细胞凋亡论文

深圳大学生命科学学院创新实验论文

□基础生物学创新实验 1.0学分

课程名称：□细胞与遗传学创新实验 1.0学分

□生化与分子生物学创新实验□生物科学1.0学分

□生物技术1.5学分实验项目来源：

□创新实验课程指定实验项目

□课外科技创新实验项目：资助单位

项目编号

实验项目名称：凋亡细胞的诱导和检测

实验项目学分：0.5

指导教师：彭勇

姓名：学号：专业：生物技术

实验时间：2011年12月1日星期四

论文提交时间：2011年12月17日星期六

生物科学教学实验中心制

深圳大学生命科学学院创新实验论文

评分表

指导老师签字：

生物科学教学实验中心制

盐胁迫诱导的植物细胞凋亡

摘要：以洋葱内表皮细胞为材料，分别以0.1mol/L 0.6mol/L 1.1mol/L的NaCl溶液处理2,4,6 h后进行染色观察,以此来发现植物细胞在高盐环境下的抗逆性，并且观察细胞凋亡的典型特征。

关键词：碱性纤维素酶产生菌；分离；筛选；生长曲线

细胞凋亡或细胞程序性死亡是多细胞生物甚至单细胞生物体在内外因子的诱导下，由基因控制的一种细胞主动性死亡途径，是细胞生命活动的基本特征之一。近年来研究表明，植物的一些特定细胞除在正常生长发育的特定期间能发生细胞凋亡外，还能受理化或生物等因子所诱导发生类似细胞凋亡的典型形态和生化特征。[1]本实验旨在研究不同NaCl浓度对细胞凋亡的影响。

盐胁迫是植物的一种重要抗逆反应，对植物的生长具有重要的生理意义。盐浓度达一定值时,会破坏细胞的正常生命活动，部分细胞甚至死亡。[1]高盐胁迫下的洋葱内表皮细胞死亡也具有细胞凋亡典型的形态和生化特征。

细胞凋亡主要形态学特征有：细胞膜完整，细胞连接和微绒毛消失，细胞骨架紊乱，粘着力降低，单个细胞与临近细胞脱离；核纤层蛋白降解，染色质凝集和边缘化，裂解为碎块，细胞核最终裂解为由核膜包裹的碎块，细胞器基本保持完整，细胞皱缩，细胞膜收缩并内陷，将细胞自行分割为多个具有膜包围、内含各种细胞成分的凋亡小体。凋亡细胞不会发生细胞膜、溶酶体等膜结构的破裂，不会引起细胞内容物外溢。[2]

细胞凋亡可通过形态学观察鉴定：改良苯酚品红染色观察,可观察细胞核、染色体的形态，从而判断细胞是否凋亡。

1 材料与方法

1.1实验材料

普通洋葱1个

1.2 实验试剂

1.2.1改良苯酚品红染液：

95%乙醇、1%醋酸、Na2HPO4、Na2HPO4、1%NaOH溶液、1%HCl、甘油、苏木精、铵矾、碘酸钠（NaIO3）、冰醋酸、Hanks染液、丙醇、二甲苯、中性甲醛

1.2.2 NaCl诱导溶液：

0.1mol/L：0.2922g NaCl定容至50ml 0.6mol/L：1.7532g NaCl定容至50ml

1.1mol/L：3.2142g NaCl定容至50ml

1.3 实验预处理

取新鲜洋葱于室温下清水培养4小时，使其活化

1.4细胞诱导凋亡

1.4.1 鳞茎切取30cm2左右的内表皮，任取1进行观察记录

1.4.2将切片分成5组，每组6片，其中1、2组为对照组，1组放入去离子水中不做其他处理，2组则放入试管中煮沸5min 。3-5组为实验组，依次放入装有1mol/L 、 0.6mol/L 、 1.1mol/L 浓度的NaCl 溶液的培养皿中。 1.4.3 进行实验处理后的 2h 、4h 、6h 在各组中任取一片做改良苯酚品红的染色观察并记录。

2 结果与分析

2.1 诱导前染色观察结果

细胞膜完整,细胞核呈球形,染色均匀,细胞质均匀透明,从细胞核倚靠边缘可推断液泡依然完整。

图1 诱导前改良苯酚品红染色观察图

2.2 煮沸的细胞观察结果

细胞坏死,细胞膜破碎，细胞核破裂，内容物外溢。

图2 经煮沸处理细胞改良苯酚品红染色观察图

400X 1000X 400X 1000X

2.3 诱导2h后的观察结果

2.3.1去离子水（图3）：与诱导处理前大致相同，细胞膜完整,细胞核呈球形,染色均匀,细胞

质均匀透明,

从细胞核倚靠边缘可推断液泡依然完整。

图3 2h去离子水改良苯酚品红染色观察图

2.3.20.1mol/L（图4）：部分细胞出现轻度质壁分离，部分细胞核有轻微皱缩。

图4 2h 0.1mol/L改良苯酚品红染色观察图

2.3.30.6mol/L（图5）：质壁分离较为明显，细胞膜皱缩，细胞核内出现泡状结构。

400X 1000X

1000X

400X

图5 2h 0.6mol/L 改良苯酚品红染色观察图

2.3.4 1.1mol/L （图6）：质壁分离明显，细胞核明显皱缩，染色质与细胞质包裹在一起形成较多的凋亡小体

图6 2h 1.1 mol/L 改良苯酚品红染色观察图

2.4 诱导4h 后的观察结果 2.4.1 去离子水（图7）：与诱导处理前大致相同，细胞膜完整,细胞核呈球形,染色均匀。

图7 4h 去离子水改良苯酚品红染色观察图

400X

1000X

400X 1000X 400X

1000X

2.4.2 0.1mol/L （图8）：质壁分离程度加强，细胞核开始出现泡状结构。

图8 4h 0.1mol/L 改良苯酚品红染色观察图 2.4.3 0.6mol/L （图9）：质壁分离明显,细胞膜严重皱缩,细胞核聚缩,出现少量凋亡小体

图

9 4h 0.6 mol/L 改良苯酚品红染色观察图

2.4.4 1.1mol/L(图10):质壁分离明显,细胞膜、细胞核明显皱缩,形成大量凋亡小体

图10 4h 1.1 mol/L 改良苯酚品红染色观察图

400X

1000X

400X

1000X

400X 1000X