兔瘟组织灭活苗的制作
猪瘟兔化组织灭活疫苗的研制
关键词 ： 瘟 ； 活疫苗 ； 胶 ； 猪 灭 蜂 免疫 效 力 ； 体 抗
中 图分 类 号 ：８ ９７ ７ ￥５． ９ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文 章顺 序 编 号 ： ６ ２ ５ ９ （０ ０ ０ — １ ２ ０ １７ — １０ ２ １ ）５ ０ ４ — ２
为 当地 规 模 猪 场 的 猪 瘟 预 防 起 到 了 良好 的 效 果 。
１ 材 料 与 方 法 １１ 材 料 ．
１ ． 疫 苗 的 安 全 性 检 测 ．１ ２
１ ．． 小 白鼠安检 ：取试制的 ０ ０ ４６ ３ ．１ ２ １ ６ １ ）０ 批猪瘟兔化组织灭活 疫苗 ， 皮下接种 １～ ２ｇ小 白鼠 ｌ ８ ２ Ｏ只 ， 每只０５ｍＬ 观察 １ 。 ． ， ０ｄ １２１２ 猪 安检 ： ．．． 取试 制 的 ０ ０ ～ ６ ３批 猪瘟 兔化组 织 灭活 ６ １ ００ 疫苗 ， 每头 颈 部肌 肉接 种 ２ ７日龄 的仔 猪 ｌ ０头 ， 每头 ４ｍＬ ，
猪 瘟
（ｌｓｉａ ｗｎ ｆｖｒ Ｓ ） 是 由 猪 瘟 病 毒 ｃａｓ ｌ ｉｅ ｅｅ， Ｆ ｃ ｓ Ｃ
９ ％食用 酒精 ， ８ ５ 置 ５℃水浴 溶解 ， 制成备 用 。 １１６ 种毒 的制 备 ： 猪瘟 毒 株 Ｃ株毒 种做 适 当稀 释 ， 种 ．． 将 接 大 白兔 ． 种 后 每天 间 隔 ４ｈ测 １次 体 温 ， 择 定 型热 反 应 接 选 兔 ， 杀 ， 菌收 取脾 脏及 淋 巴结 。按一 定 比例加 入灭 菌 生 剖 无 理盐 水 ， 制备 脾 、 淋毒 ， 过滤 ，７ 一 ０℃保存 备用 。 １１ 疫 苗 的制 备 ：将生 产 用 的 毒种用 灭 菌生 理 盐水 适 当 ．． ７ 稀 释 ， 入 双抗 ， ２ ８℃作 用 ２ ４ｈ 然 后 接种 乳兔 两侧 臀 加 置 ～ ～ ， 肌 ， 只 １ ， 天 定 时观 察 乳 兔 ， ４ 每 ｍＬ 每 至 ８ｈ取 出所 有 活兔 ， 置冰 箱快 速冻 死 。无 菌操作 取 心 、 、 、 以及 胴体 ， 脾 肝 肾 研磨 打碎 ， 甲醛 灭 活后 ， 经 与一 定 比例 的蜂胶 溶 液制 成猪 瘟 兔化 弱毒灭 活疫 苗 ， 检 ， 菌 分装 。
自家组织灭活苗制作
自家组织灭活苗制作鸡组织苗的制作用具及其消毒:手术剪/镊子、饭盒、三角瓶、量杯、纱布等高压消毒。
捣碎机:用温和消毒水浸4-5小时(浓度为正常浓度的2倍)之后用温开水冲洗掉消毒药。
1.采病料:发病死亡鸡的典型脏器，肝、脾、肺、肾、法氏囊、输卵管等典型病变脏器，也可从不同的鸡采取(结合猪的典型病料提取)。
将组织的结缔组织去除。
放在冰箱或冰柜冷冻室反复冻融，冰冻后拿出融化，升至常温再放冰箱冷冻，反复操作最少三次。
这样做的目底是让病毒从内脏组织病料中最大程度的释放。
(也可借此机会逐渐切碎)2. 称重:将采取的组织称重，一般按W:V比加入1:3或1:5的生理盐水稀释，即300克组织加入1000或1500毫升生理盐水。
3. 粉碎:用组织粉碎机粉碎组织，越碎越好，制成组织悬液。
4.过滤:先用2层灭菌纱布粗过滤，边过滤边搅拌组织悬液;滤液再用8层灭菌纱布精过滤;最好用12层纱布过滤。
5.配制1%~2%的甲醛灭活液:99%以上纯的甲醛用灭菌生理盐水配制成1%(或2%)，如果是福尔马林，2.78毫升相当于1毫升甲醛，如配制1000毫升1%的甲醛灭活液需加入27.8毫升。
6.灭活:将甲醛溶液加入滤液中，使甲醛的终浓度为0.1-0.3-0.5%。
在37?(30~40?之间也可)灭活48~72小时，每2小时振摇一次，以充分灭活。
7.进行安全性检测。
无菌检查: 取灭活的组织液0.2ml，各接种血琼脂斜面及肉汤培养基，37培养24--48小时，观察无菌生长; 安全检查: 选择1.5Kg以上健康兔4只，分两组，每组两只，试验组皮下接种灭活组织液5ml/只，对照组接种PBS液5ml/只，观察7天，无不良反应则为合格;效力检验: 选择1.5Kg以上健康兔4只，每只肌注1ml，20天后采集兔的血液并分离血清，进行HI试验，检测血清抗体效价;或取对照兔2只，连同试验兔一起，用兔瘟强毒进行攻毒，结果对照兔2/2死亡，试验验兔3/4保护或对照兔1/2死亡，试验兔4/4保护，说明所制的兔瘟组织灭活疫苗合格。
组织灭活苗的制备过程
组织灭活苗的制备过程
1、病料采集
2、病料处理
3、配苗
4、灭活
一、材料：脾脏、淋巴结等组织、甲醛、硫
柳汞、恒温箱、剪刀、漏斗、镊子、三
角烧瓶、烧杯、移液器、匀浆机、纱布
二、步骤：
1、无菌处理：去除被膜、大血管、脂肪、
筋膜，称重。
剪成1平方厘米大小的小块，匀浆。
2、无菌检验，测定病毒效价
3、生理盐水4-6倍稀释，搅拌均匀
4、过滤。
纱布4-8层进行过滤，取上清液
5、灭活剂配制：计算甲醛用量，使甲醛最
终浓度达到0.5%。
（用甲醛的目的是使蛋白变性）。
6、缓慢加入甲醛，边加边搅拌。
用三角烧
瓶盛装。
7、牛皮纸扎好三角烧瓶，放入恒温箱内，
38摄氏度下放置24小时。
（病毒苗24
小时，细菌苗48小时。
）
8、分装灭菌瓶，每瓶100毫升。
9、成品检验：要求无菌、达到一定的效价、
安全等。
10、保存：4摄氏度冰箱保存，用时摇匀。
注：若长久保存，需加入硫柳汞（防腐剂）。
固体硫柳汞配制成1%浓度的水剂，加入到灭活苗中的终浓度为万分之一；也可加入有治疗作用的双抗（如青链霉素）。
兔瘟组织灭活苗的制作
RHDV可凝集人的O型红细胞，温度对血 凝无显著影响，PH4.4-7.2时血凝稳定，血 凝具有特异性，能被高免血清所抑制。
10%肝悬液4000rpm，10-15分钟离心后取上清， 1%人O型红细胞做HA，放置20-30分钟出结果， 血凝现象的观察时间不超过45分钟。 HA≥1︰160即为阳性 阳性病料无论是自然死亡 还是人工感染致死，其血凝价一般不低于25。
细菌(bacteria)的细胞形态
1、球菌
单独存在时为圆球形，几个细菌联在一起时其 接触面稍为扁平。按其分裂方向和分裂后排列状态， 可以分为：单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、 链球菌、葡萄球菌。
2、杆菌
细胞呈杆状或圆柱状，各种杆菌的长度与直径 比例差异很大，有的粗短，有的细长，短杆菌近似 球状，长杆菌近似丝状。一般来说，同一种杆菌其 粗细比较稳定，而长度则经常因培养时间、培养条 件不同而有较大变化。有的杆菌很直，有的稍弯， 有的两端截平如炭疽芽孢杆菌，有的略尖，有的半 圆。
（三）革兰氏染色 革兰氏染色法于1884年由丹麦医生Gram创立，是延用 至今的经典染色法。 经革兰氏染色后可以把全部细菌分为G+和G-两大类。 染色机制：与细菌细胞壁的结构和组成有很大关系。 G+细菌：肽聚糖层厚，含量多，经乙醇处理后使之发 生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细 胞内而不被脱色，复染后不着色，保持结晶紫的颜色； G-细菌：肽聚糖层很薄，含量少，脂肪含量高，经乙 醇处理后部分细胞壁脂类可能被溶解并改变其组织状态， 细胞壁孔径变大或通透性增加，不能阻止溶剂透入，酒精 将结晶紫与碘的复合物洗脱，细菌被脱色，经复染后染成 红色。
外膜
肽聚糖 脂蛋白
染色操作步骤—涂片固定
干燥
取菌液一环 涂片 干燥
兔瘟组织灭活苗的制作课件
疫苗的副作用和注意事项
副作用
少数家兔可能会出现过敏反应，如呼吸急促、皮肤瘙痒等， 应立即就医处理。
注意事项
接种前应检查疫苗的生产日期和质量，确保疫苗未过期或未 受污染；接种时应严格遵守操作规程，避免交叉感染；接种 后应观察家兔的反应，如有异常应及时处理。
兔瘟的预防和控制
04
兔瘟的预防措施
01
02
加强协作和信息共享
养殖场应与当地兽医部门加强协作，及时交流疫情信息和防控经验 ，共同做好兔瘟的防控工作。
结论与展望
05
当前研究的局限性和不足之处
实验样本量不足
缺乏长期追踪数据
由于实验资源有限，目前的研究主要基于 小样本量，可能影响结果的普遍性和可靠 性。
关于兔瘟组织灭活苗的长期效果，目前的 数据还不够充分，需要进一步追踪和观察 。
03
使用和效果
疫苗的接种对象和接种方法
接种对象
适用于兔瘟易感家兔，包括各年龄段 的家兔。
接种方法
皮下或肌肉注射，根据家兔的体重和 年龄选择适当的接种剂量。
疫苗的保护效果和免疫期
保护效果
兔瘟组织灭活苗对兔瘟具有很好的预防效果，免疫后家兔的发病率和死亡率显著 降低。
免疫期
接种后，家兔的免疫期一般为3-5年，但建议每年进行一次加强免疫，以保证家 兔的健康。
03
定期接种兔瘟疫苗
按照疫苗接种计划，定期 为兔子接种兔瘟疫苗，提 高兔子的免疫力。
严格检疫和隔离
对新引进的兔子进行严格 的检疫和隔离，防止携带 病毒的兔子进入养殖场。
加强养殖管理
保持养殖场的环境卫生， 定期清理和消毒养殖设施 ，提高养殖兔子的健康水 平。
兔瘟的控制策略
兔病毒性出血症组织灭活苗的研制
血平 皿 、 肉基 及 肉汤培养基 ，７ 熟 ３ ℃培养 ４ ｈ 观察有 无细菌 ８， １ ． 红 细胞凝集抑制试验 （ ） 根据薛华平微量血凝试 ．６ ２ ＨＩ 验， 于微量血凝反应板 的第 １ １ ， ｆ ／ 生理盐 水 ００５ ～１ 孔 每－ Ｊ Ｌ￣ ｌ ． ２ ｍ ， １ 加 ００ｍＬ 再 向第 １ Ｌ 第 ２孔 ． ５ ； 孔加 入 已知兔 瘟 阳性 血清 ０ ２ Ｌ， ． ５ ｍ 并倍 比稀 释至第 １ ０ ０孔 ； １ １ 孔各加 ４ 自 １ Ｕ血凝 价的被检抗原 ００ ５ ， ． ｍＬ 在微型混和器上振荡 ｌ ｉ。置 ３ ℃ ２ ｍｎ ７ 温箱 ３ ｍｎ 其 问摇振 ２～３次 。然后每孑 加 １ ０ ｉ， Ｌ ％０型红细胞 ０ ２ｍＬ 在混合 器上振荡 １ ｉ， ４Ｃ冰箱感 作 ３ ｉ ．５ ， ０ ａ ｒｎ置 ￣ ０ ｍ ｎ观 察结果 。以血凝抑制的最高稀释度为判定终点。 １ ． 安 全检验 ．７ ２ 疫苗 经无 菌检查合格后分装 ， 然后抽样做
毒性 出血症 病毒（ＨＤ ） ０ ％甲醛 溶液在 ３ ｃ条件 下能 Ｒ Ｖ经 ． ５ ７ｃ
失去致病性而保持其免疫原性 。目前 ， 对此病没有确实有效
的治疗方法 ，广泛用于本病的预防方法是定期 接种 Ｒ Ｄ组 Ｈ 织灭活疫苗 。 该苗制作方法简单 ， 不须复杂的设备 ， 免疫效果 确实 ， 具有 良好 的保 护性 。经试验证实 ， 该苗的保护效果好 ， 应用方便 ， 在普通冰箱中即可保存 ， 近期保护率为 １０ ０ ％。
１２ 方 ． 法
２ ． １细茵学检验结果 病毒接种死亡兔的肝 、 、 脾 肾于血琼脂
取含毒兔 的肝 、 、 用生理 盐水 制 脾 肾， 平板划线 培养均不见可疑菌落生长 。 ２ ＨＡ试验结 果 ６只接 毒兔 的接种剂量 不 同 ， Ａ结果 ． ２ Ｈ 明 显 不 同 。试 验 证 明 接 种 ｌ Ｌ为 最 适 剂 量 。 因为 ｌ Ｌ中 的 ｍ ｍ
佐剂及灭活疫苗的制作
氢氧化钠合成法。其中，用铝粉加烧碱合成法最为常用，其基本原理为：
2Al(OH)3 十 12H2O 十 3H2SO4→Al2(SO4)3·18H2O。 Al2(SO4)3·18H2O 十 6NaOH→2Al(OH)3 十 2Na2SO4 十 18H2O。 用三氯化铝与氢氧化钠合成，此法合成的铝胶含量低，透明无沉淀，目前广泛用于制备人用生物
二、实验内容
1、配制白油佐剂； 2、配制氢氧化铝胶佐剂； 3、配制蜂胶佐剂。
三、实验原理
油佐剂、氢氧化铝胶和蜂胶常用于兽用灭活疫苗。佐剂活性与质量密切相关，优质佐剂应具备分子
细腻、胶体性良好、稳定和吸附力强等特点。 （一）油佐剂由矿物油和乳化剂组成。矿物油应不含多环芳烃化合物、粘度低、无色、无味和无毒性。
六、注意事项
1、灭活要彻底，以免影响疫苗的安全性。 2、水相制备时，使抗原与 Tween-80 充分混匀。 3、乳化时，注意将油相冷却后再乳化，以防油温过高使抗原性降低。 4、注意先加入油相后再加入水相，充分搅拌。
七、实验结果记录
八、实验总结
——本资料由王印整理，难免错误——
6
《动物生物制品学》实验课程
实验三、兔病毒性出血症组织灭活疫苗的制备
专业：
姓名：
学号：
成绩：
—————————————————————————————————
一、实验目的
1、了解并掌握兔病毒性出血症组织灭活疫苗的制备程序。
二、实验内容
1、兔病毒性出血症病毒增殖和组织灭活疫苗的制备。
三、实验原理
兔病毒性出血症病毒可引起兔严重疾病，病毒培养困难，现仍然没有发现适应病毒体外培养的细胞
六、注意事项
1、硫酸有很强的腐蚀性，应放在耐酸搪瓷缸配置，操作要十分小心，防止爆沸时溅出，造成伤害。 2、氢氧化铝具有较强的吸附力，所以制胶过程中一般用软化水或去离子水洗涤。 3、氢氧化铝胶为两性化合物，过酸或过碱都会失去胶态，故要掌握好化合时的 pH。 4、油相制备时，温度和时间要掌握好，要使 Span-80 和硬脂酸铝充分溶解。
兔瘟组织灭活苗的制备[1]
![兔瘟组织灭活苗的制备[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/9c41df966bec0975f465e202.png)
%+组织灭活 在稀释液中加入试剂
纯 福 尔 马 林 液 ，使 其 最 终 含 量 为 "+/2，充 分 摇 匀 ， 用 玻 塞 盖 口 再 用 溶 蜡 密 封 。 置 于 0$3环 境 中 作 用 !% 小 时 ，每 ! 小 时 振 摇 一 次 ，使 其 充 分 灭 活 ，即 成 疫苗。
)+无菌检验 在无菌操作平台上取自制疫苗 用涂布法接种血琼脂平板 ! 个及厌氧肉肝汤 ! 支 ，0$3培 养 $! 小 时 未 见 细 菌 生 长 。
养水平的差异而造成羊绒自然脱离存在先后顺序，
因 此 抓 绒 不 能 搞 集 中 时 间 打 歼 灭 战 ，而 应 从 四 月 初
开 始 ，按 脱 绒 先 后 顺 序 首 先 从 成 母 羊 抓 起 ，逐 日 检
ห้องสมุดไป่ตู้
查 ，发 现 脱 绒 几 只 就 抓 绒 几 只 ，个 别 体 弱 者 可 延 长
到 夏 至 后 与 育 成 羊 一 并 抓 绒 ，而 对 六 月 龄 左 右 个 体
部羊绒已经部分丢失，倘若羊绒脱
离皮肤达到或超过 ! 公分时，不仅 双侧胸腹部羊绒大部分丢失，而且
其他部位的仅存羊绒也不同程度地
形 成 了 板 结 ，其 经 济 损 失 是 很 大 的 。
可是在现实养殖生产中，不少农村 梁 世
养殖户抓绒却晚于适时抓绒时 间 !" 同
天甚至更长的时间。这是因为他们
唯 恐 抓 绒 “早 ”了 羊 只 受 寒 。笔 者 认
作 者 单 位 ：河 北 大 午 农 牧 集 团 公 司
0#
灭 赵 凝 试 验 ，测 其 毒 价 为 !/。
志
活良
0+材料稀释 先将病料加入等量生
兔瘟
简介兔瘟（兔病毒性出血性败血症）是由病毒引起的一种急性、热性、败血性和毁灭性的传染病。
一年四季均可发生，各种家兔均易感。
3月龄以上的青年兔和成年兔发病率和死亡率最高（可高达95%以上），断奶幼兔有一定的抵抗力，哺乳期仔兔基本不发病。
可通过呼吸道、消化道、皮肤等多种途径传染，潜伏期48～72小时。
临床症状可分为3种类型。
最急性型：无任何明显症状即突然死亡。
死前多有短暂兴奋，如尖叫、挣扎、抽搐、狂奔等。
有些患兔死前鼻孔流出泡沫状的血液。
这种类型病例常发生在流行初期。
病兔突然精神沉郁，不吃，趴卧不动，有的趴卧时四肢向左右伸开一数小时后呼吸突然急促、惊厥、不安、骚动．最后倒地抽搐呜叫死亡急性型：精神不振，被毛粗乱，迅速消瘦。
体温升高至41℃以上，食欲减退或废绝，饮欲增加。
死前突然兴奋，尖叫几声便倒地死亡。
血性分泌物。
散发，呈零星死亡，病死率100％。
以上2种类型多发生于青年兔和成年兔，患兔死前肛门松弛，流出少量淡黄色的粘性稀便。
慢性型：多见于流行后期或断奶后的幼兔。
体温升高，精神不振，不爱吃食，爱喝凉水，消瘦。
病程2天以上，多数可恢复，但仍为带毒者而感染其他家兔。
萎靡不振病理变化病死兔出现全身败血症变化，各脏器都有不同程度的出血、充血和水肿。
肺高度水肿，有大小不等的出血斑点，切面流出多量红色泡沫状液体。
喉头、气管粘膜淤血或弥漫性出血，以气管环最明显；肝脏肿胀变性，呈土黄色，或淤血呈紫红色，有出血斑；肾肿大呈紫红色，常与淡色变性区相杂而呈花斑状，有的见有针尖状出血；脑和脑膜血管淤血，脑下垂体和松果体有血凝块；胸腺出血。
出血实质性器官出血病例1a)发病情况2005 年8 月25 日, 临沂市某养兔场王某饲养的300余只，3~4 月龄新西兰肉兔，其中约20只突然发病开始患病兔表现精神不振，食欲减退，从鼻腔中流出粘性分泌物，打喷嚏，体温升高，进而呈现呼吸困难\抽搐\倒地而死等临床症状。
根据经验，随即用庆大霉素进行肌肉注射，但效果不理想。
灭活苗生产工艺
分布检测
• 分布检测：显微镜观察（低倍镜 100Χ） 乳剂颗粒的大小、分布均匀程度，网格 致密如的确良布状的为均匀程度高的乳 剂。
乳化剂的种类
天然乳化剂--来自动植物，如阿拉伯胶、海藻酸钠、蛋黄以及炼 乳等。 阴离子型—多用于乳化一般生物制剂.
乳 化 剂
人工合成乳化剂
离 子 型
如硬脂酸铝、碱肥皂。
乳化
• 剂型：单向苗（W/O、O/W）、双向苗W/O/W • 乳化设备：捣碎机、超声波、匀浆机、胶体磨、 剪切机、乳化泵。 • 乳化工艺：将已熬好的白油入乳化罐内, 启动乳 化罐内置剪切，徐徐向乳化罐内加入水相,待水 相加完后进行初乳，再将初乳通过在线剪切机 后入另一乳化罐内，搅拌均匀即可分装。
乳剂的检测
油乳剂检测项目包括粘度检 测、稳定性检测及分布检测
稳定性检测
• 离心加速分层法。在一个10ml离心管中 装油乳剂10ml，3000r/min 离心15min 不 分层。 • 加速老化法。疫苗于37℃贮存21天不破 乳。 • 疫苗于2-8℃贮存、在保存期内不分层。
粘度检测
• 适于测定乳剂疫苗用的是流出法，也可 用Saybolt粘度剂。最简易的方法是取出 口直径为1.2mm的吸管，在室温下吸满 1ml乳剂，垂直放出0.4ml所需时间作为 粘度单位，以0.4 ml 2-6s为合格。
油相制备
• 白油佐剂：杭州兽用溶解 度低，不易在水中分散，溶于多种有机溶剂， 性质稳定，易形成W/O型油乳剂。 • 油相制备工艺：白油入熬油罐定容，加入1℅ 的硬脂酸铝、5℅司班80搅匀，升温至126℃后 继续加热至硬脂酸铝完全融化，高压灭菌后入 乳化罐备用。
阳离子型--用于制备一般的水包油生 物制剂。
非离子型 -- 具有一定的亲水性和亲油性基团， 为制造医药或化妆品的乳化剂。如山梨醇脂、 单油酸脂等。
兔瘟自家灭活疫苗的制作
３ ． ４ 硬 化 处 理
参考文献
［ １ ］张绍祥 ， 等－ 生物塑化技术在形态学研究中的应用 ， 第三军医大学 学报 ， １ ９ ９ ６， １ ８ （ ３ ０ ） ： ２ ３ ０ — ２ ３ ２ ．
是采用气体 、 光线或加热等方法将标本 中多 聚物 聚合 的 过程 。 塑化剂是一种 高分子化合物 ， 液态时为单分子存在 ， 当 发生聚合反应 时， 分子结 构中的双键 打开 ， 组成共价键 ， 形成 高分 子多聚化合物 ， 聚合后则 由液态变为固态。依据所用 塑
专 论 与 综 述
抽吸下从标本 中移出 ， 标本 内呈现负压 。塑化剂则渗入标本
内填补了 由于置换剂移 出而 留下的空位 。 真空浸渍是利用置 件下进行聚合 、 硬化 。 此外还有一种特殊 的硬化方法 ， 即气体 硬化 ， 经真 空浸渍后 的标本 与气化 的置换剂相结合 ， 使 之完
换剂和塑化剂之间蒸发压不同的特点来完成的 。 真空浸渍要 缓慢进行 ，以便让塑化剂 充分填充 于标 本 内原来被 置换剂 （ 如丙酮 ） 占据的空间 ， 置换剂则变成气态并被排 出。真空浸
病毒 经甲醛处 理后 可丧失毒力而保有 良好 的免疫原 性 ， 接 种 后兔能很快地 引起免疫应答 产生坚强 的免疫力 的这一特 性 研制 而成 ， 现将兔瘟 自家灭活疫苗的制作介绍如下 ：
１ 材 料
培养基上 ， ３ ７ ℃培养 ４ ８ ｈ ， 检查 有无 细菌生长 ； 如无菌生长 ， 说
明制苗过程无 污染 。
３ ． ２ 安 全性 检 验
取未免疫过兔瘟疫苗 的兔 １ ０只 ，其 中 ５只每只注射灭 活苗 ｌ ｍ Ｌ ， 另 ５只不注射苗为对照 ， 连续 观察 一周 ， 有无异常
中西医结合治疗兔瘟
2020年第5期（总第222期）@1中茗4莩龛4中西医结合治疗兔瘟刘力夫(甘肃省泾川县畜牧兽医中心高平工作站，744300)中图分类号：S858.291 文献标识码：B文章编号：1003-8655 (2020) 05-0098-01兔瘟是兔急性病毒性传染病，本病潜伏期短 (1-3天)、发病急、传染快、发病率和死亡率都很 高。
常流行于冬、春季节。
成年兔最易感染。
青年 兔，成年兔尤其是5月龄以上的兔死亡率最高。
2 月龄以下仔兔、乳兔不易感染。
感染途径为消化 道、呼吸道皮肤等。
被病兔、隐性感染兔污染的伺 料、饮水、器具等是传染媒介，配种也能传播本 病。
收购兔毛兔皮的外地人进人兔场或代剪兔毛 也是传播兔瘟的重要原因。
1典型病例2017年12月份，我镇某村养兔大户共有白 兔800只，近一周左右，陆续有部分兔突然死亡，还有部分兔精神沉郁，不喜走动，食欲减废，体温 升高，呼吸急促，耳壳潮红。
笔者现场对2只病死 兔进行解剖，发现喉头和气管内有红色粘液，肺 部有出血点，肝脏肿大等症状，根据工作经验和 临床检查，确诊为兔瘟。
2 临床症状2.1最急性型：无临床症状，突然死亡。
2.2急性型：表现精神萎顿，不喜走动，有的离群 昏睡，食欲减废，体温升到411左右，呼吸困难，耳壳潮红。
当体温降到常温以下时，病兔抽搐蹦 跳几下或惨叫几声死亡。
病程为1-3天。
2.3慢性型：多见于流行后期或断奶后的幼兔。
体温升高，精神不振，不爱吃食，爱喝凉水，消瘦。
病程2天以上，多数可恢复，但仍为带毒者而感 染其他家兔。
3 病理变化死兔呈角弓反张姿势，有的鼻流淡红色泡沫 液体或鲜血。
喉头和气管内有红色粘液，尤以气 管更为严重，故有“红气管”之称。
肺部有出血点。
肝脏肿大、质脆，淡黄色。
脾、肾瘀血肿大，脾呈黑 紫色,有的脾脏病变不明显。
胃内充满，胃粘膜易 脱落。
4 治疗措施4.1 一旦发现有兔瘟的病兔，应立即全群接种兔瘟疫苗和分别肌肉注射三氮唑核苷6-8mg/kg(2次/d)。
一种兔瘟组织灭活疫苗及其制备方法[发明专利]
![一种兔瘟组织灭活疫苗及其制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/92ac5c87ddccda38366baf72.png)
专利名称：一种兔瘟组织灭活疫苗及其制备方法专利类型：发明专利
发明人：吴红云,王卫芳,孙芳
申请号：CN201210273725.9
申请日：20120731
公开号：CN102755644A
公开日：
20121031
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种兔瘟组织灭活疫苗及其制备方法，其中,兔瘟组织灭活疫苗包含有兔瘟组织病毒液和蜂胶佐剂，加入比例为：每毫升病毒提取液中含有5—15mg蜂胶。
其制备方法主要包括以下步骤：病料处理与病毒液获取；病毒灭活；疫苗配置；疫苗的安全及免疫效力检验；疫苗分装。
采用本发明的疫苗病原体分离后进行了传代增值，较为全面的抗原成份对接种动物群体进行全面的，多方面的诱导，能达到预防和控制疾病的良好效果。
采用的蜂胶佐剂是一种良好的免疫增强剂和刺激剂,具有广谱生物学活性,它既能引起特异性免疫应答,又能启动非特异性防御机制,有增强免疫抗体生成和提高白细胞吞噬能力的明显效果。
申请人：郑州后羿制药有限公司
地址：451162 河南省郑州市郑州航空港区新港大道东侧
国籍：CN
代理机构：郑州睿信知识产权代理有限公司
代理人：牛爱周
更多信息请下载全文后查看。
猪瘟乳兔组织活疫苗生产流程
猪瘟乳兔组织活疫苗生产流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!猪瘟乳兔组织活疫苗是防治猪瘟的一种生物制品，它的生产流程主要包括以下几个步骤：1. 选择乳兔：首先，需要选择健康的乳兔作为生产疫苗的原料。
兔瘟蜂胶组织灭活苗的研制及免疫效果观察
兔瘟蜂胶组织灭活苗的研制及免疫效果观察
宁康健;王慧
【期刊名称】《中国养兔》
【年(卷),期】2003(000)003
【摘要】采用人工感染兔瘟(兔病毒性出血症)病毒致死的兔的脏器(主要是肝),制成10%的兔瘟组织灭活苗和10%的兔瘟蜂胶组织灭活苗.采用常规血凝抑制实验,初步分析比较了注射兔疸组织灭活苗和兔瘟蜂胶组织灭活苗后兔体内抗体水平的消长情况.结果表明:兔瘟蜂胶组织灭活苗能明显提高抗体效价,增强免疫效果.
【总页数】3页(P20-22)
【作者】宁康健;王慧
【作者单位】安徽技术师范学院动物科学系,安徽凤阳,233100;安徽省泗县畜牧水产局,安徽泗县,234300
【正文语种】中文
【中图分类】S858.291
【相关文献】
1.兔瘟蜂胶组织灭活苗的研制及免疫效果观察 [J], 宁康健;王慧;杨靖松
2.兔出血症-巴氏杆菌病二联蜂胶灭活苗的研制及免疫效果的观察 [J], 刘来利;李元新;王必成
3.中国白兔IL-6基因真核表达质粒的构建及其对兔瘟组织灭活苗免疫效果的影响[J], 张夏兰;徐斌;何琴;苏兵
4.兔瘟强毒株的筛选和血清型鉴定——兔瘟H9组织灭活疫苗的研制 [J], 周学利;
朱传民;吴世义;汪丽
5.兔巴氏杆菌魏氏梭菌二联蜂胶灭活苗的研制 [J], 史同瑞;于万才;王铭杰;武克勤;许腊梅;刘文韬;鹿凌岩;苏永福;宋广涛;王长文
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
兔瘟的攻毒实验报告
兔瘟的攻毒实验报告
1、材料和方法
1.1试验兔：2~3月龄、体重1.5kg左右非免疫青紫兰和日本大耳兔，由xx种兔场和xx医科大学试验动物房提供。
1.2兔瘟种毒：为本实验室自兔瘟病死兔采集的病料经人工发病获得的肝毒，使用时1:10(w/v)稀释，HA滴度达1:1280以上。
1.3人红细胞：购自省立医院血库。
1.4常规苗的制备
1.4.1制苗毒的准备：用种毒制成1:10(w/v)肝组织悬液，皮下注射非免疫青年兔，1ml只，待兔死亡后无菌操作取出肝脏、测HA 效价达1:1280以上者，供制苗用。
1.4.2常规苗的配制：取上述肝组织称重、捣碎加入适量生理盐水匀浆过滤补足生理盐水制成1:10(w/v)的肝脏悬液，加入甲醛使其终浓度达0.4%，装入容器中置37°C定时振摇灭活48小时，无菌分装后置室温备用。
1.5安全试验：共研制8批佐剂苗，每批取4只试验兔，颈部皮下注射疫苗4ml只，观察14天。
1.6效力试验：每批苗接种4只试验兔，颈部皮下注射疫苗0.5ml 只(为免疫剂量的112)，14天后攻毒，另设3只非免疫兔作对照。
1.7攻毒试验：分别于免疫后6、8、10、12个月每组随机取6只试验兔攻毒，攻毒剂量为1:10肝毒悬液1ml/只，同时设3只非免
疫兔作对照。
2、实验结果：所有接种的兔，观察14天均健活，无任何全身反应和局部红肿现象，但手触注苗部位有蚕豆瓣大的硬结，2个月后硬结消退。
除试验兔外，在其他外贸种兔场和本所试验兔场共计使用这8批疫苗50万余头剂，均安全可靠。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
（三）革兰氏染色 革兰氏染色法于1884年由丹麦医生Gram创立，是延用 至今的经典染色法。 经革兰氏染色后可以把全部细菌分为G+和G-两大类。 染色机制：与细菌细胞壁的结构和组成有很大关系。 G+细菌：肽聚糖层厚，含量多，经乙醇处理后使之发 生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细 胞内而不被脱色，复染后不着色，保持结晶紫的颜色； G-细菌：肽聚糖层很薄，含量少，脂肪含量高，经乙 醇处理后部分细胞壁脂类可能被溶解并改变其组织状态， 细胞壁孔径变大或通透性增加，不能阻止溶剂透入，酒精 将结晶紫与碘的复合物洗脱，细菌被脱色，经复染后染成 红色。
兔病的综合诊断
王海荣
流行病学诊断
临床诊断
被检材料
病理诊断
增菌培养
镜检 生化试验 （种属）
纯培养
动物试验
培养特性
血清学试验
活苗
药敏试验
灭活苗
微生物(Microorganism) 形体微小、结构简
单，须借助于光学显微镜或电子显微镜进行观 察。 病毒(包括噬菌体)； →非细胞型微生物 细菌、放线菌、立克次氏体、支原体、衣 →单细胞原核微生物 原体、螺旋体等； 真菌：包括酵母菌（单细胞）、霉菌（多 →真核微生物 细胞）； 单细胞的藻类以及原生动物等。
细菌(bacteria)的细胞形态
1、球菌
单独存在时为圆球形，几个细菌联在一起时其 接触面稍为扁平。按其分裂方向和分裂后排列状态， 可以分为：单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、 链球菌、葡萄球菌。
2、杆菌
细胞呈杆状或圆柱状，各种杆菌的长度与直径 比例差异很大，有的粗短，有的细长，短杆菌近似 球状，长杆菌近似丝状。一般来说，同一种杆菌其 粗细比较稳定，而长度则经常因培养时间、培养条 件不同而有较大变化。有的杆菌很直，有的稍弯， 有的两端截平如炭疽芽孢杆菌，有的略尖，有的半 圆。
健康兔只有22～23，＜24。
RHD组织灭活苗的制造与检验
病料：PBS=1:10 ，生理盐水也可。 捣碎、滤过，加入甲醛，使之含0.4%， 37℃ 12—24小时，摇匀/2小时。
用0.8%甲醛生理盐水对倍稀释，分装，37℃温 箱内灭活48小时，每2小时摇匀一次，备检。
方 法：
100g+400ml灭菌生理盐水——高 速组 织、捣碎碎机匀浆（13）——过滤——用 0.8%甲醛生理盐水对倍稀释——分装—— 37℃温箱内灭活24小时，每2小时摇匀一次， 备检。
外膜
肽聚糖 脂蛋白
染色操作步骤—涂片固定
干燥
取菌液一环 涂片 干燥
滴生理盐水
挑取菌苔一环
涂片
热固定
革兰氏染色法
1. 涂片、干燥及固定 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染 液，染1-2分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫 色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而 后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色 约25秒，后立即用流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染2分钟，水洗后 用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果图。
兔病毒性出血症的诊断及其组织 灭活苗的制造
王海荣
兔的病毒性出血症（rabbit viral hemorrhagic diseaze）是兔的一种急性败 血性传染病，RHDV抗原性强，组织灭活苗 效果极佳，安全可靠，目前广泛使用的是 肝组织甲醛灭活苗，联苗兔瘟、巴分加佐剂和不加佐剂两种。含佐 剂苗所产生的抗体水平较高于无佐剂苗，但产生 免疫力的时间迟于无佐剂苗，而且生产程序较为 复杂，成本也高。 当发生免瘟时，作为紧急接种，选用无佐剂苗 更为理想，因产生免疫力较快，可提早控制疫情， 即使平时预防接种，无佐剂苗也极为有效。
细水冲洗 细水冲洗 结晶紫初染2min 碘液媒染1min
细水冲洗 蕃红复染 1~2min 95%酒精脱色 20s
革兰氏染色成败关键：
酒精脱色，脱色不够将G-转变为G+，脱 色过度将G+变成G-； 涂片要均匀、薄； 菌龄影响染色，菌龄老、陈旧的细菌培 养物，往往G+转变成G-，一般做革兰氏染色 用18小时左右的细菌培养物，不要超过24小 时，以免影响染色性。
（1）抗生素可先配制成高浓度的原液， -20℃保存。 （2）抗生素的最高使用浓度。 青霉素钾1万单位/ml 链霉毒钾：20mg/ml即 1mg=1000Iu 2万Iu/ml。 抗生素的配置： 1先配浓溶液20万/ml，25万/ml
2、RHD的临床诊断及实验室诊断
临床上，RHD以神经症状为主，在免疫压力可 表现出非典型变化。 剖检以呼吸系统的严重出血和内脏实质器官的 淤血肿大为特征。 人工感染后的发病高峰时间 接种后36～72小 时。
一 材料
（1）种毒 强毒株组织毒1:10悬液感染成 兔肌注1ml，48～72小时引起发病死亡。 （2）制苗动物 3月龄以上未感染本病和未接种本病疫 苗的健康免。 ⑶ 组织捣碎机等
二、操作方法
1、攻毒 取种毒2-5g制成1:10组织悬液，每毫 升各加青链霉素1000IU单位,在4℃处理4～ 6小时，取上清液皮下或肌肉注射兔子， 1ml/只，实验免接毒后的观察。
油镜操作规程
1. 先用低倍镜和高倍镜观察涂片，待看到目的物后，将其移到 视野中央。 2. 在涂片上滴一滴香柏油，转动换转器使油镜针对通光孔。 3. 使油镜与香柏油接触，这时油镜头几乎与载玻片相接触，切 记不能使用粗调，以免压碎载玻片。 4. 用细调旋钮慢慢提升镜头高度，直至物像清晰。切勿拧反方 向。 5. 观察完毕后，使镜筒远离载物台。取下载玻片。用擦镜纸擦 去镜头上的香柏油：先用干的擦镜纸擦1～2次，把大部分油去 掉，再用二甲苯滴湿的擦镜纸擦2次，最后再用干擦镜纸擦1次。 擦拭时要顺镜头的直径方向，不要沿镜头的圆周擦。擦拭要细 心，动作要轻 。
五、结果：
绘模式种、自 选种镜检油镜 视野图（比例 、形状准确， 注放大倍数， 染色特性）
G+ (金黄色葡萄球菌)
G-（枯草芽孢杆菌）
G-（大肠杆菌）
Gram Stain of Staphylococcus aureus
Gram Stain of Escherichia coli
A Gram Stain of a Mixture of Gram-Positive and Gram-Negative Bacteria.
RHDV可凝集人的O型红细胞，温度对血 凝无显著影响，PH4.4-7.2时血凝稳定，血 凝具有特异性，能被高免血清所抑制。
10%肝悬液4000rpm，10-15分钟离心后取上清， 1%人O型红细胞做HA，放置20-30分钟出结果， 血凝现象的观察时间不超过45分钟。 HA≥1︰160即为阳性 阳性病料无论是自然死亡 还是人工感染致死，其血凝价一般不低于25。
细胞壁 厚度与强度 肽聚糖数量、含量 脂类含量 磷壁酸（垣酸）
革兰氏阳性菌 (G+) 厚、致密、坚韧 多层、含量高、占细胞 干重40—90% 少、占细胞干重1-4% +
革兰氏阴性菌 (G-) 薄、疏松 单层、含量低、占细胞 干重5—10% 多、占细胞干重11-22% -
脂多糖、磷脂、脂蛋白
-
+
磷壁酸
检验：
①安全检验：2—3倍接种量 1ml—3ml(血液琼脂斜面，厌氧肉肝汤) ②无菌检验：培养基接种。 ③效力检验：
③ 效力检验：
试验： 对照：7——10天产生免疫力→攻毒。对 照免三分之二或100%死亡。 保护率应>80%
4、免疫期测定 5、疫菌的保存 4℃ 25℃ 保存6个月
七 思考题
1 兔瘟的病变有哪些？ 2 如何制备兔瘟组织灭活苗？