果蔬中抗坏血酸含量的测定[1]

果蔬中抗坏血酸含量的测定

摘要：分别采用２，６－二氯靛酚钠法、高锰酸钾滴定法和紫外分光光度法测定果蔬中抗坏血酸的含量，通过对比研究，优选出测定果蔬中抗坏血酸含量的方法为分光光度法。

关键词：抗坏血酸；果蔬；测定方法

抗坏血酸（ａｓｃｏｒｂｉｃ aｃｉｄ，ａａ）也称ｖｃ，是维持人体健康的一种重要物质。人体所需的ｖｃ大多数由水果、蔬菜及食品供给［１］。人体长期缺乏抗坏血酸会得坏血病、关节疼痛、牙龈出血、发炎、感染、身体骨骼易损伤且不易愈合等疾病，而过量摄入ｖｃ不仅不能抵御疾病，而且还可能缩短寿命［２－４］。这是因为ｖｃ能够破坏ｄｎａ自由基，这种破坏会导致早衰和癌症。因此，对果蔬中抗坏血酸含量的定量分析具有重要的意义。

ｖｃ含量的测定方法很多。一般有２，６－二氯靛酚钠法、高锰酸钾滴定法、紫外分光光度法、库仑分析法、原子分光光度法和碘量法等［５－１０］。本研究采用２，６－二氯靛酚钠法、高锰酸钾滴定法和紫外分光光度法测定果蔬中抗坏血酸的含量，然后通过对比分析，确定测定果蔬中抗坏血酸含量的最优方法。

１材料与方法

１．１仪器与试剂

紫外分光光度计（美国安捷伦）；岛津分析天平（日本岛津）；ｓｈｂ－循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；微量移液器（上海安亨微量进样器厂）。

２．０％（ｗ／ｖ，下同）偏磷酸溶液；标准抗坏血酸；０．０２ｍｏｌ／ｌｅｄｔａ溶液；高锰酸钾；２，６－二氯靛酚钠。以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。

１．２样品的处理

选取新鲜的西红柿和黄瓜洗净、擦干，称取约１００ｇ至研钵中，捣碎，加入１００ｍｌ２．０％偏磷酸浸提剂，迅速捣成匀浆，用纱布过滤至烧杯中，然后抽滤。取滤液转移至１０００ｍｌ容量瓶中，用浸提剂定容，备用。

１．３样品的检测

１．３．１紫分光光度法校准曲线的绘制：配制一系列抗坏血酸标准溶液，浓度分别为１．００、２．００、４．００、６．００、８．００、１０．００μｇ／ｍｌ。以２％偏磷酸为参比，在波长２４３ｎｍ处用石英皿测定标准系列抗坏血酸溶液的吸光度。以吸光度值（ａ）对抗坏血酸浓度（ｃ）绘制校准曲线。线性回归方程ａ＝０．０７０１５ｃ－０．００５３，r２=０．９９９５。结果表明，抗坏血酸浓度在１．００～１０．００μｇ／ｍｌ范围内吸光度值与浓度之间呈良好的线性关系。

样液的测定：用２％偏磷酸为参比，在波长２４３ｎｍ处测定样液的吸光度。将待测样品的吸光度值代入回归方程，则可得样品中抗坏血酸的浓度，进而可按式（１）计算出样品中抗坏血酸的含量ｘ（ｍｇ／１００ｇ）。

ｘ＝ａ×ｃｖ×１００／ｍ（１）

其中：ｍ为样品重量，ｇ；ａ为稀释倍数；ｖ为提取液体积，ｍｌ。

１．３．２高锰酸钾法配制ｋｍｎｏ４标准溶液：称取１．６ｇｋｍｎｏ４溶于１０００ｍｌ水中，煮沸１５ｍｉｎ，冷却，贮存于棕色试剂瓶中，浓度为０．０１ｍｏｌ／ｌ；用ｎａ２ｃ２ｏ４标定后为０．０１０１６ｍｏｌ／ｌ。

样液的测定：移取配制好的试样溶液２５．００ｍｌ于２５０ｍｌ锥形瓶中，加入１ｍｌ０．０２ｍｏｌ／ｌ的ｅｄｔａ溶液，５ｍｌ３ｍｏｌ／ｌ硫酸溶液，摇匀后在棕色滴定管中用高锰酸钾标准溶液滴定至呈微红色，３０ｓ不退色即为终点。

两者的反应方程式：２ｍｎo■■＋５ｃ６ｈ８ｏ６＋６ｈ＋＝２ｍｎ２＋＋５ｃ６ｈ６ｏ６＋８ｈ２ｏ，可按式（２）计算出样品中抗坏血酸的含量ｘ（ｍｇ／１００ｇ）。

ｘ＝ａ×ｃｖ×ｍ×５／２×１００／ｍ（２）

式中：ｃ、ｖ分别为ｋｍｎｏ４标准溶液的浓度和滴定用去的体积；ｍ为抗坏血酸的摩尔质量。

１．３．３２，６－二氯靛酚钠法测定２，６－二氯靛酚钠的滴定度：吸取２５ｍｌ２，６－二氯靛酚溶液于１００ｍｌ锥形瓶中，摇匀，用浓度为１．０ｍｇ／ｍｌ抗坏血酸标准溶液滴定至溶液呈粉红色１５ｓ不退色为止［１１］。按式（３）计算其滴定度：

ｔ＝ｃ×ｖ／ｖ１（３）

式中：ｃ为抗坏血酸的浓度，ｍｇ／ｍｌ；ｖ为吸取抗坏血酸的体积，ｍｌ；ｖ１为滴定抗坏血酸溶液所用２，６－二氯靛酚溶液的体积，ｍｌ。

样品中抗坏血酸含量的测定：移取样品提取液１０．００ｍｌ于锥形瓶中，立即从滴定管中滴入２，６－二氯靛酚钠溶液，直到溶液变色后１５ｓ不变色即为滴定终点，到达滴定终点时，样品溶液变为粉红色。平行测定３次。由２，６－二氯靛酚钠溶液的体积可按式（４）计算出样品中抗坏血酸的含量ｘ（ｍｇ／１００ｇ）。

ｘ＝ａ×ｖ×ｔ×１００／ｍ（４）

式中：ｖ为滴定样液时消耗染料溶液的体积，ｍｌ；ｔ为２，６－二氯靛酚染料滴定度，ｍｇ／ｍｌ。

２结果与分析

２．１实验条件的选择

２．１．１紫外分光光度法测定波长的选择：ｖｃ是烯醇化合物，在可见区无吸收［１２］，在紫外区有吸收。分别对不同浓度的ｖｃ与试剂空白溶液在２００～４００ｎｍ波长范围内进行扫描，最大吸收峰在２４３ｎｍ。因此，选２４３ｎｍ作为测量波长。

溶剂的选择：一般用偏磷酸、草酸作为提取剂。但由于草酸在波长２４３ｎｍ处有非常强的吸收，不能作为ｖｃ的提取液。因此，本实验选择２％偏磷酸作为分光光度法的溶剂。

２．１．２高锰酸钾法溶液的酸度：ｋmｎｏ４在酸性溶液中具有较强的氧化性，所以其测定宜在酸性溶液中进行。由于ｃｌ－具有还原性，也能与高锰酸钾作用；而ｈｎｏ３具有氧化性，可氧化抗坏血酸，所以不使用ｈｃｌ和ｈｎｏ３而用稀ｈ２ｓｏ４。

干扰离子的影响：试液中如有ｆｅ２＋等还原性离子存在，不仅能加快抗坏血酸被空气中的氧气所氧化而分解的速度，而且也要消耗一定量的标准溶液而造成滴定误差。所以加入ｅｄｔａ溶液予以掩蔽ｆｅ２＋而消除干扰［１３］。

２．２样品测定结果

２．２．１不同方法的对比将紫外分光光度法、高锰酸钾法、２，６－二氯靛酚滴定法进行对比，这３种方法采用相同的前处理溶液，从表１可以看出，用高锰酸钾法测的值明显高于紫外分光光度法和２，６－二氯靛酚钠法的值。这表明３种方法均可用于快速测定果蔬中抗坏血酸的含量，但紫外分光光度法和２，６－二氯靛酚滴定法的准确度要优于高锰酸钾法，而对于深色泽样品的测定，紫外分光光度法由于不受颜色干扰和其他还原性物质的影响而优

于氧化还原滴定法，因此更加准确、可靠，适用范围更广。

２．２．２紫外分光光度法的检出限连续测定空白吸光值１０次，吸光度值见表２，在置信度９０％时，取置信系数ｋ＝３，按上述线性方程，其校准曲线斜率为０．０７１０５，则相对应