外植体的选择与培养ppt课件
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植物组织培养-外植体的选择与建立
择
第三节 外植体（培养物）的建立
污染（Infection） 能否有效地控制微生物污染是植物离体培养是否成功的关键技术之一。对于离体培养的 探索性研究实验，污染会导致实验失败；对于大规模的离体繁殖生产来说，污染使生产 成本大大增加。因此，无论是科研机构还是生产厂家都十分重视微生物污染问题。 植物离体培养中的污染可分为外植体、培养基、无菌操作和培养环境四个方面。其中培 养基和无菌操作方面的污染，目前已得到十分有效的控制。外植体方面污染最复杂，也 最难控制，其可能是细菌引起的，也可能是真菌引起的；微生物可能是附生性的，也可 能是内生性的。近年来，国外较重视各种微生物的鉴定，并根据不同的微生物种类采取 相应的控制措施，这方面的研究进展较快。
（3）、污染估算及对策：
污染估算：首次接种通常污染率 40—60% 按40%计：接种100个材料 1个材料/容器：
污染量=100X40%=40 获得量=100-40=60。 2个材料/容器： 2污染：1X40%X40%=16% 1污染：2X40%X40%=32% 2未污染：60%X60%=36% 弃掉 污染率=100-36=62% 污染量=100X62%=62
添加标题
不具原基结构的外植体：根、茎、 叶、花、果等器官，需要脱分化。
第二节 外植体 （培养物）的 选择
第二节 外植体（培养物）的选择
第二节 外植体（培养物）的 选择
第二节 外 植体（培养 物）的选择
第二节 外植体（培 养物）的选择
4、根据外植体的大小选择： 外植体大小 外植体建立 外植体大小与外植体建立
第三节 外植体（培养物）的建立
第三节 外植体（培养物）的建立
三． 褐化发生的可能因素： 与组培植物品种有关： 不同的植物种与品种之间常有很大差异，有人把此归结为基因型的
第三节 外植体（培养物）的建立
污染（Infection） 能否有效地控制微生物污染是植物离体培养是否成功的关键技术之一。对于离体培养的 探索性研究实验，污染会导致实验失败；对于大规模的离体繁殖生产来说，污染使生产 成本大大增加。因此，无论是科研机构还是生产厂家都十分重视微生物污染问题。 植物离体培养中的污染可分为外植体、培养基、无菌操作和培养环境四个方面。其中培 养基和无菌操作方面的污染，目前已得到十分有效的控制。外植体方面污染最复杂，也 最难控制，其可能是细菌引起的，也可能是真菌引起的；微生物可能是附生性的，也可 能是内生性的。近年来，国外较重视各种微生物的鉴定，并根据不同的微生物种类采取 相应的控制措施，这方面的研究进展较快。
（3）、污染估算及对策：
污染估算：首次接种通常污染率 40—60% 按40%计：接种100个材料 1个材料/容器：
污染量=100X40%=40 获得量=100-40=60。 2个材料/容器： 2污染：1X40%X40%=16% 1污染：2X40%X40%=32% 2未污染：60%X60%=36% 弃掉 污染率=100-36=62% 污染量=100X62%=62
添加标题
不具原基结构的外植体：根、茎、 叶、花、果等器官，需要脱分化。
第二节 外植体 （培养物）的 选择
第二节 外植体（培养物）的选择
第二节 外植体（培养物）的 选择
第二节 外 植体（培养 物）的选择
第二节 外植体（培 养物）的选择
4、根据外植体的大小选择： 外植体大小 外植体建立 外植体大小与外植体建立
第三节 外植体（培养物）的建立
第三节 外植体（培养物）的建立
三． 褐化发生的可能因素： 与组培植物品种有关： 不同的植物种与品种之间常有很大差异，有人把此归结为基因型的
植物组织培养学课件 (6)
植体浸入15～30秒种即可起到消毒作用
• 由于酒精对组织细胞的杀伤力比较强,使用 时间不能过长,一般达不到彻底消毒的要求， 但酒精的浸润作用可以促进其它消毒剂渗 透到外植体的整个表面，提高杀菌效果， 常做为外植体消毒的第一步
次氯酸钠（NaClO）
• 可以分解释放Cl2,具有较强的杀菌作用,对 植物细胞的损伤较小,消毒时间10min左右 为宜(2NaClO+H2O+2CO2 =2NaHCO3+ Cl2)
• 鳞茎：百合、大蒜等。且鳞茎的不同部位 的再生能力有很大的差别，外层比内层鳞 片叶的再生能力强，同一鳞片下段比中上 段再生能力强
其它 • 子叶或下胚轴 • 胎座 • 胚珠 • 种子 • 花瓣 • 花药和花粉
• ……
因此，选择合适的部位和组织（最 能表达全能性），是决定组织培养 成功的前提之一
⑶外植体的大小
一般来讲，较大的外植体有较大的再生能力
许多植物的茎尖培养表明，材料越小，成活率越 低（临界大小一般为一个茎尖分生组织带1～2个 叶原基）
但也不能过大，过大则难以消毒灭菌，容易引起 污染
一般愈伤组织诱导，可将材料切成5mm小段或 5mm×5mm小块
脱毒培养在保证存活的前提下应尽量小（0.1～ 0.2mm）
长状态已脱离分化状态，重新恢复分生能 力，即脱分化 ⑵继代培养 也称传代培养，指愈伤组织在培养基上生 长一段时间后，营养物枯竭，水分散失， 并已经积累了一些代谢产物，此时需要将 这些组织转移到新的培养基上
水稻幼穗
愈伤组织
⑶分化培养
愈伤组织的再分化过程
⑷生根培养
在生根培养基 (with relatively higher auxin/cytokinin ratios) 上进行根的诱导
• 由于酒精对组织细胞的杀伤力比较强,使用 时间不能过长,一般达不到彻底消毒的要求， 但酒精的浸润作用可以促进其它消毒剂渗 透到外植体的整个表面，提高杀菌效果， 常做为外植体消毒的第一步
次氯酸钠（NaClO）
• 可以分解释放Cl2,具有较强的杀菌作用,对 植物细胞的损伤较小,消毒时间10min左右 为宜(2NaClO+H2O+2CO2 =2NaHCO3+ Cl2)
• 鳞茎：百合、大蒜等。且鳞茎的不同部位 的再生能力有很大的差别，外层比内层鳞 片叶的再生能力强，同一鳞片下段比中上 段再生能力强
其它 • 子叶或下胚轴 • 胎座 • 胚珠 • 种子 • 花瓣 • 花药和花粉
• ……
因此，选择合适的部位和组织（最 能表达全能性），是决定组织培养 成功的前提之一
⑶外植体的大小
一般来讲，较大的外植体有较大的再生能力
许多植物的茎尖培养表明，材料越小，成活率越 低（临界大小一般为一个茎尖分生组织带1～2个 叶原基）
但也不能过大，过大则难以消毒灭菌，容易引起 污染
一般愈伤组织诱导，可将材料切成5mm小段或 5mm×5mm小块
脱毒培养在保证存活的前提下应尽量小（0.1～ 0.2mm）
长状态已脱离分化状态，重新恢复分生能 力，即脱分化 ⑵继代培养 也称传代培养，指愈伤组织在培养基上生 长一段时间后，营养物枯竭，水分散失， 并已经积累了一些代谢产物，此时需要将 这些组织转移到新的培养基上
水稻幼穗
愈伤组织
⑶分化培养
愈伤组织的再分化过程
⑷生根培养
在生根培养基 (with relatively higher auxin/cytokinin ratios) 上进行根的诱导
组培苗生产技术—外植体的选择、处理与接种(植物组织培养课件)
（2）在无病虫害的田块，连续晴天3～4d时选取生长健壮、新萌发且未着地 的匍匐茎段3cm长作外植体。
3、蔬菜（龙牙百合） 龙牙百合特征:鳞茎，无皮，广卵形，外部鳞片长,将整个鳞茎 包裹，直径5~15厘米，白色，茎高90厘米左右，直立茎上叶 多而散生，披针形，叶色从浓绿，光滑。花单生茎顶。花朵 呈喇叭状长筒形，白色，有清香。
不能损伤组织材料，保持外植体的生活力，使外 植体在良好的培养条件下很快恢复生机，正常 生长和繁殖.
• 消毒剂的要求 • 要求：具有良好的消毒作用，既不会杀死植物的
组织细胞，又易被无菌水冲洗掉，不影响消毒后 外植体的生长和分化.
常用灭菌药剂的使用和效果
灭菌剂 使用浓度（%） 清除的难易 消毒时间 效 果
2、茎段（采用嫩茎的切段促进腋芽萌发，取材容易） 3、叶（幼嫩叶片组织通过愈伤组织或不定芽分化产生植株，
取材容易，操作方便，但易发生变异）； 4、花球和花蕾 5、种子、根、块根、块茎、花瓣等。
（二）实例分析 1、花卉（非洲菊） • 常用茎尖、嫩叶、花托进行非洲菊的组织培养，也有利用
种子进行组织培养的。 • 茎尖培养操作麻烦，但对于脱毒苗的生产是最有效的。 • 花托培养可直接成苗， 既可保持种性，又易行、 耗时短，是首选的外植体。
• 首先要选择花大、花色艳丽、市场流行的品种，然后再选 择无病虫害、植株生长健壮、花色纯正的优良品种单株进 行取材。
• 一旦选出优株后，应进行挂牌标记，并一直在其上采取花 蕾。作为外植体的花蕾要选取直径在1㎝左右，而且未露 心的小花蕾，太大或是太小的花蕾均不能获得满意的效果 。
2、水果（草莓）
（1）选择结果性优良的草莓母株上新抽出的匍匐茎作外植体，以每年6～7 月份最为适宜。
龙牙百合的许多器官、组织都可作为外植体， 如鳞片、花梗、叶片、茎尖、腋芽、花瓣、花托 、花丝、花药、胚、子房、根尖等，其中采用鳞 片作外植体的较多。
3、蔬菜（龙牙百合） 龙牙百合特征:鳞茎，无皮，广卵形，外部鳞片长,将整个鳞茎 包裹，直径5~15厘米，白色，茎高90厘米左右，直立茎上叶 多而散生，披针形，叶色从浓绿，光滑。花单生茎顶。花朵 呈喇叭状长筒形，白色，有清香。
不能损伤组织材料，保持外植体的生活力，使外 植体在良好的培养条件下很快恢复生机，正常 生长和繁殖.
• 消毒剂的要求 • 要求：具有良好的消毒作用，既不会杀死植物的
组织细胞，又易被无菌水冲洗掉，不影响消毒后 外植体的生长和分化.
常用灭菌药剂的使用和效果
灭菌剂 使用浓度（%） 清除的难易 消毒时间 效 果
2、茎段（采用嫩茎的切段促进腋芽萌发，取材容易） 3、叶（幼嫩叶片组织通过愈伤组织或不定芽分化产生植株，
取材容易，操作方便，但易发生变异）； 4、花球和花蕾 5、种子、根、块根、块茎、花瓣等。
（二）实例分析 1、花卉（非洲菊） • 常用茎尖、嫩叶、花托进行非洲菊的组织培养，也有利用
种子进行组织培养的。 • 茎尖培养操作麻烦，但对于脱毒苗的生产是最有效的。 • 花托培养可直接成苗， 既可保持种性，又易行、 耗时短，是首选的外植体。
• 首先要选择花大、花色艳丽、市场流行的品种，然后再选 择无病虫害、植株生长健壮、花色纯正的优良品种单株进 行取材。
• 一旦选出优株后，应进行挂牌标记，并一直在其上采取花 蕾。作为外植体的花蕾要选取直径在1㎝左右，而且未露 心的小花蕾，太大或是太小的花蕾均不能获得满意的效果 。
2、水果（草莓）
（1）选择结果性优良的草莓母株上新抽出的匍匐茎作外植体，以每年6～7 月份最为适宜。
龙牙百合的许多器官、组织都可作为外植体， 如鳞片、花梗、叶片、茎尖、腋芽、花瓣、花托 、花丝、花药、胚、子房、根尖等，其中采用鳞 片作外植体的较多。
外植体的选择与培养ppt课件
第1章 植物组织培养实验室 构建及操作技术
本章小结：
(6) 植物培养技术：灭菌、接种、培养和驯化四个环节。
(7) 灭菌与消毒的方法。
(8) 接种程序：①植物材料表面的消毒；②切割外植体；③ 将外植体移人培养基。
(9)培养方法：固体培养法和液体培养法。
(10)接种材料的培养：①初代培养；②继代培养；③生根 培养
第三节 外植体的选择与培养
五、培养过程中常出现的问题 及解决方法
污染
褐变
组织培养三大难题
玻璃化现象
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精选ppt课件2021
第三节 外植体的选择与培养
（一）污染
1、污染原因 细菌污染 真菌污染
真菌污染
14
精选ppt课件2021
第三节 外植体的选择与培养
2、污染的预防措施
(1)减少或防止材料带菌 (2)外植体灭菌要彻底 (3)玻璃器皿和金属器皿的灭菌 (4)布质制品的灭菌 (5)无菌室的消毒 (6)操作人员一定要严格按照无菌操作的程序进 行接种。
除细胞分裂素，有利生根，提高成活率
3、无机盐浓度：适当降低 4、加入少许活性炭 5、控制好移栽前10天的光、温、湿环境因子 6、使试管苗从无菌向有菌逐渐过渡
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精选ppt课件2021
第1章 植物组织培养实验室 构建及操作技术
本章小结：
(1) 常用的培养基：①MS培养基；②B5培养基；③ White培养基；④N6培养基；⑤KM-8P培养基。
第三节 外植体的选择与培养
四、外植体成苗途径
1、外植体→愈伤组织→根、芽→试管苗 ①同时长芽和根 ②先长芽，再长根 ③先长根，再长芽 2、外植体→胚状体→试管苗（胚状体途径） 3、外植体→根、芽→试管苗（器官发生途径）
外植体的选择和灭菌ppt课件
6
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
吐温的使用：0.1%，表面活性剂，浸润作用 无菌水:在用灭菌剂之前和之后均需用无菌水冲 洗数遍.
7
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
第一部分
组织培养技术
第四章 外植体的选择和灭菌
外植体（explant）：从植物体上分离的用于离体培养的植 物体部分。
第一节 外植体的选择
一、外植体的部位：根、茎、叶、花、果等 二、其它：如季节、生理状态和发育年龄等 三、外植体的大小
三、培养条件
温度：25±2℃； 光照：包括光照、光质和光周期； 培养基的pH:5.6-6.0;但若培养基中含有铁 离子， pH应在5.2以下. 湿度:培养容器的湿度常保持在100%; 培养 室的湿度70-80%. 气体:氧;二氧化碳;乙烯等.
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资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
3
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
取材季节
一般取母株生长旺盛的季节的材料
外植体的大小
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
吐温的使用：0.1%，表面活性剂，浸润作用 无菌水:在用灭菌剂之前和之后均需用无菌水冲 洗数遍.
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资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
第一部分
组织培养技术
第四章 外植体的选择和灭菌
外植体（explant）：从植物体上分离的用于离体培养的植 物体部分。
第一节 外植体的选择
一、外植体的部位：根、茎、叶、花、果等 二、其它：如季节、生理状态和发育年龄等 三、外植体的大小
三、培养条件
温度：25±2℃； 光照：包括光照、光质和光周期； 培养基的pH:5.6-6.0;但若培养基中含有铁 离子， pH应在5.2以下. 湿度:培养容器的湿度常保持在100%; 培养 室的湿度70-80%. 气体:氧;二氧化碳;乙烯等.
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资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
3
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
取材季节
一般取母株生长旺盛的季节的材料
外植体的大小
(完整版)植物组织培养学课件(5)
消毒剂
次氯酸钠 次氯酸钙
氯化汞 H2O2 溴水 硝酸银 酒精
使用浓 度(%) 2～5 9～10
0.1～0.2
10～12 1～2 1
70～75
消毒时间 （min）
5～30 5～30 2～10 5～15 2～10 5～30 0.2～2
效果
好 好 最好 较好 好 较好 好
去除难易
易 易 最难 最易 易 较难 易
⑴取材的部位
➢ 不同植物、不同部位组织的形态发生能力 不同
➢ 茎尖
• 在植物组织培养中普遍采用的外植体，其 分生能力强、生长速度快，也是获得脱毒 苗的重要途径
• 一般顶芽生长势比侧芽旺，比较容易成
• 往往受到材料来源的限制
• 例：许多兰科植物、石刁柏、非洲菊等
➢ 叶片
• 材料来源最为丰富，使用普遍
第三节 外植体的取材与培养
第三节 外植体的取材与培养
一 外植体的选择 二 外植体灭菌 三 外植体的接种及培养 四 培养中的常见问题及对策
原生质体培养
一、外植体的选择
1.外植体的概念
➢外植体（explant）： 用于离体培养的活的植 物组织、器官等材料， 是植物离体培养的基础 材料。（Ex-plant离开 植物体的一部分）
Multiple shoot formation on the explants after 35 days in culture.
Rooting of an elongating adventitious shoot.
Regenerated plants established in soil
Effect of cutting and leaf age on the percentage of leaves forming shoots (LFS) and the average number of shoots per leaf (AS) produced from cv. Arbel. Overall efficiency (OE) of shoot regeneration from leaves. Regeneration efficiencies were evaluated following a total of 42 days in culture on medium
植物组织培养 组培苗生产技术外植体的选择处理与接种护理课件
ห้องสมุดไป่ตู้湿度
保持培养环境湿度适宜， 以防止培养基干燥和外植 体失水。
培养过程中的观察与记录
定期观察外植体的生长状 况，包括颜色、质地、生 长速度等，并记录观察结 果。
观察外植体是否有异常表 现，如病变、死亡或生长 异常等，及时采取相应措 施。
记录外植体的生长曲线， 以便了解其生长动态和规 律。
培养过程中的问题处理
污染问题
如发现外植体受到微生物污染， 应及时采取措施，如更换培养基、
增加消毒频率等。
褐化问题
外植体褐化是常见的现象，可以通 过添加抗氧化剂、调整培养基成分 等方法减轻褐化程度。
玻璃化现象
玻璃化是指培养中的植物组织出现 半透明状的现象，可以通过降低激 素浓度、增加培养基湿度等方法进 行改善。
外植体的繁殖与移栽
生根过程
无根苗在生根培养基上生长，经过细胞分裂和分 化形成根原基，进而发育成完整的根系。
移栽前的准备
在生根培养过程中，需要对外植体进行适当的炼 苗处理，以适应外界环境，提高移栽成活率。
移栽与驯化
移栽是将培养好的组培苗从培养 容器中取出，移植到自然环境中 的过程。
移栽后的管理：保持适宜的光照、 温度、湿度和水分条件，及时除 草、防治病虫害，促进组培苗健 康生长。
外植体的接种
无菌操作技 术
操作前准备
在操作前，需要对外植体进行彻底清洗，去除表面的污垢 和微生物。同时，操作人员需要对手部进行消毒，确保无 菌操作。
灭菌处理 外植体需要进行严格的灭菌处理，以消除附着在表面上的 微生物。常用的灭菌方法包括使用酒精、次氯酸钠或氯化 汞等消毒剂。
接种环境
接种环境需要保持无菌状态，通常在超净工作台或无菌室 内进行。同时，接种工具也需要进行消毒处理，避免交叉 污染。
植物组织培养-外植体的选择与建立
第三节 外植体（培养物）的建立
• 与取样外植体年龄有关： 引起褐化程度的轻重常与取 样外植体组织的年龄有关， 通常是幼龄部位产生褐化 较轻，随着组织的老龄化 而褐化加重。因此，在外 植体接种时常需要剥去鳞 片和大叶片，尤其是以切 取幼嫩的芽尖或切取顶芽 分生组织（或带少量叶原 基）接种更为理想 。
第三节 外植体（培养物）的建立
（5）、内源菌防治： 植物组织培养中对材料只能进行表面灭菌， 而对材料组织内部所带的细菌往往难 以对付。 1. 表面污染与内源污染的区别：
第三节 外植体（培养物）的建立
• 常见内源菌：芽孢杆菌（rod bacteria）为主，尤其是 Bacilus licheniformis 和B.subtilis （“white ghost”）。 真菌中主要是镰刀菌(Fusarium)、轮枝孢菌(Verticillium)、 瓶霉菌(Phialophora)和丝核菌(Rhizoctonia)。 • 内源菌的检测：通常情况下，通过观察培养瓶就可看到 一些污染的迹象；但是对于生长缓慢的细菌或内生菌来 说，仅靠肉眼观察是不够的，必须通过指示培养，即采 用微生物特别容易生长的培养基和培养条件，让外植体 上的微生物快速生长，然后予以鉴定[培养基中加入蛋白 胨（peptone）、胰蛋白胨（trypone）或酵母汁(YE)]。
3 个材料/容器： 污染率=100-（60%）3=78.4% 污染量=100X78.4%=79 获得量= 100X（60%）3= 21 4 个材料/容器： 获得量= 100X（60%）4=13 5 个材料/容器： 获得量= 100X（60%）5=8 • 防止污染的对策： 小容器、多数量、尽量分散、相 互隔离
2、根据母株的年龄和生长发育阶段选择：
年 龄 或 幼 化 程 度
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培养的环境条件:
温度
8
光照
培养室 培养条件
氧气
湿度
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第三节 外植体的选择与培养
定义：培养物在培养基上生长一段时间以后，由 于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物 的积累，必须转移到新鲜培养基上培养,这个 过程叫做继代培养。
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第三节 外植体的选择与培养
四、外植体成苗途径
1、外植体→愈伤组织→根、芽→试管苗 ①同时长芽和根 ②先长芽，再长根 ③先长根，再长芽 2、外植体→胚状体→试管苗（胚状体途径） 3、外植体→根、芽→试管苗（器官发生途径）
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第三节 外植体的选择与培养
表面灭菌剂的种类较多，可选取1—2种使用。
常用灭菌剂使用浓度及效果比较表
灭菌剂 次氯酸钙 次氯酸钠 氯化汞 抗菌素
使用浓度(%)
9~10 2
0.1~1 4~50mg/L
持续时间 （min）
5~30 5~30 2~10 30~60
去除的难易
易 易 较难 中
效果
第三节 外植体的选择与培养
（二）、外植体的褐变
1、定义：
是指外植体在培养中体内的多酚氧 化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化 成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养 基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响 材料的培养。
16
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第三节 外植体的选择与培养
2、褐变的主要原因
①植物品种 ②生理状态 ③培养基成分 ④培养条件不当
百合试管苗
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第四节、试管苗驯化与移栽
2、特点：(与常规苗相比）
(1)生长细弱； (2)光合作用差 (3)叶片气孔数目少，活性差 (4)根的吸收功能弱 (5)对逆境的适应和抵抗能力差
小麦试管苗
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第四节、试管苗驯化与移栽
二、炼苗（驯化）
驯化的目的： 通过减肥、增光、降温、控水等措施，提高
(2)接种前15-20min，打开超净工作台的风机以及台上 的紫外灯；
(3)接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，及拖 鞋等；
(4)上工作台后，用酒精棉球擦拭双手。然后70%酒精喷 雾降尘，并擦拭工作台面；
(5)先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子蘸95% 酒精在酒精灯火焰上灼烧，放置冷却。
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第三节 外植体的选择与培养
五、培养过程中常出现的问题 及解决方法
污染
褐变
组织培养三大难题
玻璃化现象
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第三节 外植体的选择与培养
（一）污染
1、污染原因 细菌污染 真菌污染
真菌污染
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第三节 外植体的选择与培养
2、污染的预防措施
(1)减少或防止材料带菌 (2)外植体灭菌要彻底 (3)玻璃器皿和金属器皿的灭菌 (4)布质制品的灭菌 (5)无菌室的消毒 (6)操作人员一定要严格按照无菌操作的程序进 行接种。
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第三节 外植体的选择与培养
三、外植体的接种与培养
（一）接种—无菌操作 定义:把经表面灭菌处理后植物材料，切碎或分
离出器官、组织、细胞，再经无菌操作转接到 无菌培养基上，这一过程叫做接种。
4
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第三节 外植体的选择与培养
接种前的准备工作：
(1)在接种前1-2周用甲醛熏蒸接种室；
试管苗对外界环境条件的适应性，提高光合 作用的能力，提高试管苗的移栽成活率。
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第四节、试管苗驯化与移栽
三、试管苗的移栽
（一）移栽方法： 1、直接移栽法 2、常规移栽法 3、嫁接移栽法
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第三节 外植体的选择与培养
3、减轻褐变现象发生的措施
①选择合适的外植体： ②合适的培养条件： ③连续转移 ④加抗氧化剂： ⑤加活性炭
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第三节 外植体的选择与培养
（三）玻璃化现象
1、定义：在长期的离体培养繁殖时，有些 试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状， 这种现象称为玻璃化。
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第三节 外植体的选择与培养
接种时的无菌操作技术：
(1)对接种材料进行消毒；
(2)先解开包口纸，将试管等拿成斜角，使试管口在酒 精火焰上方转动，灼烧数秒钟；
(3)用灼烧过的镊子夹取外植体送入试管内，轻轻插入 或放在培养基表面；
(4)接种完后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟；
(5)接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、 走动和咳嗽等；
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第三节 外植体的选择与培养
2、玻璃化现象产生的原因
细胞分裂素浓度较高时； 琼脂浓度低时； 温度低、光照时间长时； 气体交换不良时； 培养基中无机离子种类及比例不当时。
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第三节 外植体的选择与培养
3、预防措施：
①适当控制培养基中无机营养成分； ②适当提高培养基中蔗糖和琼脂浓度； ③适当降低细胞分裂素和赤霉素浓度，增加生
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第三节 外植体的选择与培养
外植体成苗途径：
愈伤组织
根、芽
A
外植体 B
C
胚状体 芽、根
芽根
试
根芽
管
苗
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第三节 外植体的选择与培养
胚状体的产生途径：
(1)、直接从器官上发生 (2)、从愈伤组织发生 (3)、从游离的单细胞发生 (4)、从小孢子发生
诱导胚状体比诱导芽的优点：
(1)数量多 (2)速度快 (3)结构完整
长素量； ④增加自然光照，控制光照时间； ⑤降低培养温度，进行变温培养； ⑥增加容器通风，最好进行CO2施肥。
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第1章 植物组织培养实验室 构建及操作技术
第四节、试管苗驯化与移栽
草莓
试管苗
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第四节、试管苗驯化与移栽
一、试管苗的特点
1、试管苗的生态环境： 高温且恒温、 高湿、 弱光、 无菌
第1章 植物组织培养实验室 构建及操作技术
第三节 外植体的选择与培养
一、外植体的选择： 种质优良
选材
取材的最适时期
1
植株健壮
适宜的大小
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第三节 外植体的选择与培养
二、外植体灭菌
1：对材料进行预处理 2：材料表面灭菌： 1）水洗,滤纸吸干; 2)70%酒精浸30～60s; 3）用灭菌剂处理; 4）用无菌水冲洗.
(6)接种工具随时蘸95%酒精灼烧，避免交叉污染；
6
(7)接种完毕后要清理干净并用70%酒精擦工作台。 完整版课件
第三节 外植体的选择与培养
（二） 外植体培养
外植体培养：指把培养材料放在培养室里，使之 生长，分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化 成再生植株的过程。
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第三节 外植体的选择与培养
温度
8
光照
培养室 培养条件
氧气
湿度
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第三节 外植体的选择与培养
定义：培养物在培养基上生长一段时间以后，由 于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物 的积累，必须转移到新鲜培养基上培养,这个 过程叫做继代培养。
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第三节 外植体的选择与培养
四、外植体成苗途径
1、外植体→愈伤组织→根、芽→试管苗 ①同时长芽和根 ②先长芽，再长根 ③先长根，再长芽 2、外植体→胚状体→试管苗（胚状体途径） 3、外植体→根、芽→试管苗（器官发生途径）
2
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第三节 外植体的选择与培养
表面灭菌剂的种类较多，可选取1—2种使用。
常用灭菌剂使用浓度及效果比较表
灭菌剂 次氯酸钙 次氯酸钠 氯化汞 抗菌素
使用浓度(%)
9~10 2
0.1~1 4~50mg/L
持续时间 （min）
5~30 5~30 2~10 30~60
去除的难易
易 易 较难 中
效果
第三节 外植体的选择与培养
（二）、外植体的褐变
1、定义：
是指外植体在培养中体内的多酚氧 化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化 成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养 基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响 材料的培养。
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第三节 外植体的选择与培养
2、褐变的主要原因
①植物品种 ②生理状态 ③培养基成分 ④培养条件不当
百合试管苗
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第四节、试管苗驯化与移栽
2、特点：(与常规苗相比）
(1)生长细弱； (2)光合作用差 (3)叶片气孔数目少，活性差 (4)根的吸收功能弱 (5)对逆境的适应和抵抗能力差
小麦试管苗
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第四节、试管苗驯化与移栽
二、炼苗（驯化）
驯化的目的： 通过减肥、增光、降温、控水等措施，提高
(2)接种前15-20min，打开超净工作台的风机以及台上 的紫外灯；
(3)接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，及拖 鞋等；
(4)上工作台后，用酒精棉球擦拭双手。然后70%酒精喷 雾降尘，并擦拭工作台面；
(5)先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子蘸95% 酒精在酒精灯火焰上灼烧，放置冷却。
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第三节 外植体的选择与培养
五、培养过程中常出现的问题 及解决方法
污染
褐变
组织培养三大难题
玻璃化现象
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第三节 外植体的选择与培养
（一）污染
1、污染原因 细菌污染 真菌污染
真菌污染
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第三节 外植体的选择与培养
2、污染的预防措施
(1)减少或防止材料带菌 (2)外植体灭菌要彻底 (3)玻璃器皿和金属器皿的灭菌 (4)布质制品的灭菌 (5)无菌室的消毒 (6)操作人员一定要严格按照无菌操作的程序进 行接种。
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第三节 外植体的选择与培养
三、外植体的接种与培养
（一）接种—无菌操作 定义:把经表面灭菌处理后植物材料，切碎或分
离出器官、组织、细胞，再经无菌操作转接到 无菌培养基上，这一过程叫做接种。
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第三节 外植体的选择与培养
接种前的准备工作：
(1)在接种前1-2周用甲醛熏蒸接种室；
试管苗对外界环境条件的适应性，提高光合 作用的能力，提高试管苗的移栽成活率。
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第四节、试管苗驯化与移栽
三、试管苗的移栽
（一）移栽方法： 1、直接移栽法 2、常规移栽法 3、嫁接移栽法
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第三节 外植体的选择与培养
3、减轻褐变现象发生的措施
①选择合适的外植体： ②合适的培养条件： ③连续转移 ④加抗氧化剂： ⑤加活性炭
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第三节 外植体的选择与培养
（三）玻璃化现象
1、定义：在长期的离体培养繁殖时，有些 试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状， 这种现象称为玻璃化。
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第三节 外植体的选择与培养
接种时的无菌操作技术：
(1)对接种材料进行消毒；
(2)先解开包口纸，将试管等拿成斜角，使试管口在酒 精火焰上方转动，灼烧数秒钟；
(3)用灼烧过的镊子夹取外植体送入试管内，轻轻插入 或放在培养基表面；
(4)接种完后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟；
(5)接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、 走动和咳嗽等；
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第三节 外植体的选择与培养
2、玻璃化现象产生的原因
细胞分裂素浓度较高时； 琼脂浓度低时； 温度低、光照时间长时； 气体交换不良时； 培养基中无机离子种类及比例不当时。
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第三节 外植体的选择与培养
3、预防措施：
①适当控制培养基中无机营养成分； ②适当提高培养基中蔗糖和琼脂浓度； ③适当降低细胞分裂素和赤霉素浓度，增加生
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第三节 外植体的选择与培养
外植体成苗途径：
愈伤组织
根、芽
A
外植体 B
C
胚状体 芽、根
芽根
试
根芽
管
苗
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胚状体的产生途径：
(1)、直接从器官上发生 (2)、从愈伤组织发生 (3)、从游离的单细胞发生 (4)、从小孢子发生
诱导胚状体比诱导芽的优点：
(1)数量多 (2)速度快 (3)结构完整
长素量； ④增加自然光照，控制光照时间； ⑤降低培养温度，进行变温培养； ⑥增加容器通风，最好进行CO2施肥。
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第1章 植物组织培养实验室 构建及操作技术
第四节、试管苗驯化与移栽
草莓
试管苗
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第四节、试管苗驯化与移栽
一、试管苗的特点
1、试管苗的生态环境： 高温且恒温、 高湿、 弱光、 无菌
第1章 植物组织培养实验室 构建及操作技术
第三节 外植体的选择与培养
一、外植体的选择： 种质优良
选材
取材的最适时期
1
植株健壮
适宜的大小
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二、外植体灭菌
1：对材料进行预处理 2：材料表面灭菌： 1）水洗,滤纸吸干; 2)70%酒精浸30～60s; 3）用灭菌剂处理; 4）用无菌水冲洗.
(6)接种工具随时蘸95%酒精灼烧，避免交叉污染；
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(7)接种完毕后要清理干净并用70%酒精擦工作台。 完整版课件
第三节 外植体的选择与培养
（二） 外植体培养
外植体培养：指把培养材料放在培养室里，使之 生长，分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化 成再生植株的过程。
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第三节 外植体的选择与培养