志贺氏菌检验教程文件
志贺氏菌检验
• 番红或沙磺复染：在涂片薄膜上滴加番红1滴，染色1 ~ 2 min。
• 水洗：用水冲洗至冲下的水呈无色为止。 • ห้องสมุดไป่ตู้燥：于室温下自然干燥。 • 观察：干燥后，于涂片薄膜上滴香柏油1滴，置油镜下观
察。 • 结果:
革兰氏阳性菌——紫色； 革兰氏阴性菌——红色。
志贺氏菌检验
革兰氏阴性短杆菌
增菌 分离 初步生化试验 血清凝集试验 革兰氏染色
增菌
固体样品：25g（电子天平）
稀释瓶或具
液体样品：25mL（25mL吸量管） 塞广口瓶
+ 225mLGN增菌液（量筒），混匀。
培养（于36℃±1℃培养6~8h）
注意：液体样品先用无菌NaOH或HCl调节PH至7.0。
结果：志贺氏菌多价血清：凝固 灭菌生理盐水：不凝固
革兰氏染色步骤：
涂片—— 火焰固定——结晶紫初 染—— 水洗—— 碘液媒染—— 乙醇 脱色—— 水洗—— 吸干—— 番红或 沙磺复染—— 水洗—— 干燥—— 镜 检
• 涂片：在载玻片中央滴一滴生理盐水，用无菌操作法挑取 菌种于生理盐水中，调匀并涂成薄膜。注意：生理盐水不 宜过多；涂片必须均匀。
分离
从阳性增菌液中用接种环取
1环
HE琼脂平板，划线
36℃±1 ℃培养
1环
麦康凯琼脂平板，划线
18~24h
HE琼脂平 板
麦康凯琼脂 平板
开始处
开始处
平板划线示意图
HE琼脂平板上的典型 菌落特征：呈透明， 不发酵乳糖菌落
麦康凯琼脂平板上的 典型菌落特征：呈透 明，不发酵乳糖菌落
初步生化试验
取有明显典型菌落的HE或麦康凯琼脂平板 （在放阳性物品处）
• 火焰固定：载玻片通过火焰1 ~ 2 次固定，不可过热，以载 玻片不烫手背为宜。
志贺氏菌
四、志贺氏菌检验标准操作程序11 范围本标准规定了食品中志贺氏菌（Shigella）的检验方法。
本标准适用于食品中志贺氏菌的检验。
2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃2.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
2.3 厌氧培养装置：41.5 ℃ 1 ℃。
2.4 电子天平：感量0.1 g。
2.5 显微镜：10×～100×。
2.5 均质器。
2.6 振荡器。
2.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。
2.8 无菌锥形瓶：容量100 mL、200 mL、2 000 mL。
2.9 无菌培养皿：直径90 mm。
2.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
2.11 全自动微生物生化鉴定系统。
3 培养基和试剂3.1 GN增菌液：见第A.1章。
3.2 志贺氏菌增菌肉汤：见第A.2章。
3.3 麦康凯（MAC）琼脂：见第A.3章。
3.4 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂：见第A.4章。
3.5 志贺氏菌显色培养基3.6 三糖铁（TSI）琼脂：见第A.5章。
3.7 营养琼脂：见第A.6章。
、3.8 葡萄糖半固体管：见第A.7章。
3.9 葡萄糖铵培养基：见第A.8章。
3.10 尿素琼脂：见第A.9章。
3.11 β-半乳糖苷培养基：见第A.10章。
3.12 氰化钾（KCN）培养基：见第A.11章。
3.13 氨基酸脱羧酶试验培养基：见第A.12章。
3.14 糖发酵管：见第A.13章。
1顾启芳，郭云昌。
3.15 缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和V-P试验用）：见第A.14章。
3.16 西蒙氏柠檬酸盐琼脂：见第A.15章。
3.17 醋酸盐培养基：见第A.16章。
3.18 粘液酸培养基：见第A.17章。
3.19 蛋白胨水、靛基质试剂：见第A.18章。
3.20志贺氏菌属诊断血清。
4 检验程序志贺氏菌检验程序见图1。
志贺氏菌检测流程
志贺氏菌属检验的标准操作程序【目的】指导检验伤寒、副伤寒沙门氏菌。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
【标本的采集】由受检者将采便用已蘸有甘油盐水的棉棒自行插入肛门内，轻轻转动，然后取出，插入带有编号的塑料试管中，交给检验科人员。
【检验程序】采便→立即划线接种SS平板→培养后挑取可疑菌落接种三糖铁斜面及半固体培养基→生化学试验→血清学试验→报告检验结果。
【操作步骤】1. 分离培养采便后立即用采便棒划线接种SS琼脂平板。
36±1℃培养18-24小时，挑取无色半透明的光滑菌落分解乳糖或迟缓分解乳糖的光滑菌落，接种三糖铁斜面及半固体，36±1℃培养18-24小时。
2. 生化学试验凡是三糖铁反应符合志贺氏菌属特征者（斜面产碱或不变色，底层产酸，H2S（—），产气（—），但福氏6型产生少量气体）、无动力、革兰氏阴性杆菌、作V-P试验，苯丙氨酸，赖氨酸，柠檬酸盐，葡萄糖铵试验。
其结果全部阴性者，作血清学试验。
3. 血清学试验挑取三糖铁斜面上的培养物，按下列顺序作玻片凝集试验：四种志贺氏——→福氏————→宋内氏————→志贺氏————→志贺氏多价血清多价血清血清 2型血清 1型血清∣ + ∣ +∣ +∣ +∣—∣↓↓↓↓∣福氏菌宋内氏菌志贺氏2型志贺氏1型↓ 1-6型某型+鲍氏 7-11型某组+：组内分型血清———→鲍氏某型血清： 12-15型全部—：加热破坏K抗原，重做凝集试验16-18型福氏菌的鉴定：凡是与福氏多价血清凝集的菌株，可先用3、4，群6，群7，三种因子血清检查，根据群因子血清反应结果，再用型因子血清检查。
福氏菌抗原成分如下。
食品沙门志贺氏菌
使用孢子储备液，在验证过的期间内，其稳定的孢子储备 液可以保存在2～8℃一直使用。
26
注意事项
➢ 黑曲霉转种操作应在超净工作台（或相当此环境）中进行， 关闭风机，靠近酒精灯操作；
➢ 每次移植后，应与原菌种的编号、名称逐一核对，确证培 养基特征和纯度无误后再继续保藏。
10
典型菌落--CHRO
菌落为紫红色
11
初筛微生 物
沙门氏菌
柠檬酸杆 菌属
变形杆菌
菌落颜色
紫色(直径约 1mm)
蓝色(直径约 1mm)
无色或被抑 制
12
注意事项
亚硫酸铋琼脂（BS）：该培养基制备过程不宜过分加热， 以免降低其选择性，应在临用时配制，超过48h不宜使用。
将已挑菌落的平板储存于2 ℃～5 ℃或室温至少保留24 h， 以备必要时复查。
➢ 各实验室应根据自身操作习惯总结出一套切实可行、 快速稳定的菌液制备标准程序。
23
操作步骤
➢ 1、接种前用1：1000新洁尔灭擦拭工作台面，然后开紫外 灯消毒30分钟。
➢ 2、自冰箱取出保存工作用菌种，室温放置20分钟，温度 平衡后才能传代。
➢ 3、实验人员进入缓冲间，换鞋、穿无菌衣、戴口罩，用1： 1000新洁尔灭溶液消毒双手，并将培养基及菌种移入阳性 菌接种室。
品污染了沙门菌后，通常没有感官性状的改变。
3
沙门氏菌检验程序
4
前增菌
目的：修复损伤的细菌细胞。 缓冲蛋白胨水(BPW) 肉汤：是基础增菌培养基，不含任
何抑制成分，有利于受损伤的沙门菌复苏。使受损伤的 沙门菌细胞恢复到稳定的生理状态。 方法：25 g（mL）样品置于盛有225 mL BPW的无菌均 质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为 液态，不需要均质，振荡混匀，直接进行培养。于36 ℃±1 ℃培养8 h～18h。
食品微生物学检验 志贺氏菌检验作业指导书
食品微生物学检验志贺氏菌检验1、范围适用于食品中志贺氏菌的检验2、设备和材料2.1恒温培养箱：36℃±1℃2.2冰箱：2℃—5℃2.3厌氧培养装置：41.5℃±1℃2.4电子天平；2.5显微镜2.6均质器；2.7无菌吸管；2.8无菌均质杯；2.9无菌培养皿，直径90mm；2.10生化鉴定试剂盒；2.11比浊管及比浊管架；3、培养基和试剂3.1志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素3.2麦康凯琼脂（MAC）3.3木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂（XLD）3.4志贺氏菌显色培养基3.5三糖铁琼脂3.6营养琼脂平面4、操作步骤4.1增菌以无菌操作取检样25g（mL），加入装有灭菌225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片均质器以8000r/min~10000r/min均质，于41.5℃±1℃厌氧培养16h~20h。
4.2分离取增菌后的志贺氏菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于36℃±1℃培养20h~24h，观察各个平板上生长的菌落形态，若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48h进行观察。
志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表1.表1 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征4.3 初步生化试验(1)自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种TSI.半固体和营养琼脂斜面各一管。
置36℃±1℃培养20h～24h，分别观察结果。
(2)凡是三糖铁琼脂中斜面产碱，底层产酸（发酵葡萄糖，不发酵乳糖，蔗糖）.不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体），不产硫化氢，半固体管中无动力的菌株，挑取其5.3.1中已培养的琼脂斜面上长的菌落，进行生化试验和血清学分型。
5、生化试验(1)生化试验（生化鉴定试剂盒）a.菌悬液的制备取一支盛有2ml无菌水的试管；用接种针挑取可疑菌落至无菌水中；仔细研磨，与标准浊度管比较，制成0.5个麦氏浊度的均匀菌悬液。
志贺氏菌检验操作规范
上海味泽生物科技有限公司志贺氏菌检验1 范围本标准规定了食品中志贺氏菌的检验方法。
本标准适合用于各类食品和食物中毒样品中志贺氏菌的检验。
2 术语和定义2.1志贺氏菌志贺氏菌shigella是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，通称痢疾杆菌dyseatery bacteria。
致病性较强，感染10-200个即可发病，人类是唯一的患者和带菌者。
3设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃。
3.2冰箱：2℃～5℃。
3.3恒温水浴箱：46℃±1℃。
3.4天平：感量0.1g。
3.5震荡器。
3.6无菌吸管:1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头。
3.7无菌锥形瓶：250ml 500ml。
3.8无菌培养皿：直径90mm。
4 培养基和试剂4.1 GN增菌液4.2 HE琼脂4.3 SS琼脂4.4麦康凯琼脂4.4伊红美蓝琼脂（EMB）4.5三糖铁琼脂（TSI）4.6葡萄糖半固体管5 操作步骤5.1增菌以无菌操作取检样25g(ml),加入装有225mlGN增菌液的广口瓶内，固体食品用均质器以8000r/min打碎1min,或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃±1℃培养6h～8h。
培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。
5.2分离和初步生化试验5.2.1取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板一个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板一个，于36℃±1℃培养18h～24h，志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。
5.2.2挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各一管。
一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃±1℃培养18h～24h，分别观察结果。
5.3判定下述培养物可以弃去：a)在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；b)在18h～24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；c）不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；d）产气的培养物；e）有动力的培养物；f）产生硫化氢的培养物。
志贺氏菌检测
志贺氏菌的检验（国标法）一、增菌称取检样25g ,加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎lmin ,或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培育6〜8h。
培育时间视细菌生长状况而定，当培育液消失稍微混浊时即应中止培育。
二、分别和初步生化试验取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36工培育18~24h e志贺氏菌在这些培育基上呈现无色透亮不发酵乳糖的菌落。
挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。
一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培育18~24h ,分别观看结果。
下述培育物可以弃去：a.在三糖铁琼脂斜面上呈扩散生长的培育物；b.在18~24h内发酵乳糖、蔗糖的培育物;C.不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培育物；d.产气的培育物；e.有动力的培育物；f.产生硫化氢的培育物。
凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体），无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。
三、血清学分型挑取三糖铁琼脂上的培育物，做玻片凝集试验。
先用4种志贺氏菌多价血清检查，假如由于K抗原的存在而不消失凝集，应将菌液煮沸后再检查；假如呈现凝集，则用Al、A2、B群多价和D群血清分别试验。
如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。
福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表10可先用群因子血清检查，再依据群因子血清消失凝集的结果，依次选用型因子血清检查。
4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1~15各型因子血清检查。
假如鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3~12型多价血清及各型因子血清检查。
四、进一步的生化试验在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：葡萄糖镀西蒙氏柠檬酸盐赖氨酸和鸟氨酸脱竣酶pH7.2尿素KCN生长水杨昔和七叶昔的分解除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培育物均为阴性结果。
志贺氏菌检测Word版
志贺氏菌检测1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：1.1 恒温培养箱：36℃±1℃；1.2 冰箱：2℃～5℃；1.3 膜过滤系统；1.4 厌氧培养装置：41.5℃±1℃；1.5 电子天平：感量0.1g；1.6 显微镜：10×～100×；1.7 均质器；1.8 振荡器；1.9 无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头；1.10 无菌均质杯或无菌均质袋：容量500ml；1.11 无菌培养皿：直径90mm；1.12 pH计或pH比色管或精密pH试纸；1.13 全自动微生物生化鉴定系统。
2 培养基和试剂3.1 志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素：见附录中1。
3.2 麦康凯（MAC）琼脂：见附录中2。
3.3 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂：见附录中3。
3.4 三糖铁（TSI）琼脂：见附录中4。
3.5 营养琼脂斜面：见附录中5。
3.6 半固体琼脂：见附录中6。
3.7 葡萄糖铵培养基：见附录中7。
3.8 尿素琼脂：见附录中8。
3.9 β-半乳糖苷酶培养基：见附录中9。
3.10 氨基酸脱羧酶试验培养基：见附录中10。
3.11 糖发酵管：见附录中11。
3.12 西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录中12。
3.13 粘液酸盐培养基：见附录中13。
3.14 蛋白胨水、靛基质试剂：见附录中14。
3.15 志贺氏菌属诊断血清。
3.16 生化鉴定试剂盒。
4 操作步骤4.1 增菌以无菌操作取检样25g（ml），加入装有灭菌225ml志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以8000r/min～10000r/min均质；或加入装有225ml志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1min～2min，液体样品振荡混匀即可。
于41.5℃±１℃，厌氧培养16h～20h。
4.2 分离取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于36℃±1℃培养20h～24h，观察各个平板上生长的菌落形态。
志贺氏菌检测流程
志贺氏菌属检验的标准操作程序【目的】指导检验伤寒、副伤寒沙门氏菌。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
【标本的采集】由受检者将采便用已蘸有甘油盐水的棉棒自行插入肛门内，轻轻转动，然后取出，插入带有编号的塑料试管中，交给检验科人员。
【检验程序】采便→立即划线接种SS平板→培养后挑取可疑菌落接种三糖铁斜面及半固体培养基→生化学试验→血清学试验→报告检验结果。
【操作步骤】1. 分离培养采便后立即用采便棒划线接种SS琼脂平板。
36±1℃培养18-24小时，挑取无色半透明的光滑菌落分解乳糖或迟缓分解乳糖的光滑菌落，接种三糖铁斜面及半固体，36±1℃培养18-24小时。
2. 生化学试验凡是三糖铁反应符合志贺氏菌属特征者（斜面产碱或不变色，底层产酸，H2S（—），产气（—），但福氏6型产生少量气体）、无动力、革兰氏阴性杆菌、作V-P试验，苯丙氨酸，赖氨酸，柠檬酸盐，葡萄糖铵试验。
其结果全部阴性者，作血清学试验。
3. 血清学试验挑取三糖铁斜面上的培养物，按下列顺序作玻片凝集试验：四种志贺氏——→福氏————→宋内氏————→志贺氏————→志贺氏多价血清多价血清血清 2型血清 1型血清∣ + ∣ +∣ +∣ +∣—∣↓↓↓↓∣福氏菌宋内氏菌志贺氏2型志贺氏1型↓ 1-6型某型+鲍氏 7-11型某组+：组内分型血清———→鲍氏某型血清： 12-15型全部—：加热破坏K抗原，重做凝集试验16-18型福氏菌的鉴定：凡是与福氏多价血清凝集的菌株，可先用3、4，群6，群7，三种因子血清检查，根据群因子血清反应结果，再用型因子血清检查。
福氏菌抗原成分如下。
志贺氏菌的检验
二、志贺氏菌的致病性与食物中毒 • （一）传染源 • 食物、病人、粪便、苍蝇等
（二）志贺氏菌的致病性
致病因素： 侵袭力、菌体内毒素、外毒素 临床症状 A、急性细菌性痢疾： 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性细菌性痢疾： 慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。
三、志贺氏 菌的检验
菌落为无色半透明状， 可能为志贺氏菌
大肠杆菌
第三次 初步生化试验
（一）接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体培养基 从HE或SS、麦康凯或EMB琼脂平板、挑取平板 上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体 各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏。经 36℃培养18～24h，分别观察结果。 （二）培养 放于36℃培养18～24h。 结果：乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福 氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力
不发酵乳糖，菌落呈蓝绿色或蓝色 可能就是志贺氏菌
SS平板原理及反应 SS Agar (Salmonella Shigella Agar)
是沙门氏菌。有黑色中心。 如果没有黑色中心，就很可能 是志贺氏菌了
大肠杆菌或者别的发酵乳糖的肠杆菌
麦康凯琼脂平板
菌落为粉红色，半透明的，
可能为志贺氏菌
EMB平板照片及原理
（三）结果报告 综合生化试验结果判定菌型并作出报告
GB/T4789.5-2003 中志贺氏菌检验程序
（一）实验内容
样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分 离→→生化学试验→→结果报告
第一次 样品处理和增菌培养
预先准备并灭菌的器材 规格名称 • 1、18×180mm试管
数量
6支
• • • •
2、10ml移液管 1支 3、直径为90mm平皿 2套 4、250ml量筒与500毫升广口瓶 酌情 7 、不锈钢汤匙1把 ，玻璃珠，杜氏小管 酌情
志贺氏菌检验流程
志贺氏菌检验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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志贺氏菌属的检验教学内容
SS平板原理及反应 SS Agar (Salmonella Shigella Agar)
大肠杆菌或者别的发 酵乳糖的肠杆菌
是沙门氏菌。有黑色中 心。 如果没有黑色中心，就很 可能是志贺氏菌了
麦康凯琼脂平板
EMB平板照片及原理
3、初步生化试验：
• 挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄 糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏， 经36℃培养18～24h，分别观察结果。
6、结果报告：
• 综合生化血清学试验结果判定菌群， 菌型，并做出报告。
二）其他检测方法
• 脉冲场凝胶电泳 • 荧光菌球法 • 协同凝集试验 • PCR法
三）检验操作要点
• 志贺氏菌在常温中生存的时间较短，应尽快 进行试验。
• 如24h内不能检验，样品应在冰箱内 • 长时间不能检验，放在低温冰箱内。
• 如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏 菌3～12型多价血清及各型因子血清检查。
（2）进一步的生化试验
5、进一步的生化试验： 葡萄糖铵 西蒙氏柠檬酸盐 赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶 pH7.2的尿素 KCN生长 水杨苷和七叶苷的分解 -
已（判定3）为志生贺化氏分菌属群
五项生化试验： 5%乳糖发酵 甘露醇 棉子糖 甘油发酵 靛基质试验
志贺氏菌属的检验
革兰氏阴性鲍氏志贺菌 志贺氏菌的菌毛
二、污染途径
• 即可产生内毒素，也可产生外毒素，是侵 入性细菌
• 传染源：食物、病人、粪便、苍蝇等 主要污染凉拌菜
三（、二致病）性临：床症状
A、急性细菌性痢疾： 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性细菌性痢疾： 慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。
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志贺氏菌快速测试片
志贺氏菌快速测试片1、原理及适用范围适用于食品及原料中志贺氏菌的检测。
执行标准：（GB/T4789.38-2008)2、使用方法2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成 1:10的样品匀液，必要时用1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液调节样品匀液pH至6.6～7.2。
用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推，做出1:1000等稀释度的样品匀液，每次换一支吸管。
2.2、接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。
将测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片。
同时做一片空白阴性对照。
2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。
一般食品培养温度为36℃±1℃，培养15～24h3、结果判读培养后，志贺氏菌显白色-粉红色/清晰的菌落，沙门氏菌黄色菌落，产气肠杆菌显绿色4、计数原则及报告方式4.1、选择菌落数在15CFU～150CFU之间的纸片进行计数。
4.2、若两个稀释度的菌落数均在15CFU～150CFU之间，则取其平均菌落数乘以稀释倍数，即为每毫升（或每克）样品中菌落数。
4.3、如果所有稀释度的测试片上的菌落数都小于15CFU，则计数稀释度最低的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告之；如果所有稀释度的测试片上均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。
4.4、如果所有稀释度的菌落数都大于150CFU，计数最高稀释度的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
计数菌落数大于150CFU的测试片时，也可计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数后乘以20（滤纸区面积为20cm2），即为测试片上估算的菌落数。
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GB/T 4789.5-2003 标准不足处
1. 采用GN增菌肉汤,37℃需氧培养,4小时后大 肠菌的生长速度大大超过志贺氏菌, 检测效 果较差
2. 使用的分离平板SS对志贺1型有抑制
3. 检验方法与现行的其它国家的标准存在差 异
• 培养物中出现以下情况可以弃去 a.在三糖铁琼脂斜面上蔓延生长 b.发酵乳糖或蔗糖 c.不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的 d.产气的 e.产生硫化氢 f.有动力的培养物
初步生化:三糖铁（TSI）
现象
说明
底层
黄色
红色或 不变色
黑色
气泡
斜面
黄色
红色或 不变色
葡萄糖阳性 葡萄糖阴性
产H2S 产气 乳糖和（或）蔗糖阳性 乳糖和（或）蔗糖阴性
• 每年均有志贺菌感染暴发的报告，每次暴 发的发病人数在数十人到上千人不等。多 数由于食物和饮水污染引起。
• 1994年5月11日，江苏省无锡市发生一起 26所小学的学生因课间餐食用豆奶导致 1345人食物中毒的事故，后经调查是一起 志贺菌和致病性大肠杆菌混合感染引起的 食物中毒，此次爆发波及范围之大，发病 人数之多，在我国历史
1.以原国标为基础，保持与原标准的连续性
考虑基层单位方法的可操作性，对增菌步骤、培养条件尽 可能简化；生化反应方面亦尽量沿用原标准中的方法
2.与国际接轨的原则
该标准的起草内容主要参考了国际标准组织ISO标准 ，部 分参考采用了美国FDA、NMKL等标准
3.与现有已颁布的新版国家标准协调 统一
志贺氏菌都能分解葡萄糖， 产酸不产气，大多不发酵 乳糖，不产生H2S。 如图 中2号管的反应.
志贺氏菌属四个群的生化特征
二、生物学特性
• （一）、形态与染色 • 革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无
鞭毛 • • 2~3um*0.5~0.7um
（二）、培养特性
1 、 需 氧 或 兼 氧 性 厌 氧 ， 最 适 温 度 37℃ ， PH7.2~7.4
2、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、 光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小 的菌落
• 志贺菌致病力强，少量细菌进入人体即可 引起发病。是否发病，取决于细菌数量、 致病力（粘附、侵袭力、毒素）和人体的 抵抗力。
• 各种志贺菌都可以产生强烈的内毒素，是 引起全身毒血症的主要因素。志贺菌还可 产生外毒素（志贺毒素），具有神经毒、 细胞毒和肠毒性作用，能引起更严重的临 床表现如溶血性尿毒综合症等。
志贺氏菌检验
• 细菌性痢疾历年来一直是我国夏秋季发病 率最高的肠道传染病。
• 近年来报道非洲及中美洲流行的痢疾志贺 菌病死率达5%-15%。
• 我国属发展中国家，人民的生活条件虽然 在不断改善，但由于部分地区卫生知识普 及不够，食品卫生管理、监督不力，使得 志贺菌的感染在我国传染病中多年来一直 处于较高的地位。
增菌：用GN增菌液使 处于濒死状态的细菌 恢复活力
选择性平板分离培养： XLD+MAC/显色培 养基
生化试验：可采用 API 20E或VITEK2
血清学鉴定：特异性 诊断血清鉴定到种。
志贺氏菌操作流程
修改的内容
增菌部分
志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5 μg/mL ）
原国标：GN ISO ：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5 μg/mL ） FDA：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5 μg/mL 和3 μg/mL ） NMKL：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5 μg/mL ）
（一）增 菌 培 养
用志贺氏菌增菌液增菌, 41.5 ℃±１℃，16 h～20 h厌氧培养。
智能厌氧微需氧培养系统
（二）分 离 培 养
• 取增菌后的GN增菌液或志贺氏增菌肉汤分 别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平 板或R&F志贺氏菌显色培养基平板上
• 于36 ℃1 ℃培养20 h～24 h，观察各个 平板上生长的菌落形态
• 若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察， 则继续培养至48 h再进行观察。
菌落特征
• MAC琼脂 ：无色至浅粉红色， 半透明、光滑、 湿润、圆形、 边缘整齐或不齐，直径2～3 mm
• XLD琼脂 ：粉红色至无色，半 透明、光滑、 湿润、圆形、边缘整齐或不齐， 直径1 ～2 mm
R&F志贺氏菌显色琼脂 ：白色，不透明、圆形、 边缘不整齐，直径1 mm～3 mm，菌落周围琼 脂颜色变为紫红色
（四）、抗原结构
1、抗原构成： O抗原：
群特异性抗原：A、B、C、D K抗原：除B群外，一般有K抗原
2、志贺氏菌的分群与血清型
志贺氏菌分为四群： A群（痢疾志贺氏菌）：1~10型 B群（福氏志贺氏菌）：1~6型+X、Y两个变种， C群（鲍氏志贺氏菌 ）：1~15型 D群（宋内氏志贺氏菌） ：1个型
培养条件：41.5℃±1℃ 厌氧培养
原国标： 37℃需氧培养 ISO： 41.5℃厌氧培养 FDA： 42℃（除宋内其他志贺菌) 和44℃（宋内）厌氧培养 NMKL： 42℃厌氧培养
分离用平板
原国标：HE或SS; MAC或EMB ISO： MAC、 XLD 、 HE FDA： MAC NMKL： MAC、 XLD 、 HE
3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁 平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。
4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。
（三）、生化反应
1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺 氏菌外，均不发酵乳糖。
2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3、不产生H2S，不分解尿素，V-P试验阴性，
不能利用柠檬酸盐。 4、甲基红阳性。
1 宋内氏典型菌落
XLD
志显
2 福氏典型菌落
XLD
志显
3 鲍氏典型菌落
XLD
志显
4 痢疾典型菌落
XLD
志显
5 熟肉制品中宋内的分离效果
R&F志显
XLD
6 蔬菜制品中宋内分离效果
XLD
志显
7 鲍氏在生肉中的分离效果
XLD
志显
8 熟肉制品中福氏的分离效果
志显
（四）初 步 生 化
• 选取平板上5个或5个以上可疑菌落接种TSI、葡萄糖 半固体、营养琼脂斜面，36 ℃1 ℃培养20 h～24 h， 观察结果。