化妆品卫生规范微生物

微生物的有毒代谢产物可使人中毒。 微生物的有毒代谢产物可使人中毒。 即使污染的微生物被杀灭， 即使污染的微生物被杀灭，其残存的菌酶也 会引起产品变质， 会引起产品变质，变质时分解的某些组分可 对皮肤产生刺激作用。 对皮肤产生刺激作用。 因此化妆品的微生物污染不仅影响化妆品的 质量，而且影响产品的使用安全。 质量，而且影响产品的使用安全。对化妆品 进行微生物检验是十分必要的。 进行微生物检验是十分必要的。
首先选取平均菌落数在30 首先选取平均菌落数在 个～300 个之间 的平皿，作为菌落总数测定的范围。 的平皿，作为菌落总数测定的范围。当只 有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时， 有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时， 即以该平皿菌落数乘其稀释倍数 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30 若有两个稀释度，其平均菌落数均在 个之间， 个～300 个之间，则应求出两菌落总数之 比值来决定，若其比值小于或等于2， 比值来决定，若其比值小于或等于 ，应报 告其平均数，若大于2 告其平均数，若大于 则报告其中稀释度较 低的平皿的菌落数
膏、霜、乳剂半固体状样品 亲水性的样品：称取10g，加到装有玻璃珠 亲水性的样品：称取 ， 灭菌生理盐水的三角瓶中， 及90mL灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振 灭菌生理盐水的三角瓶中 荡混匀，静置15min。用其上清液作为 荡混匀，静置 。 1:10 的检液。 的检液。 疏水性样品：称取10g，放到灭菌的研钵中， 疏水性样品：称取 ，放到灭菌的研钵中， 灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状， 加10mL 灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状， 再加入10mL 灭菌吐温 ，研磨待溶解后， 灭菌吐温80，研磨待溶解后， 再加入 灭菌生理盐水， 加70mL 灭菌生理盐水，在40℃～44℃水 ℃ ℃ 浴中充分混合，制成1： 检液。 浴中充分混合，制成 ：10 检液。
供检验样品，应严格保持原有的包装状态。 供检验样品，应严格保持原有的包装状态。 容器不应有破裂，在检验前不得打开， 容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止 样品被污染。 样品被污染。 接到样品后，应立即登记，编写检验序号， 接到样品后，应立即登记，编写检验序号， 并按检验要求尽快检验。如不能及时检验， 并按检验要求尽快检验。如不能及时检验， 样品应放在室温阴凉干燥处， 样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷 冻。
用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大 用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5 倍的放大镜检查，以防遗漏。 倍～10 倍的放大镜检查，以防遗漏。记下 各平皿的菌落数后， 各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿 生长的平均菌落数。 生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的 菌落或花点样菌落蔓延生长时， 菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜 计数。若片状菌落不到平皿中的一半， 计数。若片状菌落不到平皿中的一半，而其 余一半中菌落数分布又很均匀， 余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半 个平皿菌落计数后乘以2， 个平皿菌落计数后乘以 ，以代表全皿菌落 数。
菌落总数
菌落总数（ 菌落总数（Aerobic bacterial count）是指 ） 化妆品检样经过处理， 化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后 如培养基成分、培养温度、培养时间、 （如培养基成分、培养温度、培养时间、 pH 值、需氧性质等）， （1mL）检样中 需氧性质等）， ），1g（ ） 所含菌落的总数。 所含菌落的总数。所得结果只包括一群本方 法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落 总数。 总数。 测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程 是对样品进行卫生学总评价的综合依据。 度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。
操作步骤
为便于区别化妆品中的颗粒与菌落， 为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每 100mL 卵磷脂吐温 营养琼脂中加入 卵磷脂吐温80 1mL0.5％的TTC 溶液，如有细菌存在，培养 溶液，如有细菌存在， ％ 后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。 后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。
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菌落计数方法
操作步骤
将融化并冷至45℃ 将融化并冷至 ℃～50℃的卵磷脂吐温 营 ℃的卵磷脂吐温80 养琼脂培养基倾注到平皿内，每皿约15mL， 养琼脂培养基倾注到平皿内，每皿约 ， 随即转动平皿， 随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均 待琼脂凝固后，翻转平皿， 匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，置 36℃±1℃培养箱内培养 ℃ ℃培养箱内培养48h±2h。另取一个 ± 。 不加样品的灭菌空平皿，加入约15mL 卵磷 不加样品的灭菌空平皿，加入约 脂吐温80 营养琼脂培养基，待琼脂凝固后， 脂吐温 营养琼脂培养基，待琼脂凝固后， 翻转平皿， 翻转平皿，置36℃±1℃培养箱内培养 ℃ ℃ 48h±2h，为空白对照。 ± ，为空白对照。
化妆品卫生规范
微生物检验方法
四川省疾病预防控制中心 微生物检验所 赖发伟
化妆品微生物污染
化妆品卫生微生物指标是评价化妆品成品及 原料中的微生物质量极其对人类健康和化妆 品质量影响的重要内容。 品质量影响的重要内容。 化妆品受微生物污染后可使化妆品的色、 化妆品受微生物污染后可使化妆品的色、形、 气味等发生变化，品质下降。 气味等发生变化，品质下降。 致病菌的污染可导致人体健康损害， 致病菌的污染可导致人体健康损害，如化脓 性细菌污染可引起皮肤和眼部的感染。 性细菌污染可引起皮肤和眼部的感染。当人 体抵抗力低时， 体抵抗力低时，某些非病原菌或条件致病菌 也会引起感染。 也会引起感染。
油性液体样品，取样品 油性液体样品，取样品10mL，先加 ，先加5mL 灭菌液体 石蜡混匀， 灭菌的吐温80， 石蜡混匀，再加10mL灭菌的吐温 ，在40℃～ 灭菌的吐温 ℃ 44℃水浴中振荡混合 ℃水浴中振荡混合10min，加入灭菌的生理盐水 ， 75mL（在40℃～44℃水浴中预温），在40℃～ ），在 ℃ （ ℃ ℃水浴中预温）， 44℃水浴中乳化，制成 ：10 的悬液。 ℃水浴中乳化，制成1： 的悬液。 极性溶剂， 非极性溶剂， （水—极性溶剂，液状石蜡 非极性溶剂，吐温 极性溶剂 液状石蜡—非极性溶剂 吐温80— 非离子型表面活性剂 ，分子中一端是亲水基团 ， 常用作增溶剂和油／ 一端是亲油基团 ，常用作增溶剂和油／水型乳化剂 等）
若所有稀释度的平均菌落数均大于300 个， 若所有稀释度的平均菌落数均大于 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍 数报告之 若所有稀释度的平均菌落数均小于30 若所有稀释度的平均菌落数均小于 个， 则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍 数报告之
菌落计数的报告，菌落数在 以内时， 菌落计数的报告，菌落数在10 以内时，按 实有数值报告之，大于100 时，采用二位有 实有数值报告之，大于 效数字，在二位有效数字后面的数值， 效数字，在二位有效数字后面的数值，应以 四舍五入法计算。 四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个 可用10 的指数来表示。 数，可用 的指数来表示。在报告菌落数 不可计” 应注明样品的稀释度。 为“不可计”时，应注明样品的稀释度。
变化
如检出粪大肠菌群或其它致病菌， 如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发 出之日起该菌种及被检样品应保存一个月。
供检样品的制备
液体样品 水溶性的液体样品，可量取10mL 加到 水溶性的液体样品，可量取 90mL 灭菌生理盐水中，如样品少于 灭菌生理盐水中，如样品少于10mL， ， 仍按10 倍稀释法进行。如为5mL 则加到 仍按 倍稀释法进行。如为 45mL 灭菌生理盐水，混匀后，制成 ：10 灭菌生理盐水，混匀后，制成1： 检液。 检液。
化妆品微生物污染
化妆品卫生微生物指标是评价化妆品成品及 原料中的微生物质量极其对人类健康和化妆 品质量影响的重要内容。 品质量影响的重要内容。 化妆品受微生物污染后可使化妆品的色、 化妆品受微生物污染后可使化妆品的色、形、 气味等发生变化，品质下降。 气味等发生变化，品质下降。 致病菌的污染可导致人体健康损害， 致病菌的污染可导致人体健康损害，如化脓 性细菌污染可引起皮肤和眼部的感染。 性细菌污染可引起皮肤和眼部的感染。当人 体抵抗力低时， 体抵抗力低时，某些非病原菌或条件致病菌 也会引起感染。 也会引起感染。
培养基
卵磷脂、吐温 卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基 营养琼脂培养基 成分： 成分： 蛋白胨 20g 牛肉膏 3g 氯化钠 5g 琼脂 15g 卵磷脂 1g（两性离子型表面活性剂 ） （ 吐温80 吐温 7g 蒸馏水 1000mL
操作步骤
用灭菌吸管吸取1： 稀释的检液2mL，分 用灭菌吸管吸取 ：10 稀释的检液 ， 别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。另 别注入到两个灭菌平皿内，每皿 。 注入到9mL 灭菌生理盐水试管中 取1mL 注入到 注意勿使吸管接触液面），更换一支吸管， ），更换一支吸管 （注意勿使吸管接触液面），更换一支吸管， 并充分混匀，制成1：100 检液。吸取2mL， 并充分混匀，制成 ： 检液。吸取 ， 分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。 分别注入到两个灭菌平皿内，每皿 。 如样品含菌量高，还可再稀释成1： 如样品含菌量高，还可再稀释成 ：1000， ， 1：10000，……等，每种稀释度应换 支 ： ， 等 每种稀释度应换1 吸管。 吸管。
若只有一个样品而同时需做多种分析， 若只有一个样品而同时需做多种分析，如细 毒理、化学等， 菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品做 细菌检验，再将剩余样品做其它分析。 细菌检验，再将剩余样品做其它分析。 在检验过程中， 在检验过程中，从打开包装到全部检验操作 结束，均须防止微生物的再污染和扩散. 结束，均须防止微生物的再污染和扩散 所用器皿及材料均应事先灭菌， 所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应 在无菌室内进行，或在相应条件下， 在无菌室内进行，或在相应条件下，按无菌 操作规定进行。 操作规定进行。
化妆品微生物指标
菌落总数 粪大肠菌群 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 霉菌和酵母菌
化妆品的微生物指标要求
眼部化妆品及口唇等粘膜用化妆品以及婴儿和儿 童用化妆品菌落总数不得大于500CFU／mL 或 童用化妆品菌落总数不得大于 ／ 500CFU／g。 ／ 。 其它化妆品菌落总数不得大于1000CFU／mL 或 其它化妆品菌落总数不得大于 ／ 1000CFU／g。 ／ 。 每克或每毫升产品中不得检出粪大肠菌群、 每克或每毫升产品中不得检出粪大肠菌群、铜绿 假单胞菌和金黄色葡萄球菌。 假单胞菌和金黄色葡萄球菌。 化妆品中霉菌和酵母菌总数不得大于100CFU／ 化妆品中霉菌和酵母菌总数不得大于 ／ mL 或100CFU／g。 ／ 。
若所有稀释度的平均菌落数均不在30 若所有稀释度的平均菌落数均不在 个～ 300 个之间，其中一个稀释度大于 个之间，其中一个稀释度大于300 个， 而相邻的另一稀释度小于30 个时， 而相邻的另一稀释度小于 个时，则以接近 30 或300 的平均菌落数乘以稀释倍数报告之 若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每g 若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每 或每mL 小于 小于10CFU（稀释倍数）。 或每 （稀释倍数）。
固体样品 称取10g，加到 灭菌生理盐水中， 称取 ，加到90mL 灭菌生理盐水中，充 分振荡混匀，使其分散混悬，静置后， 分振荡混匀，使其分散混悬，静置后，取上 清液作为1： 的检液。 清液作为 ：10 的检液。 如有均质器，上述水溶性膏、 粉剂等， 如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等， 可称10g 样品加入90mL灭菌生理盐水，均 灭菌生理盐水， 可称 灭菌生理盐水 质1min～2min；疏水性膏、霜及眉笔、口 ～ ；疏水性膏、霜及眉笔、 红等， 样品， 灭菌液体石蜡， 红等，称10g 样品，加10mL灭菌液体石蜡， 灭菌液体石蜡 10mL 吐温 ，70mL 灭菌生理盐水，均质 吐温80， 灭菌生理盐水， 3min～5min。 ～ 。
化妆品微生物检验方法 化妆品微生物检验方法
样品的采集及注意事项
所采集的样品，应具有代表性， 所采集的样品，应具有代表性，一般视每批 化妆品数量大小， 化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装 单位。检验时， 单位。检验时，应分别从两个包装单位以上 的样品中共取10g 或10mL。包装量小于 的样品中共取 。包装量小于20g 的样品，采样量可适当增加样品包装数量。 的样品，采样量可适当增加样品包装数量。