或其他双翅目)幼虫的唾液腺等，用较小的压力压碎在载玻片上使成一薄 层的一种制片法。
植物染色体研究技术
二 地衣红 一种地衣中提取的紫红色染料。 配制方法 100ml45%冰乙酸置200ml三角烧瓶加热煮沸，移去 火源，缓缓（切记缓缓，否则沸腾喷溅）加入2g地衣红 粉末，搅动溶解。此为母液，装棕色瓶储存备用。母液用 45%冰乙酸稀释成1%地衣红染色液直接用于染色。 另有一种可以省略材料解离的方法是将上述母液取9 份与1份1mol/L HCl混合为A液，再将母液用45%乙酸稀 释成1%地衣红（B液）。 制片时，固定的材料稍加水洗，直接投入A液，酒精 灯加热数秒，室温放置30分钟，取出材料B液染色压片。 乙酸地衣红染色不能在压片前加热烘烤，只能在压片 之后进行，否则退色。地衣红易溶于酒精，制片不可用酒 精脱水封片。
A 离体处理 将根尖从植物体上切割下来，浸入处理液中进行前处理。 B 非离体处理 一般在植物原材料较小，如萌发的种子，而且是无土培养，可 以采用此方法。无须切割根尖，把整个种子浸泡于处理液中即可。此 方法的优点是根尖生长未受到断绝营养的影响，可以获得更多中期分 裂相的细胞。但很多材料无法应用该方法，又所需处理液较多。
C 正常栽培植株根 a 季节性强，一般只能在春季和夏季进行；b 生长状态一般要求 植株生长健壮。
鳞茎水培根 百合科、石蒜科鳞茎植物，如葱、蒜、百合等。优点是培养方便， 易于解决水气矛盾，根尖洁净而利于压片操作。 扦插条根 木本植物或多年生具地上茎草本：杨、柳、菊花。 归根结底，种子根尖取材是想方设法 使得根尖生长旺盛，分生组织细胞分裂指数 高，也就是有可能大量细胞同时处于分裂过 程中。这就需要给予培养材料最适宜的培养 条件。 质量好的根尖：可以看到大量根毛， 且为乳白色。
三 处理时间
处理时间受下面几个因素的影响，为其共同作用的结果。一般情 况下，处理时间控制在半个工作日。 A 材料 B 染色体大小 C 处理方法 D 处理液浓度 E 材料大小 F 处理液温度：多在室温。 具体材料的处理条件和时间由预实验摸索。当然，许多植物植物 都有人研究过，我们在计划实验之前，首先要参考别人的工作。如果 没有，可参照近缘物种的处理条件和时间。
染色体技术之制片技术的原理
三、比较：
植物染色体标本的制备最常用的方法是压片法， 但压片法的不足是由于细胞堆积致使染色体很难彻 底分散开。 而去壁低渗火焰干燥法则有效地克服了压片法 中存在的染色体分散不开，平展不开等不足，现已 广泛用于核型分析，染色体显带
原理：
有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，一般发生在植物的根 尖或茎尖的分生组织中。在有丝分裂时，细胞核与细胞质有 较大的变化，但以细胞核内染色体的变化最为明显，而且是 有规律的进行。 各种生物染色体在数目和形态上是相对恒定的，并随科属 种的不同而具有一定的特征。 人们若需了解某一物种的染色体数目，最有效的方法就是 观察有丝分裂的中期，这样可以得到较为准确的结果。
二、去壁低渗干燥火焰法
原理：
植物细胞有很坚实的细胞壁，染色体很难像动物染色体 那样平整地贴在载玻片上，可通过纤维素酶和果胶酶处理去 掉细胞壁；用低渗溶液处理可以提高染色体的分散程度。 去壁低渗干燥火焰法是：先用纤维素酶和果胶酶去除细胞 壁，得到原生质体，再将细胞进行低渗处理，即把细胞置于 低渗液（低浓度的kcl或蒸馏水）中，使细胞充分吸胀,染色 体分散，平展地铺在载玻片上，再用火焰干燥让染色体紧贴 在载玻片上。
植物染色体制片与观察实验报告
植物染色体制片与观察实验报告（洋葱组）同组成员：曹鉴云陈锦容刘艳马彦霞一、中文摘要：染色体（Chromosome），是细胞内具有遗传性质的物体，易被碱性染料染成深色，又叫染色质。
其本质是脱氧核甘酸，是细胞核内由核蛋白组成、能用碱性染料染色、有结构的线状体，是基因的载体。
这里我们用洋葱染色体作为代表使用压片法制片并且进行观察。
二、关键词：染色体洋葱压片法三、引言：洋葱（onion）是百合科（Liliaceae）葱属中以肉质鳞片和鳞芽构成鳞芽的2年生草本植物，其学名为Allium cepa L，染色体数为2n=2x=16。
由表1和图1可见,洋葱的8对染色体中,有7对(第1~7对)染色体,臂比在1·01~1·70之间,为中部着丝点染色体,1对(第8对),臂比为4·74,为近端部着丝点且带随体的染色体;依据STEB-BINS[4]的核型分类标准,洋葱的染色体核型在遗传进化上属较古老的2A型。
100多年来有关染色体与染色体组结构功能的研究一直是生命科学最活跃的研究领域之一，现今人们完成基因组测序后回到对染色体上进行基因定位和作图，因此有关染色体的研究在基因组合功能基因组时代都有重要意义，陈瑞阳教授历时25年的研究完成的《中国主要植物染色体研究》对我国2834种植物染色体数目进行了报道，完成了1045种植物的核型分析，积累了宝贵的染色体基础数据创建了我国植物染色体研究信息平台。
研究染色体进化与生物进化的有不可分割的关系,国际对染色体的化学成分,DNA含量,碱基组成和以染色体数目、形态、结构、大小等为特征的核型进化与物种形成和演化关系的研究,为揭示生物进化趋势提供染色体方面的科学资料，总的来说对染色体的研究在各类学科领域内都有着重要的意义。
国内外对洋葱的研究主要在其成分和药用方面，在细胞遗传上张自力和陈瑞阳等对洋葱的C带显示法进行过研究，田秋元等对洋葱的核型分析及有关制片方法进行了探讨。
植物染色体标本的制备和观察
植物染色体标本的制备和观察摘要：目的1、掌握常规压片法制备植物染色体标本的基本原理和方法；2、学会观察和统计植物细胞的染色体数目；3、了解和学习去壁低渗法进行植物染色体制片的基本原理和方法。
方法大蒜的根尖是分裂比较旺盛的，我们可以利用秋水仙素处理根尖使得大蒜根尖的细胞分裂处于分裂中期，然后经固定染色等处理将染色体染色固定，以便观察。
结果大蒜的染色体有16条，都被染色成红色的条状或细丝状物质。
结论大蒜染色体有16条。
关键词：植物染色体；大蒜；秋水仙素前言染色体是遗传物质的载体，本实验便是观察染色体的形态和数目。
植物染色体标本的制备，常用分生组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。
常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法。
其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤，即可观察到较多的、处于有丝分裂中期的细胞和染色体。
由于现在洋葱发根较难，我们采用的是大蒜根尖进行相关实验。
材料与方法1.实验材料大蒜根尖、白姜花的根尖、野百合的根尖等。
2.实验试剂：0.02%秋水仙素；改良苯酚品红染液；卡诺氏固定液，1N盐酸，浓盐酸：95%乙醇（1:1）解离液。
3. 实验用具显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、吸水纸、滴管、载玻片、盖玻片。
4.实验植物和试剂大蒜根尖、 0.02%秋水仙素；改良苯酚品红染液；卡诺氏固定液，1N盐酸；70%酒精；95％乙醇；85％乙醇；蒸馏水5.实验方法和步骤5.1 取材先将大蒜浸泡若干小时，然后转入一个垫有湿润滤纸的培养皿中，置25℃恒温培养箱中萌发，待幼根长至1~2cm时，于上午9~11时剪下根尖。
5.2 预处理将剪下的根尖放进装有0.02%秋水仙素溶液的烧杯中，浸泡处理3～4小时。
5.3 固定将经过预处理或没有预处理的材料，放到卡诺氏固定液中固定（固定液的量约为材料的10倍，要求一个容器中所装的材料不能太多，温度不能太高）。
固定2～24h后分别在95％和85％乙醇中各30min ，再转入70%酒精中，于4℃冰箱内保存，保存时间最好不超过二个月。
植物染色体标本的制备和观察【范本模板】
植物染色体标本的制备和观察摘要：植物染色体标本的制备，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。
本实验主要是介绍了解常规压片法和去壁低渗法制备植物染色体标本的基本原理和方法关键词:大蒜、洋葱、染色体、去壁低渗法、压片、标本【实验目的】掌握常规压片法和去壁低渗法制备植物染色体标本的基本原理和方法。
【实验原理】植物染色体标本的制备，常用分生组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。
常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。
但压片法的不足之处是染色体很难分散开，染色体容易变形和断裂.而去壁低渗法则能较好地克服这弊端,方法也较简单，不需要特殊设备。
它是借助纤维素酶和果胶酶将细胞间的果胶质和组成细胞壁的α—纤维素、半纤维素溶解掉，使植物细胞只有质膜，然后按哺乳类动物染色体标本制备的方法-—低渗、火焰干燥法制备植物染色体标本。
实验证明，这一技术可以显著提高染色体的分散程度，现已广泛应用于植物染色体显带，妹染色单体交换等研究，大大促进了植物细胞遗传学研究的发展.【实验仪器、材料和试剂】（一）仪器、用具培养箱、显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、滤纸、吸水纸、青霉素瓶、染色缸、载玻片、盖玻片、玻璃板、酒精灯（二)百合根尖，大蒜（三)试剂1．Giemsa 母液：原液的配制：Giemsa 粉0。
5g 甘油（AR）33ml 甲醇（AR）33ml 先将少量甘油加入研鉢中，将Giemsa 粉充分研细,再倒入剩余甘油,并在56℃温箱中保温2 小时,然后再加入甲醇混匀，贮存在棕色瓶内。
2．磷酸缓冲液、甲醇、冰醋酸、混合酶液、秋水仙素（或对二氯苯）3．改良苯酚品红染色液。
【方法与步骤】（一）压片法制备染色体标本1．取材把大蒜（百合）根尖茎置于盛水的小烧杯上,放在25℃温箱中发根，待根长至2cm 左右,于上午9～11 时剪下根尖。
2．预处理将剪下的根尖0.02%秋水仙素溶液中，浸泡处理4 小时。
实验三植物染色体标本制作
随着科学技术的发展，染色体制片技术将不断改进和完善， 未来有望实现更加准确、高效的染色体计数和形态分析。这 将有助于推动植物遗传学和进化生物学的研究进展。
THANKS
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染色体数目
通过对大量细胞的观察和计数，我们确定了植物细胞的染色体数目为2n=46条 ，这与之前的研究结果一致。
染色体分组
我们还观察到了染色体按照大小和形态的不同被分为不同的组别，这些组别在 遗传学上具有重要意义。
染色体分析的结果
染色体长度
我们测量了每条染色体的长度，并发现不同染色体长度存在差异，这对于理解基 因组结构和功能具有重要意义。
植物染色体的结构
植物染色体的基本结构包括染色质纤维、核膜、着丝粒和染色体臂。染色质纤维是染色体的基本组成单位，由 DNA和蛋白质组成。核膜是包围着整个细胞核的双层膜结构，起着调节基因表达的作用。着丝粒是染色体上连接 两个染色单体的区域，而染色体臂则是由DNA和蛋白质组成的区域，上面排列着基因。
学习制作染色体标本的方法
染色体观察与计数
找到分裂相细胞
染色体计数
在显微镜下寻找处于分裂期的细胞， 这些细胞是观察染色体的最佳时期。
对每个分裂相细胞中的染色体进行计 数，确保计数的准确性和可靠性。
观察染色体形态
在找到分裂相细胞后，仔细观察染色 体的形态、数目和分布情况，并记录 下来。
染色体分析
染色体形态分析
分析染色体的形态特征，如长度、着丝粒 位置等，判断是否存在染色体结构变异。
染色体的形态和结构
染色体形态
染色体在细胞分裂过程中呈现特 定形态，包括染色质、染色粒和 着丝粒等。
染色体结构
染色体由DNA和蛋白质组成，具 有特定的序列结构和组织结构。
实验三植物染色体标本制作(共9张精选PPT)
五 实验步骤（3）
封片：从4号培养皿中取出载玻片和盖玻片置于滤 纸上吸去多余的溶剂，在载玻片中央载有材料处 滴上1~2滴中性树胶，将盖玻片盖回原来位置进行 封片。覆盖盖玻片时，要注意用鸭嘴镊子夹住盖 玻片，轻轻地倾斜覆盖，使之随着树胶的扩展自 然下滑，切不可施加压力或移动盖玻片。如发现 封片中树胶有气泡，应让其自行逸出或用针尖烧 热后烫一下，使气泡逸出。如数胶滴得过多溢出 玻片四周，应待树胶晾干后，用脱脂棉蘸二甲苯 轻轻擦净溢出的树胶。封片后平放晾干，进行镜 检，物像清晰符合要求的保存，并贴上标签，注 明标本名称、作者姓名和制作日期。
五 实验步骤（2）
脱水、透明：取三只培养皿，分别编号2、3、4， 在其中各放一根短粗玻璃棒，顺序加入下列脱水 剂：2号培养皿加2份95%酒精+1份正丁醇；3号培 养皿加1份95%酒精+2份正丁醇；4号培养皿加正 丁醇。操作时，用鸭嘴镊子把1号培养皿中已脱落 的盖玻片和载玻片从盖玻片液中取出，稍干后迅 速放入2号培养皿中。依次脱水、透明，最后放入 4号培养皿中，在各编号培养皿中分别浸泡5min左 右。整个脱水过程中，必须保持载玻片和盖玻片 原来相对的方向和位置，同时注意操作轻巧，以 免造成玻片上材料漂失。
六 实验结果
制作清洁完整的有丝分裂永久片1张。
镜检观察制作的有丝分裂永久片，记录永久片中 出现的分裂时期。
三 实验材料
经镜检物像清晰符合要求母 细胞减数分裂的临时片子。
四 实验用具与药品
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实验二植物根尖细胞有丝分裂及染色体制片技术
2021/3/10
授课：XXX
3
后期：每一条染色体的着丝粒分裂，两条染色单体彼 此分开形成两条子染色体，子染色体在纺锤丝的牵引下， 分别移向两极。
末期：移向两极的染色体逐渐松散成染色质，纺锤丝 逐渐消失，在赤道面上开始出现细胞板，把一个细胞分隔 成两个子细胞，核膜重新形成，核仁出现，逐渐进入间期 状态。
前期：细胞核内染色体呈细丝状，在核内互相缠绕 成团。核仁开始消失，核膜随之破裂。此时，染色体已 经有两条染色单体所组成，只在着丝粒处连结。
中期：各染色体的着丝粒排列在赤道面上，两臂伸 向赤道面的两旁。纺锤体完全形成，其一端与染色体的 着丝粒相连接，另一端集中于细胞的极处。中期染色体 高度浓缩，具有各物种染色体的典型形态，是染色体计 数的最好时期。
实验二 植物根尖细胞有丝分 裂及染色体制片技术
2021/3/10
பைடு நூலகம்
授课：XXX
1
一 实验目的
1 学习并掌握植物根尖有丝分裂玻片标本的制作方法。 2 观察并了解植物根尖细胞有丝分裂各个时期染色体的 行为变化。
二 实验原理
植物生长旺盛的分生组织如根尖、茎尖、幼叶等都
在进行着有丝分裂。取这些组织为材料，经过固定后迅
速杀死细胞，并使细胞内的物质和生活状态得以保持，
再经过解离、染色、压片等过程，可以迅速地将细胞分
散附着于载玻片和盖玻片之间，在显微镜下就可以看到
大量处于有丝分裂各个时期的细胞，并进行染色体行为
的观察。
2021/3/10
授课：XXX
2
间期：一般持续时间比较长，是核内染色体DNA合 成的过程，能够看到核的变化，如核仁体积增大、核内 存在染色质，一般情况下看不到染色体。
2021/3/10
植物细胞染色体标本的制作与观看教案
植物细胞染色体标本的制作与观看1. 实验背景与原理染色体的研究在生物进化、发育、遗传和变异中都有十分重要的作用。
因此，染色体标本的制备技术是遗传学、细胞生物学、染色体工程、分类学等众多学科的大体实验技术。
物种细胞内染色体数量、形态、长度等信息的总和依如实验的观看和测量绘制成的模式图称为核型（karyotype）。
核型分析在物种亲缘鉴定，染色体变异分析，杂种分析，细胞割裂进程分析，孤雌生殖等研究中均有重要的作用。
染色体标本的常规制片方式有切片法、涂片法、压片法、滴片法（空气干燥法）等。
压片法操作简单，是经常使用的植物染色体标本制备的方式。
只是，该法在制备中要注意幸免压片所造成的染色体的扭曲、变形和丢失的现象。
染色体制备的重要环节如下：（1）取材：应取分生旺盛的组织或细胞。
在植物中通常取根尖，在割裂顶峰时取材，可取得大量割裂相细胞。
而在动物细胞中通常选取骨髓等割裂活跃的细胞，或是植物血球凝集素等刺激下的淋巴细胞，也可选取割裂旺盛的体外培育的癌细胞或转化细胞等。
（2）预处置：利用秋水仙胺等药品破坏纺锤体形成，不但可取得大量割裂相细胞，而且可使染色体缩短变粗，有利于观看。
（3）固定：渗透力强的固定液将细胞迅速杀死，蛋白质沉淀，并可尽可能维持细胞原有状态。
（4）解离或低渗：植物细胞要除去细胞间的果胶层，并使细胞壁软化，从而使细胞得以膨胀，为染色体的分散提供了空间。
经常使用解离方式有酸解法和酶解法。
动物细胞无细胞壁，通常不需解离，而是用低渗液使细胞膨胀。
（5）染色体分散：通过压片、滴片等机械力量使染色体分散, 有利于观看。
2. 实验目的（1）把握常规压片技术制作植物染色体标本的一样方式。
（2）了解显微镜下常规显色的植物细胞染色体的形态特点,熟练把握显微镜的利用。
（3）明白得染色体与生命遗传的意义及染色体核型检查的应用。
3. 实验材料与试剂（1）材料：市售大蒜、洋葱。
（2）设备与用品：一般光学显微镜，水浴锅，盖玻片，载玻片，异物针，镊子，平皿，滤纸等。
青钱柳染色体的制片技术及核型分析
青钱柳染色体的制片技术及核型分析黄岩萌;易炎;卞国良;胡凤荣;尚旭岚【期刊名称】《东北林业大学学报》【年(卷),期】2024(52)4【摘要】采集母树生长于湖北省宜昌市五峰土家族自治县的青钱柳(Cyclocarya paliurus)二倍体和四倍体种子,在室外自然层积至萌发,待根长(L)分别达到0.5 cm<L≤1.0 cm、1.0 cm<L≤2.0 cm、L>2.0 cm时,选取根部嫩白且完整的根尖,按照试验设定的处理条件进行预处理、固定、解离、染色。
取长度达到0.5cm<L≤1.0 cm的二倍体青钱柳胚根的根尖,采用常规压片法,比较预处理条件、解离方法、染色时间对染色体制片效果的影响,获取优化的二倍体青钱柳根尖染色体制片技术;按照优化后的二倍体青钱柳根尖染色体制片技术,对四倍体青钱柳根尖进行染色体制片。
对不同倍性青钱柳各选取30个以上染色体分散良好的细胞分裂相进行染色体数目统计,选取5张染色体分散良好、形态清晰的中期细胞照片,采用测量和分析工具(MATO)软件对染色体的长臂、短臂进行测量,计算相对长度和臂比,再进行染色体类型划分、核型分类、核型不对称系数计算。
结果表明:①选取根长为0.5 cm<L≤1.0 cm的根尖,4℃避光条件时,用质量浓度为2 g/L的秋水仙素与浓度为2 mmol/L的8-羟基喹啉等体积比例混合溶液处理1~2 h(或对二氯苯饱和水溶液处理6 h)、常温时浓盐酸和乙醇混合溶液解离10 min、卡宝品红溶液染色30 min,制片效果最佳。
②二倍体青钱柳核型公式为2n=2x=32=32m,核型不对称系数为57.61%,属于1B型,染色体全由中部着丝粒染色体组成;四倍体青钱柳核型公式为2 n=4x=64=60m+4sm,核型不对称系数为58.83%,属于1B型,染色体由中部和近中部着丝粒染色体组成。
③试验建立了青钱柳染色体制片的适宜方案;核型分析表明,青钱柳二倍体和四倍体在进化中均处于较原始地位。
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染色体数目众多的植物玻片制片技术摘要：探究体积较小且数目众多的植物染色体制片方法，摸索一套适合这类植物的制片方法，为这一类植物的染色体鉴定提供资料。
关键词：染色体；制片；技术
中图分类号：q943-3 文献标识码：a 文章编号：1674-0432（2012）-12-0031-1
目前，针对部分染色体数目众多、体积太小或染色体过于细长，容易缠绕的植物，其玻片制作仍然存在着较大的难度，国外在这方面也早有研究[1]。
本文以杨柳科杨属的滇杨（populus yunnanensis dode）[2]作为例子简介这一类植物的制片方法。
1 材料与方法
1.1 材料
试验材料为西南林业大学校园内生长健壮，无病虫害的成年大树的两年生滇杨枝条，剪取后置于水桶中于室温下水培。
1.2 方法
参考李懋学[3，4]，李国珍[5]，康向阳[6，7]等在文中所提到的实验方法，结合改良后的部分操作步骤进行制片。
实验前将从室外采集的枝条下半部约10cm高的部位浸入水中培养，待其根长约1～1.5cm时，选取生长良好、粗壮的根，截取整个根部置于装满蒸馏水的培养皿中待用。
1.2.1 预处理分别用0.2%秋水仙素、对二氯苯饱和水溶液、
0.002mol/l 8-羟基喹啉、8-羟基喹啉0.002mol/l+秋水仙素0.2%、8-羟基喹啉0.002mol/l+对二氯苯饱和以及低温4°24h作为预处理组合，分别对滇杨根尖处理1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 h ，从而确定最佳预处理的药剂和时间的组合。
1.2.2 固定将经过预处理后的材料转入固定液中进行固定，固定液组合为（ⅰ：冰乙酸：无水乙醇为1：2；ⅱ：冰乙酸：无水乙醇为1：3）于冰水混合物、4℃以及常温中固定1.0、2.0、4.0、20.0、24.0h ，从而确定最佳的固定药剂和固定温度的组合。
1.2.3 解离将上一步骤中经过固定的材料，利用hcl和酒精混合的解离液进行解离（组合ⅰ：1mol/l盐酸：无水乙醇=1：1；组合ⅱ：浓盐酸：无水乙醇=1：1），于常温、40℃±1℃、60℃±1℃中进行解离，以期获得最佳的解离时间及温度的组合。
1.2.4 染色及压片从根尖部位起截取约1mm左右长度的根，置于洁净的载玻片上，用镊子稍做按压铺平，滴加一滴碱性改良卡宝品红染液包埋材料静置，之后洗净材料上的染液，盖上盖玻片后进行常规压片。
1.2.5 封片保存将效果良好的玻片置于-20℃的冰箱中冷冻
24h，之后取出在玻片解冻之前撬开盖玻片和载玻片，在自然状态下干燥后浸入叔丁醇中进行透明处理15min左右，自然风干后用中性树胶进行封片。
2 结果与分析
2.1 预处理
经过上述试验得出，对二氯苯饱和水溶液于冰水混合物中处理材料1.0h可以获得良好的制片效果，能够得到较多的形态清晰、收缩较好的中期分裂相细胞。
综合三个处理温度来看，在冰水混合物条件下预处理材料时，总体效果优于在常温和4℃时。
2.2 固定
实验表明在冰水混合物条件下，染色体的总体形状较好，优于常温和4℃条件下，由此得出，低温条件有利于染色体的沉淀和保持固定形状。
2.3 解离
实验表明利用组合ⅱ（浓盐酸：无水乙醇=1：1）于常温下解离18min可以获得良好的解离效果。
且常温下解离效果优于40℃±1℃及60℃±1℃。
2.4 染色及制片
实验表明利用改良碱性卡宝品红染色9min可以获得良好的染色效果，如图1所示。
3 讨论
（1）由于该材料取自水培苗，且是在室内进行培养，受温度和光照等的影响较大，因此取材时最好在细胞分裂的高峰期，一般认为在温度较高时细胞分裂比较旺盛。
（2）通常情况下，秋水仙素对纺锤丝的作用效果较强，但实际试验过程中发现对二氯苯饱和水溶液的效果优于秋水仙素，这可能与处理温度，材料差异等有关。
（3）固定液的组合ⅰ（冰乙酸：无水乙醇=1：2）效果优于组合ⅱ（冰
乙酸：无水乙醇=1：3），这与材料的染色体细小，数量众多，需要不同配比的固定液等因素有关。
（4）在解离过程中组合ⅱ的效果优于组合ⅰ，说明浓盐酸条件下植物细胞间的果胶质更容易被溶解，这与滇杨细胞较小，且排列致密等因素有关，其深层原因有待进一步研究。
参考文献
[1] sakamoto k，shimomura k.analysis of the structure of sex chromosomesin a dioecious plant，cannabis saliva
l.[j].l.plant physio1，1997，114（sl）：243.
[2] 张忠涛，孙乐智.我国的杨树资源与开发利用[j].林业建设，2001，（5）：21-24.
[3] 李懋学，张赞平.作物染色体及其研究技术[m].北京：中国农业出版社，1996.
[4] 李懋学，张学攵方.植物染色体研究技术[m].哈尔滨：东北林业大学出版社，1991.
[5] 李国珍.染色体及其研究方法[m].北京：科学出版社，1985.
[6] 康向阳，王君.杨树多倍体诱导技术研究[m].北京：科学出版社，2010，1：3.
[7] 康向阳.杨树染色体数目和形态观察[j].甘肃农业大学学报，1996b，43（6）：67-70.
作者简介：陈杰（1985-），男，西南林业大学2010级研究生，研究方向：林木遗传育种。
网络出版时间：2013-1-31 9：53：37
网络出版地址：http：
///kcms/detail/22.1186.s.20130131.0953.002.ht ml。