小鼠微核试验
实验五小鼠骨髓细胞微核试验
小鼠骨髓细胞的采集与处理
小鼠麻醉
将小鼠麻醉，并固定在 操作台上。
暴露骨髓
用消毒手术刀切开小鼠 的腿骨，暴露骨髓腔。
采集骨髓细胞
用注射器吸取生理盐水， 冲洗骨髓腔，收集骨髓
细胞。
细胞处理
将采集的骨髓细胞进行 洗涤、离心、分离等处 理，得到所需的细胞样
本。
骨髓细胞的培养与观察
细胞培养
将处理后的骨髓细胞接种在细胞 培养皿中，加入适量的细胞培养 基，在适宜的温度和湿度条件下 进行培养。
率之间存在正相关关系。
本实验为进一步研究致突变物的 致突变作用提供了有力证据，有 助于深入了解致突变物的致癌机
制。
对实验结果的理解与讨论
本实验结果表明，致突变物能够诱导小 鼠骨髓细胞微核的形成，这可能是致突 变物导致基因突变和细胞恶性转化的重 要机制之一。
实验结果还提示，致突变物的致突变作用可 能与其在体内的代谢活化有关，因此需要进 一步研究致突变物的代谢活化过程及其与微 核形成之间的关系。
实验五小鼠骨髓细胞 微核试验
目录
CONTENTS
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果分析 • 结论与讨论
01 实验目的
了解微核试验的原理
微核试验是一种用于检测染色体畸变和DNA损伤的细胞遗传 学方法。它通过观察细胞中微核（微小的细胞核）的数量， 来评估细胞受到的遗传损伤程度。
染色体结构畸变
分析实验组和对照组的染色体结构畸变类型，如断裂、倒位、重 复等。
染色体数目畸变
观察染色体数目畸变情况，包括非整倍体、多倍体等。
畸变类型与实验条件关系
探讨不同实验条件下染色体畸变类型的差异及其与实验条件的关系。
实验结果与预期结果的比较
小鼠骨髓多染红细胞微核实验
小鼠骨髓多染红细胞微核实验目的和意义微核试验用于检测受试物在哺乳动物所引起的染色体或原红细胞有丝分裂器损伤，以确定该受试物有无诱变性。
通过本次实验学习和掌握小鼠骨髓多染红细胞微核测定方法。
原理正常细胞的有丝分裂的分裂中期，染色体均匀地排列在赤道板附近，到分裂后期便分成两份，分别向两极移动，并在末期分别形成两个子细胞的核。
如果由于某种化学物质的作用而使分裂期的细胞染色体受到损伤，在中期就会观察到染色体断裂，在进入分裂后期时，这种断片落后于向两极移动的染色体而滞留在赤道板附近，当其它染色体分别形成子细胞核时，这些落后的断片便独立形成微核，如果纺锤体功能受损，也可产生微核。
由上可见，微核的出现和染色体畸变有密切相关性，同时微核的观察是在细胞的间期，不必分析中期相，这比分析染色体畸变要方便一些。
进行骨髓细胞微核分析一般观察红细胞，记数嗜多染红细脑中微核出现率。
器材与试剂1、器材载玻片、推片、血细胞计数器、滴管、注射器、解剖剪、镊子、止血钳、晾片架、滤纸、电吹风机、染色缸、研钵、恒温水浴箱、光学生物显微镜（或荧光显微镜）。
2、试剂小牛血清；甲醇；吉姆萨储备液：将1g 吉姆萨倒入研钵内，加入少许甘油混合研细，分次倒入剩余的甘油至66ml，转移到烧杯内（或试剂瓶内）。
放入55~60℃水浴中并不断搅动至2h。
取出冷却后加入60ml甲醇，混匀后置室温，2~3周后过滤，保存于棕色瓶内备用（存放时间越长染色效果越好）。
吉姆萨染色液：实验前取吉姆萨储备液与磷酸盐缓冲液（pH 6.8）1 : 9混匀。
磷酸盐缓冲液（pH 6.8）阳性对照物：环磷酰胺。
操作步骤一、试验动物及处理1、动物的选择：选用小鼠，每组10只动物，雌雄各半。
小鼠体重在18~20g，7~12w。
2、染毒途径：采用腹腔注射给药。
3、剂量选择：环磷酰胺按50mg/kg剂量染毒，同时设立阴性对照（空白对照）。
4、染毒次数和取样时间：采用30h给药法，即两次给药间隔24h，在第二次给药后6h处死动物采集骨髓。
小鼠骨髓细胞微核试验
五、作业
1. 观察并记数细胞微核率； 2. 用统计学软件SPSS统计结果。
ห้องสมุดไป่ตู้
小鼠骨髓细胞微核试验
一、实验目的
1． 观察诱变物质产生的微核； 2． 了解微核测定的方法与意义，计算微核 率。
二、实验原理
微核（Micronuclei）是真核类生物细胞中的一种异常结构， 往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间 期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主 核1/3 以下。 已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈 正相关，这一点和染色体畸变一样。所以，可用间期的微 核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。 目前国内外不少部门已经把微核测试用于辐射损伤，辐射 防护，化学诱变剂，新药实验，染色体遗传疾病及癌症前 期诊断等各方面。
三、实验材料
小鼠骨髓
四、实验步骤
1. 实验前6小时用对苯二酚80mg/kg注射于小鼠腹腔内， 处死动物，用0.85%的生理盐水吹出股骨骨髓，离心1000 转/分5分钟，除上清液，滴入少量小牛血清混匀后涂片。 2. 固定：放入甲醇和冰醋酸固定液中固定5-10分钟； 3. 染色：直接在Gimsa染液中染色10分钟，然后冲洗； 用滤纸擦干载片背面的水分，再用滤纸轻轻吸干载片上面 的水分，取出盖上盖片； 4. 观察：嗜多染红细胞呈灰兰色，成熟红细胞呈桔红色， 每只动物计数1000-2000个嗜多染红细胞，微核率为千分 之2.58+0.41。
实验三小鼠骨髓细胞微核试验
实验三小鼠骨髓细胞微核试验实验三：小鼠骨髓细胞微核试验一、实验目的本实验旨在通过观察小鼠骨髓细胞微核率的变化，了解并评估骨髓细胞受到的损伤程度，为进一步研究生物样品中的毒性物质及其潜在危害提供依据。
二、实验原理微核试验是一种检测染色体畸变的快速、敏感的方法，常用于评价各种因素对机体的遗传毒性。
微核是由染色体的片段或整个染色体在细胞分裂后期或末期未能进入子代细胞核而形成的，因此微核率的高低可反映细胞染色体受损的程度。
骨髓细胞微核试验常用于检测体内外接触毒物的程度及检测药物的遗传毒性。
三、实验步骤1.选取健康的成年小鼠，进行试验前处理，包括脱毛、称重等。
2.对小鼠进行腹腔注射或口服给予不同剂量的待测毒物。
3.分别于24小时、48小时和72小时三个时间段采集小鼠骨髓细胞，制备骨髓细胞涂片。
4.对涂片进行染色处理，以便观察和计数。
5.在显微镜下观察每个涂片，记录微核数并计算微核率。
6.统计分析数据，对比不同剂量组与对照组的微核率差异。
7.根据实验结果，评估待测毒物的遗传毒性及对骨髓细胞的损伤程度。
四、实验结果与数据分析经过对小鼠骨髓细胞微核率的观察和计数，我们得到了不同剂量组与对照组的微核率数据。
通过对比分析，我们发现随着待测毒物剂量的增加，小鼠骨髓细胞的微核率也逐渐升高。
这表明待测毒物具有明显的遗传毒性，能够导致骨髓细胞的损伤。
为了更直观地展示实验结果，我们可以使用柱状图或折线图来表示不同剂量组与对照组之间的微核率差异。
通过观察图表，可以清楚地看到随着毒物剂量的增加，微核率也逐渐升高。
这进一步证实了待测毒物的遗传毒性和对骨髓细胞的损伤作用。
五、实验结论通过本实验，我们得出以下结论：1.待测毒物具有明显的遗传毒性，能够导致小鼠骨髓细胞的损伤。
2.随着待测毒物剂量的增加，小鼠骨髓细胞的微核率也逐渐升高。
3.实验结果提示，待测毒物可能对机体产生一定的危害作用，需要进一步研究其对人体健康的潜在影响。
4.微核试验作为一种快速、敏感的检测方法，可用于评估生物样品中的毒性物质及其潜在危害。
小鼠骨髓多染红细胞微核试验
小鼠骨髓多染红细胞微核试验实验原理微核是由细胞分裂末期滞留的染色体片段或整条迟滞的染色体在分裂间期的子代细胞浆内形成的游离团块物质。
微核实验作为细胞遗传损伤的标志之一，可用于染色体断裂剂和纺锤体损伤剂的检测。
当骨髓成红细胞发展成为红细胞时，主核排除，成为多染红细胞，这些细胞保持其碱性约24小时，然后成为正染红细胞，并进入外周血中。
在主核排出时，已形成的微核可留在胞浆中。
由于这些细胞没有主核，便于观察微核。
观察并计数多染红细胞中的微核，可反映染色体断裂和纺锤体损伤情况。
本次试验的检测终点为染色体损伤。
一、实验动物健康的成年ICR小鼠50只，体重18-22g，每组10只，雌雄各半，随机分组。
二、试剂与其器材40%工业久效磷，环磷酰胺，PH6.8的小牛血清，甲醇，PH6.8的磷酸缓冲液，Giemsa 染液；注射器、小鼠灌胃针头、动物秤、剪刀、镊子、纱布、载玻片、染色盘、染色架、固定用染色缸、显微镜。
三、试验方法1.实验动物：采用配伍组设计法对小鼠进行分组。
每组10只，共5组。
2.剂量分组：设置阳性对照及阴性对照组。
阳性对照物采用120mg/kg环磷酰胺，阴性对照物采用蒸馏水。
此外设计三个剂量组，分别为高中低剂量组。
通常取受试物LD50的1/2,1/4,1/8等剂量。
剂量分别为13.2mg/kg，6.6mg/kg，3.3mg/kg。
3.染毒途径：经口灌胃染毒。
4.染毒次数及骨髓采样时间：一次染毒，24小时后取样测定。
5.取材：按照上述步骤染毒24小时后，颈椎脱臼处死动物，仔细剥离并取下一侧后肢股骨。
用纱布擦净碎肉，减去股骨两端，露出骨髓腔，用注射器吸取少量小牛血清冲洗骨髓腔数次，冲洗物滴在玻片上。
6.制片：蘸取骨髓液，推片3张，干燥后取其中较好的两张用甲醇固定5分钟。
7.染色：用1:9的Giemsa-磷酸缓冲液（PH6.8）染色约10-15分钟，自来水冲洗后，自然干燥。
8.镜检：每只小鼠选择一张染色最成功的片子，在低倍镜下观察染色及分散情况。
小鼠骨髓细胞微核试验
小鼠骨髓细胞微核试验
小鼠骨髓细胞微核试验是一种用于检测物质对小鼠骨髓细胞基因毒性的方法。
骨髓细
胞微核是正常细胞中小核细胞数量的标志。
在受到某些化学物质的影响后，骨髓细胞可以
形成异常小鼠骨髓微核和形态不规则的细胞，这是指指出该物质可能是致癌物或基因毒物，因此，这种试验可以用于评估某种物质对人类健康的风险。
在小鼠骨髓微核试验中，通常将小鼠的骨髓细胞放置在培养基中进行培养，然后将待
检物质加入培养中。
待检物质可能是化学物质、辐射或生物质等。
随后，经过一定时间后，分离的细胞会被染色并进行显微镜检查，以确定细胞数量和微核的数量。
通过小鼠骨髓细胞微核试验得出的结果可以帮助研究人员判断待检物质是否是基因毒
物和可能是致癌物，是否影响细胞的正常生长和健康。
因此，小鼠骨髓细胞微核试验已成
为一种广泛使用的实验室技术，以评估物质的潜在致癌性和毒性。
总之，小鼠骨髓细胞微核试验是一种快速且有效的实验室技术，用于评估化学物质、
辐射等物质对人类健康的影响和风险。
虽然该方法需要一定的经验和技能，但它已被广泛
使用于实验室中，并成为确定制定公众卫生政策的重要工具之一。
实验四.小鼠骨髓细胞微核试验
院系：理学院专业：农药学学号：0931******* 姓名：王熠实验四：小鼠骨髓细胞微核试验1、实验目的通过检测哺乳动物骨髓细胞中嗜多染红细胞（PCE）的微核出现率，间接反映骨髓细胞染色体畸变发生率的高低，从而判断受试动物是否具有致突变作用。
主要用于测试干扰细胞有丝分裂的物质。
2、实验原理微核可以出现在多种细胞中，但在有核细胞中较难与正常核的分叶及核突出物相区别。
红细胞在成熟之前最后一次分离后数小时可将主核排出，但微核仍保留于PCE细胞中，因此可通过计数PCE细胞中的微核来判断受试物的致突变作用。
3、实验材料3.1实验动物7～12周龄健康小鼠，体重20~30g，10只，雌雄各半。
3.2试剂小牛血清（灭活）；甲醇；姬姆萨染色液：磷酸盐缓冲液（pH6.8）：丝裂霉素C。
3.3器材生物显微镜、恒温水浴箱、解剖剪、镊子、止血钳、注射器、灌胃针头、载玻片、玻璃染色缸、塑料吸瓶、吸管、乳钵、干净纱布、滤纸等。
4、操作步骤4.1试剂的配制4.1.1小牛血清（灭活）小牛血清滤菌后置于56℃恒温水浴保温30 min进行灭活。
4.1.2磷酸盐缓冲液（pH 6.8）1/15mol/L磷酸氢二钠溶液：磷酸氢二钠(Na2HPO4) 9.47 g溶于1000ml蒸馏水中;1/15mol/L磷酸二氢钾溶液：磷酸二氢钾(KH2PO4) 9.07g溶于1000ml蒸馏水中;1/15mol/L磷酸氢二钠溶液50ml与1/15mol/L磷酸二氢钾溶液50ml混合即可。
4.1.3姬姆萨染色液将Giemsa染料和少量甲醇于乳钵里仔细研磨，再加入甲醇至375 ml，待完全溶解后，再加入125ml甘油，混合均匀。
置37℃恒温箱中保温48h。
保温期间振摇数次，促使染料的充分溶解。
取出过滤，即为姬姆萨储备液，两周后可使用。
实验前取姬姆萨储备液与磷酸盐缓冲液（pH 6.8）1 : 9混匀，即可。
4.2实验动物的处理步骤如下:（1）给药根据急性LD50，选用使动物出现中毒，但不引起动物死亡的剂量，受试小鼠腹腔注射丝裂霉素C1.5～2mg/kg（2）骨髓细胞液的制备在给与受试物6h后，小鼠脱颈椎处死，打开胸腔，沿着胸骨柄与肋骨交界处剪断，剥掉附着其上的肌肉，用滤纸擦干血污（3）PCE及微核的观察涂片在洁净的玻片一端滴小牛血清1滴，横向剪开胸骨，暴露骨髓腔，然后用止血钳挤出骨髓液至血清中，混匀，推片（长度约2～3cm），在空气中晾干（一般以两节胸骨髓液涂一张片子为宜）固定将干燥的涂片置甲醇液中固定5～10min，取出晾干染色固定好的涂片放入姬姆萨应用液中染色15～30min，蒸馏水冲洗，干燥镜检先在低倍镜下观察，选择分布均匀，染色较好的视野，然后换到油镜下观察计数。
小鼠骨髓细胞微核试验
（三）固定、染色 推片晾干 加6~10滴染液盖满玻片30秒 加水10~15滴混匀 染色6~8分钟 洗去 染液
（五）观察结果 1.先在低倍镜下选择分布均匀，染色的区域 2.在油镜下观察计数。
3.计数 300~600个PCE中含微核的 PCE数， 并且计数200个细胞中PCE与NCE的比值。 （PCE细胞呈灰蓝色，正染红细胞呈桔黄色）
3.实验试剂：甲苯、环磷酰胺、小牛血清、 生理盐水、快速染液等。
四、操作步骤
（一）试验动物及处理
1.动物选择：小鼠，体重18～20g，7～12周龄。每 组小鼠数量4只。
2.染毒途径：经口染毒。 3.染毒次数：每天染毒一次，连续4天，第5天取样。 4.剂量选择：1/2 LD50为最高剂量。甲苯灌胃 0.06ml/20g、0.03ml/20g、0.02ml/20g。 5.对照组：阳性对照组环磷酸胺（60mg/kg）腹腔注 射一次。阴性对照组使用等体积的溶剂。
六、注意事项
该试验的关键步骤是制作良好的骨髓涂片 及优质的染色。
（微核多呈圆形，边缘光滑整齐，嗜色性与核 质一致，呈紫红色或蓝紫色。）
五、结果分析与评价
微核率以千分率表示。每只动物为一观察单 位。 正常的PCE／NCE比值约为1（正常范围为 0.6～1.2）。 阳性对照组微核发生率一般大于千分之五， 且与阴性对照组比较有统计学意义。 阳性结果：受试物至少一个剂量组与对照组 比较有统计学意义，且有剂量反应关系。
小鼠骨髓Hale Waihona Puke 胞微核试验公共卫生学院 冯昶
一、目 的
学习和掌握小鼠骨髓多染红细胞 （PCE）微核测定方法
二、原 理
1.微核的形态： 2.观察、检测对象： 3.微核试验的意义：
小鼠骨髓细胞微核试验
五、操作步骤
染色 涂片充分晾干后 染色：1. 平置涂片于染色架上，滴加试剂一5滴， 迅速均匀盖满涂片，染色1.5 min 不要丢弃试剂一，直接滴加试剂二10滴，轻轻均匀摇晃涂片使染液均匀覆盖涂片，染色8 min 水洗涂片30s, 待干后镜检
五、操作步骤
观察 显微镜的使用 低倍镜：细胞群 高倍镜：分布均匀、染色良好 油镜：细胞形态、微核
微核成因 染色体或染色单体的无着丝点断片 纺锤丝受损而丢失的整个染色体 细胞分裂后期遗留在胞质中，单独形成规则的次核
植物细胞微核实验（蚕豆根尖）
淋巴细胞微核实验
双核微核实验
小鼠骨髓微核实验
嗜多染红细胞（PCE）
嗜多染红细胞是分裂后期的红细胞，由幼年发展为成熟红细胞的一个阶段 特点： 无主核、易识别微核（有核细胞中微核与正常核叶及核的突起难以鉴别） 胞内含核糖体，染色后成灰蓝色（区别于成熟红细胞，其无核糖体、染色呈淡橘红色） 骨髓中PCE数量充足，满足实验计数的要求
检测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点。
01
检测能使染色体发生断裂或使染色体和纺锤体联结损伤的化学物（DNA断裂剂和非整倍体诱变剂）。
02
辐射损伤、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。
03
三、意义及应用
器材：手术剪、无齿镊、小型弯止血钳、干净纱布、带橡皮头吸管、晾片架、玻璃蜡笔、玻璃染色缸、载玻片及推片、定时钟、带油镜头显微镜、细胞计数器
六、注意事项
镜下观察
03
01
正染红细胞
嗜多染红细胞
微核
有核细胞
镜下观察
有微核的嗜多染红细胞
有核细胞 正染红细胞
小鼠骨髓中嗜多染红细胞（PCE）微核实验简介
小鼠骨髓中嗜多染红细胞（PCE）微核实验简介小鼠骨髓中嗜多染红细胞（PCE）微核实验简介微核（micronucleus），与染色体损伤有关，是染色体或染色单体的无着丝点断片或纺锤丝受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期遗留在细胞质中，末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，包含在子细胞的胞质中，比主核小，故称微核。
故微核试验能检测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点。
实验目的1.学习和掌握小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）微核测定方法2.了解细胞染色体损伤情况，掌握检测断裂剂和部分非整倍体致突变剂的测定方法3.进一步熟练制片和镜检操作器材与试剂1.器材手术剪、无齿镊、小型弯止血钳、载玻片、玻璃染色缸、定时钟、晾片架、显微镜（带油镜）、注射器及针头、干净纱布、乳头吸管、玻璃铅笔、电吹风机2.试剂甲醇、Giemsa储备液、磷酸盐缓冲液（PH6.8）环磷酰胺操作步骤1.试验动物及处理（1）动物选择：一般选用大小鼠，小鼠最常用，18-20g，每组10只，雌雄各半。
（2）染毒途径：根据研究目的或受试物性质不同，原则上可尽量采用人类接触受试物的途径：通常采用灌胃法和腹腔注射。
（3）染毒次数：多次染毒法（每天染毒一次，连续4天，第五天取样）或两次染毒法（处死前30h+处死前6h）（4）剂量及对照选择据受试物的LD50，以1/2LD50为最高剂量组，下设3-4个剂量组。
同时设立阳性（环磷酰胺）和阴性对照（溶剂组）2.骨髓细胞制片和涂片：最后一次染毒后，在确定时间脱颈椎处死动物，迅速剪取其胸骨，剔去肌肉，用干净纱布擦拭，剪去每节骨骺端，用小型弯止血钳挤出骨髓液，点在载玻片一端预先滴好的一滴小牛血清中。
混匀后推片。
长度为2-3cm。
3.固定：将推好晾干的骨髓片放入染色缸中，用甲醇固定15min,取出晾干。
4.染色：Giemsa应用液染色15min.冲洗染色液，晾干。
5.观察计数：先以低倍镜、高倍镜粗检，选择细胞分布均匀、疏密适度、形态完整、染色良好的区域，再在油镜下按一定顺序进行PCE和微核计数。
小鼠骨髓微核实验骨髓细胞悬液制备的基本实验流程
小鼠骨髓微核实验骨髓细胞悬液制备的基本实验流程1.测试动物和治疗（1）动物的选择：常用的实验动物是大型和小鼠。
小鼠是使用最广泛的，需要18至20克体重和7至12周龄的体重。
每组中的小鼠数量为10只，雌雄各占一半。
（2）中毒途径：根据研究目的或所测试化学毒物的性质，可选择口服，经皮，呼吸和注射途径。
但原则上，应采用与人接触化学毒物相同的方式。
（3）中毒频率和采样时间：研究已经证实，化学毒物需要在目标器官中积累到一定浓度才能产生诱变作用。
不同化学毒物诱导的微核的峰值时间也不同。
波动范围可达24?72h。
这就要求在接触化学毒物后建立不同的采样时间点。
考虑到上述两个原因，建议使用多种曝光方法。
其中，四次曝光更方便合理。
也就是说，每天一次，连续4天，第5天采样。
这样，样品可以覆盖24?72h 的峰，并且如果峰延迟至96h，则不会错过。
（4）剂量选择：被测化学毒物的最大剂量应为最大耐受量，但溶解度极限除外。
如果是叶子，应设定3至5个或更多剂量组。
剂量范围应正确且连续。
腹腔注射环磷酰胺（50?100mg / kg）或丝裂霉素C（10mg / kg）一次即可。
或2次。
静脉注射使用等体积的溶剂。
2.骨髓液的制备和涂片在最后一次暴露测试动物后，在确定的时间通过颈脱位或麻醉处死它们。
将四肢固定在解剖板上，用头发浸透腹部的中线，切开胸腹部，除去胸骨，并清洗血液。
，去除肌肉，切断骨the，使用小的弯曲止血钳在干净的玻璃载玻片上挤入骨髓，并滴加小牛血清，混合均匀，然后推动载玻片。
或者，在处死动物后，用手术剪刀除去股骨，除去肌肉，用生理盐水洗净血液和碎肉，切掉分离的骨physi，并使用带针的2ml注射器吸小牛血清。
插入骨髓腔，将颗粒冲洗到离心管中，然后使用移液管吹动微观肿块以校正均匀性。
以1000r / min的速度离心10分钟，弃去多余的上清液，并与沉淀物混合约0.5ml。
用滴管吸出并将一滴滴在干净的玻璃载玻片上，然后推动载玻片。
小鼠微核试验
可取胸骨或股骨的骨髓。 固定 将推好晾干的骨髓片放入染色缸中，用甲醇溶液固定 15 min， 取出晾干。不能及时染色的涂片也应固定后保 存。 染色 将固定晾干后的涂片，用新鲜配制的 Gemsa 应用液染色 10 ～ 15 min， 然后冲洗掉玻片上的染色液，置晾片架上 晾干。 观察计数
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 国际环境致突变物致癌物防护委员会(ICPEMC)
于1983年提出致突变试验的遗传学终点分为5类: ①DNA完整性的改变(形成加合物、断裂、交联)； ②DNA重排或交换；③DNA碱基序列改变；④染 色体完整性改变；⑤染色体分离改变。 其中③实 际上指基因突变；④指染色体畸变。
--------------------------------------------------------------------------------------试验名称 DNA DNA重排 DNA碱基 染色体完整 染色体分离 完整性 或交换 序列改变 性改变 改变 ------------------------------------------------------------------------------------细胞遗传学试验 1 2 微核试验 1 2 显性致死试验 1 2 体外姐妹染色单体 交换试验(SCE) 2 1 可遗传易位试验 1 细菌回复突变试验 1 哺乳动物细胞突变试验 1 果蝇伴性隐性致死试验 1 转基因动物检测系统 1 DNA测序及分子杂交 检测技术 1 小鼠特定基因座突变试验 1 酵母重组试验 1 2 1 细菌DNA修复试验 体外UDS试验 1 单细胞凝胶电泳技术 1 DNA加合物检测技术 1 ------------------------------------------------------------------------------------
小鼠微核试验流程
小鼠微核试验流程The process of the micronucleus test on mice is an important step in evaluating the genotoxicity of chemicals, drugs, and other substances. The test involves exposing mice to the substance in question and then examining their bone marrow cells for the presence of micronuclei, which are small, abnormal nuclei that can indicate DNA damage or chromosomal instability.小鼠微核试验是评估化学品、药物和其他物质的遗传毒性的重要步骤。
该测试涉及让小鼠接触所研究的物质，然后检查它们的骨髓细胞中是否存在微核，微核是指小的异常细胞核，可能表明DNA损伤或染色体不稳定。
From a scientific perspective, the micronucleus test on mice is crucial in determining the potential harm that a substance can cause to living organisms. By observing the occurrence of micronuclei in the bone marrow cells of mice, researchers can assess the genotoxic effects of the tested substance, which can inform decisions related to human and environmental safety.从科学角度来看，对小鼠进行微核试验对于确定物质可能对生物体造成的潜在危害至关重要。
小鼠骨髓细胞微核试验
四、
操作步骤
1． 动物一般选用 7~12 周的、体重 20~30g 的小鼠，也可选用体重 150~200g 的大鼠。 每个剂量组至少用两种性别的动物各 5 只。 若需多次采样， 则每组的动物数需增加， 每个采样时间至少有 8 性质 （尤其是溶解度、 水溶性或脂溶性） ， 确定溶剂。 一般采用水或食用植物油，不容者可用淀粉制成混悬液。 一般在受试物的 1/2~1/30LD50 范围内选择 3~4 个剂量组。 也可采用急性毒性试验中出现中毒 而不致死的剂量作为染毒最高剂量组，以畜禽的可能摄入量作为最低剂量组，中间插入 1~2 个剂量组。同时设对照组，即空白对照、溶剂对照和阳性对照。阳性对照组用环磷酰胺生理 盐水溶液一次腹腔注射 30~50mg/kg，或以环磷酰胺水溶液 80~120mg/kg，经口染毒两次， 间隔 24h。 3．染毒途径根据受试物的性质及畜禽接触方式不同，可分别选用灌胃、腹腔注射、皮 下或肌肉注射等染毒途径。 4．染毒方法一般采用 2 次染毒方法，两次间隔 24h。 5．制片 （1）骨髓细胞液的制备在第二次给予受试物 6h 后，小鼠脱颈椎处死。取下小鼠两侧股 骨，剔去肌肉，用滤纸或纱布擦去血污和肌肉，减去股骨两端。用配有 6 号针头 1ml 注射器 吸取小牛血清约 0.05ml 冲洗骨髓腔数次，将冲洗物滴在载玻片上。 （2） 涂片将玻片上的冲洗物调匀后， 推片若干张。 迅速干燥， 可在酒精灯上短时烘烤。 （3）固定将干燥的涂片置甲醇液中固定 5~10min，取出晾干。当日不染色的涂片亦应 固定后保存。 （4）染色固定好的涂片用 1:10 的吉姆萨-磷酸缓冲液（pH6.4）染色 15~30min。用蒸馏 水冲洗，干燥，待检。 为了便于诊断，可选用吖啶橙染色法。固定好的涂片放入 0.24mmol/L 吖啶橙磷酸缓冲 液内，染色 2~3min。用 Ph6.8 磷酸缓冲液冲洗 3 次，每次 1~2min。晾干后在荧光显微镜下 观察，如微核带红色荧光，可再冲洗数分钟，直至发黄绿色荧光。在染色、干燥过程中均应 避光，以防荧光减弱或消失。 （5）封片染色干燥后的涂片，若需长时间保存，可放入二甲苯透明 6min，取出后趁湿 滴上适量中性树脂胶， 盖上盖玻片， 平置。 待干后却可收入盒内备检。 若在短时内进行观察， 涂片不需制成涂片。 （6）镜检先以低倍镜、高倍镜粗检，选择细胞完整、分布均匀和染色良好的区域，再 以油镜检查计数。 可用细胞形态是否完好， 作为判断制片优劣的标准。 嗜多染红细胞 （PCE） 呈灰蓝色，成熟的正染红细胞（NCE）呈粉红色。 每只动物需计数 1000 个嗜多染红细胞， 并计算含微核的嗜多染红细胞数， 列入表实 6-1。 在一个嗜多染红细胞中出现两个或多个微核，仍按一个为细胞计算。微核率按下式计算，并 以千分率表示。 微核率列入表实 6-2。 另外， 在计数 PCE 时， 计数见到的 NCE 数， 求出 PCE/NCE 的比值。 嗜多染红细胞微核率=有微核的嗜多染红细胞总数/检查嗜多染红细胞数× 100% 表示 6-1 出现微核的嗜多染红细胞数统计 性别 空白对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组 阳性对照组
微核试验_精品文档
.
图13-1 细胞周期可划分为四个阶段
.
微核（micronucleus）
是染色体或染色单体的无着丝点片断或纺锤体 受损而丢失的整个染色体，于细胞分裂后期留在 细胞质中，末期后，单独形成一个或几个规则的 次核，包含在子细胞的胞质内，比主核小，故叫 微核。
.
原理：
1 有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点 的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞 质中
2 断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向 移动，从而遗留在细胞质中
.
结论：
微核试验能检测化学或其他物质因素诱导产生 的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗 传学终点
.
微核可出现于多种细胞中，但在有核细胞中 难以与正常核的分叶及核突出物区分，故常计数 PCE细胞中的微核，因为在此阶段，主核排出，易 于观察微核，这些细胞保持其嗜碱性约24小时， 然后成为正染红细胞（NCE）,并进入外周血。
２ 计数：1000个PCE中含微核的PCE数，并计算 200个细胞中PCE/NCE的比值
.
结果与分析：
1 结果：试验只计数PCE中的微核，微核率 以千分率表示。每组的雌雄动物分开计数 微核PCE均值。
2 分析：正常的PCE/NCE比值为1（0.6-1.2）， 如果＜0.1，则表示PCE形成受到严重抑制； 如果＜0.05，则表示受试物剂量过大，结果 不可靠。
2 固定：将推好凉干的骨髓片放进染色缸，甲醇 固定15分钟，取出晾干
3 染色：用新鲜配制的Giemsa应用液（Giemsa储 备液一份加pH6.8的磷酸盐缓冲液9份）染色10－ 15分钟，细流水冲掉玻片染色液，晾干
微核试验实验报告
一、实验背景微核试验是一种常用的遗传毒理学检测方法，用于评估化学物质、药物或其他环境因素对生物体的遗传毒性。
本实验采用小鼠骨髓细胞微核试验，旨在检测某化学物质对小鼠骨髓细胞的遗传毒性。
二、实验目的1. 观察某化学物质对小鼠骨髓细胞微核形成的影响。
2. 评估该化学物质的遗传毒性。
3. 探讨该化学物质对小鼠骨髓细胞DNA损伤的机制。
三、实验材料与仪器1. 实验动物：清洁级雄性昆明小鼠，体重18-22g。
2. 实验试剂：某化学物质、生理盐水、小牛血清、RPMI-1640培养基、吖啶橙染液等。
3. 实验仪器：显微镜、细胞培养箱、细胞培养板、电子天平等。
四、实验方法1. 实验分组：将小鼠随机分为对照组和实验组，每组10只。
2. 给药：实验组小鼠按0.5ml/只的剂量给予某化学物质，对照组小鼠给予等体积的生理盐水。
3. 采样：给药后24小时，处死小鼠，取骨髓细胞。
4. 细胞培养：将骨髓细胞接种于细胞培养板，置于细胞培养箱中培养。
5. 染色：细胞培养至适宜时期，用吖啶橙染液染色。
6. 观察与计数：显微镜下观察骨髓细胞，记录微核细胞数。
7. 数据处理：采用SPSS软件进行统计学分析，比较各组间微核率差异。
五、实验结果1. 对照组小鼠骨髓细胞微核率为（5.6±1.2）%，实验组小鼠骨髓细胞微核率为（10.8±2.5）%。
2. 实验组小鼠骨髓细胞微核率显著高于对照组（P<0.05）。
六、实验结论1. 某化学物质对小鼠骨髓细胞具有遗传毒性。
2. 该化学物质可能导致小鼠骨髓细胞DNA损伤，进而引发微核形成。
七、实验讨论1. 微核试验是一种简单、快速、灵敏的遗传毒理学检测方法，可用于评估化学物质、药物等对生物体的遗传毒性。
2. 本实验结果表明，某化学物质对小鼠骨髓细胞具有遗传毒性，可能与DNA损伤有关。
3. 进一步研究应探讨该化学物质对小鼠骨髓细胞DNA损伤的机制，为该化学物质的安全性评价提供依据。
【2017年整理】小鼠微核试验
宝兴千里光的小鼠微核试验研究1.研究背景1.1千里光植物形态千里光（S.scandens Buch.-Ham)为菊目(Asterales)菊科(Compositae or Ast-erales)千里光属Compositae or Asteraceae)植物的地上干燥部分。
千里光名千里及，别名九里明、九龙光、黄花草、九岭光、蒲儿根、一扫光等，始于《本草拾遗》，主要分布于我国华东、中南及西南各地，多生于丘陵山地林灌丛草丛和路边，夏秋采收，是应用历史悠久的常用中药之一。
味苦、辛、性寒具有清热解毒、明目退翳、杀虫止痒、散瘀消肿等功效。
千里光多年生草本。
茎木质细长，高约2～5米，曲折呈攀援状，上部多分枝，有脱落性的毛。
叶互生；椭圆状三角形，或卵状披针形，长7～10厘米，宽3.5～4.5厘米，先端渐尖，基部戟形至截形，边缘具不规则缺刻状的齿牙，或呈微波状，或近于全缘，有时基部稍有深裂，两面均有细软毛。
头状花序顶生，排列成伞房花序状，头状花序径约1厘米；总苞圆筒形，苞片10～12片，披针形或狭椭圆形，长5～6毫米，宽2毫米，先端尖，无毛或少有细毛；周围舌状花黄色，雌性，约8朵，长约9毫米，宽约2毫米，先端3齿裂；中央管状花，黄色，两性，长约6.5毫米，先端5裂。
瘦果圆筒形，长约3毫米，有细毛；冠毛长约7毫米，白色。
1.2 千里光功能主治清热，解毒，杀虫，明目。
治各种急性炎症性疾病，风火赤眼，目翳，伤寒，菌痢，大叶性肺炎，扁桃体炎，肠炎，黄疸，流行性感冒，毒血症，败血症，痈肿疖毒，干湿癣疮，丹毒，湿疹，烫伤，滴虫性阴道炎。
用于风热感冒、目赤肿痛、泄泻痢疾、皮肤湿疹疮疖。
①《本草拾遗》：主疫气，结黄，疟瘴，盅毒，煮服之吐下，亦捣敷疮、虫蛇犬等咬伤处。
②《本草图经》：与甘草煮作饮服，退热明目。
花、叶：治眼有效。
③《滇南本草》：洗疥癞癣疮，去皮肤风热。
④《纲目》：同小青煎服，治赤痢腹痛。
⑤《生草药性备要》：治疳疔，消热毒。
小鼠微核试验
宝兴千里光的小鼠微核试验研究1.研究背景1.1千里光植物形态千里光（S.scandens Buch.-Ham)为菊目(Asterales)菊科(Compositae or Ast-erales)千里光属Compositae or Asteraceae)植物的地上干燥部分。
千里光名千里及，别名九里明、九龙光、黄花草、九岭光、蒲儿根、一扫光等，始于《本草拾遗》，主要分布于我国华东、中南及西南各地，多生于丘陵山地林灌丛草丛和路边，夏秋采收，是应用历史悠久的常用中药之一。
味苦、辛、性寒具有清热解毒、明目退翳、杀虫止痒、散瘀消肿等功效。
千里光多年生草本。
茎木质细长，高约2～5米，曲折呈攀援状，上部多分枝，有脱落性的毛。
叶互生；椭圆状三角形，或卵状披针形，长7～10厘米，宽3.5～4.5厘米，先端渐尖，基部戟形至截形，边缘具不规则缺刻状的齿牙，或呈微波状，或近于全缘，有时基部稍有深裂，两面均有细软毛。
头状花序顶生，排列成伞房花序状，头状花序径约1厘米；总苞圆筒形，苞片10～12片，披针形或狭椭圆形，长5～6毫米，宽2毫米，先端尖，无毛或少有细毛；周围舌状花黄色，雌性，约8朵，长约9毫米，宽约2毫米，先端3齿裂；中央管状花，黄色，两性，长约6.5毫米，先端5裂。
瘦果圆筒形，长约3毫米，有细毛；冠毛长约7毫米，白色。
1.2 千里光功能主治清热，解毒，杀虫，明目。
治各种急性炎症性疾病，风火赤眼，目翳，伤寒，菌痢，大叶性肺炎，扁桃体炎，肠炎，黄疸，流行性感冒，毒血症，败血症，痈肿疖毒，干湿癣疮，丹毒，湿疹，烫伤，滴虫性阴道炎。
用于风热感冒、目赤肿痛、泄泻痢疾、皮肤湿疹疮疖。
①《本草拾遗》：主疫气，结黄，疟瘴，盅毒，煮服之吐下，亦捣敷疮、虫蛇犬等咬伤处。
②《本草图经》：与甘草煮作饮服，退热明目。
花、叶：治眼有效。
③《滇南本草》：洗疥癞癣疮，去皮肤风热。
④《纲目》：同小青煎服，治赤痢腹痛。
⑤《生草药性备要》：治疳疔，消热毒。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
可取胸骨或股骨的骨髓。 固定 将推好晾干的骨髓片放入染色缸中，用甲醇溶液固定 15 min， 取出晾干。不能及时染色的涂片也应固定后保 存。 染色 将固定晾干后的涂片，用新鲜配制的 Gemsa 应用液染色 10 ～ 15 min， 然后冲洗掉玻片上的染色液，置晾片架上 晾干。 观察计数
•
注意事项
• 操作时推制良好的骨髓涂片及良好的染色，
是本实验的关键步骤。 • 熟悉并正确区分各种骨髓细胞。
应达最大耐受量，或参考毒物的LD50， 以80％LD50为最高剂量。在一般情况下，应设4～ 5或更多试验组，剂量水平跨3个以上数量级。另 设阳性和阴性对照组。阳性对照组可用环磷酰胺 (50～100mg/Kg)或丝裂霉素C(10mg/kg)腹 腔注射一次或二次。阴性对照组使用等体积的溶 剂。
操作步骤
操作步骤
• 动物选择
首选物种是小鼠和大鼠。以小 鼠使用最为广泛，要求体重18～20g，7～ 12周龄。每组小鼠数量10只，雌雄各半。 无首选品系，通常用实验室品系。 • 染毒途径 根据研究目的或受试化学毒物性 质的不同，可分别选用经口、经皮、经呼 吸道及注射等染毒途径。但 原则上应尽可 能采用与人体接触化学毒物相同的途径。
4.结果分析与评价
• 本试验中只计数 PCE 中的微核，微核率以千分率
表示。每只动物为一观察单位。每组的雌、雄动 物分别计算微核 PCE 的均值。雌、雄动物之间无 明显的性别差异时可合并计算结果，否则应分别 进行计算； 正 常 的 PCE/NCE 比 值 约 为 l( 正 常 范 围 为 0.6 ～ 1.2)。如比值＜0.1，则表示PCE形成受到严重抑 制；如比值＜0.05，则表示受试化学毒物的剂量 过大，试验结果不可靠。
操作步骤
• 染毒次数及取Байду номын сангаас时间 不同化学毒物诱发微
核出现的高峰时间也不尽相同。波动范围 可以达到 24 ～ 72 h。 这就要求在接触化学 毒物后设立不同的采样时间点。建议采用 多次染毒的方法。其中以4次染毒比较方便 合理。即每天染毒一次，连续 4 d， 第 5 天 取样。
操作步骤
• 剂量选择 受试物的最大剂量除因溶解度所限外，
主要致突变试验所反映的遗传学终点
• 微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有
丝分裂的化学毒物的快速检测方法。微核 是指存在于细胞中主核之外的一种颗粒， 其染色与细胞核一致，大小相当于细胞直 径的 l／20～l／5， 呈圆形或杏仁状，在间 期细胞中可以出现一个或多个。
• 一般认为微核是细胞内染色体断裂或纺锤
• 国际环境致突变物致癌物防护委员会(ICPEMC)
于1983年提出致突变试验的遗传学终点分为5类: ①DNA完整性的改变(形成加合物、断裂、交联)； ②DNA重排或交换；③DNA碱基序列改变；④染 色体完整性改变；⑤染色体分离改变。 其中③实 际上指基因突变；④指染色体畸变。
--------------------------------------------------------------------------------------试验名称 DNA DNA重排 DNA碱基 染色体完整 染色体分离 完整性 或交换 序列改变 性改变 改变 ------------------------------------------------------------------------------------细胞遗传学试验 1 2 微核试验 1 2 显性致死试验 1 2 体外姐妹染色单体 交换试验(SCE) 2 1 可遗传易位试验 1 细菌回复突变试验 1 哺乳动物细胞突变试验 1 果蝇伴性隐性致死试验 1 转基因动物检测系统 1 DNA测序及分子杂交 检测技术 1 小鼠特定基因座突变试验 1 酵母重组试验 1 2 1 细菌DNA修复试验 体外UDS试验 1 单细胞凝胶电泳技术 1 DNA加合物检测技术 1 ------------------------------------------------------------------------------------
丝受影响而在细胞有丝分裂后期滞留在细 胞核外的遗传物质(染色体断片或迟滞的染 色体 )。所以，微核试验能检测化学毒物或 物理因素诱导产生的 染色体完整性改变 和 染色体分离改变 这两种遗传学终点，用于 检测断裂剂及非整倍体诱发剂。
微核可以出现在多种细胞中，但在有核细 胞中较难与正常核的分叶及核突出物相区 别，故常计数 PCE 细胞中的微核，因为当 成红细胞发展为红细胞时，主核排出，成 为 PCE， 这些细胞保持其嗜碱性约 24 小时， 然后成为正染红细胞（ NCE）， 并进入外 周血。在主核排出时，但微核仍保留于 PCE细胞中。
小鼠骨髓细胞微核试验
一、意义和目的
• 学习小鼠骨髓多染红细胞（ PCE） 微核
测定方法，了解环磷酰胺对骨髓细胞染 色体的损伤作用。
二、原 理
• 基因突变和染色体畸变的检测可直接反映化学毒
物的致突变性,是评价化学毒物致突变性唯一可靠 的方法。还有许多试验所观察到的现象并不反映 基因突变,染色体畸变和染色体分离异常，而仅反 映致突变过程中发生的其他事件。因此，将试验 观察到的现象所反映的各种事件统称为遗传学终 点(genetic endpoint )。
•
•
操作步骤
观察计数 先在低倍镜下进行观察，选择分布均匀，染色 较好的区域，再在油镜下观察计数，如染色得当， 细胞核呈暗蓝色，PCE呈灰（淡）蓝色， NCE呈 淡红色。此外，一般地PCE比NCE稍大稍圆。 对所分析的每只动物，计数含微核的PCE数和 每1000个PCE中含微核的PCE数（或微核PCE千 分数），并且计数 200 个红细胞中 PCE 数和 PCE 百分比（或PCE/NCE的比值）。