葡聚糖凝胶层析实验报告

葡聚糖层析实验报告

一、实验目的1. 掌握葡聚糖凝胶层析的原理及其在生物大分子分离中的应用。

2. 学习并掌握葡聚糖凝胶层析的基本操作技术。

3. 通过实验，验证葡聚糖凝胶层析对分子量不同的物质具有分离效果。

二、实验原理凝胶层析，又称分子排阻层析或凝胶过滤，是一种基于被分离物质分子量差异的层析分离技术。

该技术利用凝胶颗粒的多孔网状结构，通过分子量差异使不同组分在层析柱中以不同的速度移动，从而达到分离的目的。

葡聚糖凝胶是一种由直链的葡聚糖分子和交联剂3-氯1，2-环氧丙烷交联而成的高分子化合物。

通过调节葡聚糖和交联剂的比例，可以控制凝胶颗粒的孔径大小。

分子量大于允许进入凝胶网孔范围的物质被凝胶排阻，不能进入凝胶颗粒内部，阻滞作用小，随溶剂流动快速流出层析柱；而分子量小的物质可进入凝胶颗粒的网孔内，阻滞作用大，流程慢，后流出层析柱。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 葡聚糖凝胶（Sephadex）- 标准蛋白质溶液（如牛血清白蛋白、鸡蛋清蛋白等）- 溶剂（如磷酸盐缓冲溶液）- 离心机- 层析柱- 漏斗- 吸管2. 实验仪器：- 电子天平- 移液器- 显微镜四、实验步骤1. 准备层析柱：将葡聚糖凝胶倒入层析柱中，用溶剂冲洗，直至凝胶床均匀。

2. 加载样品：将标准蛋白质溶液加入层析柱中，使其在凝胶床表面形成一薄层。

3. 洗脱：用溶剂缓慢冲洗层析柱，收集不同时间流出的洗脱液。

4. 分析洗脱液：将收集到的洗脱液进行比色分析或电泳分析，确定各组分的位置。

五、实验结果与分析1. 实验结果：- 洗脱液在比色分析或电泳分析中，可观察到不同分子量的蛋白质分别在凝胶层析柱中的位置。

- 小分子量的蛋白质先流出层析柱，大分子量的蛋白质后流出。

2. 结果分析：- 通过实验，验证了葡聚糖凝胶层析对分子量不同的物质具有分离效果。

- 实验结果表明，小分子量的蛋白质在凝胶层析柱中的流动速度较快，大分子量的蛋白质流动速度较慢。

六、实验结论1. 葡聚糖凝胶层析是一种基于分子量差异的层析分离技术，在生物大分子分离中具有广泛的应用。

凝胶层析_实验报告

一、实验目的1. 了解凝胶层析的原理和操作方法。

2. 掌握凝胶层析分离混合物中不同组分的基本技能。

3. 分析实验结果，验证实验原理。

二、实验原理凝胶层析是一种基于分子筛效应的分离技术。

该技术利用凝胶的孔隙结构，使不同分子量的物质在凝胶柱中受到不同的阻滞作用，从而实现分离。

凝胶是一种具有多孔、网状结构的分子筛，分子量不同的物质通过凝胶柱的速度也不同。

在凝胶层析实验中，样品被注入凝胶柱，随着洗脱液的流动，不同分子量的物质会以不同的速度通过凝胶柱，从而实现分离。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：混合样品、葡聚糖凝胶、洗脱液（如蒸馏水、乙醇等）。

2. 实验仪器：凝胶层析柱、注射器、恒流泵、收集器、滤纸、烧杯等。

四、实验步骤1. 准备凝胶层析柱：将葡聚糖凝胶倒入层析柱，轻轻敲打柱底，使凝胶均匀分布。

2. 洗脱液平衡：将凝胶层析柱放入盛有洗脱液的烧杯中，使凝胶充分浸泡。

3. 样品制备：将混合样品与洗脱液按一定比例混合，制成样品溶液。

4. 注射样品：将样品溶液注入凝胶层析柱。

5. 收集分离组分：随着洗脱液的流动，不同分子量的物质会以不同的速度通过凝胶柱。

将收集器放置在凝胶柱下方，收集分离组分。

6. 分析实验结果：观察收集到的组分，分析实验结果。

五、实验结果与分析1. 分离效果：通过凝胶层析实验，成功分离出混合样品中的不同组分。

2. 分组情况：根据收集到的组分，分析其分子量大小，确定分离效果。

3. 实验原理验证：实验结果表明，凝胶层析能够有效分离混合物中的不同组分，验证了实验原理。

六、实验讨论1. 凝胶层析的原理：凝胶层析的原理是基于分子筛效应，通过凝胶的孔隙结构，使不同分子量的物质在凝胶柱中受到不同的阻滞作用，从而实现分离。

2. 影响分离效果的因素：实验过程中，洗脱液的种类、流速、凝胶的孔径等因素会影响分离效果。

在实验中，应严格控制这些因素，以确保分离效果。

3. 实验结果分析：通过分析实验结果，可以了解不同组分在混合样品中的含量和分子量大小，为后续研究提供数据支持。

葡聚糖凝胶Sephadex G–25柱层析法脱盐分离蛋白质实验技术总结

凝胶是由胶体粒子构成的立体网状结构。网眼里吸满水后凝胶膨胀呈柔软而富于弹性的半固体状态。人工合成的凝胶网眼较均匀地分布在凝胶颗粒上有如筛眼，小于筛眼的物质分子均可通过，大于筛眼的物质分子则不能，故称为“分子筛”。小于筛眼的分子将完全渗入凝胶网眼，并随着流动相的移动沿凝胶网眼孔道移动，从一个颗粒的网眼流出，又进入另一颗粒的网眼，如此连续下去，直到流过整个凝
胶
柱为止，因而流程长、阻力大、流速慢；大于筛眼的分子则完全被筛眼排阻而不能进入凝胶网眼，只能随流动相沿凝胶颗粒的间隙流动，其流程短、阻力小、流速快，比小分子先流出层析柱；小分子最后流出。分子大小介于完全排阻不能进入或完全渗入凝胶筛眼之间的物质分子，则居中流出。这样被分离物质即被按分子的大小分开。
层析法的基本原理
层析法是利用混合物中各组分物理化学性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等），使各组分在两相（一相为固定的，称为固定相；另一相流过固定相，称为流动相）体系中的分布程度不同，从而使各组分以不同的速度移动而达到分离的目的。
如盐析（粗分级分离）向蛋白质溶液中加入大量的中性盐[（NH4)2SO4， Na2SO4，Na2SO4]，使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀，这种现象称为盐析。
可见，不同类型的各种凝胶溶涨所需的最少时间是不相同的，请参考有关的技术数据。在凝胶溶涨的处理过程中，不能进行剧烈搅拌，禁止使用电磁搅拌器，以为这样会使凝胶颗粒破裂而产生碎片。
2. 装柱
将层析剂装入柱中进行层析的方法称柱层析法。作层析用的柱子称层析柱。柱子的一端为进口，另一端为出口，出口端底部有烧结玻璃砂板，能阻止层析剂流出，溶剂则可流过。层析柱的长短粗细根据实验的目的而定，一般说来，凝胶层析时柱越长，分离效果越好。但柱过长，层析时间长，样品易稀释造成扩散。

葡聚糖凝胶层析试验报告

葡聚糖凝胶层析实验报告一、实验目的1、学习凝胶（Gel）层析法的基本原理;2、掌握葡聚糖凝胶（SephadeX）柱层析的操作技术。

二、实验原理凝胶层析又称排阻层析，凝胶过滤，渗透层析或分子筛层析等对于某种型号的凝胶，一些大分子不能进入凝胶颗粒内部而完全被排阻在外，只能沿着颗粒间的缝隙流出柱外（所用洗脱液的体积为外水体积）;而一些小分子不被排阻，可自由扩散，渗透进入凝胶内部的筛孔，尔后又被流出的洗脱液带走（所用洗脱液的体积为内水体积）。

分子越小，进入凝胶内部越深，所走的路程越多，故小分子最后流出柱外，而大分子先从柱中流出。

一些中等大小的分子介于大分子与小分子之间，只能进入一部分凝胶较大的孔隙，亦即部分排阻，因此这些分子从柱中流出的顺序也介于大、小分子之间。

这样样品经过凝胶层析后，分子便按照从大到小的顺序依次流出，达到分离的目的。

三、仪器、材料和试剂1、仪器：内直径为1cm，外直径为的层析柱，恒流泵、收集器、酶标仪、试管、烧杯、移液枪。

2、材料与试剂：交联葡聚糖、双蒸水、蛋白溶液样品。

四、实验步骤 1 、装柱将交联葡聚糖溶液用玻璃棒引流导入层析柱中，要注意，不能让柱子中有气泡，可以边装边用玻璃棒搅拌。

2、上样装好柱后，用移液枪将柱子中上面的水吸出，再用移液枪将 1ml 的蛋白溶液加入层析柱中。

3、洗脱和收集打开恒流泵和收集器装置，待样品刚好渗入到凝胶中时，再向层析柱中加入3-4ml 的蒸馏水，此时盖上层析柱的上盖，将上盖的细管插入到盛有双蒸水的烧杯中，调节恒流泵的速度和收集器时间，开始洗脱收集。

4、样品的检测酶标版上，选用一个孔加入双蒸水作为对照，用酶标仪在测检测。

五、实验结果及分析 1、实验结果:2、蛋白质样品洗脱曲线:收集一段时间后，将样品取出，依次编号，依次加入200 a I 到280nm 下收集样品时设置的时间为3min每管，收集得到每管的体积为, 则计算：流速二每管体积/每管时间=3二min。

葡聚糖凝胶层析法

实验一蛋白质分子量的测定——凝胶层析法；一、实验目的；1.掌握凝胶层析的基本原理；2.学习利用凝胶层析法测定蛋白质相对分子质量的实；二、实验原理；凝胶层析法也称分子筛层析法，是利用具有一定孔径大；将凝胶装在柱后，柱床体积称为“总体积”，以Vt表；式中Ve为洗脱体积，自加入样品时算起，到组分最大；上式中Ve为实际测得的洗脱体积；Vo可用不被凝胶；如果假定蛋白质实验一蛋白质分子量的测定——凝胶层析法一、实验目的1.掌握凝胶层析的基本原理。

2.学习利用凝胶层析法测定蛋白质相对分子质量的实验技能。

二、实验原理凝胶层析法也称分子筛层析法，是利用具有一定孔径大小的多孔凝胶作固定相的层析技术。

当混合物随流动相经过凝胶层析柱时，其中各组分按其分子大小不同而被分离的技术。

该法设备简单、操作方便、重复性好、样品回收率高。

凝胶是一种不带电的具有三维空间的多孔网状结构、呈珠状颗粒的物质，每个颗粒的细微结构及筛孔的直径均匀一致，像筛子，小的分子可以进入凝胶网孔，而大的分子则排阻于颗粒之外。

当含有分子大小不一的蛋白质混合物样品加到用此类凝胶颗粒装填而成的层析柱上时，这些物质即随洗脱液的流动而发生移动。

大分子物质沿凝胶颗粒间隙随洗脱液移动，流程短，移动速率快，先被洗出层析柱；而小分子物质可通过凝胶网孔进入颗粒内部，然后再扩散出来，故流程长，移动速度慢，最后被洗出层析柱，从而使样品中不同大小的分子彼此获得分离。

若分子大小介于上述完全排阻或完全渗入凝胶的物质，则居二者之间从柱中流出。

总之，各种不同相对分子质量的蛋白质分子，最终由于它们被排阻和扩散的程度不同，在凝胶柱中所经过的路程和时间也不同，从而彼此可以分离开来。

将凝胶装在柱后，柱床体积称为“总体积”，以Vt表示。

实质上Vt是由V i与Vg三部分组成，Vo称为“孔隙体积”或“外水体积”，即存在于柱床内凝胶颗粒外面空隙之间的水相体积，相应于一般层析法中柱内流动相的体积；Vi 为内体积，即凝胶颗粒内部所含水相的体积。

实验三葡聚糖凝胶柱层析纯化蛋白质

层析柱的重要参数：
Vt(total volume) Vo(outer volume) Vi(inner volume) Ve(elution volume) Vg(gel volume) Vt=Vo+Vi+Vg , Ve=Vo+Kd×Vi。
组分的洗脱体积（Ve）：①当样品的体积很少时（与洗脱体积比较可以忽略不计），在洗脱图中，从加样到峰顶位置所用洗脱液体积为Ve。 ②当样品体积与洗脱体积比较不能忽略时，洗脱体积计算可以从样品体积的一半到峰顶位置。③当样品体积很大时，洗脱体积计算可以从应用样品开始到洗脱峰升高的弯曲点（或半高处）。
常用0.02％叠氮钠或20%乙醇溶液作防腐剂。 1 厘米光程时， 254nm 处透光率为 60 ％，
280nm处透光率为100％。
3、试剂、器材：
3.1、层析介质 Sephadex G-50； 3.2、样品（包含三个组分）： ①蓝色葡聚糖2000， ②溶菌酶，③ Trp
上样量：0.4ml/柱。 3.3、洗脱液：0.15M氯化钠，即生理盐水。
、洗脱液流速的影响：
洗脱液的流速与样品分离的分辨率相关。流速过快，会使色谱峰变形，流速过慢，样品扩散倾向加剧。一般流速控制在30－200ml/h。
今天洗脱流速控制在1ml/min。
、洗脱液的离子强度和pH值的影响：
纯化蛋白时,通常选用离子强度＞0.02的盐溶液作洗脱剂，以增加样品的溶解度和消除凝胶的吸附作用；
Kd是分配系数：用于衡量两个物质的分离分辩率，是凝胶层析的一个特征常数，只与被分离物质分子大小和凝胶孔径大小有关，与层析柱的长短粗细无关。
Kd值的计算：Kd=(Ve-Vo)/Vi

凝胶层析法_实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 熟悉凝胶层析法的原理和操作步骤。

2. 学习利用凝胶层析法分离蛋白质混合物。

3. 掌握收集纯化蛋白质的方法。

二、实验原理凝胶层析法是一种基于分子大小差异进行分离的纯化技术。

在该方法中，样品通过一个由微孔大小不同的凝胶组成的柱子，较大的蛋白质分子无法进入凝胶微孔，而较小的蛋白质则能够进入微孔中，从而实现了蛋白质的分离。

三、实验材料1. 凝胶柱（例如Sephadex G-100）2. 蛋白质混合物3. 缓冲液（例如Tris-HCl缓冲液，pH 7.4）4. 吸管、移液器、烧杯、离心管等实验器材四、实验步骤1. 准备凝胶柱：将凝胶柱固定在凝胶柱支架上，用蒸馏水冲洗凝胶柱，直至流出液清澈。

2. 准备蛋白质混合物：将蛋白质混合物用缓冲液稀释至适当的浓度。

3. 装载样品：用移液器将蛋白质混合物加到凝胶柱的顶部，让样品自然流下。

4. 洗脱杂质：用缓冲液冲洗凝胶柱，直至流出液清澈。

5. 收集目标蛋白：调整洗脱缓冲液的条件，使目标蛋白质从凝胶柱中洗脱下来。

收集洗脱液，并用蛋白质检测方法（如SDS-PAGE）检测蛋白质纯度。

6. 纯化蛋白质：将收集到的洗脱液进行浓缩、透析或超滤等操作，得到纯化的蛋白质。

五、实验结果与分析1. 凝胶层析图谱：根据洗脱液收集时间，绘制凝胶层析图谱。

图谱中，不同蛋白质的洗脱峰对应于不同分子大小的蛋白质。

2. 蛋白质纯度：通过SDS-PAGE检测纯化蛋白质的纯度。

纯化蛋白质应在对应分子量处出现单一、明显的条带。

六、实验讨论1. 凝胶层析法的原理及操作步骤：凝胶层析法是一种基于分子大小差异进行分离的纯化技术。

在实验过程中，需要注意凝胶柱的冲洗、样品的装载、洗脱缓冲液的调整等操作，以确保实验结果的准确性。

2. 蛋白质纯度：在实验过程中，通过SDS-PAGE检测纯化蛋白质的纯度。

纯化蛋白质应在对应分子量处出现单一、明显的条带，表明蛋白质已得到有效纯化。

3. 实验误差：实验误差可能来源于凝胶柱的冲洗不充分、样品装载不当、洗脱缓冲液条件不合适等因素。

实验一葡聚糖凝胶柱层析分离核黄素和牛血清蛋白

☻葡聚糖凝胶（Sephadex） ☻琼脂糖凝胶（Sepharose）
☻聚丙稀酰胺凝胶（Polyacrylamide）
G型（G-X: X数字代表交联度与吸水量） LH型
Sephadex的常见规格（分级范围）
型号分离范围 (G-X) (分子量Da)
G10 G15 G25 G-50 G-75 G100 G150 G200 <700 <1,500
（四）洗脱、收集与检测
1、流速1滴/5-6秒不变，2ml/管收集流出液，收集至流出液为无色。 2、用分光光度计，在280nm波长处，以PBS调零，测定无色管吸光度；在在450nm波长处，以PBS调零，测定有色管吸光度。（每管收集液稀释1倍后测定） 3、以管号为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制洗脱曲线。
（三）上样
1. 先将柱的出口打开，让PBS逐渐流出，待液面与凝胶床面平齐时，关闭出口（注意：不可使凝胶柱表面干涸）。 2. 用刻度吸管取样品混合液0.5ml，沿管壁小心加于柱床表面，打开层析柱出口端，待样品完全渗入胶内，开始收集流出液，同时小心加洗脱液（PBS），
控制流速：1滴/5-6秒。（注意柱床上要不断加PBS，保持1cm高水层）
六、思考题
1、凝胶层析的原理是什么？ 2、用凝胶柱层析分离不同蛋白质，怎样才能
得到较好的分离效果？
实验一葡聚糖凝胶柱层析法分离核黄素和牛血清白蛋白
夏芳
2011-8-30
一、实验目的
了解：
层析技术的基本原理。
熟悉：
凝胶层析的操作过程。
掌握：
组分的洗脱与鉴定。
层析技术的基本原理
利用混合物中各组分的物理、化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两相(固定相、流动相)中达到分离。

葡聚糖凝胶实验报告

一、实验目的1. 掌握葡聚糖凝胶的特性及凝胶层析的原理。

2. 学习葡聚糖凝胶层析的基本操作技术。

3. 了解分子量对分离效果的影响。

二、实验原理凝胶层析，又称分子排阻层析或凝胶过滤，是一种以被分离物质的分子量差异为基础的层析分离技术。

该技术为纯化蛋白质等生物大分子提供了一种非常温和的分离方法。

层析的固定相载体是凝胶颗粒，目前应用较广的是具有各种孔径范围的葡聚糖凝胶（Sephadex）和琼脂糖凝胶（Sepharose）。

葡聚糖凝胶是由直链的葡聚糖分子和交联剂3-氯1，2-环氧丙烷交联而成的具有多孔网状结构的高分子化合物。

凝胶颗粒中网孔的大小可通过调节葡聚糖和交联剂的比例来控制，交联度越大，网孔结构越紧密；交联度越小，网孔结构就越疏松，网孔的大小决定了被分离物质能够自由出入凝胶内部的分子量范围。

可分离的分子量范围从几百到几十万不等。

在葡聚糖凝胶层析中，待分离物质通过葡聚糖凝胶层析柱，各个组分由于分子量不相同，在凝胶柱上受到的阻滞作用不同，而在层析柱中以不同的速度移动。

分子量大于允许进入凝胶网孔范围的物质完全被凝胶排阻，不能进入凝胶颗粒内部，阻滞作用小，随着溶剂在凝胶颗粒之间流动，因此流程短，先流出层析柱；分子量小的物质可完全进入凝胶颗粒的网孔内，阻滞作用大，流程长，后流出层析柱。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 葡聚糖凝胶G15- 待分离样品（蛋白质溶液）- 缓冲液（磷酸盐缓冲液，pH 7.0）- 甲醇- 水浴锅- 凝胶层析柱- 移液器- 离心机- 超滤器2. 实验仪器：- 电子天平- 紫外分光光度计- pH计- 显微镜四、实验步骤1. 准备葡聚糖凝胶：将葡聚糖凝胶G15浸泡于蒸馏水中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，或者用热水浸泡（不建议煮沸）至少1小时直至充分溶胀，凝胶体积不再变化。

2. 准备缓冲液：配制磷酸盐缓冲液（pH 7.0），用超滤器过滤，以去除其中的大分子物质。

3. 装柱：将凝胶层析柱清洗干净，用缓冲液润湿并保持一小段液位，确保底端无气泡。

葡聚糖凝胶层析法

葡聚糖凝胶层析法 The document was finally revised on 2021实验一蛋白质分子量的测定——凝胶层析法；一、实验目的；1.掌握凝胶层析的基本原理；2.学习利用凝胶层析法测定蛋白质相对分子质量的实；二、实验原理；凝胶层析法也称分子筛层析法，是利用具有一定孔径大；将凝胶装在柱后，柱床体积称为“总体积”，以Vt表；式中Ve为洗脱体积，自加入样品时算起，到组分最大；上式中Ve为实际测得的洗脱体积；Vo可用不被凝胶；如果假定蛋白质实验一蛋白质分子量的测定——凝胶层析法一、实验目的1.掌握凝胶层析的基本原理。

2.学习利用凝胶层析法测定蛋白质相对分子质量的实验技能。

二、实验原理凝胶层析法也称分子筛层析法，是利用具有一定孔径大小的多孔凝胶作固定相的层析技术。

当混合物随流动相经过凝胶层析柱时，其中各组分按其分子大小不同而被分离的技术。

该法设备简单、操作方便、重复性好、样品回收率高。

凝胶是一种不带电的具有三维空间的多孔网状结构、呈珠状颗粒的物质，每个颗粒的细微结构及筛孔的直径均匀一致，像筛子，小的分子可以进入凝胶网孔，而大的分子则排阻于颗粒之外。

当含有分子大小不一的蛋白质混合物样品加到用此类凝胶颗粒装填而成的层析柱上时，这些物质即随洗脱液的流动而发生移动。

大分子物质沿凝胶颗粒间隙随洗脱液移动，流程短，移动速率快，先被洗出层析柱；而小分子物质可通过凝胶网孔进入颗粒内部，然后再扩散出来，故流程长，移动速度慢，最后被洗出层析柱，从而使样品中不同大小的分子彼此获得分离。

若分子大小介于上述完全排阻或完全渗入凝胶的物质，则居二者之间从柱中流出。

总之，各种不同相对分子质量的蛋白质分子，最终由于它们被排阻和扩散的程度不同，在凝胶柱中所经过的路程和时间也不同，从而彼此可以分离开来。

将凝胶装在柱后，柱床体积称为“总体积”，以Vt表示。

实质上Vt是由Vi与Vg三部分组成，Vo称为“孔隙体积”或“外水体积”，即存在于柱床内凝胶颗粒外面空隙之间的水相体积，相应于一般层析法中柱内流动相的体积；V i为内体积，即凝胶颗粒内部所含水相的体积。

凝胶层析法实验报告(3篇)

6. 测定蛋白质分子量：
- 将收集到的蛋白质样品进行离心，取上清液。
- 使用紫外分光光度计测定蛋白质浓度。
- 根据蛋白质分子量与紫外吸收值的关系，计算蛋白质分子量。
五、实验结果与分析
1. 蛋白质分离结果：
- 通过凝胶层析法，成功地将蛋白质样品中的不同大小蛋白质分离出来。
2. 蛋白质纯化结果：
- 收集到的蛋白质样品纯度较高，蛋白质含量达到预期值。
- 缓冲液
- 洗脱液
- 紫外分光光度计
- 移液器
- 离心机
- 实验记录表
2. 仪器：
- 凝胶层析柱
- 凝胶颗粒（如琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）
- 紫外分光光度计
- 移液器
- 离心机
四、实验步骤
1. 准备凝胶柱：将凝胶颗粒加入凝胶层析柱中，用缓冲液冲洗凝胶柱，使凝胶颗粒均匀分布。
2. 装载样品：将蛋白质混合物加入凝胶柱上，通过差异排除法分离不同大小的蛋白质。
3. 洗脱杂质：使用缓冲液冲洗凝胶柱，将未结合的杂质从柱中洗出。
4. 收集目标蛋白：通过调整洗脱缓冲液的条件，使目标蛋白质从凝胶柱中洗脱下来。
5. 收集纯化的蛋白质：收集洗脱液中的目标蛋白质，即得到纯化的蛋白。
6. 蛋白质分子量测定：
- 将标准蛋白质混合液加入凝胶柱中，洗脱并收集不同分子量的标准蛋白质。
3. 蛋白质分子量测定结果：
- 通过紫外分光光度计测定，成功测定了蛋白质的分子量。
六、实验讨论
1. 凝胶层析法在蛋白质分离和纯化中的应用非常广泛，具有操作简单、效果显著等优点。
2. 在实验过程中，应注意以下几点：
- 选择合适的凝胶类型和孔径大小，以确保蛋白质的分离效果。
- 控制洗脱缓冲液的流速，避免蛋白质的降解。

凝胶层析实验报告

一、实验目的1. 理解凝胶层析的原理及其应用。

2. 掌握凝胶层析的基本操作技术。

3. 通过实验，分离并鉴定不同分子量的蛋白质。

二、实验原理凝胶层析，又称分子筛层析或凝胶过滤，是一种利用凝胶的分子筛效应进行分离纯化的技术。

凝胶具有多孔的网状结构，其孔径大小可通过交联度来调节。

当混合物通过凝胶层析柱时，不同分子量的物质在凝胶柱中受到的阻滞作用不同，从而实现分离。

分子量较大的物质无法进入凝胶颗粒的内部，只能沿着颗粒间的缝隙流出，因此流出柱子的速度较快；而分子量较小的物质可以进入凝胶颗粒的内部，受到的阻滞作用较大，流出速度较慢。

通过调节凝胶的孔径和洗脱液的流速，可以实现对混合物中不同分子量物质的分离。

三、实验材料1. 凝胶层析柱（1.5cm×30cm）2. 葡聚糖凝胶（Sephadex G-75）3. 蛋白质混合物（含有已知分子量的蛋白质和未知分子量的蛋白质）4. 标准蛋白质分子量对照品5. 洗脱液（0.1mol/L Tris-HCl缓冲液，pH 7.4）6. 紫外分光光度计7. 移液器8. 试管9. 烧杯10. 滤纸四、实验步骤1. 准备凝胶层析柱，将葡聚糖凝胶用洗脱液浸泡过夜，使其充分膨胀。

2. 将浸泡好的凝胶层析柱垂直固定在支架上，用移液器将凝胶层析柱中的空气排尽。

3. 用移液器将蛋白质混合物加入凝胶层析柱中，使其刚好流过凝胶层析柱的顶部。

4. 将洗脱液缓慢加入凝胶层析柱中，使洗脱液流速保持恒定（约0.5ml/min）。

5. 收集洗脱液，每5ml收集一次，收集至蛋白质混合物完全流出。

6. 使用紫外分光光度计检测洗脱液中的蛋白质浓度，绘制蛋白质洗脱曲线。

7. 将收集到的洗脱液分别进行SDS-PAGE电泳，鉴定不同分子量的蛋白质。

五、实验结果与分析1. 蛋白质洗脱曲线通过蛋白质洗脱曲线，可以观察到不同分子量的蛋白质在凝胶层析过程中的洗脱时间。

分子量较大的蛋白质先流出柱子，而分子量较小的蛋白质后流出。

葡聚糖凝胶柱层析

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外。
亲水性
葡聚糖凝胶是一种亲水性凝胶，在水中能够膨胀并保持稳定的结构。
分子筛作用
由于凝胶的网孔大小不同，不同大小的分子在通过凝胶柱时的路径和速度也不同，从而实现分子的分离。
柱层析分离原理
吸附与解吸
样品中的各组分在葡聚糖凝胶上的吸附能力不同，通过选择合适的洗脱液，可以实现各组分的分
离。
分子筛效应
4. 上样
5. 洗脱与收集
将待分离样品溶解在少量洗脱液中，沿柱内壁缓慢加入，避免冲击凝胶表面。
开启恒流泵，以恒定流速进行洗脱，同时用收集器按一定时间或体积收集流出液。
6. 检测与记录
7. 结果分析
对收集到的流出液进行适当稀释后，利用紫外可见分光光度计或酶标仪等检测目标物质的含量，并记录数据。
优点
分辨率高，操作简便，重复性好，对样品的适用范围广。
缺点
对于某些非水溶性物质或极端条件下的分离效果不佳，且分离过程中可能存在吸附损失。
02 实验材料与方法
主要试剂与仪器
主要试剂
葡聚糖凝胶（如Sephadex G-25 、G-50、G-100等）、洗脱液（一般为缓冲液或盐水）、待分离样品。
基本原理 • 实验材料与方法 • 葡聚糖凝胶柱层析在生物大分子分离中应
用 • 葡聚糖凝胶柱层析在药物分析中应用 • 葡聚糖凝胶柱层析在环境科学中应用 • 实验结果分析与讨论
01 葡聚糖凝胶柱层析基本原理
葡聚糖凝胶结构与性质
三维网状结构
葡聚糖凝胶具有三维的交联网状结构，这种结构允许小分子进入凝胶内部，而大分子则被排除在
环境污染物检测与去除

层析凝胶法实验报告

1. 了解层析凝胶法的原理及其应用。

2. 掌握层析凝胶法的基本操作步骤。

3. 学习利用层析凝胶法分离混合物中的不同组分。

二、实验原理层析凝胶法，又称分子筛层析法，是一种利用凝胶作为固定相，根据分子大小不同进行分离的技术。

凝胶是一种具有多孔结构的物质，其孔径大小可以调节，从而实现对不同分子大小的分离。

在层析过程中，分子量较大的物质无法进入凝胶内部，只能沿凝胶颗粒间的缝隙流出；而分子量较小的物质可以进入凝胶内部，流速较慢，最后流出柱外。

通过这种差异，样品中的不同组分可以得到有效分离。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：混合物样品、葡聚糖凝胶、洗脱液、收集瓶等。

2. 实验仪器：层析柱、紫外-可见分光光度计、电子天平等。

四、实验步骤1. 准备凝胶：将葡聚糖凝胶用洗脱液浸泡，使其充分膨胀，然后装入层析柱中。

2. 样品制备：将混合物样品溶解于适量的洗脱液中，调整其浓度为1mg/mL。

3. 上样：将样品溶液缓慢加入层析柱中，使其均匀分布在凝胶表面。

4. 洗脱：用洗脱液冲洗层析柱，收集不同洗脱体积的洗脱液。

5. 分析：使用紫外-可见分光光度计测定不同洗脱体积的洗脱液吸光度，确定各组分的洗脱时间。

6. 收集：将不同洗脱时间的洗脱液收集于不同试管中，进行后续分析。

五、实验结果与分析1. 通过紫外-可见分光光度计测定不同洗脱体积的洗脱液吸光度，绘制洗脱曲线。

2. 根据洗脱曲线，确定各组分的洗脱时间。

3. 对收集的洗脱液进行后续分析，如质谱、核磁共振等，确定各组分的成分。

1. 层析凝胶法是一种有效分离混合物中不同组分的技术。

2. 通过调节凝胶的孔径大小，可以实现不同分子大小的分离。

3. 本实验成功分离了混合物中的不同组分，为后续分析提供了基础。

七、实验讨论1. 层析凝胶法的分离效果受多种因素影响，如凝胶的孔径大小、洗脱液的流速等。

在实际操作中，需要根据样品特性和实验目的选择合适的实验条件。

2. 层析凝胶法适用于分离分子量较大的物质，对于分子量较小的物质，可能需要采用其他分离方法。

生化凝胶层析实验报告

一、实验目的本实验旨在通过凝胶层析技术，对混合物中的不同分子量物质进行分离和纯化。

具体目标包括：1. 掌握凝胶层析的原理和操作步骤。

2. 学习如何根据分子量差异对蛋白质等生物大分子进行分离。

3. 观察和分析实验结果，验证凝胶层析技术的有效性和可行性。

二、实验原理凝胶层析（Gel Filtration）又称分子筛层析，是一种基于分子量差异进行物质分离的方法。

该技术利用凝胶作为固定相，凝胶具有多孔结构，分子量不同的物质在凝胶中的移动速度不同，从而实现分离。

实验中常用的凝胶材料包括葡聚糖凝胶（Sephadex）和琼脂糖凝胶（Sepharose）。

凝胶颗粒的大小可通过调节葡聚糖和交联剂的比例来控制。

交联度越大，网孔结构越紧密；交联度越小，网孔结构就越疏松。

因此，不同型号的凝胶具有不同的分子量分级范围。

实验过程中，将待分离物质加入凝胶柱中，在溶剂的作用下，各组分因分子量差异在凝胶柱中以不同的速度移动。

分子量大的物质在凝胶柱中的移动速度较慢，先流出柱子；而分子量小的物质则可以进入凝胶颗粒的网孔内，移动速度较快，后流出柱子。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 待分离的混合物- 葡聚糖凝胶（Sephadex G-100）- 洗脱液（例如磷酸盐缓冲液）- 标准蛋白质溶液（例如牛血清白蛋白、肌红蛋白等）- 紫外分光光度计- 凝胶层析柱- 量筒- 移液器- 离心机2. 实验仪器：- 凝胶层析柱- 紫外分光光度计- 移液器- 量筒- 离心机四、实验步骤1. 准备凝胶柱：将葡聚糖凝胶（Sephadex G-100）用洗脱液充分溶胀，装入凝胶层析柱中。

2. 准备样品：将待分离的混合物用洗脱液稀释，调整蛋白质浓度至适当水平。

3. 加样：将样品加入凝胶柱中，待样品完全进入凝胶柱后，用洗脱液冲洗柱子，直至流出液为无色。

4. 收集洗脱液：用紫外分光光度计检测洗脱液中的蛋白质浓度，收集不同分子量范围的蛋白质组分。

5. 分析结果：将收集到的蛋白质组分进行SDS-PAGE电泳或Western blot分析，观察蛋白质的分子量和纯度。

葡聚糖凝胶柱层析

分离范围
颗粒大小（μm）
<700 <1500 1000~5000
干粉40~120 干粉40~120 干粉100~300
1000~5 000
干粉50~150
1000~5000
干粉20~80
1000~5000
干粉10~40
1500~30000
干粉100~300
1500~30000
干粉50~150
1500~30000
pH 稳定性工作
2~13 2~13 2~13
干凝胶溶胀体
积mL/g
2~3 2.5~3.5 4~6
溶胀最少平衡时间h
室温沸水
3
1
3
1
6
2
最快流速 (cm/h)
2~5 2~5 2~5
2~13 4~6
6
2
2~5
2~13 4~6
6
2
2~5
2~13 4~6
6
2
2~5
2~10 9~11
6
2
2~5
2~10 9~11
2、影响凝胶层析分离的因素：
2.1、样品的体积、粘度。 2.2、层析柱：（高度，内径，材质）。 2.3、洗脱液的流速：
过慢：扩散；过快：拖尾。 2.4、洗脱液的离子强度、pH。
2.1、样品的体积、粘度：
分析分离时：Vsample=1-4%Vbed；制备分离时：Vsample=25-30%Vbed. 分离体积(Vsep): 相邻两组分Ve之差，用于衡量相邻两组分的
同型号的胶，同样的床体积，粒度小的胶对样品的分离度要优于粒度大的胶，即有较高的分辨率。
4.4、凝胶的防腐、保存：
Sephadex、Sepharose 是多糖类物质，易于长菌。因此，常在凝胶不用时，加入抑菌剂，使用时再除去。

凝胶层脱盐实验报告

一、实验目的1. 掌握凝胶层析法的原理和操作步骤。

2. 学习利用凝胶层析法对蛋白质进行脱盐处理。

二、实验原理凝胶层析法是一种利用凝胶对分子进行分离的技术。

凝胶是一种具有多孔结构的物质，分子在凝胶中的移动速度取决于其分子大小和凝胶孔径。

通过选择合适的凝胶和层析条件，可以将不同分子大小的物质分离。

在凝胶层析脱盐实验中，蛋白质分子与盐分子在凝胶层析柱中的移动速度不同，从而使蛋白质与盐分离。

蛋白质分子较大，无法进入凝胶的微孔，移动速度较快；而盐分子较小，可以进入凝胶的微孔，移动速度较慢。

三、实验材料与试剂1. 材料：蛋白质样品、盐溶液、葡聚糖凝胶G-252. 试剂：蒸馏水、缓冲液、洗脱液、洗脱液储备液、盐检测试剂、蛋白质检测试剂四、实验步骤1. 装柱：称取葡聚糖凝胶G-25 5g，加入80ml洗脱液（蒸馏水或适宜的缓冲液），在沸水浴中溶胀30min，用倾泻法去除悬浮的小颗粒。

然后装进内径1.2cm，高30cm的玻璃柱内，注意装填均匀，无气泡和裂纹存在，并保持液面在凝胶表面以上。

2. 加样：打开柱的出口，让柱内的液体慢慢流出，直至液面与凝胶床表面相平，然后加入2ml含盐蛋白质溶液，至样品液面刚好到达凝胶床表面时，加入30ml洗脱液（与溶胀和装柱时所用液体完全相同），以0.5ml/min的流速洗脱，每5ml收集一管。

3. 收集样品：将收集的样品液进行盐和蛋白质检测。

4. 盐检测：根据具体盐的种类选择合适的检测方法，如火焰原子吸收光谱法、离子色谱法等。

5. 蛋白质检测：将分步收集的样品液于280nm处的紫外光吸收法检测，也可用福林酚测定。

五、实验结果与分析1. 盐检测：通过盐检测方法，可以确定脱盐效果。

实验结果显示，脱盐效果良好，盐浓度明显降低。

2. 蛋白质检测：通过紫外光吸收法或福林酚法，可以确定蛋白质的纯度和浓度。

实验结果显示，蛋白质的纯度较高，浓度符合预期。

六、实验讨论1. 凝胶层析法是一种简单、有效的蛋白质脱盐方法。

葡聚糖凝胶层析法分离蛋白质

葡聚糖凝胶层析法分离蛋白质实验简介：凝胶层析法是用一般的柱层析法使分子量不同的溶质通过具有分子筛效应的介质(如葡聚糖凝胶)，从而达到分离提纯的目的。

凝胶层析设备简单，操作简便，条件温和，已成为分离分析蛋白质等生物大分子不可缺少的实验手段。

一、实验目的1、掌握葡聚糖凝胶柱层析法的工作原理及基本操作技术。

2、掌握蛋白质分离纯化的一般操作技术。

二、实验原理凝胶层析是按溶质分子大小不同而进行分离的一种层析技术，当溶质分子大小不同的样品溶液通过凝胶柱时，由于凝胶颗粒内部的网络结构具有分子筛作用，分子大小不同的溶质就会受到不同的阻滞作用。

本实验采用葡聚糖凝胶G-50作为固相载体，它适用于相对分子质量范围在1500～30000之间的多肽与蛋白质的分离。

当蓝色葡聚糖-2000(相对分子质量在200万以上，蓝色)，细胞色素C(相对分子质量12800，红色)和重铬酸钾(相对分子质量294，黄色)的混合物流经层析柱时，三种物质的分级分离明显可见。

蓝色葡聚糖因完全被排阻在凝胶颗粒之外而首先流出，细胞色素C渗入凝胶颗粒内部而其次流出，重铬酸钾则完全渗入凝胶内部最后流出。

通过作洗脱曲线便可清楚地表示出葡聚糖凝胶G-50对这三种物质的分离效果。

样品中的各组分的流出顺序，可用有效分配系数K av表示：K av =(V e-V o)/(V t -V o)上式中，K av指的是分子量不同的溶质在凝胶内部和外部的分配系数，只与被分离物质分子的大小和凝胶颗粒孔径的大小分布有关，而与柱的长短粗细无关。

外水体积V o(outer volume)指基质颗粒之间体积的总和；内水体积V i(inner volume)指基质颗粒内部体积的总和；基质体积(V g)指基质自身所具有的体积。

V。

、V i和V g都是随着床体积和基质性质变化而变化的；洗脱体积V e(elution volume)指从加样到柱出现最大浓度(峰)时所流过的洗脱液的体积(如图1)。

生化葡聚糖实验报告

一、实验目的1. 理解和掌握葡聚糖凝胶层析的基本原理和操作技术。

2. 通过实验验证葡聚糖凝胶作为分子筛在蛋白质分离中的应用效果。

3. 学习如何分析层析结果，了解不同分子量的蛋白质在层析过程中的分离行为。

二、实验原理凝胶层析，又称分子排阻层析或凝胶过滤，是一种基于分子量差异的层析分离技术。

该技术利用具有多孔网状结构的凝胶颗粒作为固定相，通过分子量的不同，使蛋白质等生物大分子在层析过程中受到不同程度的阻滞，从而实现分离。

葡聚糖凝胶是由直链的葡聚糖分子和交联剂3—氯1，2—环氧丙烷交联而成的，其网孔大小可通过调节葡聚糖和交联剂的比例来控制。

交联度越大，网孔结构越紧密；交联度越小，网孔结构越疏松。

因此，不同分子量的蛋白质在层析过程中受到的阻滞作用不同，从而实现分离。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：蛋白质混合物、葡聚糖凝胶（Sephadex G-100）、缓冲溶液、标准蛋白质溶液等。

2. 实验仪器：层析柱、紫外分光光度计、移液器、微量注射器、烧杯、试管等。

四、实验步骤1. 准备层析柱：将葡聚糖凝胶加入层析柱中，用缓冲溶液平衡凝胶。

2. 样品制备：将蛋白质混合物用缓冲溶液稀释，配制一定浓度的样品。

3. 层析操作：将样品注入层析柱中，待样品流出后，用缓冲溶液冲洗层析柱，收集各洗脱峰。

4. 蛋白质检测：使用紫外分光光度计检测各洗脱峰的蛋白质含量。

5. 结果分析：比较不同分子量的蛋白质在层析过程中的分离效果。

五、实验结果与分析1. 层析图谱：通过紫外分光光度计检测各洗脱峰的蛋白质含量，绘制层析图谱。

2. 分子量分布：根据层析图谱，分析不同分子量的蛋白质在层析过程中的分离效果。

3. 结果讨论：比较实验结果与理论预期，分析实验中可能存在的问题及改进措施。

六、实验结论1. 葡聚糖凝胶层析是一种有效的蛋白质分离技术，适用于不同分子量的蛋白质分离。

2. 通过调节葡聚糖凝胶的交联度，可以控制层析过程中的分离效果。

3. 本实验成功实现了蛋白质混合物的分离，为后续的蛋白质研究提供了有力支持。

葡聚糖凝胶Sephadex G–25柱层析法脱盐分离蛋白质实验技术总结

凡盐析所获得的粗制蛋白质（如盐析得到的IgG）中均含有硫酸铵等盐类，将影响以后的纯化，所以纯化前均应除去，此过程称为“脱盐”（desalthing）。脱盐常用透析法和凝胶过滤法。
大分子保持天然构象状态（功能有关），有高度的生物活性。
常用的柱层析方法有葡聚糖凝胶柱层析（分子筛层析）、离子交换层析、吸附层析、亲和层析等。
1944年出现纸层以后层析法不断发展相继出现气相层析高压液相层析薄层层析亲和层析凝胶层析层析法是利用混合物中各组分物理化学性质的差异如吸附力分子形状及大小分子亲和力分配系数等使各组分在两相一相为固定的称为固定相
葡聚糖凝胶Sephadex G – 25柱层析法脱盐分离蛋白质
实验技术总结
引
言
层析法也称色谱法，是1906年俄国植物学家Michael等发现并命名的。他将植物叶子的色素通过装填有吸附剂的柱子，各种色素以不同的速率流动后形成不同的色带而被分开，由此得名为“色谱法”（Chromatography) 。后来无色物质也可利用吸附柱层析分离。1944年出现纸层析，以后层析法不断发展，相继出现气相层析、高压液相层析、薄层层析、亲和层析、凝胶层析等。
可见，不同类型的各种凝胶溶涨所需的最少时间是不相同的，请参考有关的技术数据。在凝胶溶涨的处理过程中，不能进行剧烈搅拌，禁止使用电磁搅拌器，以为这样会使凝胶颗粒破裂而产生碎片。
2. 装柱
将层析剂装入柱中进行层析的方法称柱层析法。作层析用的柱子称层析柱。柱子的一端为进口，另一端为出口，出口端底部有烧结玻璃砂板，能阻止层析剂流出，溶剂则可流过。层析柱的长短粗细根据实验的目的而定，一般说来，凝胶层析时柱越长，分离效果越好。但柱过长，层析时间长，样品易稀释造成扩散。