染色体数目众多的植物玻片制片技术

染色体数目众多的植物玻片制片技术摘要：探究体积较小且数目众多的植物染色体制片方法，摸索一套适合这类植物的制片方法，为这一类植物的染色体鉴定提供资料。

关键词：染色体；制片；技术

中图分类号：q943-3 文献标识码：a 文章编号：1674-0432（2012）-12-0031-1

目前，针对部分染色体数目众多、体积太小或染色体过于细长，容易缠绕的植物，其玻片制作仍然存在着较大的难度，国外在这方面也早有研究[1]。本文以杨柳科杨属的滇杨（populus yunnanensis dode）[2]作为例子简介这一类植物的制片方法。

1 材料与方法

1.1 材料

试验材料为西南林业大学校园内生长健壮，无病虫害的成年大树的两年生滇杨枝条，剪取后置于水桶中于室温下水培。

1.2 方法

参考李懋学[3，4]，李国珍[5]，康向阳[6，7]等在文中所提到的实验方法，结合改良后的部分操作步骤进行制片。实验前将从室外采集的枝条下半部约10cm高的部位浸入水中培养，待其根长约1～1.5cm时，选取生长良好、粗壮的根，截取整个根部置于装满蒸馏水的培养皿中待用。

1.2.1 预处理分别用0.2%秋水仙素、对二氯苯饱和水溶液、

0.002mol/l 8-羟基喹啉、8-羟基喹啉0.002mol/l+秋水仙素0.2%、8-羟基喹啉0.002mol/l+对二氯苯饱和以及低温4°24h作为预处理组合，分别对滇杨根尖处理1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 h ，从而确定最佳预处理的药剂和时间的组合。

1.2.2 固定将经过预处理后的材料转入固定液中进行固定，固定液组合为（ⅰ：冰乙酸：无水乙醇为1：2；ⅱ：冰乙酸：无水乙醇为1：3）于冰水混合物、4℃以及常温中固定1.0、2.0、4.0、20.0、24.0h ，从而确定最佳的固定药剂和固定温度的组合。

1.2.3 解离将上一步骤中经过固定的材料，利用hcl和酒精混合的解离液进行解离（组合ⅰ：1mol/l盐酸：无水乙醇=1：1；组合ⅱ：浓盐酸：无水乙醇=1：1），于常温、40℃±1℃、60℃±1℃中进行解离，以期获得最佳的解离时间及温度的组合。

1.2.4 染色及压片从根尖部位起截取约1mm左右长度的根，置于洁净的载玻片上，用镊子稍做按压铺平，滴加一滴碱性改良卡宝品红染液包埋材料静置，之后洗净材料上的染液，盖上盖玻片后进行常规压片。

1.2.5 封片保存将效果良好的玻片置于-20℃的冰箱中冷冻

24h，之后取出在玻片解冻之前撬开盖玻片和载玻片，在自然状态下干燥后浸入叔丁醇中进行透明处理15min左右，自然风干后用中性树胶进行封片。

2 结果与分析

2.1 预处理

经过上述试验得出，对二氯苯饱和水溶液于冰水混合物中处理材料1.0h可以获得良好的制片效果，能够得到较多的形态清晰、收缩较好的中期分裂相细胞。综合三个处理温度来看，在冰水混合物条件下预处理材料时，总体效果优于在常温和4℃时。

2.2 固定

实验表明在冰水混合物条件下，染色体的总体形状较好，优于常温和4℃条件下，由此得出，低温条件有利于染色体的沉淀和保持固定形状。

2.3 解离

实验表明利用组合ⅱ（浓盐酸：无水乙醇=1：1）于常温下解离18min可以获得良好的解离效果。且常温下解离效果优于40℃±1℃及60℃±1℃。

2.4 染色及制片

实验表明利用改良碱性卡宝品红染色9min可以获得良好的染色效果，如图1所示。

3 讨论

（1）由于该材料取自水培苗，且是在室内进行培养，受温度和光照等的影响较大，因此取材时最好在细胞分裂的高峰期，一般认为在温度较高时细胞分裂比较旺盛。（2）通常情况下，秋水仙素对纺锤丝的作用效果较强，但实际试验过程中发现对二氯苯饱和水溶液的效果优于秋水仙素，这可能与处理温度，材料差异等有关。（3）固定液的组合ⅰ（冰乙酸：无水乙醇=1：2）效果优于组合ⅱ（冰

乙酸：无水乙醇=1：3），这与材料的染色体细小，数量众多，需要不同配比的固定液等因素有关。（4）在解离过程中组合ⅱ的效果优于组合ⅰ，说明浓盐酸条件下植物细胞间的果胶质更容易被溶解，这与滇杨细胞较小，且排列致密等因素有关，其深层原因有待进一步研究。

参考文献

[1] sakamoto k，shimomura k.analysis of the structure of sex chromosomesin a dioecious plant，cannabis saliva

l.[j].l.plant physio1，1997，114（sl）：243.

[2] 张忠涛，孙乐智.我国的杨树资源与开发利用[j].林业建设，2001，（5）：21-24.

[3] 李懋学，张赞平.作物染色体及其研究技术[m].北京：中国农业出版社，1996.

[4] 李懋学，张学攵方.植物染色体研究技术[m].哈尔滨：东北林业大学出版社，1991.

[5] 李国珍.染色体及其研究方法[m].北京：科学出版社，1985.

[6] 康向阳，王君.杨树多倍体诱导技术研究[m].北京：科学出版社，2010，1：3.

[7] 康向阳.杨树染色体数目和形态观察[j].甘肃农业大学学报，1996b，43（6）：67-70.

作者简介：陈杰（1985-），男，西南林业大学2010级研究生，研究方向：林木遗传育种。

网络出版时间：2013-1-31 9：53：37

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