人核转录因子肽(NF-κBp65)操作步骤
人类防御素β-1、β-2和核转录因子-κBp65、在某些红皮病皮损中的表达的开题报告

人类防御素β-1、β-2和核转录因子-κBp65、在某些红皮病皮损中的表达的开题报告背景:
红皮病是一类自身免疫性疾病,其发病机制尚未完全阐明。
人类防御素(HBD),是一种小分子抗菌肽,具有广谱杀菌、抑菌作用。
它的三个亚型,分别为HBD1、HBD2和HBD3,均在人类皮肤表皮中表达。
同时,核转录因子-κBp65(NF-κBp65),是介导炎症反应和免疫调节的重要分子。
前人研究表明,HBD的表达受到NF-κBp65的调控。
因此,本研究旨在探究HBD1、HBD2和NF-κBp65在某些红皮病皮损中的表达情况,以期了解它们在红皮病的发病机制中的作用。
方法:
选取若干例红皮病患者的皮损组织,采用免疫组化技术检测HBD1、HBD2和NF-κBp65的表达情况。
同时,选取同期正常人群的皮肤组织作为对照,进行对比分析。
预期结果:
预计在红皮病的皮损中,HBD1、HBD2和NF-κBp65的表达会有所改变,可能会出现上调或下调的情况。
通过对比正常人群的皮肤组织,可以初步了解HBD和NF-κBp65在红皮病发病机制中的作用。
意义:
本研究可以为进一步研究红皮病的发病机制提供一定的参考依据,为对红皮病的早期诊断和治疗提供理论支持。
同时,在深入了解HBD1、HBD2和NF-κBp65的调控机制的基础上,可以为研发新型红皮病治疗药物提供一定的指导作用。
核因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒说明书

核因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒说明书elisa酶联免疫试剂盒上海樊克生物科技有限公司专业供应ELISA试剂盒;人ELISA试剂盒;大鼠ELISA试剂盒;小鼠ELISA试剂盒;兔ELISA试剂盒;猪ELISA试剂盒;牛ELISA试剂盒;山羊ELISA试剂盒;鸡ELISA试剂盒;核因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒说明书核因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。
1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。
尽可能的不要使用溶血或高血脂血。
如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。
人白细胞抗原ELISA 检测试剂盒不要在37℃或更高的温度加热解冻。
应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。
稀释前将标准品振荡混匀。
2.洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。
1.蒸馏水。
2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3.振荡器及磁力搅拌器等。
elisa酶联免疫试剂盒安全性1.避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
Handling Precautions1 reagents should label storage instructions, return to room temperature before use. The standard should be discarded after thinning, can not be saved.No 2 in the experiment of the plate should be immediately put back the bag, sealed to prevent spoilage.3 no other reagents should be packaged or covered. Do not mix different batches of reagents. Shelf life before use.4 using disposable suction head to avoid cross contamination, absorb the stop solution and the substrate A, B liquid, avoid using pipette with metal parts.Plastic container configuration using a clean washing liquid 5. All samples of ingredients and mix well before use in the kit.6 washing microtiter plates should be fully taken will not dry, absorbent paper directly into the water hole in the standard enzyme reaction.The 7 substrates of A should be volatile, avoid long time to open the lid. The B substrate is sensitive to light, avoid long time exposure to light. Avoid hand contact, toxic. After completion of the experiment should be immediately read od.8 add reagents should be consistent in order to ensure that all reaction plate hole incubation time.9 in accordance with the amount of liquid and the sequence of instructions indicated time, the operation of the incubation.核因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒说明书Operation steps1 before use, all reagents fully mixed. Do not allow liquid to produce a large number of bubbles, so as to avoid adding a large number of bubbles, resulting in the addition of the error.2 according to the number of samples to be measured and the number of standard products to determine the number of required. Each standard and blank hole is recommended to do the hole. Each sample can be made according to its own quantity, and can be used as a hole in the hole.3 to join the dilution of the standard 50ul in the reaction hole, to add the sample to be measured in the reaction hole 50ul. The biotin labeled antibody was immediately added to the 50ul. Cover the membrane plate, gently oscillating mixing, 37 degrees Celsius incubation 1 hours.4 left hole liquid, each hole filled with washing liquid, oscillating 30 seconds off the washing liquid, pat dry with absorbent paper. Repeat this operation 3 times. If the washing machine with washing, washing times increased once.5 each hole to join 80ul affinity chain enzyme -HRP, gently oscillating mixing, 37 degrees Celsius incubation 30 minutes.6 left hole liquid, each hole filled with washing liquid, oscillating 30 seconds off the washing liquid, pat dry with absorbent paper. Repeat this operation 3 times. If the washing machine with washing, washing times increased once.7 each hole to join the substrate A, B each 50ul, gently oscillating mixing, 37 degrees Celsius incubation 10 minutes. Avoid light.8 remove the enzyme labeled plate, quickly join the 50ul terminator, add the end of the liquid should be measured immediately after the results.9 OD value at the wavelength of 450nm was measured by hole.limitThe result of the above 6 standard is nonlinear, and the result can not be obtained accurately according to the standard curve.核因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒说明书试剂盒性能1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。
nf-κbp65抗体

NF-κB p65抗体H, human; M, mouse; R, rat.本NF-κB p65抗体(NF-κB p65 antibody)为进口分装,用人工合成的人NF-κB p65氨基端(N-terminal)的一段多肽进行适当修饰后免疫rabbit,然后用protein A和抗原多肽亲和柱经过两步纯化而得到的高纯度抗体。
NF-κB是一种常见的转录因子,可以被炎症因子、生长因子或趋化因子等激活。
常见的炎症因子(包括Interleukin-1 和TNF-α等)都可以激活NF-κB。
NF-κB由两类亚基形成同源或异源二聚体。
一类亚基包括p65(也称RelA)、RelB和C-Rel;另一类亚基包括p50和p52。
最常见的NF-κB亚基组成形式为p65/p50或p65/p65。
NF-κB未被激活时和IκB-α形成一个复合物,分布在细胞浆中。
在炎症因子、生长因子或趋化因子等可以激活NF-κB的刺激存在的情况下,IκB-α会在Ser32和Ser36被磷酸化,随后被泛素-蛋白酶体途径降解。
NF-κB和IκB-α解聚后,其核定位序列被暴露,从而被转运到细胞核内促进NF-κB依赖的基因转录。
通过免疫染色检测NF-κB的主要亚基p65是否被转移到细胞核内,就可以判断NF-κB是否被激活。
或者提取细胞核蛋白通过Western检测细胞核内p65是否增加,也可以判断NF-κB 是否被激活。
本NF-κB p65抗体仅识别p65,不识别RelB、C-Rel、p50和p52。
配套提供了Western一抗稀释液,可以用于Western检测时的一抗稀释。
):保存条件:NF-κB p65抗体-20℃保存,Western一抗稀释液-20℃或4℃保存,一年有效。
注意事项:对于本抗体,Western检测时一抗要4℃缓慢摇动过夜,如果仅短时间与一抗孵育检测效果较差。
在Western实验后,请注意回收稀释的抗体。
回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。
肝癌组织中 NF-κBp65 的表达变化及意义

肝癌组织中 NF-κBp65 的表达变化及意义陈增银;赵业民;商和振;史光军【摘要】目的观察核转录因子( NF)-κBp65在肝癌患者癌组织中的表达变化,并探讨其意义. 方法收集经手术切除的肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织,采用免疫组化法检测三种组织中NF-κBp65 蛋白表达情况. 结果NF-κBp65蛋白在肝癌组织、癌旁组织、正常组织中的阳性表达率分别为60.67%、22.67%、12.00%,三组间两两比较,P均<0.05. HBsAg阳性与阴性肝癌组织中NF-κBp65 阳性表达率分别为64.44%、26.67%,二者比较,P<0.05. NF-κBp65蛋白阳性表达与肝癌患者病理分级、淋巴结转移有关(P均<0.05). NF-κBp65阴性表达的肝癌患者生存时间分布好于NF-κBp65阳性表达者,但两者生存率的差异无统计学意义( P>0.05). 结论 NF-κBp65在肝癌患者癌组织中表达明显升高,且HBsAg 阳性肝癌组织中的阳性表达率高于HBsAg 阴性肝癌组织, NF-κBp65可能参与了肝癌的发生、发展.%Objective To detect the expression changes of nuclear transcription factor ( NF)-κBp65 in the hepatocel-lular carcinoma ( HCC) tissues and to explore its clinical significance .Methods The expression of NF-κBp65 protein was detected by immunohistochemistry in the resected HCC tissues , adjacent tissues and normal liver tissues through sur-gery.Results The positive expression rates of NF-κBp65 protein in the HCC tissues, adjacent tissues and normal tissues were 60.67%, 22.67%and 12.00%, respectively.There were significant differences between each two groups (all P<0.05).The positive rates of NF-κBp65 in HCC tissues with positive or negative HBsAg were 64.44%and 26.67%, and the difference was statistically significant (P<0.05).The positive expression of NF-κBp65protein was related with patho-logical grade and lymph node metastasis (all P<0.05).The survival time distribution of NF-κBp65 negative group was better than that of the NF-κBp65 positive group, but the difference was not significant (P>0.05).Conclusions The ex-pression of NF-κBp65 was increased significantly in the carcinoma tissues of HCC patients , and the positive expression rate is high in HBV positive cancer tissues .NF-κBp65 may be involved in the occurrence and development of liver cancer .【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2015(055)045【总页数】3页(P8-10)【关键词】肝肿瘤;肝癌;核转录因子;核转录因子-κBp65【作者】陈增银;赵业民;商和振;史光军【作者单位】青岛市城阳区人民医院,山东青岛 266300;青岛市城阳区人民医院,山东青岛 266300;青岛市城阳区人民医院,山东青岛 266300;青岛市市立医院【正文语种】中文【中图分类】R735.7陈增银1,赵业民1,商和振1,史光军2(1青岛市城阳区人民医院,山东青岛266300;2青岛市市立医院) Expression changes of NF-κBp65 in hepatocellular carcinoma tissues and its clinical significanceCHENZeng-yin1, ZHAO Ye-min, SHANG He-zhen, SHI Guang-jun(1QingdaoChengyangPeople'sHospital,Qingdao 266300,China)Key words: liver neoplasms; liver carcinoma; nuclear transcription factor-κBp65肝细胞性肝癌 (HCC)是一种病死率较高的恶性肿瘤,该病的发生、发展是多基因作用、多因素影响、多个阶段递进形成的一种生物学过程。
核转录因子-κB与肝炎肝纤维化病理分期的相关性

核转录因子-κB与肝炎肝纤维化病理分期的相关性李伟伟;宋新文;王宏伟;申保生;王全楚【期刊名称】《中国免疫学杂志》【年(卷),期】2013(029)003【摘要】目的:研究慢性乙型肝炎肝纤维化患者肝组织中核转录因子κB-p65(NF-κBr65)与其病理分期的相关性.方法:选60例慢性乙型肝炎肝纤维化患者,行肝穿刺活组织检查,确定肝纤维化分期(S0-S4),运用免疫组化技术分别测定Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和NF-κBp65在不同病理分期肝纤维化组织中的分布与表达,明确其相关性,并进行统计学分析.结果:NF-κBp65的表达与肝纤维化分期(S)呈明显的正相关性,即S4>S3>S2>S1(S0) (P <0.01),且与Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA的表达呈正相关性(P<0.01).结论:NF-κBp65的表达增加与肝纤维化的发生发展有关,其机制可能与促进肝星状细胞(HSC)活化后表达α-SMA增加、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原等细胞外基质分泌增加有关.【总页数】4页(P251-254)【作者】李伟伟;宋新文;王宏伟;申保生;王全楚【作者单位】解放军第一五三中心医院感染科,郑州450002【正文语种】中文【中图分类】R575【相关文献】1.慢性乙型肝炎肝纤维化辨证分型与肝纤维化病理及血清学指标的相关性研究 [J], 马建红;焦亚龙;方朝义;王晓玲;杨丽;于文涛2.乙型肝炎病毒对不同ALT状态下慢性乙型肝炎患者肝功和肝纤维化以及肝脏病理分期的影响 [J], 高鹏;李俊峰;周伟;杨彦麟;毛小荣;陈琳;岳伟;张立婷3.74例慢性肝炎患者肝纤维化血清学指标与肝穿刺病理分期相关性分析 [J], 周青;黄启强;黄丽庆4.慢性病毒性肝炎肝纤维化的超声检测与病理分期的相关性 [J], 龚念梅5.乙型肝炎患者血清肝纤维化指标与肝穿活检病理分期(S)相关性分析 [J], 顾克凤;刘建军因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
建立NF-κB核转位的转基因细胞模型

建立NF-κB核转位的转基因细胞模型苑玉和;吴苗苗;刘岩;胡金凤;王宏旭;陈乃宏【摘要】目的建立NF-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)转基因细胞模型.方法RT-PCR方法扩增p65基因片段;分子克隆技术构建哺乳动物细胞表达载体;脂质体法转染不同细胞;Western blot验证蛋白表达;利用荧光可视化技术观察p65核转位的情况.结果成功获得与绿色荧光蛋白(GFP)融合的载体;并建立p65转基因细胞模型;转基因组中p65蛋白表达量明显高于对照组,给予LPS刺激BV-2后能够促进p65向细胞核转位;而转染后的PC12细胞,p65的核定位现象则呈现不均一性.结论成功建立p65转基因细胞模型,针对不同细胞建立的模型,可用于相关化合物的筛选.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2012(028)005【总页数】3页(P726-728)【关键词】NF-κB;p65;核转位;转基因;细胞模型;小胶质细胞【作者】苑玉和;吴苗苗;刘岩;胡金凤;王宏旭;陈乃宏【作者单位】天然药物活性物质与功能国家重点实验室,中国医学科学院药物研究所,北京协和医学院药物研究所,北京,100052;天然药物活性物质与功能国家重点实验室,中国医学科学院药物研究所,北京协和医学院药物研究所,北京,100052;天然药物活性物质与功能国家重点实验室,中国医学科学院药物研究所,北京协和医学院药物研究所,北京,100052;天然药物活性物质与功能国家重点实验室,中国医学科学院药物研究所,北京协和医学院药物研究所,北京,100052;天然药物活性物质与功能国家重点实验室,中国医学科学院药物研究所,北京协和医学院药物研究所,北京,100052;天然药物活性物质与功能国家重点实验室,中国医学科学院药物研究所,北京协和医学院药物研究所,北京,100052【正文语种】中文【中图分类】R329.2;R341.31;R394.2核转录因子-kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)是一种广泛表达并发挥重要作用的转录因子,具有调控细胞存活、增殖、分化等功能。
NF-κBp65和ICAM-1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其意义

NF-κBp65和ICAM-1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其意义李成;漆明;张敬;马爱玲【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2009(31)2【摘要】目的研究体内核转录因子NF-κBp65和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及意义.方法采用免疫组织化学染色法检测30例口腔鳞状细胞癌组织和10例正常成年人口腔黏膜组织的NF-κBp65蛋白及ICSM-1的表达水平.结果 (1)口腔鳞状细胞癌组织中NF-κBp65蛋白和ICAM-1表达水平均较正常口腔黏膜组织增强(P<0.001);(2)NF-κVp65蛋白表达和ICAM-1表达呈正相关(r=0.864,P=0.000).结论 NF-κVp65的激活导致口腔鳞状细胞癌患者体内ICAM-1表达增强,促进了机体自身细胞免疫抗肿瘤的作用,可能成为口腔鳞状细胞癌治疗的一个新靶点.【总页数】4页(P144-145,149,封3)【作者】李成;漆明;张敬;马爱玲【作者单位】宁夏医科大学附属医院口腔科,银川,750004;宁夏医科大学附属医院口腔科,银川,750004;宁夏医科大学附属医院口腔科,银川,750004;宁夏医科大学附属医院病理科,银川,750004;宁夏医科大学附属医院病理科,银川,750004【正文语种】中文【中图分类】R739.85【相关文献】1.NF-κBp65、 ICAM-1和sICAM-1在浆细胞性乳腺炎中的表达及意义 [J], 王华;倪青;高宇哲;陈华建2.NF-κBp65、COX-2和VEGF在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义 [J], 武彦昭;熊晨;王亚玲;王占龙;施惠晶3.Ezrin与NF-κBp65、ICAM-1在胃癌组织及区域转移淋巴结中的表达及意义 [J], 张文军;杨洪颖;申策;李茂恒;郑宏江;左燕红4.NF-κBp65和ICAM-1在口腔扁平苔藓中的表达及相关性 [J], 宫尚红;李成;张敬;漆明;王淑静;马爱玲5.热休克蛋白27与NF-κBp65在喉鳞状细胞癌中的基因表达及临床意义 [J], 刘凡理;何晓光;陈绍春;陈波蓓因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
NF-κB p65、IκBα、IL-1β mRNA在大鼠放射性肺损伤过程中的变化及意义

NF-κB p65、IκBα、IL-1β mRNA在大鼠放射性肺损伤过程中的变化及意义李其耕;邓永然;欧雪;刘文其;韦力【摘要】目的:探讨NF-κB p65、IκBα、白介素(IL)-1β mRNA在大鼠放射性肺损伤过程中的变化及意义.方法:将64只Sprague-Dawley雄性大鼠随机分成空白组和实验组.空白组不做任何处理,实验组予单次18 Gy照射,并于照射后2周、6周、12周、24周末取肺组织,苏木精—伊红(HE)染色、Masson染色观察右肺组织病理形态变化,采用样本碱水解法测定肺组织匀浆羟脯氨酸含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清炎症因子IL-1β水平,荧光定量PCR(qPCR)法检测NF-κB p65、IκBα、IL-1βmRNA相对表达量.结果:HE及Masson染色显示:空白组大鼠肺组织肺泡结构完好,无充血、渗出、水肿等,实验组大鼠照射后早期出现充血、水肿、胶原蛋白渗出、炎症细胞浸润、肺泡壁及肺泡间隔逐渐增厚,之后肺组织纤维化加重、肺泡腔变小、消失.实验组照射后6周、12周、24周的羟脯氨酸含量均明显高于空白组(均P<0.05).实验组大鼠照射后各时间点血清IL-1β水平、NF-κB p65、IL-1β mRNA相对表达量均高于空白组,而IκBα mRNA相对表达量低于空白组(P<0.05).实验组血清IL-1β水平、NF-κB p65、IL-1β mRNA相对表达量在照射后6周升到最高,之后逐渐回落,而IκBα mRNA相对表达量变化趋势相反.结论:早期放射性肺损伤NF-κB p65、IL-1β的mRNA表达明显上调,IκBα表达下调,抑制NF-κB p65、减轻炎症反应可能减缓放射性肺损伤.%Objective:To investigate the mRNA expressions of NF-κB p65,IκBα and IL-1β in radiation-induced lung injury rats.Methods:64 male Sprague-Dawley rats were randomly divided into a control group and an experimental group.Rats in the experimental group received 18 Gy irradiation to induce lung injury.After 2,6,12 and 24weeks,the lung tissue was excised and processed for hematoxylin-eosin (HE) staining and Masson staining.Hydroxyproline was measured using a method based on alkaline hydrolysis.The interleukin-1β (IL-1β) level in serum was examined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).The mRNA expressions of NF-κB p65,IκBα and IL-1β were determined by fluorescent quantitative PCR (qPCR).Results:Alveolar structure of lung tissue in the control group was intact without edema and exudation.Pathological changes in the lung tissue of all irradiated rats exhibited early hyperemia,edema,collagen deposition,inflammatory cell infiltration,thickened alveolar wall and alveolar septum,then aggravated pulmonary fibrosis and smaller alveolar space.The content of hydroxyproline was higher in the experimental group than that in the control group at 6,12 and 24 after radiation (P<0.05).Serum IL-1β level and the expressions of NF-κB p65 a nd IL-1β were increased,while the IκBα mRNA level was decreased in the experimental group at each time point,compared with the control group (P <0.05).IL-1β content in serum and NF-κB p65 and IL-1β mRNA levels in lung tissue reached the pick at week 6 of r adiation,then declined gradually,but the IκBα mRNA level showed the opposite trend.Conclusion:The mRNA expressions of NF-κBp65 and IL-1β were notably up-regulated and IκBα was down-regulated at the early stage of radiation-induced lung injury in rats.Inhibition of NF-κB p65 and inflammatory response might attenuate radiation-induced lung injury.【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2018(035)004【总页数】5页(P459-463)【关键词】大鼠;放射性肺损伤;炎症;NF-κB p65;调控【作者】李其耕;邓永然;欧雪;刘文其;韦力【作者单位】广西医科大学第二附属医院,南宁 530007;广西医科大学第二附属医院,南宁 530007;广西医科大学第二附属医院,南宁 530007;广西医科大学第二附属医院,南宁 530007;广西医科大学人体解剖学教研室广西再生医学重点实验室,南宁530021【正文语种】中文【中图分类】R965放射治疗是胸部恶性肿瘤治疗的重要手段之一,而胸部放疗引起的放射性肺损伤不仅降低了肿瘤局部控制率、患者远期生存率,而且降低了患者的生活质量。
NIBP和NF-κB p65在胃癌中的表达及其临床意义

NIBP和NF-κB p65在胃癌中的表达及其临床意义廖桂周【摘要】Objective To study the clinical value of NIBP (NIK-IKKβ scaffold protein) and NF-κB p65 (NF-κB nuclear factor p65) in gastriccancer.Methods Clinical data of 87 cases of patients with gastric cancer treated with surgical resection in our hospital from May 2012 to May 2015 were retrospectively analyzed. Gastric cancer specimens, carcinoma adjacent tissue and normal tissue were carried out immunohistochemical staining. Fluorescent PCR quantitative method and western blot method were used to test the expression of NIBP and NF-κB p65. Results There were statistical significance in the comparison of NIBP,NF-κB p65 mRNA expression, protein expression, positive rate of immunohistochemistry expression of gastric cancer tissue and adjacent tissue, normal tissue(P<0.05). Conclusion NIBP and NF-κB p65 are all highly expressed in gastric carcinoma. Reduction of activation of NF-κB p65 transduction pathway,Inhibition of NIBP expression can be used as the basis for the treatment of gastric cancer to conduct further in-depth study.%目的:研究NIBP(NIK-IKKβ支架蛋白)和NF-κB p65(NF-κB核转录因子p65)在胃癌中表达的临床价值。
脂溢性角化病病变组织NF-κB P65表达的变化及与炎症的相关性

脂溢性角化病病变组织NF-κB P65表达的变化及与炎症的相关性王成;杜镇;冯世军;王翠芹;王艳心;李保强【摘要】目的:探讨脂溢性角化病病变组织NF-κB P65表达的变化及与炎症的相关性.方法:采用Max VisionTM免疫组织化学染色法和HE染色分别检测77例脂溢性角化病病变组织、病变周围组织及10例正常皮肤组织中NF-κB P65的表达及炎症情况.结果:脂溢性角化病病变组织NF-κB P65的阳性表达率、伴炎症的比例分别为88.31%(68/77)和80.52%(62/77),均明显高于病变周围组织和正常组织(P<0.05).Spearman相关性分析显示,脂溢性角化病病变组织NF-κ B P65的阳性表达与炎症呈正相关关系(r=0.769,P<0.05).结论:NF-κB P65高表达和炎症可能在脂溢性角化病的发生发展过程中具有协同作用.【期刊名称】《承德医学院学报》【年(卷),期】2019(036)003【总页数】4页(P189-192)【关键词】脂溢性角化病;NF-κB P65;炎症【作者】王成;杜镇;冯世军;王翠芹;王艳心;李保强【作者单位】承德医学院附属医院,河北承德067000;承德医学院附属医院,河北承德067000;沧州市中心医院;承德医学院附属医院,河北承德067000;承德医学院附属医院,河北承德067000;承德医学院附属医院,河北承德067000【正文语种】中文【中图分类】R739.5脂溢性角化病(seborrheic keratosis,SK)又称老年疣、老年斑、基底细胞乳头瘤,是因角质形成细胞成熟迟缓所致,具体发病机制至今不明,是一种多见于老年人的良性肿瘤,但也存在恶变的可能。
NF-κB为核转录调节因子,有研究表明,NF-κB可通过持续活化促进肿瘤细胞增殖、减少其凋亡,NF-κB还可通过上调血管内皮生长因子促进血管新生,以及通过诱导基质金属蛋白酶的表达提高肿瘤细胞的浸润和转移能力,因此,NF-κB与肿瘤的发生、发展等多个环节有关[1]。
人核转录因子肽(NF-κBp65)操作步骤

人核转录因子肽(NF-κBp65)操作步骤人核转录因子肽(NF-κB p65)操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2400ng/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液1200ng/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液600ng/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液300ng/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液150ng/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。
测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
人胃癌组织中NF-κB-p65的表达及临床意义

人胃癌组织中NF-κB-p65的表达及临床意义李杨;宋军民;李晓晗;李岩【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》【年(卷),期】2016(025)011【摘要】目的研究人胃癌组织中NF-κB-p65的表达及其对临床病理特征的影响.方法应用免疫组织化学方法检测42例人胃癌石蜡包埋组织、12例癌旁石蜡包埋组织中NF-κB-p65在细胞质和细胞核的表达,分析其在胃癌组织中的表达与临床病理特征之间的相关性.结果人胃癌组织中NF-κB-p65在细胞质和细胞核表达均显著高于癌旁组织(P <0.001);人胃癌组织中NF-κB-p65在细胞质和细胞核表达呈显著相关(P <0.001),与肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移和肿瘤的大小呈显著相关(P<0.01).结论人胃癌组织中NF-κB-p65的表达上调,与胃癌临床进展密切相关.【总页数】4页(P1225-1228)【作者】李杨;宋军民;李晓晗;李岩【作者单位】中国医科大学附属盛京医院重症医学科,辽宁沈阳110004;中国医科大学附属盛京医院消化内科,辽宁沈阳110004;中国医科大学附属盛京医院病理科,辽宁沈阳110004;中国医科大学附属盛京医院消化内科,辽宁沈阳110004【正文语种】中文【中图分类】R735.2【相关文献】1.幽门螺杆菌阳性胃癌组织中RUNX3、NF-κB p65蛋白表达及临床意义 [J], 修丽娟;孙大志;刘宁宁;刘煊;陆烨;张映城;岳小强2.NF-κB、IκBα在胃癌组织中的表达及临床意义 [J], 李亚平;刘振胜;黄冠男;姜相君3.NF-κB p50和NF-κB p65在胃癌组织中的表达及临床意义 [J], 李燕雪;夏蕾;刘清华;刘莹4.NF-κB p50和NF-κB p65在胃癌组织中的表达及临床意义 [J], 李燕雪;夏蕾;刘清华;刘莹;5.AEG-1、NF-κB 在胃癌组织中的表达及临床意义 [J], 黄勇;伦增军;鲍广建;褚朋因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
人核因子κB(NF-κB)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

人核因子κB(NF-κB)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号:CSB-E12107h检测范围:0.32ng/mL -20ng/mL最低检测限:0.08ng/mL特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的NF-κB,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期:6个月预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中NF-κB 含量。
说明1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗NF-κB抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗NF-κB抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的NF-κB呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
2.标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)8.底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
心肺复苏患者NF—κB亚基P65、TNF—α的变化及相关性分析

心肺复苏患者NF—κB亚基P65、TNF—α的变化及相关性分析作者:夏金明赖登攀何旋芳来源:《中国现代医生》2018年第07期[摘要] 目的分析心肺复苏(cardiopulmonary resuscitation,CPR)患者心脏骤停(cardiac arrest,CA)时及自主循环恢复(restoration of spontaneous circulation,ROSC)后血浆核转录因子kappa B(nuclear factor kappa B,NF-κB)亚基P65、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)浓度的变化,并探讨两者的关系。
方法收集行CPR后ROSC并存活≥24 h 的 CA患者30例,分别于CA时、ROSC即刻和ROSC后2 h、8 h、12 h、24 h测定血浆NF-κB亚基P65、TNF-α水平,并进行相关性分析。
结果 CPR患者NF-κB亚基P65在ROSC即刻、2 h、8 h、12 h、24 h均高于CA时(P[关键词] 心脏骤停;心肺复苏;炎症反应;核转录因子kappa B[中图分类号] R459.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2018)07-0027-04[Abstract] Objective To analyze the plasma levels of NF-κB P65 and TNF-α in patients with cardiac arrest(CA)who underwent cardiopulmonary resuscitation(CPR) and had return of spontaneous circulation(ROSC),and investigate the correlation between them. Methods Medical records of 30 patients with CA who underwent CPR and had ROSC and survived more than 24 hours were collected,the plasma levels of NF-κB P65 and TNF-α were tested at CA, ROSC and 2 h,8 h,12 h,24 h after ROSC,and the correlation was analyzed. Results The plasma levels of NF-κB P65 at ROSC and 2 h,8 h,12 h,24 h after ROSC were higher than CA(P[Key words] Cardiac arrest;Cardiopulmonary resuscitation;Inflammatory reaction;NF-κB随着人们生活条件的不断提高,心脑血管病的发生率较前有了明显上升,CA也同时成为急诊比较常见的危重症之一,且发病年龄趋于年轻化。
p65分子量

p65分子量p65分子量是指p65蛋白的分子量,是研究细胞信号通路和炎症反应的重要指标之一。
全称为NF-κB p65亚单位,是NF-κB(核转录因子-κB)家族中的一员。
p65蛋白在不同种类的细胞中都可以被检测到,其分子量在不同的物种和细胞类型中有所差异。
下面我们来分步骤阐述p65分子量的相关知识。
一、p65蛋白的基本知识p65转录因子是一种核酸结合蛋白,也被称为RelA。
它是体内哺乳动物NF-κB家族的一个重要成员,可以诱导多种基因转录和表达。
p65蛋白在各种细胞中都存在,包括免疫细胞、血管内皮细胞、心肌细胞、肾细胞等。
p65蛋白是NF-κB转录因子的一个重要组成部分,是各种炎症反应、应激反应和细胞凋亡等重要生理和病理过程的关键分子。
二、p65分子量的测定方法目前,常用的测定p65分子量的方法主要有两种:SDS-PAGE和western blotting。
SDS-PAGE又称聚丙烯酰胺凝胶电泳,是一种常用的蛋白质分离技术。
在SDS-PAGE技术中,将样品中的蛋白质电泳到凝胶中,然后通过电泳移动,使蛋白质在凝胶中出现不同的带状分布。
通过比较不同蛋白质在凝胶中的迁移距离,可以大致确定其分子量。
Western blotting是一种蛋白质检测和定量分析的常用技术。
通过将蛋白质分离和电泳后,将其转移到聚丙烯酰胺膜上,然后用特异性的抗体针对目标蛋白进行检测,最后用化学发光或染色等方法对特异性信号进行定量分析。
通过这种技术,可以精确、快速地测定p65蛋白的分子量。
三、p65分子量的意义p65蛋白是NF-κB信号通路的一个重要调节因子,是激活NF-κB信号通路的一个重要初始因子。
研究表明,p65蛋白的高表达与多种炎症和癌症的发生、发展密切相关。
因此,了解p65分子量的变化可以帮助我们更好地研究和治疗这些疾病。
总之,p65分子量是研究NF-κB信号通路和炎症反应的重要指标之一,通过SDS-PAGE和Western blotting等技术可以快速测定其分子量,有助于深入研究p65蛋白的功能以及其在疾病发生、发展过程中的作用机制。
nf-κb p65 分子量

nf-κb p65 分子量NF-κB(核因子κB)是影响巨噬细胞、淋巴细胞等免疫细胞活性的一个蛋白质家族。
NF-κB家族的成员包括p65,p50,p52,RelB和c-Rel等,其中p65是最为广泛研究的分子。
NF-κB p65是一种转录因子,其分子量约为65kDa,由Rel家族蛋白和DNA结合而形成核因子。
它能够从细胞质转移到核内,调控多种基因的表达,如炎症因子(IL-1β、TNF-α、IL-6等)和凋亡相关基因(Bcl-2、Bcl-xL等)。
NF-κB p65的激活机制包括经典通路和非经典通路。
在经典通路中,其入口是IKK复合体(IKKα、IKKβ和IKKγ),而在非经典通路中,其入口是NIK和IKKα。
当受到某种外源性或内源性刺激,如生物毒素、氧化应激和细胞因子等,会引起IKK复合体通过磷酸化、泛素化和降解IkB蛋白,从而使p65能够释放并进入核内。
NF-κB p65具有多种生物学功能,如免疫调节、增殖调节、细胞生存、基因转录等。
在免疫调节方面,NF-κB p65能够诱导免疫细胞的分化、成熟和活化,并促进炎症反应、抗菌、抗病毒等免疫防御作用。
在增殖调节方面,NF-κB p65通过调控细胞凋亡和细胞周期,维持细胞增殖和组织再生的平衡。
在细胞生存方面,NF-κB p65能够保护细胞免受环境应激和恶性转化的影响,使其能够存活下去。
在基因转录方面,NF-κB p65能够调控多种溶血性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病等的基因表达,从而影响细胞功能与命运。
由于NF-κB p65在炎症、免疫和肿瘤等疾病中发挥着重要作用,研究其调控机制、功能调控及其抑制剂等已成为重要的研究领域。
同时,在药物开发和治疗方面,NF-κB p65也成为一个重要的靶点,有着广泛的临床应用前景。
甲状腺癌组织中NF-κB p65、NF-κB p50及HMGB1表达及意义

甲状腺癌组织中NF-κB p65、NF-κB p50及HMGB1表达及意义杜朝阳;陈燕玲;谌秋华【摘要】目的探讨甲状腺癌组织中核因子-κB (NF-κB) p65、NF-κB p50及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平及临床意义.方法选择解放军171医院2013年1月-2015年12月切取的甲状腺组织标本212例进行研究,其中甲状腺癌组织122例,甲状腺腺瘤组织30例,甲状腺肿组织30例,正常甲状腺组织30例,比较各组NF-κBp65、NF-κB p50及HMGB1表达,并分析其与甲状腺癌临床特征的关系,以及三者之间的相关性.结果甲状腺癌组、甲状腺腺瘤组和甲状腺肿组的HMGB1、NF-κB p50和NF-κB p65阳性率均高于正常甲状腺组(P<0.01),甲状腺癌组和甲状腺腺瘤组均高于甲状腺肿组(P<0.01),甲状腺癌组高于甲状腺腺瘤组(P<0.01).肿瘤直径≥1.0 cm和有淋巴结转移的甲状腺癌组织中NF-κB p65、NF-κB p50及HMGB1表达阳性率高(P<0.01,P<0.05).NF-κB p65、NF-κB p50及HMGB1三者间呈显著正相关(r=0.356、0.645和0.275,P<0.05).结论甲状腺癌组织中NF-κB p65、NF-κB p50及HMGB1均呈高表达,并且与肿瘤直径和淋巴结转移有关.%Objective To discuss expressions and clinical significances of nuclear factor-κB p65 (NF-κB p65),NF-κB p50 and high mobility group protein B1 (HMGB1) in thyroid carcinoma tissues.Methods A total of 212 sampies of thyroid tissues cut during January 2013 and December 2015 were recruited in the study,in which there were 122 cases of thyroid carcinoma tissues,30 cases of thyroid adenoma tissues,30 cases of goiter tissues and 30 cases of normal thyroid tissues.Expressions of NF-κB p65,NF-κB p50 and HMGB1 were compared in four groups,and their relationships with clinical featuresof thyroid carcinoma were analyzed,and correlations among NF-κBp65,NF-κB p50 and HMGB1 we re also analyzed.Results Positive rates of HMGB1,NF-κB p65 and NF-κB p50 in thyroid carcinoma,thyroid adenoma and goiter groups were significantly higher than those in normal thyroid group (P < 0.01);the positive rates in thyroid carcinoma and thyroid adenoma groups were significantly higher than those in goiter group (P <0.01);the positive rates in thyroid carcinoma group were significantly higher than those in thyroid adenoma group (P < 0.01).Positive rates of NF-κB p65,NF-κB p50 and HMGB1 expressions of thyroid carcinoma tissues with tumor diameter equal or larger than 1.0 cm and lymph node metastasis were higher(P < 0.01,P < 0.05).NF-κB p65,NF-κB p50 and HMGB1 showed significantly positive correlations with each other(r=0.356,0.645 and 0.275,P < 0.05).Conclusion Expressions of NF-κB p65,NF-κB p50 and HMGB1 in thyroid carcinoma tissues are higher,and the expressions are related to tumor diameter and lymph node metastasis.【期刊名称】《解放军医药杂志》【年(卷),期】2017(029)005【总页数】5页(P30-34)【关键词】甲状腺肿瘤;核因子-κB p50;核因子-κB p65;高迁移率族蛋白质类【作者】杜朝阳;陈燕玲;谌秋华【作者单位】332000江西九江,解放军171医院;332000江西九江,解放军171医院;332000江西九江,解放军171医院【正文语种】中文【中图分类】R736.1甲状腺癌是常见的内分泌系统恶性肿瘤,也是常见的头颈部恶性肿瘤,近年来在我国的发病率呈快速上升的趋势[1-7]。
TNFα激活NF-κB促进宫颈癌细胞的侵袭

TNFα激活NF-κB促进宫颈癌细胞的侵袭张丽瑞;李旭;王月玲;李琛【摘要】目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNFα)对人宫颈癌细胞HeLa侵袭能力的影响及其分子机制.方法5ng/mL TNFα处理HeLa细胞,体外侵袭转移实验观察TNFα诱导后细胞的侵袭能力;免疫荧光及蛋白印迹观察核转录因子-κB p65(NF-κB p65)的定位及表达,蛋白印迹法检测基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达;使用NF-κB通路抑制剂Bay11-7082(2.5μmol/L)处理24h后TNFα(5ng/mL)诱导细胞,观察细胞侵袭能力及MMP9表达的改变.结果TNFα促进了HeLa细胞的侵袭,诱导NF-κBp65核转位激活,上调了MMP9的表达.TNFα促进HeLa细胞的侵袭能力及MMP9的表达可以被NF-κB抑制剂阻断.结论TNFα通过激活NF-κB信号促进了宫颈癌细胞侵袭,暗示NF-κB可能作为抑制宫颈癌进展的重要靶点.【期刊名称】《西安交通大学学报(医学版)》【年(卷),期】2013(034)005【总页数】4页(P568-571)【关键词】肿瘤坏死因子α;核转录因子κB;宫颈癌;侵袭;基质金属蛋白酶9【作者】张丽瑞;李旭;王月玲;李琛【作者单位】西安交通大学医学院第一附属医院妇产科,陕西西安,710061;西安交通大学医学院第一附属医院医学转化中心,陕西西安,710061;西安交通大学医学院第一附属医院妇产科,陕西西安,710061;西安交通大学医学院第一附属医院妇产科,陕西西安,710061【正文语种】中文【中图分类】R737.33尽管高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染起始了宫颈癌细胞的恶性转化[1],但免疫因素及肿瘤微环境在宫颈癌进展中也同样重要[2]。
肿瘤坏死因子-α(TNFα)是巨噬细胞分泌的起始免疫反应的促炎症因子。
虽然高剂量的TNFα具有细胞毒性作用,但证据表明慢性暴露于低剂量的TNFα可使细胞获得恶性潜能[3]。
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人核转录因子肽(NF-κB p65)操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2400ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液1200ng/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液600ng/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液300ng/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液150ng/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。
测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月__试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
96T使用目的:本试剂盒用于测定马血清、血浆及相关液体样本中麻疹病毒(MV)表达。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中马麻疹病毒(MV)表达。
用纯化的马麻疹病毒(MV)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中麻疹病毒(MV)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP 标记的麻疹病毒(MV)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中马麻疹病毒(MV)的存在与否。
试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 阳性对照 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 阴性对照 0.5ml×1 瓶4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。
然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。
测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
操作程序总结:计算和结果判定:试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15阴性判定:样品OD 值< 临界值(CUT OFF)者为麻疹病毒(MV)阴性阳性判定:样品OD 值≥ 临界值(CUT OFF)者为麻疹病毒(MV)阳性。
注意事项1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。
2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物请避光保存。
6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
终止液为2M 的硫酸,使用时必须注意安全。
保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月人核转录因子-κB亚基p65亲试剂盒使用说明书试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T100ng/L– 2400ng/L使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中核转录因子-κ B 亚基p65 亲的活性。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人核转录因子-κ B 亚基p65 亲水平。
用纯化的人核转录因子-κ B 亚基p65 亲和肽(NF-κ B p65)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入核转录因子-κ B 亚基p65 亲,再与HRP 标记的核转录因子-κ B 亚基p65 亲抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的核转录因子-κ B 亚基p65 亲呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人核转录因子-κ B 亚基p65 亲浓度。
试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(4800 ng/L) 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
鲑鱼补体蛋白3(C3)试剂盒操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
240μg/ml 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液120μg/ml 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液60μg/ml 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液30μg/ml 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液15μg/ml 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。
测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。