micrOTOF-Q II 质谱仪使用流程

micrOTOF-Q II
液质联用高分辨质谱仪使用流程
1. 使用质谱须知
在使用质谱仪前请确认并检查以下条件：
● 仪器已经正确安装并且经过厂商工程师的检测；
● 质谱仪属于精密贵重仪器，未经专门培训人员不得擅自开启使用，更不
得随意“调校”氮气和氦气压力或更改仪器参数等；
● 检查液氮罐和氦气钢瓶是否有一定压力，以便为测试样品提供符合流速
和压力要求的氮气（喷雾气体和干燥气体）和氦气（碰撞气体）；
● 常规ESI源已安装完毕
● 样品溶液必须澄清透明，不含有固体微粒，不得将粗提物直接用于测定，
以免污染毛细管。

2. 测样前仪器准备
2.1 启动micrOTOFcontrol软件
2.1.1.
单击桌面图标或者通过程序目录启动micrOTOFcontrol软件；软件要求输入操作人员的姓名：
2.1.2. 选择软件中质谱仪处于操作状态<Operation>
2.1.
3. 调用方法: Method -> Open
药物类小分子样品选用如 <tune_low.m>
蛋白酶解样品选用如 <tune_wide.m>
大蛋白类样品选用如 <tune_high.m>
2.1.4. 仪器在操作状态下<Operation> 稳定20-30分钟后即可开始仪器质
量准确度校正。

2.2. 仪器质量准确度校正
2.2.1. 药物和酶解多肽样品，选用甲酸钠溶液作为校正标准液。

覆盖质量范
围m/z90-1200；校正模式选用 <Enhanced Quadratic>。

2.2.2. 蛋白质类样品选用三氟乙酸钠溶液作为校正标准液。

覆盖质量范围
m/z 200-2000；校正模式选用 <Quadratic>。

2.2.
3. 校正液配制
甲酸钠校正液：
溶剂：异丙醇:水溶液= 1:1并含有0.2%甲酸
10mM甲酸钠校正液：1ml 1M NaOH + 99ml溶剂
三氟乙酸钠校正液：
溶剂：50%乙氰含有0.1%三氟乙酸钠(TFA)
10mM甲酸钠校正液：1ml 1M NaOH + 99ml溶剂
<Calibration> 校正界面
2.2.
3.
3. 测样方式
3.1 直接进样测定
对于标准品或相对较纯或混合组分较少并且不含盐的药物样品，如果仅需要进行鉴定，可以采用直接进样方法测定。

3.1.1 样品用标准溶剂（50%H2O，50%乙腈或甲醇，0.1%甲酸）溶解或
稀释
3.1.2 将配好的样品或标准品吸入进样器（针），将进样器（针）放置于进
样泵中。

注意：进样器（针）内不能有气泡
3.1.3 将进样器（针）直接与离子源连接（如图）
注意毛细管与注射器之间需紧密连接。

进样器内不能有气泡
3.1.4 设置进样泵的流速为120～180微升/小时
3.2 液质联用（LC/MS）测定药物类小分子样品
采用常规液相色谱系统（色谱柱2.1x150mm；流速200-300uL/min）。

启动Hystar软件，在<Hardware Setup> 选项中选用适合小分子测定的液相色谱仪模
块，如选用 <HW_regularflow>；
选用适合测定小分子的质谱方法，如选用<SmallMolecules.m>；
选用或设定适合分离药物小分子的液相方法。

3.3 液质联用（LC/MS）测定混合蛋白酶解样品
采用纳升液相色谱系统（色谱柱75umx100mm；流速200-300nL/min）。

启动Hystar软件，<Hardware Setup > 选项中选用适合混合蛋白酶解样品测定的液
相色谱仪模块，如<HW_nanoflow>
3.3.1. 选择软件中质谱仪处于关机状态 <shutdown>
3.3.2. 将常规ESI源换成纳升ESI源
3.3.3. 软件中离子源的选择由常规ESI 改为nano Online
------Æ
3.3.
4. 选用适合测定酶解多肽混合物的质谱方法，如选用<digest.m>；选用或设定适合分离酶解多肽混合物的液相方法。

4. 获取质谱图
4.1 设置离子源参数
在micrOTOFcontrol软件中的 <Source> 界面可以对仪器各项参数进行调整。

4.2. 适当调节参数，以得到适宜的质谱图；（如果有已经建立好的方法，可以导
入方法后直接测定，而不需调节参数。

）
4.3. 储存图谱：点<Sample info>，指定图谱存储的文件夹和样品图谱的文件名，
点击 <Acquisition> 键即可。

4.4. 如果是混合样品须经过HPLC进样并梯度分离后，在线进入质谱分析。

数据的储存可以在Hystar软件中完成。

以下5-6操作步骤可供在建立新方法时参考：
5. 输入下列参考参数
5.1. 直接进样：（低流速）大约在120－180微升/小时
离子源： Nebulizer 0.4 bar
Dry Gas 4.0 L/min
Dry Temp 180℃
5.2. 药物小分子样品液质联用：平均流速大约在200-300 uL/min
离子源：Nebulizer 0.8 bar
Dry Gas 6-8 L/min
Dry Temp 180℃
5.2. 酶解多肽样品液质联用：平均流速大约在200-300 nL/min
离子源：Dry Gas 3.0 L/min
Dry Temp 160℃
6. 操作状态
6.1. 进入主菜单
选择操作状态。

质谱仪的相关部分将自动开启。

6.2. 启动进样泵（或LC-pump）的流程
注意Neb Gas, Dry Gas, Dry temp的值。

有溶液在Capillary管内流动时Capillary 的值应大于5毫安。

左上角： 窗口显示质谱的柱状图
右上角： 窗口显示峰形图，可以看到同位素峰
中间偏左：窗口显示随时间改变的离子强度
下部： 主控窗口，可根据离子的特点调整各项设置参数
7. 保存质谱方法
7.1. 一般保存
工具栏有不同的按钮用于对质谱方法的操作：
建立一个新的方法（读取默认选项）；
打开已有的方法；
保存方法，快捷键Ctrl+S
7.2. 保存新建方法
通过菜单Method-> Save Method as方法可保存并命名，如：
NEWMETHOD.MS
默认方法（default method）是只读的，因此在改动后的默认方法只能以新的文件名保存。

8. 获得数据
8.1. 输入样品信息
样品信息将同质谱结果一同保存以便于以后的结果整理和分析、处理。

打开的样品信息界面如图：
8.2. 输入数据文本信息
在数据文本选项里选择Prefix或者Manual，在Prefeix和Counter输入文件名；在subdirectory中选择子目录；在Sample Name选项下输入样品名；如果需要的话，在comment选项下输入关于样品的描述。

这些内容以及样品名将显示在数据分析程序（DataAnalysis）下的分析信息窗口（参考数据后期处理）
8.3. 按回车键确认信息
8.4. 获得一个单一图谱
8.4.1. 保存质谱图
保存所需要的质谱图可使用以下方法中任意一种：
－点击Analysis & Sample Info 窗口
－工具栏上的数据采集键
－选择菜单：Acquisition－> Save
8.4.2. 被保存的文件名形式为test0000.d
8.5. 手动获得一个MS/MS图谱
打开MS/MS界面，选择MRM-> 输入 <Parent Condition> 列表，激活Scan Mode 。

8.5.1 保存质谱结果
- 点击工具栏上的采集键
- 点击工具栏上的停止键
说明：被保存的文件将被命名为test0001.d；选择另一个离子进行分析并再次保存质谱图（e.g.1220），被保存的文件将被命名为test0002.d
8.5.2. 关闭手动MS/MS模式
在MS/MS界面中点击
8.6 自动获得MS和MS/MS图谱
8.6.1. 保存色谱数据
获得色谱数据可以选择以下方法中任意一种
－点击Analysis & Sample Info窗口
－点击工具栏上的采集键
－点击Acquisition菜单－选择Run method选项
8.6.2. 默认运行时间为30分钟
手工停止可以用以下方法中任意一种
－点击工具栏上的停止键
－点击Acquisition菜单－选择Stop Run选项
8.6.3. 可以进行下一运行程序并获取数据
9. 后期处理
9.1 打开分析文件
9.1.1. 在任务栏中或者在工具栏中选择按钮均可切换到数据分析程序(DataAnalysis)，读取所获得的数据文件
9.1.2. 读取数据文件被可选择File菜单下的open 对话框，所需要的显示窗口将被程序自动打开。

9.1.3. 在文件对话框中选择目录d:\data\start 用鼠标键双击test0000.d，
test0001.d，test0002.d来打开数据文件；按住shift键来标记所有文件并点击回车键来一次全部打开所选文件。

9.1.4. 质谱图与色谱图按文件名读取并显示在File菜单下。

在分析清单窗口下选择所需的文件，选择后图谱在各自的窗口下显示。

9.2 质谱图
9.2.1. 在分析清单窗口下选择的结果在质谱图窗口显示。

9.2.2. 通过Masslist参数对话框改变离子检测参数
9.2.3. 下列对话框被用来在图谱中设置新的离子检测参数
9.2.4. 对下一步的Method参数设置参见Bruke Daltonics DataAnalysis Reference Manual
9.3 色谱数据
9.3.1. 完整色谱图
1. 读取数据文件（e.g. test0001.d），显示TIC（Total Ion Chromatogram）
2. 读取某一个离子的色谱数据可以打开Edit Chromatogram Traces对话框
3. 通过Edit菜单下选择Chromatogram选项来打开Traces对话框
如下图所示，选择质荷比为622的离子
9.3.2. 获得各组分的质谱图（Compound spectra）
使用Find –> Compound功能键，快速有效的产生各组分的质谱图；
1）功能键 <Compounds-Chromatogram> 产生色谱分离过程中所有组分的质谱图。

打开Compound Spectra窗口时，可以看到各组分的质谱图。

2）功能键 <Compounds-MS(n)> 产生所有采用MS(n)步骤采集的图谱。

3）<Compounds-AutoMS(n)> 产生MS-和MS/MS图图
10. 报告
有几种可用的报告形式来输出数据，一种报告仅有质谱图，另一种报告则只有色谱图，还有一种两种图谱都保留。

10.1. 直接打印：打印键；或者打开File菜单，选择Print；或者通过打印预览打印，选择打印预览键或在File菜单选择Print Preview，然后在打印预览窗口下选择打印键
10.1.1 报告内容下拉菜单包含了所有可选的报告内容
10.1.2. 获得参数报告
选择此内容的报告中包含了获得所选分析结果的参数
10.1.3. 显示报告
选择此内容将完全按照显示窗口打印（包括色谱窗口、质谱显示窗口、混合物质谱窗口、质谱窗口）
10.2 质谱图
报告内容中几种可选的质谱图形式
10.2.1. 质谱清单报告
报告中含所选的质谱图的peak清单
10.2.2. 质谱图报告
报告中含所选的质谱图报告
10.3 色谱图
报告内容中几种可选的色谱图形式
10.3.1 色谱清单报告
报告中含所选的色谱图的色谱峰清单
10.3.2 色谱图报告
报告中含所选质谱图的报告
10.3.3 混合质谱图报告
报告中含所选色谱图的混合质谱报告。