实验二 光电比浊法测定面包酵母生长曲线

实验二光电比浊法测定面包酵母生长曲线（参照实验课本p154，实验三十二）

一、实验目的

（1）学会比浊法测定培养液中以单个细胞的分离形式存在的微生物浓度的方法；

（2）了解酵母菌等单细胞微生物生长曲线的特点及测定原理，学会用光电比浊法测定面包酵母的生长曲线。

二、实验原理

生长曲线是单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。测定时一般将一定数量的微生物纯菌种接种到一定体积的已灭菌的适宜的新鲜培养液中，在适温条件下培养，定时取样测定培养液中菌的数量，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标，绘制得到生长曲线。不同的微生物其生长曲线不同，同一微生物在不同培养条件下其生长曲线亦不同。但单细胞微生物的生长曲线规律基本相同，生长曲线一般分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期。测定一定培养条件下的微生物的生长曲线对科研和实际生产有一定的指导意义。

大肠杆菌和酵母菌等在发酵液中以单个细胞的分离形式存在的微生物可以采用测定浊度方法测定菌浓。比浊法是根据培养液中菌细胞数与混浊度成正比，与透光度成反比的关系，利用可见分光光度计在波长600-660nm下测定菌悬液的光密度值（OD值），以OD值表示培养液中的微生物量，以培养时间为横坐标，以菌悬液的OD值为纵坐标绘制菌体生长曲线。此方法所需设备简单，操作简便、迅速。

三、实验材料

1、菌种：面包酵母

2、培养基：YEPD液体培养基（酵母粉1%，蛋白胨2%，葡萄糖2%，pH6.0，115℃湿热灭菌20min）（注：2%为质量体积比，即2g/100ml）

3、器材：可见分光光度计、摇床

四、实验步骤

（1）将斜面保存的面包酵母菌种接种到YEPD培养液（20ml培养基/250ml三角瓶）中，于28℃振荡培养18-24h活化备用。

（2）将活化的酵母菌转接到新的液体培养基中（20-30ml培养基/250ml三角瓶），接种量5%，培养6-8小时使其处于对数生长中期，按照5%的接种量转接到装有YEPD培养基的

试管中（每支试管装5ml培养基，接种0.25ml菌液，每组准备20只试管，以备不同时间的测定,测定时共两组平行），28℃振荡培养。

（3）调节分光光度计的波长至620nm处，开机预热10～15min。

（4）以未接种的培养液校正分光光度计的零点（注意以后每次测定均需重新校正零点）。

（5）分别于0、1、2、4、6、7、8、9h的取出两只试管，摇匀，于分光光度计下比色测定各样品的OD值（取平均值）。

五、实验结果

以培养时间为横坐标，面包酵母菌菌悬液的OD值为纵坐标，绘出面包酵母菌的生长曲线。