病毒培养技术课件
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《动物病毒学实验》课件：实验一 病毒在鸡胚中的培养
是否有血丝？
一、原理
鸡胚为活的动物机体，组织分化程度低，病毒易 于增殖，可选择不同的日龄和接种途径，感染病毒的 组织和液体中含大量病毒。
二、实验目的
了解鸡胚的基本结构与功能，掌握常用的鸡胚 接种方法。
三、鸡胚的结构与功能
➢卵壳 ➢壳膜 ➢气室 ➢绒毛尿囊膜
➢尿囊腔 ➢羊膜与羊膜腔 ➢卵黄 ➢卵白
五、受精卵的选择
➢最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体的影响 ➢受精卵的壳最好是白色的 ➢受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要超过10天，
保存一个月的受精卵，孵化率将近于零。
六、孵育
➢温度：37.5-38.5℃ ➢相对湿度：50%-60% ➢新鲜空气流通，特别是在孵化5-6天以后 ➢翻卵：从孵育后第3天开始，每天翻卵一次。
十一、NDV接种鸡胚后对鸡胚的影响
NDV以尿囊腔接种于9-10日龄鸡胚，强毒株 在30-60h死亡，弱毒株3-6d死亡。死亡的鸡胚 以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以头部、 足趾、翅膀出血尤为明显。
十二、收毒
收毒前将鸡胚直立放置于4℃冰箱半小时以上，冻死 胚胎，防止出血。
根据接种途径的不同，收获相应的材料 1. 绒毛尿囊膜接种 收获接种部位绒毛尿囊膜 2. 尿囊腔接种 收获尿囊液（5-8ml） 3. 卵黄囊接种 收获卵黄囊或胚体 4. 羊膜腔接种 收获羊水（0.5-1ml）
• 实验结果观察：周四下午3:50 • 走之前签到，不能代签 • 实验报告选择思考题中3题作答
6.用1ml注射器滴2-3滴接种物于绒毛尿囊膜上。
7.用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖于卵窗中， 周围涂上熔化的石蜡密封，气室中央的小孔用 石蜡密封。
8.胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵窗向上。
（三） 尿囊腔接种 主要用于正粘病毒和副粘病毒，如流感病
一、原理
鸡胚为活的动物机体，组织分化程度低，病毒易 于增殖，可选择不同的日龄和接种途径，感染病毒的 组织和液体中含大量病毒。
二、实验目的
了解鸡胚的基本结构与功能，掌握常用的鸡胚 接种方法。
三、鸡胚的结构与功能
➢卵壳 ➢壳膜 ➢气室 ➢绒毛尿囊膜
➢尿囊腔 ➢羊膜与羊膜腔 ➢卵黄 ➢卵白
五、受精卵的选择
➢最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体的影响 ➢受精卵的壳最好是白色的 ➢受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要超过10天，
保存一个月的受精卵，孵化率将近于零。
六、孵育
➢温度：37.5-38.5℃ ➢相对湿度：50%-60% ➢新鲜空气流通，特别是在孵化5-6天以后 ➢翻卵：从孵育后第3天开始，每天翻卵一次。
十一、NDV接种鸡胚后对鸡胚的影响
NDV以尿囊腔接种于9-10日龄鸡胚，强毒株 在30-60h死亡，弱毒株3-6d死亡。死亡的鸡胚 以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以头部、 足趾、翅膀出血尤为明显。
十二、收毒
收毒前将鸡胚直立放置于4℃冰箱半小时以上，冻死 胚胎，防止出血。
根据接种途径的不同，收获相应的材料 1. 绒毛尿囊膜接种 收获接种部位绒毛尿囊膜 2. 尿囊腔接种 收获尿囊液（5-8ml） 3. 卵黄囊接种 收获卵黄囊或胚体 4. 羊膜腔接种 收获羊水（0.5-1ml）
• 实验结果观察：周四下午3:50 • 走之前签到，不能代签 • 实验报告选择思考题中3题作答
6.用1ml注射器滴2-3滴接种物于绒毛尿囊膜上。
7.用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖于卵窗中， 周围涂上熔化的石蜡密封，气室中央的小孔用 石蜡密封。
8.胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵窗向上。
（三） 尿囊腔接种 主要用于正粘病毒和副粘病毒，如流感病
微生物实验十 流感病毒的分离培养 PPT课件
• （二）、接种样本 • 将标记好的鸡胚的气室朝上放置在照蛋器上。 • （2）用75％酒精消毒鸡胚，用无菌镊子在气室 端钻孔，再无菌眼科剪剪开10x6mm窗口。 • (3)用注射器吸800µl标本。 • (4)从窗口中滴入无菌的液体石蜡，轻轻晃动鸡胚， 让液体石蜡在鸡胚壳膜内层铺开，此时在照蛋灯 下即可清楚的看到鸡胚胎的位置。将注射针头刺 入胚胎的鄂下胸前，用针头轻轻拨动下颚及腿， 当进入羊膜腔时，能看到鸡胚随着针头的拨动而 动，即可注射200µl标本。将针头退出至½ 寸，将 另外200µl标本注入鸡胚尿囊腔。每个样本接种2全装置中 • (6)用消毒过的医用胶布封口 • (7)33～35oC 温箱培养鸡胚2～3 天。临床 采样标本通常培养3天，病毒传代通常培养 2天。 • 注意：鸡胚进行病毒分离培养时，每天检 查鸡胚生长情况，24小时内死亡的鸡胚， 认为是非特异死亡应弃去
+++”：大部分红细胞凝集，在管底铺成薄膜状，但尚有少数红细胞不
二、流感病毒分离之鸡胚培养法
• （一）、检视标记鸡胚 • （1）用照蛋灯检视鸡胚，判断鸡胚状态 • 血管：活胚血管清晰；死胚模糊，成淤血带 或淤血块 • 胎动：活胚有明显的自然运动，死胚无胎动 • 绒毛尿囊膜发育界限：密布血管的绒毛尿囊 膜与鸡胚 • 胎的另一面形成明显的界限 • （2）标记出鸡胚的气室与尿囊的界限 • （3）如果鸡胚是死胚、没有受精、有裂痕、发 育不全、或表面有好多渗水孔，应弃掉
• • • • •
6、牛血清白蛋白组分Ⅴ，7.5%溶液 7、临床样品0.5mL 8、1mL无菌移液管 9、10mL无菌移液管 10、15mL无菌离心管
• • • • •
（三）实验步骤 1、准备病毒生长液 （1）细胞维持液准备 500mL D-MEM液中加入 ①青、链霉素母液 5mL（终浓度达： 100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素） • ②牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL（终浓度： 0.2%） • ③HEPES缓冲液 12.5mL（终浓度： 25mM）
第二章 病毒的培养ppt课件
复到常温的过程。
原理：在低于-70℃的超低温条件下，有机体细胞
内部的生化反应极其缓慢，甚至终止。采取适当的
方法将生物材料降至超低温条件，即可使生命活动
固定在某一阶段而不衰老死亡。当以适当的方法将
冻存的生物体恢复至常温时，其内部的生化反应可 恢复正常。
细胞内冰晶的损伤(intracellular ice damage)： 因细胞内部结冰而致的细胞损伤。 溶质损伤(solute damage)：也称为溶液损伤 (solution damage)，由于保存溶液溶质浓度 增高而致的细胞损伤。
优点： 1) 可以无限的传代。
2) 不少细胞系对病毒很敏感。
3) 某些传代细胞系能在悬浮培养条件下培养，
适合病毒抗原的大量生产。
4) 生长旺盛，繁殖快速，对营养条件不苛刻。
缺点：在传代过程中遭到支原体和病毒的污
染。
绿荧光蛋白在IBRS-2细胞中的表达
40X
100X
A
B
A 正常IBRS-2 B 消化的IBRS-2
E、有中和毒性物质保护细胞不受伤害的作用。 F、给培养液提供良好的缓冲系统。 G、提供蛋白酶抑制剂，保护细胞免受细胞释 放的蛋白酶的损害。
3）应用血清存在的问题 A、存在不少有害于细胞生长和繁殖的物质： 补体、免疫球蛋白、生长抑制因子等。
B、成分不明确，影响对结果的分析。
C、不同动物、不同批次的血清成分和活性差
三、受精卵的质量和孵化
１、受精卵最好来自SPF鸡群
２、受精卵应该是新鲜的
３、受精卵的壳最好是白色的
４、孵化温度37.5-38.5℃，湿度50-60%，
通风。 SPF(无特定病原微生物污染的)
四、接种途径 1、绒毛尿囊膜接种
原理：在低于-70℃的超低温条件下，有机体细胞
内部的生化反应极其缓慢，甚至终止。采取适当的
方法将生物材料降至超低温条件，即可使生命活动
固定在某一阶段而不衰老死亡。当以适当的方法将
冻存的生物体恢复至常温时，其内部的生化反应可 恢复正常。
细胞内冰晶的损伤(intracellular ice damage)： 因细胞内部结冰而致的细胞损伤。 溶质损伤(solute damage)：也称为溶液损伤 (solution damage)，由于保存溶液溶质浓度 增高而致的细胞损伤。
优点： 1) 可以无限的传代。
2) 不少细胞系对病毒很敏感。
3) 某些传代细胞系能在悬浮培养条件下培养，
适合病毒抗原的大量生产。
4) 生长旺盛，繁殖快速，对营养条件不苛刻。
缺点：在传代过程中遭到支原体和病毒的污
染。
绿荧光蛋白在IBRS-2细胞中的表达
40X
100X
A
B
A 正常IBRS-2 B 消化的IBRS-2
E、有中和毒性物质保护细胞不受伤害的作用。 F、给培养液提供良好的缓冲系统。 G、提供蛋白酶抑制剂，保护细胞免受细胞释 放的蛋白酶的损害。
3）应用血清存在的问题 A、存在不少有害于细胞生长和繁殖的物质： 补体、免疫球蛋白、生长抑制因子等。
B、成分不明确，影响对结果的分析。
C、不同动物、不同批次的血清成分和活性差
三、受精卵的质量和孵化
１、受精卵最好来自SPF鸡群
２、受精卵应该是新鲜的
３、受精卵的壳最好是白色的
４、孵化温度37.5-38.5℃，湿度50-60%，
通风。 SPF(无特定病原微生物污染的)
四、接种途径 1、绒毛尿囊膜接种
《初中生物课件病毒》课件
病毒与疾病的关系
病毒是导致许多疾病的病原 体，如流感、麻疹、肝炎等 。
病毒的感染会导致人体出现 各种症状，如发热、咳嗽、 乏力等。
病毒的传播途径包括空气传 播、接触传播、血液传播等 。
病毒的感染会影响人体的免 疫系统，导致身体虚弱，容 易感染其他疾病。
病毒的传播方式与预防措施
01
避免接触患者和疑似患者，减少前往人群密 集场所。
病毒的发现与起源
病毒的发现
病毒最早是在19世纪末期被发现的 ，当时人们发现烟草花叶病是由一种 非常微小的生物引起的，这种生物后 来被称为烟草花叶病毒。
病毒的起源
关于病毒的起源目前尚无定论，有学 者认为病毒可能来自于寄主细胞的基 因突变，也有学者认为病毒可能来自 于其他微生物的共生。
病毒的基本结构
02
注意个人卫生，勤洗手、戴口罩。
03
接种疫苗，提高自身免疫力。
04
及时就医，遵医嘱治疗。
病毒在生物技术中的应用
基因工程中，病毒可以 用于将外源基因导入细 胞或组织中。
疫苗研发中，病毒可以 用于制备灭活疫苗或减 毒疫苗。
生物治疗中，病毒可以 用于基因治疗或细胞治 疗。
病毒还可以用于研究细 胞生物学和分子生物学 等领域。
复制与合成
核酸复制
病毒的核酸在细胞核内进行复制，产生新的病毒基因。
蛋白质合成
根据病毒基因的指令，细胞内的核糖体合成病毒蛋白质。
成熟与释放
组装与修饰
新合成的病毒核酸和蛋白质在细胞内组装成完整的病毒颗粒。
释放
成熟的病毒颗粒从宿主细胞中释放出来，继续感染其他细胞或传播到其他个体。
04 病毒对人类的影响
核心
由核酸分子（DNA或RNA）构成 ，携带病毒的遗传信息。
动物病毒学课件：病毒的培养【8次】
22
23
….. 211
212
盐 水 250μL 250 μL 250 μL ….. 250 μL 250 μL
收获 尿囊液 250μL 250 L 250 L
….. 250μL 250μL
1% RBC
250μL 250μL 250μL ….. 250μL 250μL
振荡混匀15秒，37C感作10-20分钟。 弃250微升
（一）步骤
3、体温测定：接毒后分别在12、12、6、 6、6、6、6、6h…测定家兔体温。 4、判定标准：从接毒时间算起，体温超 过正常体温1℃或1℃以上连续3次或3次 以上，判定为稽留热型。
（一）步骤
5、病毒收获：选择出现典型稽留 热型的家兔，体温开始下降的24h内 扑杀，无菌采取脾、淋巴结，加5倍 体积的灭菌生理水及适量的抗生素， 制成乳剂备用。
第五讲 病毒的培养与鉴定
一、病毒培养载体类型
☞动物 ☞鸡胚 ☞细胞
二、病毒的动物培养
• 1、优点：对病毒敏感，可以培养其他方法无 法培养的病毒，培养的病毒量大，可以用于研 究病毒的致病作用等。
• 2、缺点：费用较大，不便于管理，容易造成 环境污染。由于动物机体存在免疫力而干扰试 验结果等。
三、猪瘟病毒的家兔培养
1、细胞分散液：取10倍浓缩的含有胰蛋白酶和EDTA的传 代细胞分散液，以无菌三馏水稀释10倍。
2、细胞生长液：在MEM中分别按比例加入下列成分：8％ FCS、2％双抗、1％谷氨酰胺，上述液体按顺序加入后，最后 采用NaHCO3调整pH值。
（三）细胞传代：弃取细胞培养液，加入培养瓶体积0.5％ 的10倍稀释的传代细胞分散液，消化三次，第一次冲洗整个 瓶体，第二、三次平遥细胞培养瓶消化细胞。易消化细胞可 能会出现云雾状，弃去消化液，振克细胞瓶使细胞脱离瓶壁， 并迅速加入细胞生长液终止胰酶。不易消化的细胞第三次消 化后，加入2滴消化液，37 ℃感作一定时间，时常显微镜观 察，当大部分细胞变圆并脱离瓶壁时，振克细胞瓶使细胞脱 离瓶壁，并迅速加入细胞生长液终止胰酶反应。根据细胞量 和生长速度决定分瓶数量。
流感病毒细胞分离培养ppt课件
• （5）倒掉消化液，瓶内留少许流体，再放37℃ 2’–3’， 取出手上轻轻拍打几下，这时可加已配好的生长液， 稍加吹打即可。一般情况下，1瓶细胞传3瓶 ，每2-3 天需传一代。
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3、MDCK细胞保存及复苏
MDCK细胞对流感病毒的敏感性随其代数增加 而下降，故各实验室应液氮冻存代数较低的细胞 作为种子。一般保存液为含10%二甲基亚砜和90% 小牛血清。
• （ 2 ） 已 成 片 的 MDCK 细 胞 ， 将 其 生 长 液 倒 掉 。 用 Versene洗2遍。
• （3）把Versene与0.25%胰酶按7∶1比例配成消化液。
• （4）置37℃恒温箱5—10min，当细胞变圆，细胞与 细胞间互不相联，表明消化时间已到。如细胞仍连成 片，表明消化时间未到。
4、MDCK细胞对流感病毒敏感性测试
MDCK细胞对病毒的敏感性随其代数增
加而下降。故MDCK细胞在实验室传20代以
上时，一般需测试一下其对流感病毒的敏
感性。其具体测试法：选一株对MDCK细胞
较敏感的流感病毒株。在同一条件下，用
早代与要测试的MDCK细胞对其进行TCLD50
测定。如果测试的TCLD50比早代的低2个或
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4
2、单细胞的制备（略）
2024/1/25
5
3．细胞培养的基本条件：
• （1）细胞接种数：细胞量越大繁殖的速度越快，
接种传代细胞一般为10—30万/ml。
• （ 2 ） 合 成 培 养 液 ： 如 Eagle 氏 液 ， RPMI1640 ，
Eagle’s MEM。 不同培养液各有其特点，但往往也 适用于各种细胞培养，其主要成分为氨基酸、碳水
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3、MDCK细胞保存及复苏
MDCK细胞对流感病毒的敏感性随其代数增加 而下降，故各实验室应液氮冻存代数较低的细胞 作为种子。一般保存液为含10%二甲基亚砜和90% 小牛血清。
• （ 2 ） 已 成 片 的 MDCK 细 胞 ， 将 其 生 长 液 倒 掉 。 用 Versene洗2遍。
• （3）把Versene与0.25%胰酶按7∶1比例配成消化液。
• （4）置37℃恒温箱5—10min，当细胞变圆，细胞与 细胞间互不相联，表明消化时间已到。如细胞仍连成 片，表明消化时间未到。
4、MDCK细胞对流感病毒敏感性测试
MDCK细胞对病毒的敏感性随其代数增
加而下降。故MDCK细胞在实验室传20代以
上时，一般需测试一下其对流感病毒的敏
感性。其具体测试法：选一株对MDCK细胞
较敏感的流感病毒株。在同一条件下，用
早代与要测试的MDCK细胞对其进行TCLD50
测定。如果测试的TCLD50比早代的低2个或
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2、单细胞的制备（略）
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3．细胞培养的基本条件：
• （1）细胞接种数：细胞量越大繁殖的速度越快，
接种传代细胞一般为10—30万/ml。
• （ 2 ） 合 成 培 养 液 ： 如 Eagle 氏 液 ， RPMI1640 ，
Eagle’s MEM。 不同培养液各有其特点，但往往也 适用于各种细胞培养，其主要成分为氨基酸、碳水
病毒学课件ppt课件
研究病毒的第三个目的是利用病毒为人类造福。
最新课件
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教材及参考书目
1、教材
《普通病毒学》，谢天恩、胡志红主编，北京，科学出版社，2002年
2、参考书目
《动物病毒学》，殷震主编，北京，科学出版社，1997年
《分子病毒学》，黄文林主编，北京，人民卫生出版社，2002年
《分子病毒学》，侯云德主编，学苑出版社，1990年
最新课件
222
（二）天花的记载
16世纪下半叶，我国率先发 明人痘接种法预防天花
明代隆庆年间，人痘预防天 花对外推行
种痘法的发明，可以说是我 国对世界医学的一大贡献
“其苗传种愈久，则药力之提拔愈清，人工之选炼愈熟，火毒
汰尽，精气独存，所以万全而无害也。若时苗能连种七次，精
加选炼，即为熟苗。”
---《种痘心法》
病毒学的任务等。通过本章的学习，使学生对病毒 学有基本了解。
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教学内容
第二章 病毒的分类与命名
本章主要介绍病毒的分类意义；病毒分类的发展简史；病
毒的命名规则；病毒的分类原则；病毒的分类方法等。通 过本章的学习，使学生了解病毒分类过程和分类 方法。
最新课件
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教学内容
第三章 病毒的形态与结构
最新课件
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病毒（virus）：是一类个体微小，无完整细胞
结构，含单一核酸型（DNA或RNA），必须在活 细胞内寄生或复制的非细胞型微生物。
病毒学（virology）：即研究病毒的本质、病
毒与宿主相互作用和规律的生物学科。 病毒学的分支：普通病毒学、医学病毒学、兽医
病毒学、植物病毒学、昆虫病毒学、细菌病毒学、 肿瘤病毒学、环境病毒学、分子病毒学等。
病毒的鸡胚培养法
精品课件
法氏囊病毒的分离
• 取疑似感染病毒的法氏囊，称重，按1:5 （w/v）加入生理盐水，研磨，-20℃，反 复冻融2次；每次冷冻时间以研磨物结冰为 准；
• 将冻融物转入离心管中，3000转/分，离心 5分钟，将上清取出，使用无菌滤器过滤
精品课件
2.接种
• 鸡胚接种的方法有几种：
绒毛尿囊腔内接种 ★★ 绒毛尿囊膜接种 羊膜腔接种 卵黄囊内接种
• 孵化前的鸡胚应注意消毒，置37-38℃、相对湿
度45-60%的孵卵器中孵育，每日翻蛋数次，孵蛋 第4天开始照蛋，弃去无精蛋和死胚。多采用9-11 日龄的活胚接种。
精品课件
（四）实验方法
• 1.接种前的准备：
• a.鸡胚的准备：选择9-11日龄的鸡胚，在照蛋
时以记号笔勾出气室，于气室稍下方胚胎活跃而 血管明显的区域中，在血管之间的间隙划上记号， 作为接种部位。用3%碘酊对接种部位进行消毒， 再用75%酒精棉球擦一遍，在接种定位处打孔，气 室向上竖放于蛋托上。
精品课件
绒毛尿囊膜接种
• 取10-12日龄的鸡胚，照 蛋选择血管较少的部位做 一记号，用磨蛋器磨一于 纵轴平行的裂痕，小心挑 开蛋壳，将白色的壳膜用 针尖小心挑破，不要伤及 血管丰富而透明的绒毛尿 囊膜，在气室顶端钻一小 孔，用滴管贴近小孔，轻 轻一吸，绒毛尿囊膜便下 陷成一小凹。
绒毛尿囊膜接种
1.鸡胚胎2.羊膜腔3.绒毛尿囊膜
精品课件
羊膜腔接种
取10-12日龄的鸡胚，消
毒气室顶上的蛋壳，并
将气室顶端的蛋壳锉一
三角形的裂痕，用灭菌
镊子揭去裂痕部位的蛋
壳和壳膜，用灭菌平头
镊子刺破尿囊膜，并轻
轻夹去羊膜，用小号针
头刺进羊膜腔内，注入
法氏囊病毒的分离
• 取疑似感染病毒的法氏囊，称重，按1:5 （w/v）加入生理盐水，研磨，-20℃，反 复冻融2次；每次冷冻时间以研磨物结冰为 准；
• 将冻融物转入离心管中，3000转/分，离心 5分钟，将上清取出，使用无菌滤器过滤
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2.接种
• 鸡胚接种的方法有几种：
绒毛尿囊腔内接种 ★★ 绒毛尿囊膜接种 羊膜腔接种 卵黄囊内接种
• 孵化前的鸡胚应注意消毒，置37-38℃、相对湿
度45-60%的孵卵器中孵育，每日翻蛋数次，孵蛋 第4天开始照蛋，弃去无精蛋和死胚。多采用9-11 日龄的活胚接种。
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（四）实验方法
• 1.接种前的准备：
• a.鸡胚的准备：选择9-11日龄的鸡胚，在照蛋
时以记号笔勾出气室，于气室稍下方胚胎活跃而 血管明显的区域中，在血管之间的间隙划上记号， 作为接种部位。用3%碘酊对接种部位进行消毒， 再用75%酒精棉球擦一遍，在接种定位处打孔，气 室向上竖放于蛋托上。
精品课件
绒毛尿囊膜接种
• 取10-12日龄的鸡胚，照 蛋选择血管较少的部位做 一记号，用磨蛋器磨一于 纵轴平行的裂痕，小心挑 开蛋壳，将白色的壳膜用 针尖小心挑破，不要伤及 血管丰富而透明的绒毛尿 囊膜，在气室顶端钻一小 孔，用滴管贴近小孔，轻 轻一吸，绒毛尿囊膜便下 陷成一小凹。
绒毛尿囊膜接种
1.鸡胚胎2.羊膜腔3.绒毛尿囊膜
精品课件
羊膜腔接种
取10-12日龄的鸡胚，消
毒气室顶上的蛋壳，并
将气室顶端的蛋壳锉一
三角形的裂痕，用灭菌
镊子揭去裂痕部位的蛋
壳和壳膜，用灭菌平头
镊子刺破尿囊膜，并轻
轻夹去羊膜，用小号针
头刺进羊膜腔内，注入
5.5病毒课件-2024--2025学年人教版生物八年级上册
教学设计课程基本信息学科生物学年级初二学期秋季课题病毒教学目标生命观念：1.说出病毒的种类。
2.说出病毒的结构和生活方式。
3.说出病毒繁殖的过程。
科学思维：1.尝试运用模型和建模思维构建病毒的结构和繁殖过程。
2.运用比较和归纳法说出病毒的基本构成和种类。
3.运用辩证思维看待病毒与人类的关系。
科学探究：1.尝试建构病毒繁殖的模型。
2.调查病毒研究的前沿科技与研究现状。
态度责任：1.通过病毒发现的科学史，认同技术进步对于科学研究的促进作用。
2.关注病毒与人类生活的关系。
3.提升疫情期间自我防护意识与责任意识。
教学内容教学重点：1.病毒的结构和生活。
2.病毒与人类生活的关系。
教学难点：病毒的繁殖过程。
教学过程教学内容教师活动学生活动设计意图病毒的发现结合资料“新冠病毒显微镜图的发布”及病毒发现史，引导学生思考病毒的大小。
认真聆听，思考并总结得出病毒是纳米级别的生物，需要利用电子显微镜才能观察到。
通过科学史教育，使学生初步了解病毒的发现过程，并认同科学的发展离不开技术的进步。
出示伊万诺夫斯基实验过程，提示病毒的大小比细菌小得多。
病毒的种类展示：呈现各种电子显微镜下的病毒照片，并简单介绍，提问：病毒千姿百态，如何给他们分类?可以分为哪几分类？指导学生阅读90页相关内容后回答。
观察图片，了解不同病毒的形态。
回答：是根据寄主不同进行分类：可分为动物病毒、植物病毒、细菌病毒。
初步了解生物分类，同时也为学习生物分类埋下伏笔。
病毒的结构【模型展示】噬菌体模型及新冠状病毒模型【对比分析】对比病毒与动物、植物细胞的区别【拓展提升】病毒没有细胞结构，那它还属于生物吗，为什么？在教师的引导下，说出病毒的基本结构：蛋白质外壳和遗传物质。
学生回答：病毒不具备细胞结构回顾生物的基本特征，展开联想，病毒能生活和繁殖，所以属于生物。
训练学生观察图片、模型，逻辑推理的能力和抽象概括能力。
培养学生分析图片，总结归纳的能力。
突出重点，突破难点。
医学病毒学PPT课件
02 保持社交距离 避免近距离接触有症状的人，尽量保持至少1米的安全 距离。
03
佩戴口罩
在公共场所、尤其是室内环境佩戴医用口罩或N95口 罩，以阻挡含有病毒的飞沫进入呼吸道。
04
增强免疫力
保持充足的睡眠、均衡的饮食、适当的锻炼，以提高 身体免疫力，抵抗病毒侵袭。
05
接种疫苗
根据当地卫生部门的建议，及时接种相关疫苗，以降 低感染风险。
播的风险。
疫苗研发与使用
疫苗研发
通过科研机构和制药公司的合 作，加速针对新型病毒的疫苗
研发进程。
临床试验
确保疫苗在投入使用前经过严 格的临床试验，确保安全性和 有效性。
分阶段使用
疫苗上市后，根据疫情情况和 接种计划，分阶段、分人群进 行接种。
监测与评估
在疫苗使用过程中，持续监测 其安全性和有效性，并根据实
药物设计与筛选
03
基于病毒结构信息，设计和筛选能够抑制病毒复制或破坏病毒
颗粒的药物分子。
THANK YOU
感谢聆听
病毒基因组每天约产生 10^-5~10^-8个突变， 其中大部分为负突变（降 低生存能力的突变）。
病毒进化的规律与趋势
适应性进化
病毒在传播过程中逐渐适应宿主环境 的过程，表现为毒力增强或减弱。
协同进化
病毒与宿主之间相互影响、共同进化 的过程，如病毒抗原变异与宿主免疫 应答之间的协同进化。
定向进化
在选择压力下，病毒基因组朝着特定 方向进化的过程，如抗药性病毒的出 现。
血液传播
病毒通过血液、体液等途径传播，如丙肝病毒、 乙肝病毒等。
接触传播
病毒通过接触口、鼻、眼等黏膜或破损皮肤进入 人体，如HIV病毒、HBV病毒等。
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• 血清替代因子：激素和生长因子（如胰岛素、上皮生长因
子）、结合蛋白（如转铁蛋白）、贴壁因子（如鱼精蛋白、
聚赖氨酸）和微量元素（如硒）四类几十种，多数无血清
培养液须补加3～8种血清学替习交代流P因PT 子。
⑤体重、年龄要基本一致，个体差别不宜过大。
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二、禽胚增殖病毒技术
（一）禽胚的选择
• SPF鸡胚
据国家标准，无22种特定病原体
• 非免疫鸡胚
应无特定病原的母源抗体，
• 普通鸡胚
可能带有鸡的多种病原体，不适用于疫苗生产
异源性性疫苗：鸭胚和鸽胚
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（二）禽胚接种途径与收获
• 绒毛尿囊膜接种法
量最高，平均约6～8ml，羊水约1～2ml。 •接种部位：不应伤及胚体和血管，以免影响其发育 •严格防止禽胚污染
①鸡胚接种时严格无菌操作； ②定期清扫消毒孵化室，保持室内空气新鲜； ③种蛋入孵前先用温水清洗，消毒，凉干。
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三、细胞增殖病毒技术
1．细胞培养的概念
细胞培养(cell culture)是指利用机械、酶或化学方法使动物 组织或传代细胞分散成单个乃至2～4个细胞团悬液进行培养。
能在体外无限传代，应用方便，其染色体数目及增殖特性均 类似于恶性肿瘤细胞，且多来源于癌细胞，如HeLa细胞系
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2．细胞培养方法
• 静置培养 • 转瓶培养 •悬浮培养(suspension cell culture ) •微载体培养(microcarrier cell culture) • 中空纤维细胞培养(hollow fibre cell culture) • 微囊化细胞培养
微载体培养的容器为特制的生物反应器，有自动化装置。细 胞产量达106～107个/m1，每升培养液可加微载体2～5g，每 克有8000～9000个珠子，培养面积约为2～5万cm2，比常规 培养面积大10～25倍。
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中空纤维细胞培养(hollow fibre cell culture)
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
细胞分类：根据细胞染色体和繁殖特性 • 原代细胞(primary cell) • 细胞株(cell strain) • 传代细胞（continued cell line） 细胞系(cell line)
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（1）原代细胞(primary cell)
指由新鲜组织经剪碎和胰酶消化制备的细胞，如CEF细胞。
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悬浮培养
通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内 的培养方法，主要用于一些在振荡或搅拌下能生长繁殖的细 胞，如生产单克隆抗体的杂交瘤细胞。
微载体培养
微载体直径应为60～105nm，无毒性，透明，颗粒密度与培 养液密度相近似，略重于液体，低速搅拌即能悬浮，不吸收 培养液和化学反应，表面光滑、硬度小、有弹性，易于细胞 吸附在表面，如DEAE—SephadexA-50、Cytodexl、Cytodex2、 Cytodex3等。
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血清
• 成分：必需氨基酸、促进细胞生长和贴壁的成分。α-珠蛋 白和白蛋白能促进细胞生长；白蛋白具有毒作用；糖蛋白、 a2-球蛋白和β脂蛋白G2能促进细胞贴壁。
• 血清选择：同种动物优于异种动物血清；人和牛血清优于 马血清；马血清优于兔血清和鸡血清。
• 血清使用：目前国内多用犊牛血清，使用前须经56℃灭活 30min ， 并 进 行 细 胞 毒 性 试 验 。 生 长 液 血 清 含 量 一 般 为 5 ％～20％。维持液中血清量为0%～5％。
•培养液能有效地分布，细胞培养维持时间可达数月，保持高度
活性，培养的细胞密度大，细胞分泌的蛋白质浓度高，纯度可
达60％～90％；占用空间小，适于各类细胞，但设备昂贵。
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3. 细胞培养要素
•培养液 •血清 •细胞接种量
•pH •温度 •无菌条件 •培养器皿清洁度
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RPMI-1640、199、 DMEM、F12
• 尿囊腔接种法 • 卵黄囊接种法 • 羊膜腔接种法 • 静脉接种法 • 脑内接种法
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鸡胚绒毛尿囊膜接种法
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尿囊腔接种法
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尿囊液收获方法
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鸡胚卵黄囊接种法
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（三）影响禽胚增殖病毒的因素
1．种蛋质量
①病原微生物：垂直传递，如白血病、脑脊髓炎、腺病毒、 支原体及传染性贫血因子等。
②母源抗体：
③抗生素：立克次氏体和鹦鹉热衣原体
2．孵化技术
①温度：37～39.5℃。传染性支气管炎病毒37℃ ②湿度：鸡胚53％～57％，水禽胚比鸡胚高5％～10％。
③通风：氧气，二氧化碳。
④翻蛋：
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3．接种技术
不同病毒的增殖有不同的接种途径， 同一种病毒接种不同日龄禽胚获得的病毒量也不同。 •接种日龄：鸡胚13～14日龄。鸭胚15～16日龄，尿囊液含
病毒增殖技术
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动物增殖病毒技术 禽胚增殖病毒技术 细胞增殖病毒技术
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一、动物增殖病毒技术
选择动物的标准：
①大动物应来源于非疫区，最好是未接种过相应病毒疫苗、 青壮年和健康(经临床检查、检疫)；
②对相应病毒易感，并十分敏感；
③经隔离饲养和观察检查证明健康；
④家兔、小鼠、大鼠等应符合普通级或清洁级实验动物标 准；鸡应属非免疫鸡或SPF级标准；犬和猫应品种明确，并 符合普通级实验动物标准；
（2）细胞株(cell strain) 又称二倍体细胞
指自继代培养的细胞中选育出具有特殊生物学性质和标记的 细胞。这类细胞且能保持原来的二倍染色体数目，能连续传很 多 代 (50 ～ 100 代 ) ， 但 为 有 限 生 命 ； 没 有 肿 瘤 原 。 如 PKl5 、 BHK21和Vero
（3）传代细胞（continued cell line）\ 细胞系(cell line)
•组成:中空纤维生物反应器、培养基容器、供氧器和蠕动泵
•中空纤维由乙酸纤维、聚氯乙烯－丙烯复合物或多聚碳酸硅等 材料制成，外径50~100µm，壁厚25~75µm，壁呈海绵状，上面 有很多微孔。
•中空纤维的内腔表面是一层半透性的超滤膜，允许营养物质和 代谢废物出入，而对细胞和大分子物质（如单克隆抗体）有滞 留作用。