第一章_植物工厂化育苗工厂及设备
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
51
（八）其他添加物
1.活性炭 ◆吸附培养基及培养物分泌物中的抑制物质 ◆抑制外植体褐变 ◆防止玻璃苗的产生 ◆促进培养物生长和分化 ◆促进生根 2.抗生素 ◆防止外植体内生菌造成的污染
活性炭 52
二、培养基的基本类型 （一）培养基的种类 ◆培养基形态不同：固体培养基、液体培养基 ◆培养过程不同：初代培养基、继代培养基 ◆其作用不同：诱导培养基、增殖培养基、生根培养基 ◆营养水平不同：基本培养基、完全培养基
组成成分
KNO3 CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O
KH2PO4 (NH4)2SO4
KI H3BO3 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O
N6培养基组成及配方
数量(mg/l)
2.3 166 185 400 463 0.8 1.6 4.4 1.5
组成成分
Na2－EDTA FeSO4·7H2O
A、赤霉素类 ◆组织培养中不常使用 ◆加速细胞的伸长生长 ◆促进细胞的分裂 ◆主要是GA3
B、脱落酸 ◆抑制细胞分裂和伸长 ◆促进脱落和衰老 ◆促进休眠和提高抗逆能力
GA3
脱落酸 48
（五）天然复合物
◆促进某些愈伤组织和器官的生长 ◆化学成分不明、复杂 ◆天然营养混合物 如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物
温室
培养室
基本实验室布局平面图
搁 水槽 架
搁
实
架
验
4.0m
台
电 炉
门
准备室 4.5m
冰箱 无菌台
药 品 及 仪 无菌台 器 柜 无菌室
缓冲室
搁
拉 窗
培养架
架 培养架
培养室
培
培
养
养
架
架
3.0m
3.5m
4
准备实验室
5
缓冲室
6
wk.baidu.com
无菌室
7
无菌室
8
无菌室
9
10
培养架 11
培养室
12
温室 13
36
Mg、S、Ca是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂，对核蛋白体结构具有稳定作用；
S是含S氨基酸的蛋白质的组成成分。
Ca是构成细胞壁的成分，对细胞分裂，稳定质膜结构有显著作用，此外，Ca及钙调素 在细胞信号转导中起重要作用。
2、微量元素 在微量元素中，铁的使用最大 ：
◆一些氧化酶的组成成分 ◆叶绿素形成的必要条件 ◆使用乙二胺四乙酸铁（EDTA-Fe）鳌合物防止铁的沉淀
46
2.细胞分裂素类
◆促进细胞分裂和分化 ◆诱导胚状体和不定芽的形成 ◆延缓组织的衰老并增强蛋白质的合成 ◆用于离体成花的调控 ◆溶于0.5-1.0mol/L的盐酸或稀薄的NaOH中 ◆常用的细胞分裂素：
KT (激动素) BA(6-卞基腺嘌呤) 2-ip(异戊烯氨基嘌呤) ZT（玉米素）
47
3.赤霉素类和脱落酸
61
2.MS培养基母液的配制 MS培养基母液根据试剂特性通常配成五种母液，即大量元素母液（10或20倍）、微量
元素母液（100或1000倍）、Fe盐（100倍）、Ca盐（50倍）、有机物（100倍）。
62
63
3.激素母液的配制 生长素类、赤霉素类及脱落酸等用95％乙醇溶解； 细胞分裂素类用1N HCl或1N NaOH溶解。 通常激素母液浓度生长素类为0.1~0.5 mg/ml, 细胞分裂素母液浓度为 0.2~1.0 mg/ml.
42
3.氨基酸
◆蛋白质的组成成分 ◆有机氮源 ◆可直接被细胞吸收利用 ◆培养基中常用的是甘氨酸
43
4.肌醇 ◆环己六醇 ◆细胞壁的构建材料 ◆参与碳水化合物、磷脂代谢及离子平衡等生理活动 ◆促进活性物质发挥作用
44
（四）植物生长调节剂
植物生长调节剂不仅可以促进植物组织的脱分化和形成愈伤组织，还可以诱导不定芽、 不定胚的形成。
蔗糖 pH 烟酸 盐酸吡哆醇 甘氨酸 盐酸硫铵
(mg/l)
37.3 27.8 50 5.8 0.5 0.5 2.0 1.0
58
第三章 培养基和培养条件
一、培养基母液的配制 为了减少工作量，减小误差，最方便的方法是预先配制好不同组分的培养基母液。
60
1.配制母液原则 ➢ 相同类型的试剂混合； ➢ 易形成沉淀的药品分开； ➢ 母液浓度要适宜； ➢ 用量要认真计算和核对； ➢ 药品要准确称量。
1.碳源 碳源物质包括糖类物质、醇类物质和有机酸，以糖类物质最重要。
糖类物质特点： ◆具有热易变的性质 ◆利于吸收和利用 ◆使用浓度一般在2%—5% ◆提供能源和调节渗透压
41
2.维生素类 ◆以各种辅酶的形式存在 ◆参与多种代谢活动 ◆对生长，分化等有很好的促进作用 ◆主要分为脂溶性维生素和水溶性维生素 ◆常用维生素有VB1和VB6
FeSO4·7H2O CuSO4·5H2O
蔗糖 pH 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇 激动素 2,4－D 盐酸硫铵
数量(mg/l) 27.8 0.025 40 5.5 100 1.0 1.0 0.1
0.1－1.0 10
57
4、N6培养基 ◆1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养设计 ◆ KNO3和(NH4)2SO4含量高，不含钼
38
硼与蛋白质合成、糖类运输有着密切的关系 铜是某些氧化酶的成分，能够促进离体根的生长 锰参与植物的光合、呼吸代谢 钼参与氮素的代谢 氯是光合作用水光解的活化剂 微量元素的主要作用是作为酶的辅助因子或激活剂参与代谢的调节。
39
（三）有机营养成分 培养基中的有机营养成分包括糖类物质 、维生素类 和氨基酸类。
33
（一）水分 构成培养基的绝大部分组分为水分。 在研究上，常用蒸馏水来配制培养基，而最为理想的水应该是纯水。
34
（二）矿质元素 ※大量营养元素：占干物质重量的0.1%以上；
C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等9种 ※微量营养元素：占干物质重量的0.1%以下
有的只含0.1mg/kg Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等7种
◆成分和浓度不同：含盐量较高的培养基、硝酸钾含量较高的培养基、中等无机盐含量的 培养基、低无机盐含量的培养基
53
（二）几种常见培养基的特点
1、MS培养基 ◆无机盐浓度高 ◆高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐 ◆含有一定数量的铵盐 ◆营养丰富 ◆不需要添加更多的有机附加物
54
2、White培养基 ◆1943年由White为培养番茄根尖而设计 ◆ 1963年作了改良，提高MgSO4的浓度和增加硼元素 ◆无机盐浓度较低
最常用的有生长素和细胞分裂素，有时也会用到赤霉素和脱落酸。
1.生长素类
◆促进细胞伸长和分裂 ◆促进生根、抑制器官脱落、性别控制、延长休眠、顶端优势、单性结实 ◆诱导愈伤组织形成 ◆溶于95%酒精或0.1mol/L的NaOH中，后者的溶解效果更好 ◆常用的生长素：
IAA(吲哆乙酸) NAA (萘乙酸) 2,4-D(2,4，二氯苯氧乙酸) IBA(吲哆丁酸)
16.5
MoO3
0.00
01
65 CuSO4 5H2O 0.00 1
200
含量 2.5
有机物 肌醇 烟酸
含量 其他 含量 100 蔗糖 30000 0.3 琼脂 8000
盐酸硫胺 0.1 素
盐酸吡哆 0.1 辛
甘氨酸
3
56
3、B5培养基 ◆1968年由Gamborg等为培养大豆根细胞而设计
◆含有较低的铵盐
第一章_植物工厂化育苗工厂及设备
第一节 实验室 一 、实验室
植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、 器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。
实验室设计原则：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。
2
实验室组成：
接种室
接种室 实验室
准备室
Text
49
（六）pH 在灭菌前，培养基的pH一般被调节到5.0~6.0 之间，最常用的pH为5.7~5.8。 pH过高时，培养基会变硬；pH过低时，则影响培养基的凝固。
50
（七）凝固剂 ◆琼脂是使用最普遍的凝固剂 ◆用量一般在6-10g/L之间 ◆颜色以浅、透明度高好，洁净为上品
除了琼脂外，在组织培养中还可以使用琼脂糖、结 冷胶等。
（2）玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌 干热消毒灭菌
76
饱和蒸汽压力与其对应的温度
饱和蒸汽压力
kg/cm2
1b/m2
温度（℃）
0.0 0.141 0.281 0.442 0.563 0.703 0.844 0.984
0
100
2
103.6
4
106.9
◆较高的硝酸盐和盐酸硫胺素
组成成分
KNO3 CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O (NH4)2SO4
KI H3BO4 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O Na2MoO4·2H2O CoCl2·6H2O Na2-EDTA
B5培养基的组成和配方
数量(mg/l）
组成成分
2500 150 250 134 0.75 3.0 10 2.0 0.25 0.025 37.3
4、将定容的培养基倒入容器中，加入蔗糖和琼脂，并加热使其完全溶解； 5、调整pH； 6、将培养基分装倒培养器皿中，封好瓶口； 7、灭菌，用高压锅灭菌（121℃，15～20min）或过滤除菌； 8、灭菌后待高压锅温度下降到50℃以下时，便可以取出、冷却凝固后待用。
68
69
三、培养基的保存
配制好的培养基一般要在室温、黑暗且清洁的地方放置3～5天再使用。 保存时间太久，培养基可能会污染、脱水、易分解的成分会发生分解，培养基成分会发生 较大的变化。 每批培养基均必须附有该批培养基制备记录副页或明显标签。
64
二、培养基的配制
水 药品
糖 琼脂 玻璃器皿
混合 水洗
加热溶 解
干燥 接种
调整pH
分装
封口
冷却
灭菌
培养基的配制的具体步骤：
1、取出母液并按顺序放好。将洁净的各种玻璃器皿如量筒、容量瓶、移液管、移液枪和玻 璃棒等放在指定位置；
2、取一只容量瓶，放入配制培养基总量的1/3左右纯水，将母液按顺序加入，并不断搅拌； 3、加入植物生长调节剂后定容；
5、细胞学鉴定设备 光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜
29
倒置显微镜 光 学 显 微 镜
30
三、培养器皿及实验用具 1、玻璃器皿
培养皿 培养瓶
三角瓶
2、金属材质用具 接种盘 接种针 镊子 解剖刀
32
第二节 培养基 培养基是决定植物组织培养成败的关键因素之一。 培养基的构成要素通常可分为：①水分；②无机盐类；③有机营养成分；④植物生长调节 物质；⑤天热物质； ⑥pH；⑦凝固剂等。
四、培养条件
温度
光照
湿度
环
境
条
气体
件
培养基的渗透压
pH值
植物材料一般最适温度在25±2℃之间 光强： 1000~6000 lx 光质：影响细胞分裂和器官分化 光周期：光照16h，黑暗8h 一般情况下，培养器内相对湿度应达100%，培养室内环 境的相对湿度在70%~80%
氧气是愈伤组织生长所必需的
调节渗透压常常从糖入手
14
第二节 仪器与设备 15
1.基本设备
电炉 冰箱
酸度计
17
天
纯
平
水
器
18
搅拌器 19
2.灭菌设备
蒸汽压力灭菌锅
20
21
过滤灭菌装置 22
紫外灭菌灯管 23
3、无菌操作设备
超 净 工 作 台
24
超净工作台
25
无菌接种箱 26
4、培养设备
恒温振荡培养箱
光照培养箱
27
摇床 28
按照国际植物生理协会的建议： 所需浓度 > 0.5mmol/L的元素为大量元素 所需浓度 < 0.5mmol/L的元素为微量元素
35
1.大量元素 N是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，在植物生命活动 中占有重要的位置。 P是磷脂的主要成分。培养基中常用KH2PO4 NaH2PO4等。 K对碳水化合物合成，转移，以及氮素代谢等有密切关系。
植物组织培养时培养基的pH值大多在5.0－6.5 71
一、洗涤 1、玻璃器皿洗涤
第三节 基本操作
新购置玻璃器皿
1%稀HCl
浸渍12h
已用过的玻璃器皿
洗衣粉洗涤
清水冲 洗
晾干备 用
2、塑料用品洗涤
塑料器皿
2%NaOH浸泡12h
蒸馏水冲洗
清水冲 洗
晾干备用
清水冲洗 2%—5%盐酸浸泡 30min
73
3、金属用品洗涤 热洗衣粉水洗净
冲洗
擦干
74
二、消毒灭菌
1.灭菌方法： （1）物理方法：
物理灭菌干热、湿热、射线处理、物理除菌、过滤、离心、沉淀等 （2）化学方法：
消毒剂、抗菌素灭菌
75 75
2、灭菌
（1）培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法 压力在9.8×104—10.8×104Pa 温度在121℃ 灭菌20—30min
◆使用广泛
◆在生根培养、胚胎培养中有良好的效果
附表：White培养基
大量元素
KNO3 Ca(NO3)2
4H2O MgSO4 7H2O NaH2PO4 4H2O
KCl
Na2SO4
含量 微量元素 含量 铁盐
80
H3BO3
1.5
300
MnSO4
7.0
4H2O
720 ZnSO4 7H2O 3.0
Fe2(SO4)3
（八）其他添加物
1.活性炭 ◆吸附培养基及培养物分泌物中的抑制物质 ◆抑制外植体褐变 ◆防止玻璃苗的产生 ◆促进培养物生长和分化 ◆促进生根 2.抗生素 ◆防止外植体内生菌造成的污染
活性炭 52
二、培养基的基本类型 （一）培养基的种类 ◆培养基形态不同：固体培养基、液体培养基 ◆培养过程不同：初代培养基、继代培养基 ◆其作用不同：诱导培养基、增殖培养基、生根培养基 ◆营养水平不同：基本培养基、完全培养基
组成成分
KNO3 CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O
KH2PO4 (NH4)2SO4
KI H3BO3 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O
N6培养基组成及配方
数量(mg/l)
2.3 166 185 400 463 0.8 1.6 4.4 1.5
组成成分
Na2－EDTA FeSO4·7H2O
A、赤霉素类 ◆组织培养中不常使用 ◆加速细胞的伸长生长 ◆促进细胞的分裂 ◆主要是GA3
B、脱落酸 ◆抑制细胞分裂和伸长 ◆促进脱落和衰老 ◆促进休眠和提高抗逆能力
GA3
脱落酸 48
（五）天然复合物
◆促进某些愈伤组织和器官的生长 ◆化学成分不明、复杂 ◆天然营养混合物 如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物
温室
培养室
基本实验室布局平面图
搁 水槽 架
搁
实
架
验
4.0m
台
电 炉
门
准备室 4.5m
冰箱 无菌台
药 品 及 仪 无菌台 器 柜 无菌室
缓冲室
搁
拉 窗
培养架
架 培养架
培养室
培
培
养
养
架
架
3.0m
3.5m
4
准备实验室
5
缓冲室
6
wk.baidu.com
无菌室
7
无菌室
8
无菌室
9
10
培养架 11
培养室
12
温室 13
36
Mg、S、Ca是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂，对核蛋白体结构具有稳定作用；
S是含S氨基酸的蛋白质的组成成分。
Ca是构成细胞壁的成分，对细胞分裂，稳定质膜结构有显著作用，此外，Ca及钙调素 在细胞信号转导中起重要作用。
2、微量元素 在微量元素中，铁的使用最大 ：
◆一些氧化酶的组成成分 ◆叶绿素形成的必要条件 ◆使用乙二胺四乙酸铁（EDTA-Fe）鳌合物防止铁的沉淀
46
2.细胞分裂素类
◆促进细胞分裂和分化 ◆诱导胚状体和不定芽的形成 ◆延缓组织的衰老并增强蛋白质的合成 ◆用于离体成花的调控 ◆溶于0.5-1.0mol/L的盐酸或稀薄的NaOH中 ◆常用的细胞分裂素：
KT (激动素) BA(6-卞基腺嘌呤) 2-ip(异戊烯氨基嘌呤) ZT（玉米素）
47
3.赤霉素类和脱落酸
61
2.MS培养基母液的配制 MS培养基母液根据试剂特性通常配成五种母液，即大量元素母液（10或20倍）、微量
元素母液（100或1000倍）、Fe盐（100倍）、Ca盐（50倍）、有机物（100倍）。
62
63
3.激素母液的配制 生长素类、赤霉素类及脱落酸等用95％乙醇溶解； 细胞分裂素类用1N HCl或1N NaOH溶解。 通常激素母液浓度生长素类为0.1~0.5 mg/ml, 细胞分裂素母液浓度为 0.2~1.0 mg/ml.
42
3.氨基酸
◆蛋白质的组成成分 ◆有机氮源 ◆可直接被细胞吸收利用 ◆培养基中常用的是甘氨酸
43
4.肌醇 ◆环己六醇 ◆细胞壁的构建材料 ◆参与碳水化合物、磷脂代谢及离子平衡等生理活动 ◆促进活性物质发挥作用
44
（四）植物生长调节剂
植物生长调节剂不仅可以促进植物组织的脱分化和形成愈伤组织，还可以诱导不定芽、 不定胚的形成。
蔗糖 pH 烟酸 盐酸吡哆醇 甘氨酸 盐酸硫铵
(mg/l)
37.3 27.8 50 5.8 0.5 0.5 2.0 1.0
58
第三章 培养基和培养条件
一、培养基母液的配制 为了减少工作量，减小误差，最方便的方法是预先配制好不同组分的培养基母液。
60
1.配制母液原则 ➢ 相同类型的试剂混合； ➢ 易形成沉淀的药品分开； ➢ 母液浓度要适宜； ➢ 用量要认真计算和核对； ➢ 药品要准确称量。
1.碳源 碳源物质包括糖类物质、醇类物质和有机酸，以糖类物质最重要。
糖类物质特点： ◆具有热易变的性质 ◆利于吸收和利用 ◆使用浓度一般在2%—5% ◆提供能源和调节渗透压
41
2.维生素类 ◆以各种辅酶的形式存在 ◆参与多种代谢活动 ◆对生长，分化等有很好的促进作用 ◆主要分为脂溶性维生素和水溶性维生素 ◆常用维生素有VB1和VB6
FeSO4·7H2O CuSO4·5H2O
蔗糖 pH 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇 激动素 2,4－D 盐酸硫铵
数量(mg/l) 27.8 0.025 40 5.5 100 1.0 1.0 0.1
0.1－1.0 10
57
4、N6培养基 ◆1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养设计 ◆ KNO3和(NH4)2SO4含量高，不含钼
38
硼与蛋白质合成、糖类运输有着密切的关系 铜是某些氧化酶的成分，能够促进离体根的生长 锰参与植物的光合、呼吸代谢 钼参与氮素的代谢 氯是光合作用水光解的活化剂 微量元素的主要作用是作为酶的辅助因子或激活剂参与代谢的调节。
39
（三）有机营养成分 培养基中的有机营养成分包括糖类物质 、维生素类 和氨基酸类。
33
（一）水分 构成培养基的绝大部分组分为水分。 在研究上，常用蒸馏水来配制培养基，而最为理想的水应该是纯水。
34
（二）矿质元素 ※大量营养元素：占干物质重量的0.1%以上；
C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等9种 ※微量营养元素：占干物质重量的0.1%以下
有的只含0.1mg/kg Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等7种
◆成分和浓度不同：含盐量较高的培养基、硝酸钾含量较高的培养基、中等无机盐含量的 培养基、低无机盐含量的培养基
53
（二）几种常见培养基的特点
1、MS培养基 ◆无机盐浓度高 ◆高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐 ◆含有一定数量的铵盐 ◆营养丰富 ◆不需要添加更多的有机附加物
54
2、White培养基 ◆1943年由White为培养番茄根尖而设计 ◆ 1963年作了改良，提高MgSO4的浓度和增加硼元素 ◆无机盐浓度较低
最常用的有生长素和细胞分裂素，有时也会用到赤霉素和脱落酸。
1.生长素类
◆促进细胞伸长和分裂 ◆促进生根、抑制器官脱落、性别控制、延长休眠、顶端优势、单性结实 ◆诱导愈伤组织形成 ◆溶于95%酒精或0.1mol/L的NaOH中，后者的溶解效果更好 ◆常用的生长素：
IAA(吲哆乙酸) NAA (萘乙酸) 2,4-D(2,4，二氯苯氧乙酸) IBA(吲哆丁酸)
16.5
MoO3
0.00
01
65 CuSO4 5H2O 0.00 1
200
含量 2.5
有机物 肌醇 烟酸
含量 其他 含量 100 蔗糖 30000 0.3 琼脂 8000
盐酸硫胺 0.1 素
盐酸吡哆 0.1 辛
甘氨酸
3
56
3、B5培养基 ◆1968年由Gamborg等为培养大豆根细胞而设计
◆含有较低的铵盐
第一章_植物工厂化育苗工厂及设备
第一节 实验室 一 、实验室
植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、 器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。
实验室设计原则：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。
2
实验室组成：
接种室
接种室 实验室
准备室
Text
49
（六）pH 在灭菌前，培养基的pH一般被调节到5.0~6.0 之间，最常用的pH为5.7~5.8。 pH过高时，培养基会变硬；pH过低时，则影响培养基的凝固。
50
（七）凝固剂 ◆琼脂是使用最普遍的凝固剂 ◆用量一般在6-10g/L之间 ◆颜色以浅、透明度高好，洁净为上品
除了琼脂外，在组织培养中还可以使用琼脂糖、结 冷胶等。
（2）玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌 干热消毒灭菌
76
饱和蒸汽压力与其对应的温度
饱和蒸汽压力
kg/cm2
1b/m2
温度（℃）
0.0 0.141 0.281 0.442 0.563 0.703 0.844 0.984
0
100
2
103.6
4
106.9
◆较高的硝酸盐和盐酸硫胺素
组成成分
KNO3 CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O (NH4)2SO4
KI H3BO4 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O Na2MoO4·2H2O CoCl2·6H2O Na2-EDTA
B5培养基的组成和配方
数量(mg/l）
组成成分
2500 150 250 134 0.75 3.0 10 2.0 0.25 0.025 37.3
4、将定容的培养基倒入容器中，加入蔗糖和琼脂，并加热使其完全溶解； 5、调整pH； 6、将培养基分装倒培养器皿中，封好瓶口； 7、灭菌，用高压锅灭菌（121℃，15～20min）或过滤除菌； 8、灭菌后待高压锅温度下降到50℃以下时，便可以取出、冷却凝固后待用。
68
69
三、培养基的保存
配制好的培养基一般要在室温、黑暗且清洁的地方放置3～5天再使用。 保存时间太久，培养基可能会污染、脱水、易分解的成分会发生分解，培养基成分会发生 较大的变化。 每批培养基均必须附有该批培养基制备记录副页或明显标签。
64
二、培养基的配制
水 药品
糖 琼脂 玻璃器皿
混合 水洗
加热溶 解
干燥 接种
调整pH
分装
封口
冷却
灭菌
培养基的配制的具体步骤：
1、取出母液并按顺序放好。将洁净的各种玻璃器皿如量筒、容量瓶、移液管、移液枪和玻 璃棒等放在指定位置；
2、取一只容量瓶，放入配制培养基总量的1/3左右纯水，将母液按顺序加入，并不断搅拌； 3、加入植物生长调节剂后定容；
5、细胞学鉴定设备 光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜
29
倒置显微镜 光 学 显 微 镜
30
三、培养器皿及实验用具 1、玻璃器皿
培养皿 培养瓶
三角瓶
2、金属材质用具 接种盘 接种针 镊子 解剖刀
32
第二节 培养基 培养基是决定植物组织培养成败的关键因素之一。 培养基的构成要素通常可分为：①水分；②无机盐类；③有机营养成分；④植物生长调节 物质；⑤天热物质； ⑥pH；⑦凝固剂等。
四、培养条件
温度
光照
湿度
环
境
条
气体
件
培养基的渗透压
pH值
植物材料一般最适温度在25±2℃之间 光强： 1000~6000 lx 光质：影响细胞分裂和器官分化 光周期：光照16h，黑暗8h 一般情况下，培养器内相对湿度应达100%，培养室内环 境的相对湿度在70%~80%
氧气是愈伤组织生长所必需的
调节渗透压常常从糖入手
14
第二节 仪器与设备 15
1.基本设备
电炉 冰箱
酸度计
17
天
纯
平
水
器
18
搅拌器 19
2.灭菌设备
蒸汽压力灭菌锅
20
21
过滤灭菌装置 22
紫外灭菌灯管 23
3、无菌操作设备
超 净 工 作 台
24
超净工作台
25
无菌接种箱 26
4、培养设备
恒温振荡培养箱
光照培养箱
27
摇床 28
按照国际植物生理协会的建议： 所需浓度 > 0.5mmol/L的元素为大量元素 所需浓度 < 0.5mmol/L的元素为微量元素
35
1.大量元素 N是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，在植物生命活动 中占有重要的位置。 P是磷脂的主要成分。培养基中常用KH2PO4 NaH2PO4等。 K对碳水化合物合成，转移，以及氮素代谢等有密切关系。
植物组织培养时培养基的pH值大多在5.0－6.5 71
一、洗涤 1、玻璃器皿洗涤
第三节 基本操作
新购置玻璃器皿
1%稀HCl
浸渍12h
已用过的玻璃器皿
洗衣粉洗涤
清水冲 洗
晾干备 用
2、塑料用品洗涤
塑料器皿
2%NaOH浸泡12h
蒸馏水冲洗
清水冲 洗
晾干备用
清水冲洗 2%—5%盐酸浸泡 30min
73
3、金属用品洗涤 热洗衣粉水洗净
冲洗
擦干
74
二、消毒灭菌
1.灭菌方法： （1）物理方法：
物理灭菌干热、湿热、射线处理、物理除菌、过滤、离心、沉淀等 （2）化学方法：
消毒剂、抗菌素灭菌
75 75
2、灭菌
（1）培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法 压力在9.8×104—10.8×104Pa 温度在121℃ 灭菌20—30min
◆使用广泛
◆在生根培养、胚胎培养中有良好的效果
附表：White培养基
大量元素
KNO3 Ca(NO3)2
4H2O MgSO4 7H2O NaH2PO4 4H2O
KCl
Na2SO4
含量 微量元素 含量 铁盐
80
H3BO3
1.5
300
MnSO4
7.0
4H2O
720 ZnSO4 7H2O 3.0
Fe2(SO4)3