家畜繁殖学实习报告(云南农业大学)

云南农业大学

家畜繁殖学实习报告

学院：动物科学技术学院

专业：动物科学

年级：2010级

学生学号：2010310725

学生姓名：陈江明

指导教师：哈福

实习地点：云南农业大学动物遗传育种与繁殖实验室日期：2012年7月15日

实习报告

（云南农业大学动物科学技术学院陈江明 2010310725）

一、实习目的

掌握种畜精液品质检查方法，熟悉检查程序，学会药品的配制方法，为以后从事畜牧生产打下坚实的基础。

二、药品和仪器

药品：氯化钠、苯胺黑、伊红、氯胺T、美蓝（甲基蓝）、乙醚、无水乙醇、95%乙醇、复红、苯酚（石炭酸）、氢氧化钾、苏木精硫酸铝钾、冰醋酸、二水磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、40%福尔马林液、十二水磷酸氢二钠、甲醛、碳酸镁、Giemsa原料、甘油、甲醇、香柏油、蒸馏水。

仪器：小试管、50ml容量瓶、100ml容量瓶、500ml容量瓶、1000ml容量瓶、试管架、显微镜、载玻片、盖玻片、水浴恒温箱、温度计、量筒、胶头滴管、大烧杯、小烧杯、染色用玻璃板、医用胶带、镊子、酒精灯、毛细玻璃管、pH试纸、移液枪（1ml、10ul）、电子天平、称量纸、药品勺、滤纸、漏斗、标签纸、玻璃棒、移液管、血细胞计数器、纱布、药棉、研钵。

三、试剂配制

3%氯化钠溶液：称取30g氯化钠，在烧杯中溶解并定容于1000ml容量瓶中。

1%氯化钠溶液：称取10g氯化钠，在烧杯中溶解并定容于1000ml容量瓶中。

0.9%氯化钠溶液：称取9g氯化钠，在烧杯中容解并定容于1000ml容量瓶中。

5%伊红溶液：取2.5g的伊红（曙红），用蒸馏水配制成50ml的伊红溶液。

1%苯胺黑溶液：取0.5苯胺黑（阿尼林黑、精元），用蒸馏水配制50ml的苯胺黑溶液。

0.1mg/ml美兰溶液：取美兰100mg，溶解于100ml的1%的NaCl溶液中，置于容量瓶

中3d，再用1%氯化钠溶液稀释10倍备用。

复红原液：称取10g复红（品红）溶于100ml 95%的酒精中。

5%石炭酸溶液：称取5g苯酚溶于100ml 蒸馏水。

饱和伊红酒精溶液：量取60ml 95%酒精于烧杯中，加入伊红不断搅拌，直至伊红不再溶

解为止。

复红染色液：取复红原液10ml、5%石炭酸溶液100ml相互混合，然后再加入饱和伊红酒精溶液50ml 混合，放置两周后即可使用。

美蓝溶液：取1g美蓝溶于100ml 95%酒精中。

0.01%氢氧化钾溶液：取0.1g氢氧化钾用蒸馏水定容至1000ml。

美蓝染色液：取美蓝溶液30ml、0.01氢氧化钾溶液100ml混合，然后过滤并加入3倍量的蒸馏水，混合后即可使用。

0.5%氯胺T：取氯胺T0.5g溶于100ml蒸馏水中。

苏木精溶液：苏木精2g、冰醋酸10ml、甘油100ml、95%酒精100ml、蒸馏水100ml、硫酸铝钾5g。

1.将苏木精溶于少量酒精中，加冰醋酸后搅拌。

2.加入甘油及其余酒精。

3.研碎钾矾溶于水并加温。

4.将其一滴滴加入染色剂中，并不断搅动。

5.瓶口用双层纱布包扎，放于通风处，并经常摇动，颜色变为紫色时方可使用。如果加入0.2g碘酸钾即刻成熟。

使用时，原液：50%酒精和等量冰醋酸混合液为1:1混合。

伊红染液：取1g伊红溶于100ml 95%酒精中，染色时，取一定量的该液加入等量70%的酒精。

福尔马林缓冲液：将21.82 g Na2HP04·2H20和22.25 g KH2P04分别溶于500 ml蒸馏水中，然后取200 ml Na2HP04 加80 ml KH2PO4配成缓冲液。再取该缓冲液100 ml 加入62．5 ml 40%（v/v）福尔马林溶液，最后加蒸馏水至500 ml。

磷酸盐缓冲液：取Na

2HPO

4

·12H

2

O 2.2 g、NaH

2

PO

4

·2H

2

O 0.55 g，先用少量蒸馏水溶解，

再用蒸馏水定容至100 ml。配制后用pH试纸测pH值，应为7.0～7.2。福尔马林磷酸盐固定液

1.Na

2HPO

4

·12H

2

O 2.25g、NaH

2

PO

4

·2H

2

O 0.55g置于100 ml烧杯中，加入0.89％NaCl

溶液约30 ml，使之溶解。

2.加入甲醛MgCO

3

饱和液8ml。

甲醛MgCO

3饱和液配制方法：在500 ml福尔马林（40％甲醛）中加入8 g MgCO

3

。此

饱和液必须在一周前配好。

3.用0.89％NaCl溶液少许冲洗装过甲醛的量筒置于容量瓶中，并定容至100 ml。此液配好后，第二天即可用。一般在室温下保存，其pH 为7.0～7.2。

Giemsa原液：按1 gGiemsa原料：66 ml甘油：66ml甲醇的比例配制。将Giemsa染料置于研钵中，先加入少量温热（60℃）的甘油，充分研磨至无颗粒呈浆糊状。再将剩余甘油全部倒入，置56℃恒温箱中保温2小时。分次用甲醇清洗容器于棕色瓶中保存。保持一个月后才能使用。此原液放置时间越长越好，但使用前需经过滤。Giemsa染液（必须在染色前配制）：按Giemsa原液 : 磷酸缓冲液 : 蒸馏水的比例为2 :

3 : 5的比例配制。

四、实习内容

（一）肉眼观察

猪精液稀薄，灰白色，无云雾状现象。

（二）精子密度的检查及活率评分

评定精子的活率在25℃下（在37℃保温箱内或加热在舞台最佳），用玻璃棒取一

滴原精液或稀释精液滴在载玻片上，盖上盖玻片，其内无气泡、充满精液，在油镜下，暗视野中观察。

备注：稀释时，用等温的0.9%NaCl溶液稀释；标准是直线运动精子的比例。

（三）死活精子百分率的测定

1.方法各取5ml的5%伊红和1%苯胺黑按1:1混匀，分装于1—2ml的容量试管