人体表面的微生物

人体表面的微生物检测实验

一、目的要求

1．证明体表存在微生物。

2．比较来自不同条件下细菌的数量和类型。

3．体会无菌操作的重要性。

二、基本原理

平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在37℃温度下培养，1—2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。

三、器材

肉膏蛋白胨琼脂平板，无菌水，灭菌棉签（装在试管内），酒精灯，记号笔，废物缸。

四、操作步骤

1．写标签

任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号，培养皿的记号一般写在皿底上。如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时，容易混淆。用记号笔写上班级、姓名、日期，本次实验还要写上样品来源（如实验室空气或无菌室空气或头发等），字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。

例如：

2．培养皿的包扎和消毒

（a）培养基的制备

步骤略

（b）灭菌

（i)干热灭菌将需要灭菌的物品放入干燥箱内，不要接触内壁铁板；通电，打开排气孔至温度升至100摄氏度关闭排气孔；将温度调至160-170摄氏度后维持两小时；切断电源，把恒温箱调节旋钮归零。待温度降至50摄氏度时才能取出物品。

（ii）湿法灭菌加水至底部隔板一下1/3处；把灭菌的锥形瓶（内有培养液）放入锅内，关闭锅盖（对角拧紧），打开排气阀；打开电源；待锅内水沸腾后，蒸汽将锅内冷空气驱静，当温度指向100摄氏度时，证明锅内已经充满蒸汽，关排气阀；升温升压，当压力达到1.05kg/cm2（温度为121摄氏度）时，开始灭菌，维持15-到30分钟。达到灭菌时间时，停止加热。自然降温，指针归零，打开排气阀，揭锅盖，取物品，排锅内剩水。

3．人体细菌的检查

（1）手指（洗手前与洗手后）

（a）分别在两个琼脂平板上标明洗手前与洗手后（当然，班级、姓名、日期各项在每次写标签时是必不可少的）。

（b）移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板的表面，轻轻地来回划线，盖上皿盖。

（c）用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中冲洗干净，干燥后，在另一琼脂平板表面来回移动，盖上皿盖。

（2）头发在揭开皿盖的琼脂平板的上方，用手将头发用力摇动数次，使细菌降落到琼脂平板表面，然后盖上皿盖。

（3）咳嗽将去盖琼脂平板放在离口约6—8cm处，对着琼脂表面用力咳嗽，然后盖上皿盖。

（4）鼻腔

（a）取棉签左手拿含有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞，将其取出，将管口很快地通过酒精灯的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出。放回棉塞，并将空试管放在试管架上。弄湿棉签左手取灭菌水试管，如上法拔出棉塞并烧灼管口，将棉签插入水中，再提出水面，在管壁上挤压一下以除去过多的水分，小心将棉签取出，烧灼管口，放回棉塞，并将灭菌水试管放在试管架上。

取出棉签，并将其弄湿。

（b）用湿棉签在鼻腔内滚动数次。

（c）接种，在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝。再将棉签伸入，在琼脂表面顶端接种（滚动一下），立即闭合皿盖。并将原放棉签的空试管拔出棉塞，烧灼管口，插入用过的棉签，将试管放回试管架。

3．将所有的琼脂平板翻转，使皿底在上，放37℃培养箱，培养1—2天。

4．结果记录方法

（1）菌落计数在划线的平板上，如果菌落很多而重叠，则数平板最后1/4面积内的菌落数。不是划线的平板，也一分为四，数1/4面积的菌落数。

（2）根据菌落大小、形状、高度、干湿等特征观察不同的菌落类型。但要注意，如果细菌数量太多，会使很多菌落生长在一起，或者限制了菌落生长而

变得很小，因而外观不典型，故观察菌落的特点时，要选择分离得很开的单个菌落。

菌落特征描写方法如下：

（a）大小大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、小的标准，或由教师指出一个大小范围。

（b）颜色黄色、金黄色、灰色、乳白色、红色、粉红色等。

（c）干湿情况干燥、湿润、粘稠。

（d）形态圆形、不规则等。（e）高度扁平、隆起、凹下。

（f）透明程度透明、半透明、不透明。

（g）边缘整齐、不整齐。

五、实验报告

1．结果

（1）将你自己的平板结果记录于下表中。

（2）与其他同学所做的结果进行比较。

2．思考题

（1）比较各种来源的样品，哪一种样品的平板菌落数与菌落类型最多？

（2）人多的实验室与无菌室（或无人走动的实验室）相比，平板上的菌落数与菌落类型有什么区别？你能解释一下造成这种区别的原因吗？

（3）洗手前后的手指平板，菌落数有无区别？

（4）通过本次实验，在防止培养物的污染与防止细菌的扩散方面，你学到些什么？有什么体会？

（注：以上步骤仅供参考）