实验四： 常见动物中毒毒物分析与检验

实验四：常见动物中毒毒物分析与检验 2学时

一、实验教学目标及基本要求

（1）通过实验加强学生对毒物分析的基本原理和基本操作方法的理解与掌握。（2）通过实验使学生掌握几种常见毒物检验的方法。

（3）要求学生在实验后写出试验报告。

二、实验内容提要

亚硝酸盐中毒检验—联苯胺冰醋酸反应

氢氰酸中毒的检验—普鲁士蓝反应

有机磷农药中毒的检验—间苯二酚法

（一）、亚硝酸盐中毒的定性检验

1.高铁血红蛋白的鉴定

（1）.取血液少许与小试管内,用力振摇,血液不变色,可认为是高铁血红蛋白.通常血液会与空气中的氧结合呈鲜红色。

（2）.取血液少许与小试管内,滴入数滴1%KCN溶液,若有高铁血红蛋白,血液立即由棕褐色变为鲜红色。

2.亚硝酸盐检验: 格里斯法

（1）.原理：亚硝酸盐使对氨基苯磺酸重氮化后，再与α—萘胺起偶氮反应，生成紫红色染料。

（2）.试剂：①.对氨基苯磺酸溶液②. α—萘胺（甲萘胺）溶液：取盐酸α—萘胺1.25克溶解于187.5毫升水与62.5毫升冰醋酸中，储于有色瓶中备用。

（3）.检材

①胃内容物、呕吐物、剩余饲料中亚硝酸盐的提取：取上述检材10到20

克加适量蒸馏水调成糊状，过滤，滤液若有颜色，可用活性炭脱色。

②血清：静脉采血后离心沉淀，分离血清备用。

样品采取时应注意的事项：①应当无化学污染或残渣，轻微的污染也会产生错误的结果；②样品不能用水冲洗，可能除去残毒；水可污染样品；③样品保存条件：组织样品，应在冰冻条件下送往实验室；血清和血液样品，不应冰冻，但可低温保存；④样品内不要加防腐剂或福尔马林，除非有特殊原因应加以说明；

⑤样品应注明畜主姓名、畜别或号数、死亡日期、取料日期、送检要求及送检单位等。

（4）.操作：

取滤液（或血清）1到2毫升于试管中加对氨基苯磺酸溶液及α—萘胺溶液各数滴，如有亚硝酸盐立即出现紫红色。

（二）：氢氰酸及氰化物定性检验

1.普鲁士兰法：本法是检验氰化物的特效反应方法，灵敏度高（1：50000）。

（1）.原理：检材中的氰化物遇酸分解出氢氰酸，氰离子在碱性溶液中与亚铁离子作用，生成亚铁氰化钠（钾），在酸性溶液中与高铁离子化合，生成亚铁氰化铁（普鲁士兰）。

（2）.试剂：

（3）.检材：胃内容物、呕吐物、剩余饲料、血液，为最好的检材。

（4）.操作：

取检材5到10克切碎，置于三角瓶中，加适量水调成糊状，加入几滴10%的盐酸。取滤纸一小方块在其上滴加20％硫酸亚铁2滴及10％氢氧化钠（钾）2滴，将此滤纸覆盖三角瓶口。在瓶底缓缓加热，候有蒸汽上冒，取下滤纸，在滤纸上滴加10%的盐酸及5％三氯化铁，若出现兰色斑或兰绿色斑者，表示有氰离子的存在，前者含量较多，后者含量较少。有时反应不明显，须放置12小时后，兰色反应才出现。

2.苦味酸试纸法

（1）原理：氰化物与酸性条件下，温热生成氢氰酸，遇碳酸钠生成氰化钠，再和苦味酸作用生成异性紫酸钠，成玫瑰红色。

（2）试剂：蒸馏水，苦味酸试纸条，10%碳酸钠溶液，10%酒石酸溶液。

（3）操作：取样拼10g，至於125ml三角瓶中，加蒸馏水10-15ml，浸没样品，取大小与三角瓶口适合的中间带有一小孔的橡皮赛，孔内塞入内径

0.5-0.7cm的玻璃管，管内悬苦味酸试纸条，临用时滴一滴10%的碳酸钠溶液使之湿润。像三角瓶中加10%酒石酸溶液5ml，立即塞上带苦味酸试纸的塞，置40-50度的水浴上加热30-40min，观察试纸颜色。

3.氢氰酸及氢化物快速检验

直接取检样5-10g切细，放在小三角瓶内，加水成粥状，并加酒石酸使呈酸性，立即在瓶口上盖以硫酸亚铁-氢氧化钠试纸，然后用小火缓缓加热，带沸腾后去火，取下试纸，进入稀盐酸中。

三、实验方式与分组要求：

老师现场指导和学生亲自操作相结合，依据动物数量分组。要求每组具体分工，相互配合完成实验。

四、实验动物、实验材料与操作：

鸡、兔、犬等动物均可（病例剖检、实验室化验等）；每组1-2只。

注意化验方法及仪器的使用，如动物死亡，注意观察病理学变化。

五、注意事项