蝙蝠蛾被毛孢对小鼠免疫功能的影响

蝙蝠蛾被毛孢对小鼠免疫功能的影响
目的研究蝙蝠蛾被毛孢对小鼠免疫功能的影响。

方法以KM种小鼠为研究对象，将小鼠分为空白对照组、低剂量组(110 mg/kg)和中剂量（220 mg/kg）、高剂量组(450 mg/kg)，连续灌胃用药28 d，进行小鼠碳粒廓清试验、血清溶血素试验和二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发性变态反应(DTH)。

结果与空白对照组相比，蝙蝠蛾被毛孢在220、450 mg/kg剂量下，能明显增强小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能、体液免疫功能和细胞免疫功能。

结论蝙蝠蛾被毛孢有明显的免疫促进作用。

【关键字】蝙蝠蛾被毛孢；免疫调节The influence of Hirsutella hepiali Chen et Shen on the immunologic function of the rat MA Wen-jun,SUN Xue-mei,LI
Bao-wen.Qinghai Arura Tibetan Medicine R&D Co.Ltd,Xi ning 810003,China [Abstract]ObjectiveTo investigate the influence of Hirsutella hepiali Chen et Shen on the immunologic function of the rat.MethodsKM species of rats as experimental animal and then were randomly divided into four groups：the blank control group,low-dose（110 mg/kg），middle-dose（220 mg/kg）and high-dose（450 mg/kg）groups.They were given the medicines for 28 days to experiment of Carbon clearance,Serum hemolysin and DNFB induce affection of DTH.ResultsThe results showed the middle-dose and high-dose groups was higher than that ofthe blank control group and can enhance significantly mononuclear macrophage，humoral and cellular immune function.ConclusionHirsutella hepiali Chen et Shen has immune function significantly.
[Key words]Hirsutella hepiali Chen et Shen；Immune function冬虫夏草(学名：Cordyceps sinensis)，又名中华虫草，又称为夏草冬虫，简称虫草，是中国传统的名贵中药材，冬虫夏草是虫草真菌（Cordyceps sincn-sis）的子座及其寄主蝙蝠蛾（Hepialus armori-canus）幼虫尸体的复合物。

冬虫夏草中82.2%为不饱和脂肪酸，此外，尚含有维生素B12、麦角脂醇、六碳糖醇、多种生物碱等。

近代药理研究表明冬虫夏草具有镇静、抗疲劳、抗缺氧、增强免疫力等作用。

但因其天然资源稀缺，现多采用人工方法分离和培育功效菌种。

不同来源的天然虫草和生物工程发酵虫草菌丝体在化学成分以及毒理、药理作用方面相似［1］。

蝙蝠蛾被毛孢是从天然虫草中分离得到的虫草菌之一［2，3］。

本研究通过实验验证冬虫夏草无性型-蝙蝠蛾被毛孢对小鼠免疫功能的影响。

1材料与方法
1.1材料蝙蝠蛾被毛孢由青海珠峰虫草药业有限公司提供(批号：20110714)。

1.2动物KM种小鼠，体重18～24 g（由青海省实验动物中心提供，动物合格证号：青医动字第零零壹号）。

1.3药品与试剂碳素墨水，用前以生理盐水20%稀释；Na2CO3购自西宁市天顺器化玻有限责任公司，批号：20110516；绵羊红细胞及补体分别自绵羊和豚鼠中取血制备；都氏试剂、二硝基氟苯由天津兴隆化工厂提供（使用前溶于4∶1丙酮-橄榄油中配制成1%的溶液，空白组以单独涂布丙酮-橄榄油溶剂作为对照）；注射用环磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有限公司，批号10050821。

1.4实验仪器全自动生化分析仪Olympas-au640（日本）；离心机,752分光光度仪,电子天平,数显恒温水浴锅,温度计。

1.5方法
1.5.1单核-巨噬细胞功能试验——小鼠碳粒廓清法取健康KM种小鼠40只，随机分成四组。

大、中、小剂量用药组分别给予蝙蝠蛾被毛孢110、220、450 mg/kg；对照组给予等量生理盐水；灌胃给药(0.2 ml/10 g)28 d，每日一次。

末次给药后1 h，各小鼠尾静脉注射20%的碳素墨水(0.05 ml/10 g)，第2(t2)分钟和第12(t12)分钟后，分别从眼眶静脉取血20 μl，加到0.1% Na2CO3溶液2 ml中摇匀，用分光光度计（680 nm下）测定t2和t12的吸光度(OD2和OD12)，计算廓清指数K 和吞噬指数。

K=(logOD2-logOD12)/(t2-t1)=log(OD2/OD12)/4，吞噬指数α=体质量/肝脾重×K1/3。

1.5.2体液免疫功能试验——血清溶血素试验取健康小鼠60只，随机分成五组，分别为正常组、阴性对照组(生理盐水)、给药组(110、220、450 mg/kg)。

灌胃给药(0.2 ml/10 g)28 d，每日1次，第2天灌胃后，腹腔注射20% SRBC(0.2 ml/只)28 d，每日一次。

末次给药后1 h，经眼球取血，分离血清。

取稀释400倍的血清1 ml，加入10% SRBC 0.5 ml及10%补体1 ml，置于37 ℃恒温水浴中保温30 min，然后移至冰浴中终止反应。

1500 r/min离心5 min，取上清液1 ml加都氏试剂3 ml，摇匀后放置10 min，在540 nm波长处测定吸光度。

另取5% SRBC 0.25 ml，加都氏液至4 ml，在相同波长下测吸光度值，即为所用SRBC半数溶血时的吸光度值。

计算公式（即半数溶血值HC50）：血清HC50=样品的吸光度值/SRBC半数溶血时的吸光度值×稀释倍数［5］。

1.5.3对免疫功能低下小鼠的迟发型超敏反应影响取KM种小鼠50只，雌雄各半，体重18～24 g，随机分为五组，分别为空白对照组、阴性对照组、给药组（110、220、450 mg/kg）。

空白对照组和阴性对照组给予等体积的生理盐水，给药28 d后，腹部去毛，面积约3 cm×3 cm，将1% DNFB 均匀涂抹于表面，涂抹当日除空白对照组外腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg［6］，隔日加强一次，首次致敏后给药28 d，末次给药后0.5 h，将1% DNFB 均匀涂抹于小鼠右耳进行攻击，诱发迟发型变态反应（水肿），攻击后24 h，左耳涂布生理盐水为对照，脱颈椎处死小鼠，剪下双耳，用打孔器分别取下直径8 mm的耳片，称重；同时取下小鼠胸腺和脾脏，称重。

以左右耳片重量之差作为肿胀度，以每10 g小鼠脾脏和胸腺的重量分别计算脾指数和胸腺指数。

与对照组比较，进行数理统计。

2结果
2.1单核-巨噬细胞功能试验——小鼠碳粒廓清法蝙蝠蛾被毛孢各剂量组小鼠廓清指数，均高于阴性对照组，与阴性对照组比较，高剂量组差异有统计学意义(P＜0.01)。

实验表明蝙蝠蛾被毛孢能明显增强小鼠单核-巨噬细胞功能。

详见表1。

表1蝙蝠蛾被毛孢对小鼠碳粒廓清指数的影响组别剂量（mg/kg）动物数（只）K(x±s)吞噬指数（α）生理盐水组-100.0402±0.00455.94±0.63蝙蝠蛾被毛孢低110 100.0465±0.12506.43±1.65蝙蝠蛾被毛孢中220 100.0612±0.02547.12±1.96蝙蝠蛾被毛孢高450 100.0941±0.0125*8.87±1.13*注：与生理盐水组比较，*P＜0.012.2体液免疫功能试验——血清溶血素试验蝙蝠蛾被毛孢各剂量组小鼠HC50均高于阴性对照组。

与阴性对照组相比，220、450 mg/kg组剂量组差异有统计学意义(P＜0.05、P＜0.01)。

实验表明蝙蝠蛾被毛孢可明显提高致敏小鼠的HC50值，即有明显增加小鼠体液免疫功能的作用。

详见表2。

2.3细胞免疫功能试验——DNFB诱导DTH蝙蝠蛾被毛孢各剂量组小鼠的耳廓肿胀度均高于阴性对照组，且随剂量的增加而增加。

与阴性对照组相比，220、450 mg/kg剂量组差异有统计学意义(P＜0.05、P＜0.01)。

DNFB诱导小鼠DTH，各剂量组的脾指数均随剂量的增加而增加。

与阴性对照组相比，220、450 mg/kg 组差异有统计学意义(P＜0.05、P＜0.01)，且胸腺指数随剂量增加而增加。

由此可见，蝙蝠蛾被毛孢在220和450 mg/kg可明显增强DNFB诱导的小鼠迟发性变态反应。

表明，蝙蝠蛾被毛孢具有明显增强小鼠细胞免疫功能的作用。

详见表3。

3讨论长期以来，天然虫草和生物工程发酵虫草菌丝体被用作免疫调节剂，本文通过实验表明，蝙蝠蛾被毛孢在450 mg/kg剂量下能明显增强小鼠单核-巨噬细胞功能；在220、450 mg/kg剂量下，明显增加小鼠体液免疫功能的作用；蝙蝠蛾被毛孢在220和450 mg/kg可明显增强DNFB诱导的小鼠迟发性变态反应。

结果表明，蝙蝠蛾被毛孢具有明显增强小鼠细胞免疫功能的作用，也为冬虫夏草菌丝体的开发和利用提供了参考。

参考文献
［1］柯传奎.中国冬虫夏草研究［M］.北京：中国科学技术出版社，2005：61-65.
［2］李增智，黄勃，李春如，等.冬虫夏草无性型的分子生物学证据，中国被毛孢与冬虫夏草之间的关系［J］.菌物系统，2000，19(1)：60-64.
［3］蒋毅，姚一建.冬虫夏草无性型研究概况［J］.菌物系统，2003，22(1)：161-176.
［4］龚晓健，季晖，卢顺高，等.人工虫草多糖对小鼠免疫功能的影响［J］.中国药科大学学报，2000，31(1)：53-55.
［5］樊美珍，李春如，李增智，等.“思壮”虫草菌丝体胶囊免疫功能评价［J］.微生物学通报，2000，27(1)：19-22.
［6］任建.人工虫草多糖对免疫低下小鼠免疫功能的影响［J］.第四军医大学学报，2007，28(21):1967-1969.。