抗坏血酸,可滴定酸测定方法

一. 目的

掌握滴定法测定Vc含量的基本原理和操作。

二. 原理

L-抗坏血酸（Vc）中的—C=C—基具有还原性，还原型L-抗坏血酸能与氧化剂染料2,6-二氯酚靛酚作用，染料本身被还原成无色的衍生物，同时还原态的L-抗坏血酸被氧化成无色的脱氢L-抗坏血酸。

一定量的样品提取液还原标准染料的量与样品中所含Vc的量成正比。染料2,6-二氯酚靛酚在中性或碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈粉红色。

用2,6-二氯酚靛酚滴定样品，在达到终点之前，滴下的2,6-二氯酚靛酚立即被还原成无色；当溶液中的L-抗坏血酸被消耗完时，滴下的过量的2,6-二氯酚靛酚在酸性体系里呈现粉红色。所以当溶液从无色转变成微红色时，即为滴定终点。

三. 实验材料及设备

1. 材料

新鲜蔬菜

2. 仪器

电子天平

3. 器材

滴定管：25mL×1

移液管：10mL×2 20mL×1

容量瓶：100mL×1

量筒：50mL×1

锥形瓶：100mL×4

研钵：1套

烧杯：250mL×2 50mL×1

洗瓶：1个

纱布：20cm×20cm 1块

四. 试剂的配制

1. 草酸溶液（2%）

每组配制250mL

2. 2,6-二氯酚靛酚溶液

分别称取2,6-二氯酚靛酚300mg、碳酸钠300mg，用热蒸馏水200mL溶解并定容至3000mL（过滤除去难溶颗粒，置于棕色瓶中，贮于冰箱中备用。有效期一周，使用前需标定，见附注。）

五. 操作步骤

1. 样品液的制备

(1) 取材：称取新鲜黄瓜10g左右，准确记录称样量g,再称量2.5g草酸，与样品一起用纱布包裹住。

(2) 研磨：样品包置研钵中，加15mL2%草酸，用研棒挤压样包，将样品充分磨细。将汁液转移到100mL容量瓶中。残渣再加15mL2%草酸，继续研磨，汁液再合并到上述容量瓶中。如此反复研磨2～3次，合并汁液。

(3) 定容：最后用2%草酸定容至V=100mL，摇匀备用。

2. 样品的测定

吸取汁液20mL，放入100mL锥形瓶中，立即用2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至出现粉红色在15秒内不消失为止。记录所用滴定液体积。平行操作三次得V1= mL，V2= mL，V3= mL，取平均值V= mL。

3. 空白测定

取2%的草酸液20mL，放入另一100mL锥形瓶内，用2,6-二氯酚靛酚滴定至终点，记录染料用量V0。

六. 结果处理

计算你所取生物材料中Vc的含量（单位用mg/100g鲜重）。

七. 附注

2,6-二氯酚靛酚钠溶液的标定：

准确称取Vc 20mg，用2%草酸溶解定容至1000mL。

吸取稀释液20mL，放入100mL锥形瓶中,立即用所要标定的2,6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现15秒不消失为止，记录所用毫升数，按下式计算K值（即1mL染料所能氧化抗坏血酸的毫克数）。

式中G：称取Vc的毫克数

V：滴定20mL标准Vc时所用染料液的毫升数与滴定空白所用毫升数之差值。

1. 操作要尽可能快，并防止与铁铜器具接触，以减少维生素C的氧化。

2. 草酸及样品的提取液避免日光直射。

3. 当样液本身带色时，测定前于提取液中加2～3mL二氯乙烷。在滴定过程中当二氯乙烷由无色变为粉红色时，即达终点。

总酸量（可滴定酸）的测定－酸度计法

SB/T 10203-1994

中华人民共和国行业标准 SB/T 10203-1994

果汁－总酸量（可滴定酸）的测定－酸度计法

1 范围

本方法适用于原果汁、浓缩果汁和加糖果汁中总酸量（可滴定酸）的检测。

2 原理

果汁中的有机酸，用氢氧化钠标准溶液滴定，以酸度计测定终点，用消耗的氢氧化钠标准溶液的体积计算总酸量。

3 试剂

3.1 所用水应用经煮沸除去CO2 的蒸馏水；

3.2 氢氧化钠标准溶液（0.1mol/L）：用感量0.1g的天平，迅速称取分析纯氢化钠4g，溶于蒸馏水中稀释到1000ml，摇匀；

4.3 氢氧化钠标准溶液的标定：精确称取120℃烘2h以上的基准试剂邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4）0.3～0.4g（精确至0.0001g），放入250mL锥形瓶中加蒸馏水约100mL溶解，加入1%酚酞指示剂2～3滴。用以上配制好的氢氧化钠溶液滴定，至显微红色30s不退色为终点。记录消耗氢氧化钠溶液的毫升数，平行试验3～5 次，取平均值。同样条件下取100mL蒸馏水作空白试验。记录消耗氢氧化钠的毫升数；