德国美天妮磁珠分选
密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合分离脐血中胎儿有核红细胞
密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合分离脐血中胎儿有核红细胞罗欣;杜颖颖;张进;马端【摘要】目的研究密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合方法富集脐血中胎儿有核红细胞.方法对5例脐血首先用密度梯度离心和免疫磁珠分选依次进行胎儿有核红细胞分离,用流式细胞检测和细胞染色对分选前后细胞进行分选纯度分析.结果 1.通过流式细胞仪检测发现CD71单克隆抗体磁珠用于脐血中胎儿有核红细胞分选(CD71+ ,CD45- ),分选后的纯度可以达到81%,而分选前CD71阳性细胞只占23.2%.2.分选前脐血涂片可见大量的成熟红细胞,含少量有核红细胞;密度梯度离心后可见绝大多数细胞为单个核细胞(淋巴细胞、单核细胞和有核红细胞),含少量红细胞;CD71单克隆抗体磁珠分选后阳性细胞多为胞浆丰富略嗜碱性的有核红细胞.结论密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合可以有效提高脐血中胎儿有核红细胞的分选纯度.【期刊名称】《中国产前诊断杂志(电子版)》【年(卷),期】2010(002)003【总页数】4页(P4-7)【关键词】胎儿有核红细胞;密度梯度离心;免疫磁珠分选【作者】罗欣;杜颖颖;张进;马端【作者单位】复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室,上海200032;复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室,上海200032;复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室,上海200032;复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室,上海200032;复旦大学生物医学研究院出生缺陷研究中心,上海200032【正文语种】中文产前诊断是对胚胎或胎儿在出生前是否患有某些遗传病或先天畸形做出准确的诊断。
目前采用的诊断方法多属于有创性检查,对妊娠妇女和胎儿都有一定的风险[1]。
从妊娠妇女外周血中分离胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cells,FNRBCs)进行基因分析已成为国内外无创性产前诊断的研究热点。
但是母体循环中的FNRBCs数量稀少,难以达到临床检测的要求,高效富集FNRBCs方法已成为产前诊断中筛查染色体异常和基因异常的必要手段。
MACS如何选择合适的分选器
如何选择合适的分选器?美天旎MACS技术已经成为磁性细胞分选的金标准,其文献引用量一直远超同类其他产品。
MACS磁珠分选所用到的主要组份有:MACS磁珠、MACS分选柱和MACS分选器。
如果您是第一次使用美天旎磁珠,则可以选择合适的起始套装,这样既能满足您的分选要求,又节省成本。
美天旎提供以下套装产品供您选择,针对您的实验,选择最适合您的分选器套装产品。
手动分选产品产品一:MiniMACS Starting Kit (送磁珠)130-090-312 MiniMACS Starting Kit对应使用分选柱:MS适合分选策略:阳性分选最大上样量:2X108最大目的细胞吸附量:107一次上样数量:1个产品二:MidiMACS Starting Kit (送磁珠)130-042-301 MidiMACS Starting Kit(LS)对应使用分选柱:LS适合分选策略:阳性分选和阴性分选最大上样量:2X109最大目的细胞吸附量:108一次上样数量:1个130-090-329 MidiMACS Starting Kit(LS)对应使用分选柱:LD适合分选策略:阴性分选最大上样量:2X109最大目的细胞吸附量:108一次上样数量:1个产品三:Mini & MidiMACS Starting Kit(送磁珠)130-042-501 Mini & MidiMACS Starting Kit(MS LS)对应使用分选柱:MS LS适合分选策略:阳性分选和阴性分选最大上样量:2X108+2X109最大目的细胞吸附量:107+108一次上样数量:2个Mini & MidiMACS Starting KitMACS MultiStand 分选架MidiMACS Separation Unit 分选器130-042-501 Mini & MidiMACS Starting Kit (MS LD)对应使用分选柱:MS LD适合分选策略:阳性分选和阴性分选最大上样量:2X108+2X109最大目的细胞吸附量:107+108一次上样数量:2个产品四:OctoMACS Starting Kit (送磁珠)130-042-108 OctoMACS Starting Kit对应使用分选柱:MS适合分选策略:阳性分选最大上样量:8X2X108最大目的细胞吸附量:8X107一次上样数量:8个产品五:QuadroMACS Starting Kit (送磁珠)130-091-051 QuadroMACS Starting Kit (LS)对应使用分选柱:LS适合分选策略:阳性分选和阴性分选最大上样量:4X2X109最大目的细胞吸附量:4X108一次上样数量:4个130-092-857 QuadroMACS Starting Kit(LD)对应使用分选柱:LD适合分选策略:阴选最大上样量:4X2X109最大目的细胞吸附量:4X108一次上样数量:4个产品六:VarioMACS Separator(手动细胞分选)130-090-282 VarioMACS Separator(手动细胞分选)对应使用分选柱:MS, LS, LD and CS适合分选策略:阳性分选和阴性分选最大上样量:4X10E9最大目的细胞吸附量:2X10E8一次上样数量:1个半自动分选产品130-095-346 MultiMACS Cell24 Separator(半自动分选器)对应使用分选柱:LS LD适合分选策略:阳性分选和阴性分选最大细胞上样量:24X2X10E9最大一次上样量:24个全自动分选产品autoMACS Starting Kit(全自动分选器)对应使用分选柱:自动分选柱(可重复使用)适合分选策略:阳性分选和阴性分选最大细胞上样量:4x10e9最大目的细胞吸附量:2x10e8最大一次上样量:6个。
德国美天妮磁珠分选
MACS® 细胞分选策略
• 阳性分选
• 去除分选 • 去除分选后再阳性分选
• 多重分选
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MACS细胞分选策略
1、阳性分选:
• 根据特异性标志分选细胞: 阳性分选是指目的细胞磁性标记
后,作为阳性的标记组分直接分选出来。
• 优点:
》高纯度,尤其是富集稀有的细胞 》高回收率 》操作简便、迅速
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识别DC和DC亚群 New
DC 亚群特异性标志: Blood Dendritic Cell Antigens
Lineage- (CD3, CD14, CD16, CD19, CD20, CD56) HLA-DR+ CD11c+ CD123low/-
BDCA-2/4+ BDCA-1+ BDCA-3+
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MACS® 技术分选与分析功能性T细胞
T细胞分选
T细胞亚群
T细胞功能亚群
抗原特异性 T细胞
Th细胞( CD4) Tc细胞( CD8) 调节性 T细胞 (CD4+CD25+) TCRr/d 细胞 (TCRr/d微珠 ) NK/T细胞 (CD56多选微珠+ CD3微珠 )
NaiveT细胞 (CD45RO阴选 ) 活化 T细胞( CD69、 CD25、 CD30) 效应 T细胞( CD27) 记忆 T细胞( CD45RA阴选、 CD45RO阳选) Th2细胞 (anti-CRTH2)
IFN-r IL-2 IL-4 IL-10 TNF-a
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MACS® 细胞因子分泌细胞分析与分选 New
Catch Reagent
德国美天妮磁珠分选
New
CD11c
CD11c+ B220+ Gr-1 (Ly-6C/G)+ DC
Conventional DC
Plasmacytoid DC (PDC)
CD11c B220 Gr-1
CD8+ DC
(―lymphoid― DC)
CD4+ DC
(―myeloid― DC)
mPDCA-1
CD11c CD8a
Miltenyi Biotec: 免疫磁珠分选技术及应用
德国美天旎生物技术有限公司 北方区技术支持 王卉
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内容
• MACS技术原理 • MACS技术设备及分选策略 • 几种特殊的MACS分选
分选和分析DC细胞 分选各种T细胞 分选和分析细胞因子分泌细胞 分选造血干细胞 分选人类肿瘤细胞 分选和分析凋亡和死亡细胞 分选转染细胞 分子生物学和蛋白生化的分选
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主要卖点
干细胞产品:人类:CD133、CD34、MSC试剂盒(CD271) 小鼠:系别阴性试剂盒、CD117微珠 定向分化培养基 DC产品: 人类:BDCA-1、BDCA-2/4 小鼠:CD11c NK产品: 人类:NK细胞阴选试剂盒、CD3/CD56 T细胞产品: CD4+CD25+调节性T细胞(人和小鼠) CSA系列 CD4、CD8微珠及阴选试剂盒 B细胞产品: CD19微珠及阴选试剂盒 肿瘤细胞分选:癌细胞富集试剂盒、HEA微珠、CD45阴选 单核细胞分选:CD14微珠及阴选试剂盒 间标微珠 死细胞去除试剂盒 预选滤器、FCR阻断剂、T细胞活化与扩增试剂盒 流式细胞仪抗体(价廉、包装量大、优质)
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识别DC和DC亚群 New
MACS(磁珠分选)介绍-优宁维
技术一:MACS磁珠分选介绍MACS技术为德国美天旎生物技术有限公司(Miltenyi Biotec GmbH)的专利产品,是一种集合了免疫学、细胞生物学、磁力学等知识于一体的高度特异性细胞分选技术,其高度特异性来自抗体对抗原的特异性识别。
MACS技术已成为细胞分选的标准方法,从实验室到临床,从小规模到大规模,从常见细胞到稀有细胞和复杂的细胞亚群,从人类和小鼠细胞到其它种系的细胞,MACS技术提供了一种可在每一个实验室进行高品质细胞分选的方法。
MACS技术主要组成成分为MACS微珠、MACS分选柱和MACS分选器。
MACS微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒。
MACS分选柱置于一个永久性磁场—MACS分选器中,可以将磁力增强1000倍,足以滞留仅标记极少量微珠的目的细胞。
用缓冲液冲洗分选柱,所有未标记的细胞被冲洗掉。
分选柱离开磁场,即可获得被标记的细胞组分。
所有的操作在2.5-30分钟内即可完成,得到的细胞可立即用于后继实验。
德国美天旎公司是一个以细胞分选技术为主、拥有多样化产品的生物技术公司。
开发研制并销售世界上最先进的细胞分选、细胞生物学、相关分子生物学产品和技术,尤其在干细胞分选、DC细胞分选与分析、细胞因子分泌细胞分选与分析、免疫治疗、再生医学方面占有极大的优势,CD133、BDCA-2(CD303)、BDCA-4(CD304)单抗为其专利产品。
MACS技术优点1、稳定、高质量的分选使用MACS技术,可获得高纯度(90-99%)、高回收率的分选细胞群。
2、对细胞无损伤50nm微珠和MACS分选柱均无毒性,对细胞无损伤,可以纯化有活力和功能活性的细胞而不影响其活性。
3、操作简便、快速MACS技术操作简单,消毒方便。
磁珠孵育时间很短,仅需15分钟。
手动分选可在30分钟内完成,autoMACS分选可在2.5-10分钟之内完成。
4、从实验室到临床MACS技术可以实现从105到1011个细胞分选。
美天旎临床产品解决方案
德国美天旎临床解决方案
美天旎的完整解决平台–细胞治疗的首选工具
MACS GMP Antibodies CliniMACS and Reagents MACS GMP Antigens MACS GMP Cytokines MACS GMP Media MACS culture bag
细胞治疗领域介绍 3
自身免疫病 - 自体干细胞移植
主要适应症-CD34分选
1. 严重系统性硬化 2. 系统性红斑狼疮 3. 克隆氏病
严重的自身免疫病疾病用SCT治疗是必须的。
重要的临床试验 - ASTIS和ASSIST
ASTIS(系统性硬化)
入选150例患者已经完成,2010年10月完成最后一例入选 2011年发表安全性检测报告 2012年发表有效性报告
肿瘤,感染和耐受包括下列产品
细胞因子捕获系统(IFN-r)用于分离AgT CD8用于富集TIL
CD56,CD3,CD19用于富集NK细胞
CD14用于富集MoDC细胞 CD1c,CD304用于富集BDC,分别为MDC和PDC
CD25用于富集Treg细胞,有时也用CD8,CD19
预防复发,减轻感染,帮助抑制,支持免疫重建,从GVT中分离GvHD
CD45R去除系统:去除naiveT细胞,预防GvHD Treg细胞:CD25,减轻免疫耐受,预防GvHD,也可结合TexMACS GMP Treg
medium和GMP ExpAct Treg kit扩增Treg细胞。
DC疫苗和CCS:CD14,预防移植后的感染
CliniMACS® 富集管道系统
临床用
科研用(临床前期)
美天旎细胞治疗全线-130723
细胞特异性的免 疫磁性标记试剂
管道
Mo-DC culture
5~7 ds
2 ds
美天旎DC细胞治疗方案
GM-CSF 1000 IU/mL IL-4 1000 IU/mL
流式细胞检测CD11c, CD40 ,CD80,CD83,CD86
IL-6 1000 IU/mL TNFα 1100 IU/mL IL-1β 1900 IU/mL PGE2 1 µg/mL
某些不适合手术、不能耐受放化疗的中晚期癌症
非T细胞相关的白血病和淋巴瘤
乙型肝炎,丙型肝炎,慢性寄生虫感染等
对于手术、放化疗或造血干细胞移植后患者体内微小残留病灶的清除, 防止癌细胞扩散和复发
T细胞相关淋巴瘤和白血病;器官移植后,长期使用免疫抑制药物或正 在使用免疫抑制药物的患者;自身免疫病患者
美天旎产品在CIK细胞治疗中的应用
NK治疗简介 NK(Natural Killer)来源尚不清楚,体外实验
表明,胸腺细胞在体外IL-2、 IL-12、IL-15、 IFN-α、TNF-α等细胞因子存在条件下培养也可 诱导出NK细胞。
NK细胞表面标记物为:CD3- CD56+
NK 细胞杀死肿瘤细胞特点
广泛识别肿瘤细胞,自然杀伤活性无MHC限制 分泌穿孔素及肿瘤坏死因子 起效快、杀伤能力强
重悬NK细胞 ,调整 浓度2×10e6
过夜培养(1000 U/ml IL-2)。用 5% HSA溶液洗
涤两次,重悬浮 细胞
NK细胞终产品 ,调整 细胞浓度2×10e7,回输人 体, 注射Hi-Cy/Flu,连续14
天注射IL-21 (1.75*10e6 IU/m2)
流式鉴定表型(CD3,CD4,CD8,CD56,CD25)
美天旎临床产品解决方案
CryoMACS Freezing Bags and DMSO
Cryopreservation
Leukapheresis
Cell selection
Quality control
Administration to patient
CliniMACS 管道 150* 167-01
20x109ห้องสมุดไป่ตู้
10x109
MACS技术-从实验室到临床
与科研产品的差异: • 欧共体CE认证,SFDA认证 • 全自动免疫磁性细胞分选系统 • 密闭、无菌管道系统(一次性使用) • 分选后的细胞可直接用于临床治疗 • 样本处理极为安全 • 标准化的、可控的、可靠的分选过程
造血和内皮干细胞
心脏疾病-CD133
心脏疾病全球死亡第一原因,在US,CVD死亡率比癌症高 35%。主要是冠状动脉疾病。
起源于造血/肿瘤,作为CD34的替代品,许多研究人员证明 CD133有显著的分化潜力,使CD133产品成为组织再生的基本 产品。 在心脏疾病领域使用自体骨髓CD133进行治疗有很大的潜力。 产品: CD133试剂, tubing set LS,CD133 complete LS kit 骨髓体积大于100ml推荐使用Prodigy。 全球细胞治疗中,MSC是心脏疾病首选干细胞来源
Bags, Medium
Vaccination
Patient
Cryopreservation
DC疫苗
CD14系统从2000年开始已有25篇文献,可行性和安全度得到很 好的验证,2011年继续以试剂折扣支持感兴趣的客户。 一个循环同时获得PDC和MDC 还可结合DendricMACS GMP Medium,GMP细胞因子( IL4,GM-CSF,IL1,IL6,TNF),GMP抗原,细胞分化袋等 CD1不需要细胞因子,CD304需要IL3
MACS方法手动分选套装选择
美天旎手动分选设备
内包括:
这款分选套装只能配合MS柱子使用,最大的细胞上样量是2X10,捕获细胞量是107。
用于阳性分选。
2.美天旎4通道分选套装:可以同时进展4个样本的实验,比较快捷,而且各种分选策略都适用
试剂盒内包括:
这款分选套装可以配合LS柱子和LD柱子使用,最大的细胞上样量是2X10,捕获细胞量是108。
可用于阳性分选和去除分选。
这款分选套装可配合使用MS柱子和LS柱子或LD柱子,mini套装最大的细胞上样量是2X108 ,捕获细胞量是107;midi套装最大的细胞上样量是2X109 ,捕获细胞量是108。
可用于阳性分选和去除分选,不足的地方就是每次只能进展一次实验。
4 MidiMacs套装
一根LS分选柱上样量为10E9, 适合阳性分选和去除分选
5 MiniMacs套装
一根LS分选柱上样量为10E8, 适合阳性分选和去除分选.
五款分选套装的比较:。
MACS技术介绍
高功率,水 冷
需要调整 488nm、 633nm、 407nm 模拟 否 7
数据处理模 式 脱机补偿 最多检测FL
分选速度
300/sec
no
70000/sec
10000/sec
MACS分选与 FACS分选比较 MACS优势1
• 快速 》FACS分选时间: 》MACS® 分选时间: (FACS Aria) (autoMACS™ 分选仪) 每秒钟获取70 000 细胞 平均每秒钟处理107 细胞 108 cells => 2 3 min 108 cells => 5 min 109 cells => 4 h 109 cells => 5 min (没有包括操作人员调节 (无需调节机器) 机器时间) • 操作简单、无需专人操作,可随时使用 • 分选后细胞活性好 • 无菌分选:仪器小巧,可以进操净台,耐受紫外线照射, 消毒方便,耗材为无菌性包装
• 在没有直接标记微珠可选时
• 使用自备抗体或配体的磁性分选中
• 分选或去除用多个抗体混合物标记的多种细胞
• 分选稀有细胞和抗原弱表达的细胞
• 分选标记蛋白质
MACS分选柱
填充有磁性铁珠,有亲水 包被,对细胞柔和。
在分选器中产生高梯度 磁场,滞留带有微珠磁 性标记的细胞
MACS分选柱
• 能进行完全的清洗 • 单独无菌包装,便于 无菌条件使用 • 可用于分选多种细胞 及亚细胞物质、 细菌、病毒、mRNA 和蛋白质
美天旎中国
• 2001年设立中国代表处,目前美天旎中国总部位于上海, 在北京、广州设有办事处。 • 美天旎中国目前有近15名员工,分属销售与产品推广部, 市场与技术服务部,客服与物流部。 • 美天旎中国合作伙伴 总进口商:中仪英斯泰克进出口公司 代理商: 上海强智生物技术有限公司 上海优宁维生物科技有限公司 北京利文商贸有限公司
磁珠分选产品
美天旎公司MACS(磁珠分选)相关产品一、MACS微珠(MicroBeads)MACS微珠是一种与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒,用于目的细胞或者去除细胞的磁性标记。
微珠直径约有50nm,比细胞小200多倍,体积为细胞的百万分之一,光学显微镜下不可见。
微珠由多聚糖和氧化铁组成,无毒性,对细胞无损伤,可以生物降解。
MACS微珠与流式细胞仪兼容,不会影响细胞的光散射特性;磁性标记只占用20-30%的结合位点,不影响细胞的荧光抗体标记。
此外,MACS微珠可以最大限度地避免细胞活化;无需解离磁珠,可以直接进行后续实验:如流式细胞仪分析或分选、细胞培养、分子生物学研究、回输给人或者动物。
MACS微珠主要有三种:直标微珠、间标微珠、多选微珠。
其中间标微珠有抗免疫球蛋白微珠、抗生物素微珠或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠。
多选微珠是专门为分选细胞亚群而研制的一种微珠。
这种微珠通过特殊的方式与抗体偶联,在第一次阳性分选完成后,与细胞结合的多选微珠可以被解离试剂剪切下来,阳性分选的细胞可以进行再次阳性分选或者去除分选。
MACS技术分选的CD8阳性T细胞(箭头所示为磁性结合在细胞表面的微珠)二、MACS分选柱(Separation Column)MACS分选柱是一类填充有不同规格铁珠的塑料容器,铁珠表面有亲水包被,因此不会损伤细胞。
在磁场外MACS分选柱不带有磁性,但是当置于一个永久性磁场—MACS分选器中时,分选柱内的铁珠可以使分选器的磁场增强1000倍,足以滞留仅标记有极少量微珠的目的细胞;磁性标记细胞从分选柱中通过时可以受到均匀的磁力作用,从而提高分选纯度和回收率。
手动操作在30分钟内可完成,自动分选仅需2.5-10分钟,得到的细胞可立即用于后续实验。
此外,大多数MACS分选柱都是无菌包装,一次性使用,可以满足细胞培养所需的无菌条件。
三、MACS分选器(MACS Separators)MACS分选器由永久性磁铁和支架构成。
CliniMACS介绍
美天旎细胞治疗平台CliniMACS系统简介第一部分、德国美天旎生物技术有限公司及MACS细胞分离技术介绍第二部分、CliniMACS系统在临床细胞治疗中的应用一、CliniMACS细胞分选仪及其配件介绍二、CliniMACS CD34系统的安全性德国美天旎生物技术有限公司上海市仙霞路319号远东国际广场A栋2301室200051电话:(86 21)62351005传真:(86 21)62350953服务热线:800 820 2606北京市东城区朝阳门内大街银河SOHO D座50723室100010电话:(86 10)64107101传真:(86 10)64100990第一部分德国美天旎生物技术有限公司及MACS细胞分离技术介绍德国美天旎生物技术有限公司(Miltenyi Biotec GmbH)是一个以细胞分选技术为主、拥有多样化产品的生物技术公司。
开发研制并销售世界上最先进的细胞分选、细胞生物学、相关分子生物学产品和技术,尤其在干细胞分选、DC细胞分选与分析、细胞因子分泌细胞分选与分析、免疫治疗、再生医学方面占有极大的优势,CD133、BDCA-2(CD303)、BDCA-4(CD304)单抗为我公司专利产品。
我公司总部位于德国科隆,在科隆和德国北部罗斯托克均有cGMP生产机构。
我们的产品有免疫磁珠、特异性细胞及蛋白质或者DNA/RNA分选用的MACS分选设备、单克隆抗体、无菌溶液、基础和特殊培养基、血液/血浆治疗用的生物学吸附剂、LIFE18血浆分离机、流式细胞仪及相关耗材。
MACS技术已成为细胞分选的标准方法,从实验室到临床,从小规模到大规模,从常见细胞到稀有细胞和复杂的细胞亚群,从人类和小鼠细胞到其它种系的细胞,MACS技术提供了可在每个实验室进行高品质细胞分选的方法。
MACS技术原理MACS技术为德国美天旎生物技术有限公司的专利产品,是一种集合了免疫学、细胞生物学、磁力学等知识于一体的高度特异性细胞分选技术,其高度特异性来自抗体对抗原的特异性识别。
德国美天旎
MACS® MACS® Cell Separation Columns
根据不同的分选策略、细胞的大小和多少等条件, 选择不同的柱柱子。 如适合Positive selection的有MS 如适合Positive selection的有MS Columns, LS Columns, and XS Columns ;MScapacity:2×108 ,LS的 ;MScapacity:2× LS的 capacity:2× capacity:2×109, XS的capacity:2×1010;sparate rare cells XS的capacity:2× by using two columns;Large Cell Columns were designed columns; for positive selection of large human or animal cells Depletion,根据你是用kits 还是用Microbeads,抗原 Depletion,根据你是用kits 还是用Microbeads,抗原 表达水平,细胞多少等选择。
MACS® MACS® Separators
MACS® Separators are designed for fast and easy cell separation in combination with MACS Columns and MACS MicroBeads. They contain strong permanent magnets to induce a highhighgradient magnetic field within the MACS Columns – strong enough to retain cells labeled with minimal amounts of MACS MicroBeads.
美天旎公司磁珠分选产品
美天旎公司磁珠分选产品标准化管理处编码[BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N]美天旎公司MACS(磁珠分选)相关产品一、MACS微珠(MicroBeads)MACS微珠是一种与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒,用于目的细胞或者去除细胞的磁性标记。
微珠直径约有50nm,比细胞小200多倍,体积为细胞的百万分之一,光学显微镜下不可见。
微珠由多聚糖和氧化铁组成,无毒性,对细胞无损伤,可以生物降解。
MACS微珠与流式细胞仪兼容,不会影响细胞的光散射特性;磁性标记只占用2 0-30%的结合位点,不影响细胞的荧光抗体标记。
此外,MACS微珠可以最大限度地避免细胞活化;无需解离磁珠,可以直接进行后续实验:如流式细胞仪分析或分选、细胞培养、分子生物学研究、回输给人或者动物。
MACS微珠主要有三种:直标微珠、间标微珠、多选微珠。
其中间标微珠有抗免疫球蛋白微珠、抗生物素微珠或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠。
多选微珠是专门为分选细胞亚群而研制的一种微珠。
这种微珠通过特殊的方式与抗体偶联,在第一次阳性分选完成后,与细胞结合的多选微珠可以被解离试剂剪切下来,阳性分选的细胞可以进行再次阳性分选或者去除分选。
MACS技术分选的CD8阳性T细胞(箭头所示为磁性结合在细胞表面的微珠)二、MACS分选柱(Separation Column)MACS分选柱是一类填充有不同规格铁珠的塑料容器,铁珠表面有亲水包被,因此不会损伤细胞。
在磁场外MACS分选柱不带有磁性,但是当置于一个永久性磁场—MACS分选器中时,分选柱内的铁珠可以使分选器的磁场增强1000倍,足以滞留仅标记有极少量微珠的目的细胞;磁性标记细胞从分选柱中通过时可以受到均匀的磁力作用,从而提高分选纯度和回收率。
手动操作在30分钟内可完成,自动分选仅需分钟,得到的细胞可立即用于后续实验。
此外,大多数MACS分选柱都是无菌包装,一次性使用,可以满足细胞培养所需的无菌条件。
CliniMACS临床
单核细胞来源的 DCs
CD14+ 单核细胞分选
富集前
23 %
富集后
99 %
CD15-PE
CD15-PE
DC的种类
• 单核细胞来源的DCs - MoDC (CD14)
PBMCs中的频度5-10%
• 髓血细胞来源的DCs – mDC1(BDCA-1)
PBMCs中的频度0.29%(0.09-0.42%)
CABG + TMLR + CD133+ 干细胞
手术干细胞操作流程
干细胞处理 Operating room I 外科手术 Operating room II
决定CD133+ 细胞灌注
骨髓采集Biblioteka 0 min胸阔切开术
收集、洗涤
孵育、洗涤 CliniMACS® 分选
60 min
移植物收集
ECC
90 min 心肌再灌注
CliniMACS 构造
• 2. 无菌管道系统: 一次性使用 滴流管 避免气体激活 液体感受器 预选柱 机械性过滤 非特异性的细胞 分选柱
CliniMACS管道系统
• CliniMACS TS: 60 x 109 (5min/ml) • CliniMACS LS TS: 120 x 109 (10min/ml) • DTS:120 x 109(标记40 x 109)
造血系统恶性肿瘤(自体、异体移植) 自身免疫性疾病 实体瘤 遗传、代谢性疾病
CliniMACS CD133试剂
• • • • 阳性分选CD133+干细胞 一支试剂最多标记6 x 108 CD133+细胞 应用: 1.造血系统方面:
自体、异体干细胞移植(同CD34)
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MACS技术 技术
设备与试剂
• MACS分选器
autoMACS分选仪 分选仪
• 9种程序,一机完成所有细胞分选 种程序, 种程序 • 成本低,两个可重复使用的分选 成本低, 周内100次 柱(2周内 次) 周内 • 快速(3-10分钟) 快速( - 分钟 分钟) •重复性好 重复性好 • 全自动分选,仪器操作简单 全自动分选, • 适用范围广:从少量标本(105) 适用范围广:从少量标本( 到大量标本( ),进样量 到大量标本(4X109),进样量 0.5ml-50ml • 8种全血微珠,可以做常见细胞的 种全血微珠, 种全血微珠 全血分选, 全血分选,省去了费时的提取单个 核细胞过程
• 去除分选是磁性标记非目的细胞,并将其从细胞混合物中去 去除分选是磁性标记非目的细胞,
除,即未磁性标记的细胞为目的细胞。 即未磁性标记的细胞为目的细胞。
• 去除分选策略适用范围: 去除分选策略适用范围:
》去除不需要的细胞 缺乏针对目的细胞的特异性抗体(如肿瘤细胞) 》缺乏针对目的细胞的特异性抗体(如肿瘤细胞) 》不需要抗体和目的细胞结合 》需进一步通过阳性选择分选细胞亚群
MD0347.01
MACS® 磁性分选
MACS微珠进行 微珠进行 磁性标记
洗脱阳性分 选的细胞
未标记的细胞 先行流出
MD0651.01
分选前标本制备: 分选前标本制备:过滤
.02
MACS 技术
设备与试剂
» MACS微珠 微珠 » MACS分选柱 MACS分选柱 » MACS 分选器 » 详细分选方案 详细分选方案*
MD0197.02
MACS技术 技术
设备与试剂
• MACS微珠: 微珠: 微珠
MACS 微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺 磁化微粒,可用于目的细胞的磁性标记。 磁化微粒,可用于目的细胞的磁性标记。
• 特性: 特性:
50nm大小 大小 对细胞没有毒性 可生物降解 不影响细胞特性
MACS技术分选的 技术分选的CD8+ T 细胞 技术分选的
MD0043.02
MACS® 细胞分选策略
• 阳性分选 • 去除分选 • 去除分选后再阳性分选 • 多重分选
MD0044.02
MACS细胞分选策略 细胞分选策略
1、阳性分选: 阳性分选:
• 根据特异性标志分选细胞 阳性分选是指目的细胞磁性标记 根据特异性标志分选细胞:
后,作为阳性的标记组分直接分选出来。 作为阳性的标记组分直接分选出来。
MD0044.02
主要竞争对手分析
Dynal:大磁珠 : 主要市场: 等高频细胞, 主要市场:CD4、CD8等高频细胞, 、 等高频细胞 优势: 优势:价格 劣势:回收率低(不能做低频细胞、弱表达细胞分选) 劣势:回收率低(不能做低频细胞、弱表达细胞分选) 磁珠必需剪切(耗时——细胞状态不佳) 细胞状态不佳) 磁珠必需剪切(耗时 细胞状态不佳 大磁珠(活化细胞) 大磁珠(活化细胞)
• 专利产品 • 将磁场扩大1000-10000倍— 将磁场扩大 - 倍 —高纯度,高回收率 高纯度, 高纯度
在MS柱中产生的强大磁场 柱中产生的强大磁场
MD0061.02
MACS技术 技术
设备与试剂
• MACS分选柱:
MACS技术 技术
设备与试剂
• MACS分选器:从手动到自动,从实验室到临床 分选器:从手动到自动, 分选器
Miltenyi Biotec: 免疫磁珠分选技术及应用
德国美天旎生物技术有限公司 北方区技术支持 王卉
1/1 MD0xxx.01
内容
• MACS技术原理 技术原理 • MACS技术设备及分选策略 技术设备及分选策略 • 几种特殊的MACS分选 几种特殊的 分选
分选和分析DC细胞 分选和分析 细胞 分选各种T细胞 分选各种 细胞 分选和分析细胞因子分泌细胞 分选造血干细胞 分选人类肿瘤细胞 分选和分析凋亡和死亡细胞 分选转染细胞 分子生物学和蛋白生化的分选
微珠
MD0057.03
MACS微珠 微珠
直标微珠
多选微珠
间标微珠
MACS技术 技术
设备与试剂
• MACS分选柱: 分选柱: 分选柱
》填充有不同规格的铁珠。 填充有不同规格的铁珠。 》铁珠表面有亲水包被,不损伤细胞。 铁珠表面有亲水包被,不损伤细胞。 无菌包装。 》无菌包装。 可用于分选多种细胞及亚细胞物质、 》可用于分选多种细胞及亚细胞物质、 细菌、病毒、 和蛋白质。 细菌、病毒、mRNA和蛋白质。 和蛋白质
我们的优势:纯度高、回收率高、 我们的优势:纯度高、回收率高、细胞活性好 不活化细胞, 不活化细胞,不改变细胞功能 省时、 省时、省细胞 产品品种最多, 产品品种最多,有专利产品 有手动、自动、 有手动、自动、临床级产品 有强大的技术支持队伍 很好的声誉, 很好的声誉,市场占有率最高
MD0044.02
MD0044.02
识别DC和 亚群 识别 和DC亚群 New
DC 亚群特异性标志 Blood Dendritic Cell Antigens 亚群特异性标志:
• MiniMACS starting kit:1个分选架、1个MiniMACS分选器、1盒MS 个分选架、 个 分选器、 盒 : 个分选架 分选器 分选柱、 支价值 支价值7500元试剂(15088元):可做阳性分选、小量标本、间标去 元试剂( 可做阳性分选、 分选柱、1支价值 元试剂 元):可做阳性分选 小量标本、 除分选、 除分选、分子生物学分选 • Mini&MidiMACS starting kit:1个分选架、1个MiniMACS分选器、 1 个分选架、 个 分选器、 : 个分选架 分选器 分选器、 盒 分选柱 分选柱、 盒 分选柱、 支价值 支价值7500元试剂 个MidiMACS分选器、1盒MS分选柱、 1盒LS/LD分选柱、1支价值 分选器 分选柱 元试剂 (27838元):可做阳性分选和去除分选 元):可做阳性分选和去除分选 • MS分选柱:1盒25个,2763元 分选柱: 盒 个 分选柱 元 • LS分选柱:1盒25个,4356元 分选柱: 盒 个 分选柱 元 • LD分选柱:1盒25个,5100元 分选柱: 盒 个 分选柱 元 • uMACS与u或者 分选柱:分子生物学分选 与 或者 分选柱: 或者M分选柱 • VarioMACS分选仪 分选仪 • autoMACS自动分选仪、CliniMACS分选仪 自动分选仪、 自动分选仪 分选仪
MD0044.02
MACS几种畅销磁珠与抗体 几种畅销磁珠与抗体
• 专利产品:CD133、CD303、CD304 专利产品: 、 、 • 特殊产品:人类DC系列:BDCA-1(CD1c)、BDCA-2(CD303)、 特殊产品:人类 系列 系列: 、 、 BDCA-3(CD141)、BDCA-4(CD304) 、 小鼠DC系列 系列: 小鼠 系列:mPDCA微珠与抗体 微珠与抗体 干细胞产品: 干细胞产品: CD133、CD271微珠与抗体 、 微珠与抗体 细胞因子分泌细胞: 细胞因子分泌细胞:CSA分选与分析 分选与分析 TH2细胞: CD294(CRTH)微珠与抗体 细胞: 细胞 微珠与抗体 分选人类肿瘤细胞:上皮肿瘤:CK、 分选人类肿瘤细胞:上皮肿瘤:CK、HEA 非血液肿瘤: 非血液肿瘤:CD45去除 去除 死亡细胞去除试剂盒 分选转染细胞 分选HIV病毒、mRNA、cDNA 病毒、 分选 病毒 、 • top ten:CD133、CD34、人CD4+CD25+、小鼠 : 、 、 、小鼠CD4+CD25+ CD303/CD304、人类 、小鼠 、人类NK、小鼠CD11c、anti-PE 微珠 、 小鼠干细胞试剂盒(系别阴性+ )、CD4/CD8 小鼠干细胞试剂盒(系别阴性+CD117)、 )、
• 优点: 优点:
》高纯度,尤其是富集稀有的细胞 高纯度, 》高回收率 操作简便、 》操作简便、迅速
MD0044.02
阳性分选策略
MACS® 微珠磁性 标记
将分选柱移 出磁场, 出磁场,洗 脱阳性分选 细胞
未标记细胞先行流出
MD016102
MACS细胞分选策略 细胞分选策略
2、去除分选: 去除分选:
MACS技术主要优势 技术主要优势
• 小磁珠 50 nm(快速、不活化细胞、不沉淀) 小磁珠: (快速、不活化细胞、不沉淀)
• 保留细胞功能(直接进行后续实验;无毒性;氧化 保留细胞功能(直接进行后续实验;无毒性; 铁和多聚糖组成,可生物降解) 铁和多聚糖组成,可生物降解) • 与流式细胞仪兼容(不影响细胞光学特性、不影响荧 与流式细胞仪兼容(不影响细胞光学特性、 光抗体标记、 光抗体标记、与流式细胞仪分选联合使用可以缩短流 式分选时间) 式分选时间) • 快速、简便、无菌 快速、简便、 • 适用范围广(磁珠种类多、从少量到大量、适用于分 适用范围广(磁珠种类多、从少量到大量、 选各种细胞、亚细胞物质) 选各种细胞、亚细胞物质)
阳性分选靶细胞
CD4+ CD25+ 调节性 滞留在分选柱上,离开磁场后 调节性T滞留在分选柱上 滞留在分选柱上, 洗脱下来
MACS细胞分选策略 细胞分选策略
4、多选微珠: 多选微珠:
多选微珠标记 终止解离反应
MACS 分选
根据第二标志 进行磁珠标记
磁性颗粒的酶解离
MACS 分选
MD0652.01
MACS畅销机器与分选柱 畅销机器与分选柱
MD0044.02
去除分选
磁性标记
分选未磁性标记细胞
MD0160.02
MACS细胞分选策略 细胞分选策略
3、去除分选后再阳性分选: 去除分选后再阳性分选:
• 即先去除非目的细胞,再进行阳性分选。 即先去除非目的细胞,再进行阳性分选。 • 适用范围: 适用范围: