实验九++水体藻类的计数与叶绿素含量分析
测定叶绿素含量实验报告
测定叶绿素含量实验报告测定叶绿素含量实验报告引言：叶绿素是植物中最重要的色素之一，它在光合作用中起着至关重要的作用。
测定叶绿素含量可以帮助我们了解植物的生理状态和光合效率。
本实验旨在通过分光光度法测定叶绿素含量，并探讨影响叶绿素含量的因素。
材料与方法：1. 实验材料：新鲜的植物叶片、乙醇、丙酮、二氯甲烷、石英比色皿、量筒、离心机、紫外可见分光光度计等。
2. 实验步骤：a. 将适量的新鲜叶片切碎，并加入适量的乙醇中，用离心机离心10分钟，使叶绿素溶解于乙醇中。
b. 取适量的叶绿素提取液，加入丙酮和二氯甲烷，混合均匀。
c. 用量筒将混合液转移到石英比色皿中，放入紫外可见分光光度计，设置波长为665nm和649nm，测定吸光度。
d. 计算叶绿素含量。
结果与讨论：通过实验测定，我们可以得到不同植物叶片的叶绿素含量。
在实验中，我们发现不同植物叶片的叶绿素含量有所差异。
这是因为不同植物对光合作用的需求和适应能力不同，导致叶绿素合成的数量和比例不同。
此外，我们还发现在同一植物的不同部位，叶绿素含量也存在差异。
例如，在一棵树上，树叶的叶绿素含量可能比树干或树枝的含量高。
这是因为树叶是进行光合作用的主要部位，需要更多的叶绿素来吸收光能。
除了植物本身的因素外，环境条件也会对叶绿素含量产生影响。
光照强度、温度、水分等因素都会对叶绿素合成和降解产生影响。
例如，充足的光照和适宜的温度可以促进叶绿素的合成，而干旱和寒冷的环境则可能导致叶绿素的降解。
在实验中，我们使用了分光光度法来测定叶绿素含量。
这种方法基于叶绿素对特定波长光的吸收特性，通过测量吸光度来间接测定叶绿素的含量。
分光光度法具有操作简便、结果准确等优点，因此被广泛应用于叶绿素含量的测定。
然而，分光光度法也存在一些局限性。
首先，该方法只能测定总叶绿素含量，无法区分不同类型的叶绿素。
其次，该方法对样品的处理要求较高，需要保证样品中的叶绿素完全释放并溶解于提取液中。
因此，在实际应用中，我们需要根据具体情况选择适合的方法来测定叶绿素含量。
叶绿素含量的测定实验报告
一、实验目的1. 学习叶绿素提取和分离的方法。
2. 掌握利用分光光度法测定叶绿素含量的原理和操作步骤。
3. 了解不同植物叶绿素含量的差异。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，其含量直接影响植物的生长和发育。
本实验采用分光光度法测定叶绿素含量，基于叶绿素在不同波长下对光的吸收特性，通过测定其最大吸收峰处的吸光度值，计算出叶绿素的含量。
三、实验材料与仪器实验材料：1. 新鲜菠菜、小麦、水稻等植物叶片。
2. 95%乙醇、无水乙醇、碳酸钙、石英砂等试剂。
实验仪器：1. 分光光度计2. 研钵3. 移液管4. 量筒5. 滤纸6. 比色皿7. 电子天平四、实验步骤1. 样品制备：- 称取新鲜植物叶片0.1g（准确至0.0001g），放入研钵中。
- 加入少量石英砂和碳酸钙，用研杵研磨成匀浆。
- 加入5ml 95%乙醇，继续研磨至叶片组织变白。
2. 叶绿素提取：- 将提取液转移至10ml试管中，用少量95%乙醇冲洗研钵、研杵及残渣，合并于试管中。
- 用滤纸过滤提取液，收集滤液。
3. 叶绿素分离：- 将滤液转移至比色皿中，以无水乙醇为空白，在波长663nm、645nm和652nm处测定吸光度值。
4. 叶绿素含量计算：- 根据吸光度值和标准曲线，计算出叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量。
- 叶绿素总含量 = 叶绿素a含量 + 叶绿素b含量。
五、实验结果与分析以菠菜叶片为例，实验结果如下：| 植物种类 | 叶绿素a含量（mg/g） | 叶绿素b含量（mg/g） | 类胡萝卜素含量（mg/g） | 叶绿素总含量（mg/g） || -------- | ------------------- | ------------------- | --------------------- | ------------------- || 菠菜 | 1.23 | 0.78 | 0.45 | 2.46 |通过比较不同植物叶片的叶绿素含量，可以分析其光合作用能力和生长发育状况。
叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想
叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想叶绿素a法是一种常用的方法，用于测定富营养化湖泊中的藻类数量。
藻类是湖泊生态系统中不可或缺的一部分，它们是湖泊中的初级生产者，对水体性质的改变和生态系统的稳定起着重要作用。
通过测量叶绿素a的含量，我们可以快速、准确地评估湖泊中的藻量，为湖泊生态环境的恢复和管理提供科学依据。
在实际操作中，叶绿素a法主要是通过光谱测量的原理来确定叶绿素a 的浓度。
叶绿素a是藻类中最常见的一种叶绿素，其含量与藻类生物量呈正相关关系。
通过测定叶绿素a的浓度可以间接反映湖泊中藻类的数量。
叶绿素a法的测量过程相对简单，操作方便。
需要从湖水中取样，然后将样品过滤，提取出其中的叶绿素a。
接下来，使用光谱仪或叶绿素荧光仪对提取液的吸光度进行测量，并根据已有的标准曲线，计算出叶绿素a的浓度。
根据叶绿素a的浓度，结合湖泊的水量，可以计算出湖泊中的藻类数量。
通过叶绿素a法测定富营养化湖泊中的藻量，我们可以对湖泊生态系统的变化进行准确监测和评估。
在富营养化的湖泊中，藻类数量往往过多，导致水体浑浊，水质恶化，甚至引起水华等严重问题。
通过及时测定藻类数量，我们可以对湖泊中的富营养化程度进行评估，并针对性地采取相应的措施来改善湖泊生态环境。
然而，在使用叶绿素a法进行藻量测定时，也存在一些问题和限制。
叶绿素a法只能测定叶绿素a的浓度，而不能提供其他藻类的信息。
不同种类的藻类在湖泊中有不同的生态功能和生态作用，因此仅仅通过叶绿素a的浓度无法全面了解湖泊中藻类的组成和结构。
叶绿素a 法只能在湖泊表层水体中进行测定，无法对湖泊底泥和深层水体中的藻类进行评估。
在一些深水湖泊中，底泥中的藻类可能对湖泊生态系统的健康产生重要影响，但使用叶绿素a法无法直接获取这些信息。
叶绿素a法是一种快速、准确测定富营养化湖泊中藻量的有效方法。
它为湖泊生态环境的管理和恢复提供了重要的技术支持。
然而，我们也需要意识到叶绿素a法的局限性，进一步研究和探索其他方法，以便更全面地了解湖泊中藻类的数量和组成。
藻类植物实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解藻类植物的基本特征和分类。
2. 掌握藻类植物观察和鉴定的基本方法。
3. 学习藻类植物在生态系统中的作用。
二、实验原理藻类植物是一类结构简单、种类繁多、广泛分布于水生和潮湿环境中的低等植物。
它们通过光合作用制造有机物质，是自然界中重要的初级生产者，对维持生态平衡和水质净化具有重要意义。
本实验通过观察和鉴定藻类植物，了解其形态结构、生长环境和生态功能。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：采集的藻类植物样本、显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸、酒精灯、镊子、剪刀、解剖针等。
2. 实验仪器：显微镜、酒精灯、培养皿、蒸馏水、碘液、盐酸等。
四、实验步骤1. 藻类植物样本采集：在池塘、溪流、湖泊等水生环境中采集藻类植物样本，注意采集不同种类和生长阶段的藻类。
2. 藻类植物观察：1. 取一小块藻类植物样本，用剪刀剪成小块，放入载玻片中。
2. 用盖玻片轻轻覆盖样本，滴加少量蒸馏水，使样本充分展平。
3. 将载玻片置于显微镜下观察，观察藻类植物的形态结构、细胞特征、繁殖方式等。
3. 藻类植物鉴定：1. 根据藻类植物的形态结构、细胞特征等，参考藻类植物分类学资料，对采集的藻类植物进行鉴定。
2. 记录鉴定结果，包括藻类植物的学名、门、纲、目、科、属、种等信息。
4. 藻类植物生长环境调查：1. 对采集藻类植物的水体环境进行观察和记录，包括水质、水温、光照、底质等。
2. 分析藻类植物的生长环境与水质、水温等因素的关系。
五、实验结果与分析1. 藻类植物观察结果：1. 观察到藻类植物种类繁多，形态各异，包括单细胞、群体和多细胞藻类。
2. 部分藻类植物具有类似高等植物的根、茎、叶结构，如水绵、丝藻等。
3. 部分藻类植物具有特殊繁殖方式，如轮藻的精囊、卵囊等。
2. 藻类植物鉴定结果：1. 采集到的藻类植物样本共鉴定出10种，包括蓝藻、绿藻、硅藻、金藻等。
2. 其中，蓝藻门的颤藻、绿藻门的衣藻、硅藻门的硅藻等是常见种类。
藻类生物学实验
进行微藻培养时，可根据培养藻类对营养的要求，选用合适 的配方，在消毒水中按配方加入各种营养物质配成。所加肥料 应保持清洁，某些不清洁肥料必须消毒，预防敌害生物通过肥 料污染。
绿藻培养液配方：
①海洋三号扁藻培养液（海洋研究所，1960）：
NaNO3
0.1g
2Na3C6H5O7﹒ 11H2O 0.02g
1、实验材料：海带、 裙带菜、紫菜、小球藻、球等鞭金藻等,选4种藻 2、实验仪器：紫外分光光度计(208实验室) 3、实验器材：研钵（每组一套）、15ml离心管（每组4支-依藻种类定）、
15ml刻度试管（每组4支）、0.45m的滤膜（每组3个），抽滤装置， 离心机（或用20ml针管和滤膜器） 4、试剂：丙酮（分析纯）、MgCO3
碘液，常用的配方是：将6克的碘化钾溶于20毫升水中，待完全溶解后加入4克碘，摇 荡，待碘完全溶解后，加入80毫升蒸馏水，贮存在棕色试剂瓶内。）
（3） 计数板与盖玻片洗净擦干――盖好盖玻片――摇荡藻液――吸取藻液 （干的微吸管）――迅速加样――1分钟后低倍镜下计数－计数任何对角两大 格（加盖玻片后每一大格即形成一个体积为0.1立方毫米的空间），然后取其 平均值。每个样品须重复计数两次。
三、实验步骤
3、分离：镜检待分离的藻液，调藻液浓度为5-6个藻细胞为宜，在已灭菌 的载玻片上滴加6滴消毒培养液，另取一载玻片滴一滴稀释的待分离藻 液，在显微镜下用微吸管吸取所需的藻细胞，放在第一滴消毒水中，清 洗，再用微吸管吸取所需的藻细胞放在备有培养液的试管中。
4、将装有藻细胞的试管置于适宜的条件下培养。
三、实验步骤
1、抽滤： 减压过滤5ml的藻类培养液到玻璃纤维滤片上，约加0.1g MgCO3 细粉，使均匀覆盖于薄膜上，倒入水样抽滤，注意避免高温、强光及压力
叶绿素含量的测定
海洋生物学实验浮游植物叶绿素含量的测定一、实验目的：１、通过浮游植物细胞密度与单位水体叶绿素a（Chla）含量的测定，了解浮游植物数量和生物量的表示方法，并对不同粒径浮游植物加以比较。
２、学会使用采水瓶、水样固定、浓缩及浮游植物计数框的方法，掌握叶绿素ａ的测定方法。
二、原理：见《海洋生态学》P192-194生物量是指某一特定时间、某一特定范围内存在的有机体的量。
浮游植物是海洋生态系统的初级生产者，而初级生产水平与叶绿素a 含量存在密切关系，因而往往用叶绿素a含量来表示浮游植物的生物量。
海洋生态系统的种类组成结构以及能流、物质流特征与初级生产者的粒径大小有密切关系。
不同类型海区初级生产者的粒径组成存在很大差异，了解某一特定海区初级生产者的粒径组成，有助于深入研究海区的新生产力水平、营养平衡状态等结构、功能特征。
三、仪器与设备：１、分光光度计3、采水瓶4、抽滤器5、微孔滤膜6、冰箱7、离心机四、药品与试剂：丙硐、甲醛、MgCO3等。
五、实验步骤：1、采样：选择完站位后，以500mL、或1000mL采水瓶采取一定水层（也可几个水层比较）的水样。
2、水样处理：将所取水样分别以0.45μm微孔滤膜（叶绿素a 总量）、2μm核孔滤膜（＞2μm孔径叶绿素a含量）以及先经20μm孔径筛绢过滤后再以2μm核孔滤膜（2-20μm孔径叶绿素a含量）过滤，以90%丙酮溶解滤膜后冰冻过夜。
3、数据测定：滤膜冰冻24小时后取出离心，取上清液于分光光度计测定叶绿素a含量（方法见附页），将所得不同孔径叶绿素a 含量及占叶绿素a总量比例等数据填入测定数据表中。
附：叶绿素a含量测定方法（分光光度法）：A．检测限：0.02mg/m3。
B．方法概述：已知体积的海水以玻璃纤维过滤器过滤，用90％丙酮将色素从滤器上萃取出来，其浓度以分光光度法测定。
C．仪器和设备：１、分光光度计２、抽滤器３、电动吸引器４、采水瓶５、微孔滤膜６、离心沉淀器７、冰箱８、离心管D．取样方法和贮存：将0.5-10升海水经0.45μm微孔滤膜过滤。
[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定
![[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定](https://img.taocdn.com/s3/m/e49fc262ed630b1c59eeb5c1.png)
[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定篇一 : 叶绿素含量测定叶绿素含量的测定根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度A值与其中溶质浓度C以及光径L成正比，即A,aCL。
,)各种有色物质溶液在不同波长下的吸光值可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下的吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素提取液中叶绿素a、b含量，只需测定该提取液在2 个特定波长下的吸光度度值，并根据叶绿素a与b在该波长下的吸光系数即可求出各自的浓度。
在测定叶绿素a、b含量时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长应选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a、b的80 ,丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm 和645nm，又知在波长663nm下，叶绿素a、b在该溶液中的比吸收系数分别为82.04 和9.27，在波长645nm下分别为16.75和45.60，可根据加和性原则列出以下关系式:A663=82.04Ca +9.27Cb………………A645=16.75Ca+45.6Cb………………式中A663、A664分别为波长663nm和645nm处测定叶绿素溶液的吸光度值;Ca、Cb分别为叶绿素a、b的浓度。
解联立方程、可得以下方程:Ca=0.0127A663-0.00269A645…………Cb=0.0229A645-0.00468A663…………如把叶绿素含量单位由g/L改为mg/L，、式则可改写为:Ca=12.7A663-2.69A645…………Cb=22.9A645-4.68A663…………叶绿素总量CT=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663……叶绿素总量也可根据下式求导A652=34.5×CT由于652nm为叶绿素a与b在红光区吸收光谱曲线的交叉点，两者有相同的比吸收系数，因此也可以在此波长下测定一次吸光度求出叶绿素总量: CT=A652/34.5CT=A652×1000/34.5………因此，可利用、式可分别计算叶绿素a与b含量，利用式或式可计算叶绿素总量。
藻类叶绿素a的测定(精)
藻类叶绿素a的测定一、实验名称藻类叶绿素a的测定二、实验目的——(水)环境化学中叶绿素a测定意义在地表水环境的富营养化的研究中，叶绿素a是表征浮游植物生物量的最常用的指标之一。
同时，叶绿素a也是用来衡量水体水质，评价水体富营养化水平的标准之一。
三、实验原理叶绿素介绍叶绿素是植物进行光合作用的主要脂溶性色素，它在光合作用的光吸收中起核心作用。
所有光合器官中都含有叶绿素。
叶绿素a和b都溶于乙醇、乙醚、丙酮等，难溶于石油醚，有旋光，主要吸收橙红光和蓝光。
因此，这两种光对光合作用最有效。
当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素不很稳定，光、热、酸、碱、氧、氧化剂等都会使其分解。
在酸性条件下，叶绿素中的镁原子很容易被其他酸代替，绿色消失而变黄，叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，加热时反应加速。
叶绿素的实验室测量方法有分光光度法、荧光法、色谱法，其中以传统的分光光度法应用最为广泛。
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即：A =α•C•L式中：α为比例常数。
当溶液浓度以百分比浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。
各有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。
（1）单色法已知叶绿素a的80％丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm，已知在波长663nm下，叶绿素a在该溶液中的比吸收系数分别为82.04，因此C A=A663/82，可以计算出叶绿素a的含量(mg/L)。
（2）三色法已知叶绿素a、b的80％丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm 和645nm，且两吸收曲线相交于652nm 处。
生物藻类实验报告结论(3篇)
第1篇一、实验概述本次实验旨在通过采集、鉴定和分析池塘水中的藻类植物，了解其种类组成、数量分布和群落特征，进而推测其水质状况。
实验分别对萃英山下高尔夫球场小池塘和榆中县兴隆山东山脚下云龙桥仙客休闲茶园前溪流的藻类进行了调查和分析。
二、实验结果1.藻类种类组成在两个调查地点，共采集到藻类植物18种，其中浮游藻类15种，沉水藻类3种。
其中，小球藻（Chlorella）、绿藻（Chlorophyta）、硅藻（Bacillariophyta）等为主要优势种。
2.藻类数量分布调查结果显示，两个地点的藻类数量差异较大。
高尔夫球场小池塘藻类数量较多，沉水藻类和浮游藻类数量分别为3.2×10^5个/L和1.5×10^6个/L；而云龙桥仙客休闲茶园前溪流藻类数量较少，沉水藻类和浮游藻类数量分别为1.0×10^4个/L 和2.0×10^5个/L。
3.藻类群落特征通过对藻类群落的分析，发现高尔夫球场小池塘藻类群落结构较为复杂，优势种较多，且数量分布较为均匀。
而云龙桥仙客休闲茶园前溪流藻类群落结构相对简单，优势种较少，且数量分布不均匀。
4.水质状况根据藻类种类组成、数量分布和群落特征，对两个地点的水质状况进行了综合评价。
高尔夫球场小池塘水质较好，符合《地表水环境质量标准》Ⅲ类水质标准；而云龙桥仙客休闲茶园前溪流水质较差，不符合《地表水环境质量标准》Ⅲ类水质标准。
三、结论1.本次实验成功采集并鉴定了池塘水中的藻类植物，掌握了藻类采集及鉴定、群落分析方法。
2.两个调查地点的藻类种类组成和数量分布存在显著差异，可能与水质状况、环境因素等因素有关。
3.高尔夫球场小池塘藻类群落结构较为复杂，水质较好；而云龙桥仙客休闲茶园前溪流藻类群落结构相对简单，水质较差。
4.藻类作为生物学监测指标，在水环境评价中具有重要作用。
通过对藻类种类组成、数量分布和群落特征的分析，可以较好地反映水质状况。
5.为改善水质，建议对云龙桥仙客休闲茶园前溪流进行水质治理，降低污染物排放，提高水质。
观察水藻叶绿体实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解水藻的基本结构及其功能。
2. 掌握使用显微镜观察叶绿体的方法和技巧。
3. 观察叶绿体的形态、分布和功能，加深对光合作用的认识。
二、实验原理水藻是一种低等植物，具有单细胞或多细胞结构。
水藻的细胞中含有丰富的叶绿体，是进行光合作用的主要场所。
叶绿体呈绿色，内含叶绿素等色素，能够吸收光能并将其转化为化学能，为植物提供能量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：水藻、载玻片、盖玻片、显微镜、碘液、蒸馏水、酒精、刀片、镊子、滴管等。
2. 实验仪器：显微镜、实验台、酒精灯、加热器、烘箱等。
四、实验步骤1. 制备水藻临时装片（1）取新鲜水藻，用刀片将其切成小块。
（2）将切好的水藻放入载玻片中，加入适量蒸馏水。
（3）用镊子轻轻压平水藻，使细胞紧密排列。
（4）用盖玻片覆盖载玻片，避免气泡产生。
2. 观察叶绿体（1）将临时装片置于显微镜下，调节焦距，找到清晰的水藻细胞。
（2）观察叶绿体的形态、大小、颜色和分布情况。
（3）用碘液染色，观察叶绿体的颜色变化，进一步确认叶绿体的存在。
3. 实验数据分析（1）记录水藻细胞的形态、大小、数量等特征。
（2）描述叶绿体的形态、大小、颜色、分布和染色情况。
（3）分析叶绿体的功能及其与水藻生长的关系。
五、实验结果与分析1. 水藻细胞呈椭圆形，细胞壁较薄，细胞质透明。
细胞内含有多个叶绿体，呈绿色，分布在细胞质中。
2. 叶绿体呈椭球形，大小约为2-5微米。
叶绿体在细胞质中均匀分布，部分叶绿体聚集在一起。
3. 碘液染色后，叶绿体颜色加深，更加明显。
这进一步证实了叶绿体的存在。
六、实验结论1. 水藻细胞内含有叶绿体，是进行光合作用的主要场所。
2. 叶绿体在细胞质中均匀分布，有利于提高光合作用的效率。
3. 通过观察叶绿体的形态、分布和染色情况，可以了解水藻的光合作用过程及其功能。
七、实验讨论1. 水藻的叶绿体在光合作用中扮演着重要角色，为水藻提供能量和有机物质。
2. 叶绿体的分布和形态与光合作用的效率密切相关。
叶绿素含量测定实验PPT课件
2.3 仪器与器皿： 分光光度计、台秤、剪刀、研钵、移液管、
漏斗、大试管
三. 实验步骤
1．取样：清洗叶片并擦干,称取0.5g叶片， 剪碎后放入研钵中。（在正规实验中应 各重复3次，本实验为减少乙醇或丙酮向 环境中的排放，故不设重复）。注意取 样时要避开大的叶脉。
4．结果计算：将645、663、652nm处测得的吸光 度代入公式（3）、（4）、（5）、（6）中计 算叶绿素a、b浓度和总浓度。再将叶绿素a、b 浓度和总浓度代入公式（7）中求出所测材料 单位重量或单位面积的叶绿素a、b含量和总含 量。
叶片洗净、吸干、去大叶脉 ↓
称0.5g叶用乙醇或丙酮研磨 ↓
叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用 多种有机溶剂，如丙酮、乙醇或二甲基 亚砜等研磨提取或浸泡提取。叶绿色素 在特定提取溶液中对特定波长的光有最 大吸收，用分光光度计测定在该波长下 叶绿素溶液的吸光度(也称为光密度)，再 根据叶绿素在该波长下的吸收系数即可 计算叶绿素含量。
叶绿素a、b在长波的最大吸收峰分别在663nm、 645nm，据Lamber-Beer 定律，可得浓度C与光密 度D间的关系式：
实验二. 叶绿素含量的测定
高等植物光合作用过程中利用的光能是 通过叶绿体色素(光合色素)吸收的。叶绿 体色素由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素 和叶黄素组成。
在植物光合生理、发育生理和抗性生理 研究中经常需要测定叶绿素含量。叶绿 素含量也是指导作物栽培生产和选育作 物品种的重要指标。
一.实验原理
3．读取吸光度：取厚度为lcm的洁净比色皿，注 意不要用手接触比色皿的光面，先用少量色素 提取液清洗2~3次，注意清洗时要使清洗液接触 比色皿内壁的所有部分，然后将色素提取液倒 入比色皿中，液面高度约为比色皿高度的4/5， 将撒在比色皿外面的溶液用滤纸吸掉（注意不 能擦），再用擦镜纸擦干擦净。
富营养化水体中藻类的测定叶绿素a法
（7）
CT为叶绿素的总浓度
（5） （6）
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实验仪器及材料
• 实验材料： • 富营养化水体中的藻类
• 实验仪器及试剂： • UV-1700分光光度计；天平；剪刀；打孔器；研钵；移液管；漏斗；量筒；培养皿；滤纸；丙酮；石 英砂；CaCO3；
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实验步骤
1. 提取叶绿素
于天平上称取0.5g藻体，（也可用打孔器打取一定数量的 叶圆片，计算总的叶面积），剪碎后置于研体中，加入 5ml 80%丙酮，少许CaCO3和石英砂。仔细研磨成匀 浆，用滤斗过滤到10ml量筒中，注意在研钵中加入少量 80%丙酮将研钵洗净，一并转入研钵中过滤到量筒内， 并定容至10ml。将量筒内的提取液混匀，用移液管小心 抽取5ml转入25ml量筒中，再加入80%丙酮定容至 25ml（最终植物材料与提取液的比例为W：V＝0.5： 50＝1：100，叶色深的植物材料比例要稀释到1： 200）。
在海岸或海湾中，引起“赤潮”的藻类主要是甲 Ceratium ）、环沟藻属
（Gymnodinium）、膝沟藻属（Gonyaulax
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水体富营养化
•评价水体富营养化的指标
❖ 测定水域中光合作用强度与呼吸作用强度之比
❖测定藻类生产潜在能力（AGP） ❖黑❖其它评价富营养化的方法
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水体富营养化
水体形成富营养化的指标是：水体中含氮量大于0.2-0.3 mg/L ，含磷 量大于0.01~0.02mg/L ，生化需氧量（BOD5 ）大于10mg/L。在pH值7~9 的淡水中细菌总数达到105个／ml，标志藻类生长的叶绿素a大于10g／L。
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浅析地表水叶绿素a的测定
浅析地表水叶绿素a的测定
地表水叶绿素a的测定是一种常见的环境监测方法，用于评估水体中的藻类生物量和
水质状况。
本文将对地表水叶绿素a的测定原理、实验步骤和应用进行浅析。
地表水叶绿素a是水中藻类的主要光合色素，广泛存在于淡水和海水中。
它可以吸收
可见光的蓝色和红色波长，通过光合作用将光能转化为化学能。
叶绿素a的测定能够反映
水体中藻类的生长情况和光合活性，进而评估水质状况。
地表水叶绿素a的测定通常采用光谱分析法和高性能液相色谱法。
光谱分析法是最常
用的方法之一。
光谱分析法利用叶绿素a在可见光区域的吸收特性。
需要采集地表水样品，然后通过低温离心或滤膜法将水样中的藻类捕集、浓缩。
接下来，将浓缩后的样品用乙酸
乙酯等溶剂提取叶绿素a，得到叶绿素a的溶液。
利用分光光度计测定叶绿素a溶液在不同波长下的吸光度，并根据叶绿素a的吸光度和标准曲线计算出水样中叶绿素a的浓度。
地表水叶绿素a的测定具有广泛的应用价值。
它可以用于评估水体的富营养化程度。
富营养化是水体中营养盐过多导致的现象，会引起藻类过度生长，破坏生态平衡。
通过测
定地表水叶绿素a的浓度，可以了解藻类生物量的变化情况，进而判断水质是否受到富营
养化的影响。
地表水叶绿素a的测定可以用于监测水体的透明度和浊度。
藻类密度的增加
会使水体变得浑浊，从而降低水体的透明度。
通过测定叶绿素a的浓度，可以客观地评估
水体的浊度情况，为水质管理提供参考。
地表水叶绿素a的测定还可以用于生态环境研究
和藻类水华监测等方面。
叶绿素的测定
实验六富营养化湖中藻量的测定（叶绿素a法）一、实验目的富营养化湖由于水体受到污染，尤以氮磷为甚，致使其中的藻类旺盛生长。
此类水体中代表藻类的叶绿素a浓度常大于10微克/升。
本实验通过测定不同水体中藻类叶绿素a浓度，以考查其富营养化情况。
二、器材与用品1、分光光度计（波长选择大于750nm，精度为0.5－2nm）。
2、比色杯（1cm；4cm）。
3、台式离心机（3500r/min）4、离心管（15ml具刻度和塞子）；冰箱5、匀浆器或小研钵。
6、蔡氏滤器；滤膜（0.45微克，直径47mm）。
7、真空泵（最大压力不超过300kpa）。
8、MgCO3悬液：lg MgCO3细粉悬于100ml蒸馏水中。
9、90％的丙酮溶液：90份丙酮＋10份蒸馏水。
10、水样：两种不同污染程度的湖水水样各2L.三、方法和步骤1、按浮游植物采样方法，湖泊、水库采样500ml，池塘300ml。
采样点及采水时间同“浮游植物”。
2、清洗玻璃仪器：整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤剂清洗干净，尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素a分解。
3、过滤水样；在蔡氏滤器上装好滤膜，每种测定水样取50－500ml 减压过滤。
待水样剩余若干毫升之前加入0.2ml MgCO3悬液、摇匀直至抽干水样。
加入MgCO3可增进藻细胞滞留在滤膜上，同时还可防止提取过程中叶绿素a被分解。
如过滤后的载藻滤膜不能马上进行提取处理，应将其置于干燥器内，放冷（4℃）暗处保存，放置时间最多不能超过48小时。
4、提取；将滤膜放于匀浆器或小研钵内，加2－3ml90％的丙酮溶液，匀浆，以破碎藻细胞。
然后用移液管将匀浆液移入刻度离心管中，用5ml90％丙酮冲洗2次，最后向离心管中补加90％丙酮，使管内总体积为10ml。
塞紧塞子并在管子外部罩上遮光物，充分振荡，放冰箱避光提取18－24小时。
5、离心：提取完毕后，置离心管于台式离心机上3500r/min，离心10min，取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管中，塞上塞子，3500r/min在离心10min。
水体不同含量叶绿素a的快速测定方法探讨
水体不同含量叶绿素a的快速测定方法探讨作者：周丽珍黄成丁炜炜严绍熙赖胤龙来源：《安徽农学通报》2020年第16期摘要：为进一步提高蓝藻水华应急工作中叶绿素a数据的准确性和快捷性，以西牛潭水库水源地水样为样本，开展了不同研磨时间和浸提时间对不同含量叶绿素测定的影响试验。
结果表明，在水华应急工作中，样品在充分研磨的条件下，浸提时间可缩短至2h进行叶绿素a含量测定。
相比于《水质叶绿素a 的测定分光光度法》（HJ897-2017）手工法，该方法提高了快速测定的准确性和快捷性。
关键词：叶绿素a;浸提时间;蓝藻水华;应急监测中图分类号 Q946 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2020）16-0169-021 前言蓝藻水华是指氮、磷以及其他微量元素等迅速增加，同时光照、温度及水纹地理等条件恰好适宜藻类生长繁殖时，藻类大量繁殖聚集并达到一定浓度后，使水体呈现蓝绿色的一种水体污染现象[1-2]。
叶绿素a是表征蓝藻生物量的重要因子之一，蓝藻水华暴发时，对叶绿素a浓度的快速准确分析可以评价藻类水华暴发情况与动态变化趋势，对于做好水华应急处置工作具有重要的指导意义[3-5]。
《水質叶绿素a的测定分光光度法》（HJ897-2017）[6]是分析叶绿素a浓度的国标法，该方法操作简单、稳定性好且准确度高。
但对样品的浸泡提取时间推荐在2～24h，而不同浓度的叶绿素a充分浸泡提取时间并不明确，从而不能很好地满足水华应急监测工作中分析速度快的要求。
本研究以西牛潭水库水源地水样为样本，在《水质叶绿素a的测定分光度法》（HJ897-2017）方法基础上，开展不同研磨时间和浸提时间对不同含量叶绿素a测定的影响试验，缩短样品分析时间，为叶绿素a的测定提供一种快速有效的方法。
2 材料与方法2.1 试验材料全自动样品快速研磨器：品牌;上海净信;型号规格：JXFSTPRP-24;出产编号：019518261;研磨频率：65Hz;紫外可见分光光度计（配10mm石英比色皿）：品牌：新世纪;型号规格：T6;出厂编号：28-1650-01-0520;其他设备和药品见《水质叶绿素a的测定分光光度法》（HJ897-2017）。
几种海藻叶绿素含量的测定与比较
几种海藻叶绿素含量的测定与比较张栩张沂萍“吕培顶“蔡昭铃欧阳藩中国科学院化工冶金所生化工程国家实验室，北京，１０００８０辅要：对青岛近海所采集的１７种底栖海藻中叶绿素的舍量进行了分析测定和比较．结果表明，叶绿素ａ含量较高的海藁是爆藻中的孔石莼｛Ｕｌｖａｐｅｒｔｕｓａ）１．９１ｍｇ／ｇ、浒苔（ＥｍｅｒｍｏｒｐｈａＰｒｏｈｆｅｒａ）１．９０ｍｇ／ｇ和礁膜（Ｍｏｎｏｓｌｒｏｒａａｎｉｔｉｄｕｍ）１３４ｍｇ／ｇ．依旋为褐藻中的海黍干（ＳａｒｇａｓｓｕｍＫｊｅｌｌｍａｎｉａｎｕｍ）Ｏ７４ｍｇ／ｇ、鼠尾藻｛Ｓａｒｇａｓｓｕｍｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ）０７２ｍｇ／ｇ，红藻中的松节藻（Ｒｈｏｄｏｒａｅｌａｃｏｎｆｅｒｖｏｉｄｅｓ）０．５９ｍｇ／ｇ、夺宽紫菜（Ｐｏｒｐｈｙｒａｙｅ：ｏｅｎｓｉｓ）Ｏ５８ｍ∥ｇ和多管藻（Ｐｏ挑ｉｐｈｏｎｉａｕｒｃｅｏｌａｔａ）０．５４ｍｇ／ｇ以及褐藻中的萱藻（Ｓｃｙｔｏｓｉｐｈｏｎｌｏｍｅｎｔａｒｉｕｓ）０５４ｍｇ／ｇ．绿藻的叶绿素组成和含量与陆地植物的叶子极为相似，两者都有叶绿素ｂ，不舍叶绿素ｃ：而且叶绿素ａ与叶绿素ｂ之比值通常为一定值（约２．９）．所有的红藻和褐藻中，部有叶绿素ｃ，却没有叶绿素ｂ，叶绿素ａ所占的比例，最大的是褐藻中的鼠尾藻（８４％）和萱藻（８３％），其嵌是虹藻中的条斑紫菜（７６％）、松节藻【７５％）、蜈蚣藻（７２％）和多管藻（７Ｉ％）．孔石莼．浒苔和礁膜可作为获得较高含量叶绿素的廉价原料．褐藻中的鼠尾藻、海黍子和萱藻以及红藻中的松节藻、务斑紫菜和多管藻是获得高纯度叶绿素ａ、而且不舍叶绿素ｂ的理想材料．１前言叶绿素作为一种天然色素，是绿色植物进行光合作用的物质基础。
早在】８１８年，Ｂｅｒｚｅｌｉｕｓ就开始了对叶绿素方面的研究。
后来，Ｓｔｏｋｅｓ用有机溶剂提取叶绿素。
１９１３年，德国的Ｗｉｌｌｓｔａｃｔｅｒ报道了有关叶绿素结构、制各方法、特点以及分离和检测，第一次详尽地阐述了叶绿素的研究成果，开创了现代叶绿素工业生产。
藻类叶绿素测定
藻类叶绿素测定1、样品浓缩取一定量的藻液放置在遮光离心管中，马上经过4500转10分钟离心后将上清液倒掉或者储存留作其他分析用。
2、色素提取在离心管中加入2-3ml90%的丙酮水溶液，用高速匀样器500r/min破碎1min。
用90%丙酮水溶液清洗匀样器转子，将所有藻细胞转移至离心管中。
3、测定将盛有萃取液的离心管放置于离心机中，在675g（相当于我们实验室所用最高转速4500转的离心机的工作转速为2000转/min）相对离心力下离心15min，或者500g（相当于我们实验室所用最高转速4500转的离心机的工作转速为1700转/min）相对离心力下离心20min。
将离心后的上清液倒入比色皿中，在分光光度计上测定萃取液在630nm，647nm，664nm和750nm波长处的吸光度。
750nm处吸光度不应超过0.005，否则应倒回离心管重新离心。
664nm处吸光度应在0.1-1.0，否则应将萃取液稀释或者更换不同光程的比色皿。
4、计算水样的叶绿素a 、b 和c 含量用下式计算:Chl-a = [ 11 .85(D664 -D750)-1 .54(D647 -D750)-0 .08(D630 -D750)] VE/(V sδ) (1)Chl-b = [ -5 .43(D664 -D750)+21 .03(D647 -D750)-2 .66(D630 -D750)] VE /(Vs δ) (2) Chl-c = [ -1 .67(D664 -D750)-7 .6(D647 -D750)+24 .52(D630 -D750)] VE/(V s δ) (3)式中V E ———离心管中萃取液的定容体积, mL ;Vs ———水样体积, L ;δ———比色皿光程, cm ;Chl-a 、Chl-b 、Chl-c 分别为水样中叶绿素a 、b 、c的浓度, μg/ L ;D630、D647、D664、D750分别为萃取液在波长630 nm、647 nm、664 nm、750 nm 处的吸光度值。
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实验九水体藻类的计数与叶绿素含量分析
一、目的要求
掌握藻类的接种方法；掌握水样中藻类计数方法；了解检测水样藻类计数方法的原理及其应用中的优缺点；了解水质与藻类之间的相关性，明白其应用的重要性；掌握藻类叶绿素含量的测定方法及原理。
二、实验原理
藻类个体数与光密度值成正比；藻细胞过小，密度过大,在显微镜下计数时容易出现较大的人为误差；用显微镜对水中藻类计数的工作强度大，耗时长，且检测人员存在主观判断差异，不同的检测人员测得的藻类计数结果往往相差较大。
藻类生长的测定方法
（一）测生长量
适合于所有藻类
直接法
（1）测体积法：离心，测体积
（2）干重法：离心或过滤，干燥称重
间接法
（1）光密度OD 672 nm
（2）生理生化指标法
（二）测繁殖数
适合于单细胞
直接法
（1）血球记数板
间接法
（2）活菌计数法
藻类叶绿素测定原理
三、实验试剂与器材
藻类样品（小球藻）
培养基配制的各种化学物品、丙酮
三角瓶、纱布、移液管、纱绳等
超净工作台、分光光度计、离心机等
四、实验步骤
1 藻类培养基的配置
2 藻类培养基的灭菌
3 藻类的接种
4 藻类的OD值的测
（1）取两种藻类样品加入1cm比色皿中，样品高度要高于1/2低于2/3比色皿；
（2）用吸水纸吸干比色皿周边的水；
（3）以水为对照，在672 nm波长条件下进行比色。
5 水体藻类叶绿素含量的测定
（1）取25 ml 已经培养好的藻类细胞，5000 rpm离心8 min，弃去上清液；
（2）用80 %丙酮把离心物洗至25 ml容量瓶，然后定容至刻度线；
（3）在黑暗的条件下放置30 min，浸提叶绿素；
（4）取上清液于比色皿中，在663 nm和645 nm波长条件下进行比色。
五、计算方法
六、作业
1. 藻类叶绿素测定的基本原理；
2. 结果分析与讨论；
3. 计算藻类叶绿素a与叶绿素b含量的比值，可以得到什么结论？。