酪蛋白的制备(精)
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告一、实验目的本实验旨在通过化学合成法制备酪蛋白，了解酪蛋白的合成过程及影响因素，为进一步研究酪蛋白的性质和应用奠定基础。
二、实验原理酪蛋白是一种含磷蛋白质，广泛存在于哺乳动物的乳汁、骨骼和牙齿等组织中。
本实验采用化学合成法，以甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸和磷酸为原料，在一定条件下进行缩合反应，生成酪蛋白。
三、实验步骤准备试剂和仪器：甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、磷酸、pH试纸、烧杯、磁力搅拌器、温度计、滴定管等。
配制溶液：分别称取适量甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸和磷酸，溶解于去离子水中，配制成一定浓度的溶液。
调节pH：用NaOH或HCl溶液调节溶液的pH至7.0左右。
缩合反应：将甘氨酸溶液加入到缬氨酸和亮氨酸溶液中，置于磁力搅拌器上搅拌，并加热至一定温度（如60℃），滴加磷酸溶液，继续搅拌一定时间（如2小时）。
分离纯化：将反应液冷却至室温，用离心机进行离心分离，收集沉淀物。
然后用去离子水反复洗涤沉淀物，直至洗涤液的pH接近中性。
将洗涤后的沉淀物进行真空干燥，得到粗制酪蛋白。
检测与表征：采用红外光谱仪、紫外可见光谱仪等对粗制酪蛋白进行结构检测与表征。
四、实验结果与分析红外光谱分析：通过红外光谱分析，发现粗制酪蛋白在1650 cm-1附近出现了肽键的吸收峰，表明缩合反应成功生成了蛋白质。
此外，在3400 cm-1附近出现了-OH的伸缩振动峰，表明蛋白质分子中存在大量的亲水基团。
紫外可见光谱分析：通过紫外可见光谱分析，发现粗制酪蛋白在280 nm左右出现了特征吸收峰，表明蛋白质分子中存在共轭双键，具有较好的光学性质。
纯度与收率：通过滴定法测定粗制酪蛋白中目标产物的含量，计算出纯度和收率。
本实验中，所制备的酪蛋白纯度约为80%，收率约为60%。
影响因素分析：通过对实验过程中各因素的分析，发现pH值、温度、反应时间和原料配比对酪蛋白的合成具有重要影响。
当pH值为7.0、温度为60℃、反应时间为2小时、甘氨酸与缬氨酸和亮氨酸的摩尔比为1:1:1时，所制备的酪蛋白纯度和收率较高。
酪蛋白的制备[解析]
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酪蛋白的制备【实验目的】1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。
2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
【实验原理】牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。
利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。
【材料、试剂与器具】（一）材料新鲜牛奶（一）试剂1、95%乙醇 1 200mL2、无水乙醚 1 200mL3、0.2mol/L pH4.7醋酸——醋酸钠缓冲液 300ml先配A液与B液A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称NaAC·3H2O 54.44g，定容至2000ml。
B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。
取A液1770ml，B液1230ml混合即得Ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。
4、乙醇——乙醚混合液乙醇：乙醚=1 ：1（V/V）（二）器具1、离心机2、抽滤装置3、精密pH 试纸或酸度计4、 电炉5、烧杯6、温度计【操作步骤】（一）酪蛋白的粗提100mL 牛奶加热至40℃。
在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密pH 试纸或酸度计调pH 至4.7。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心15分钟（3000 r /min ）。
弃去清液，得酪蛋白粗制品。
（二）酪蛋白的纯化1、用水洗涤沉淀 3次，离心10分钟（3 000r/min ），弃去上清液。
2、在沉淀中加入30mL 乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。
最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。
3、将沉淀摊开在表面 上，风干；得酪蛋白纯品。
（三）准确称重，计算含量和得率。
含量：酪蛋白g/100 mL 牛乳（g%）100% 测得含量得率:理论含量式中理论含量为3.5g/100mL 牛乳。
【注意事项】1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液的等电点一定要准确。
牛乳中酪蛋白的制备ppt实用资料
4．将沉淀摊开在表面皿上，风干； 乙醇—乙醚混合液 (V/V=1∶1);无水乙醚 离心10min(3000r/min)弃去上清液，得酪蛋白粗制品。 1．将25mL牛奶加热至40℃。
用乙醇—乙醚混4合．液洗将沉淀沉1次淀。 摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。
实验七 牛乳中酪蛋白的制备
目的要求 学习从牛乳中分离纯化酪蛋白的原理和方法。
实验原理
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋 白是一些含磷蛋白质的混合物，。利用等电点时溶解度最 低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用 乙醇洗涤沉淀物，乙醚除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋 白。
5．准确称重，计算含量酪蛋白g/100mL牛乳（g%）,并和 利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4. 利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4. 5．准确称重，计算含量酪蛋白g/100mL牛乳（g%）,并和
乙离醇心— 10乙mi醚n(3混00合05r液/m．(inV)/弃准V=去1∶上确1清);称液无，水重得乙酪醚，蛋白计粗制算品。含量酪蛋白g/100mL牛乳（g%）,并和
1．将25mL牛奶加热至40℃。
用乙醇洗g涤/1沉0淀0物m，L乙牛醚除乳去脂相类杂比质较后便，可得求到纯出的酪实蛋白际。得率。
思考题
1．制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？
用牛乙乳醇 中洗主涤要沉的淀蛋物白，质2乙是.醚酪除蛋将去白上脂，类含述杂量质约悬后为便3浮5可g/L得液。到纯冷的却酪蛋至白。室温。离心10min(3000r/min)弃 去上清液，得酪蛋白粗制品。 5．准确称重，计算含量酪蛋白g/100mL牛乳（g%）,并和
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白是一种重要的乳制品蛋白质，具有丰富的营养价值和广泛的应用价值。
本实验旨在通过酪蛋白的制备过程，掌握蛋白质的提取和分离技术，以及相关的实验操作技能。
首先，我们准备了酪蛋白的原料——牛奶。
将牛奶倒入一个干净的容器中，加
入适量的酸，如柠檬酸或醋酸，搅拌均匀后静置一段时间，待牛奶凝结成块状物质。
接下来，我们使用过滤纸和漏斗将凝结后的牛奶过滤，将固体和液体分离。
过
滤后的液体即为含有酪蛋白的乳清，而固体则是乳清中的酪蛋白。
然后，我们将得到的固体酪蛋白进行洗涤和纯化。
将酪蛋白固体放入洁净的容
器中，加入适量的蒸馏水，轻轻搅拌后静置，使酪蛋白充分溶解。
然后，用过滤纸和漏斗将酪蛋白溶液过滤，去除杂质。
过滤后的酪蛋白溶液即为纯化后的酪蛋白。
最后，我们对酪蛋白进行干燥和凝固。
将酪蛋白溶液倒入浅盘中，放置在通风
干燥的环境中，待其自然干燥凝固。
干燥凝固后的酪蛋白即可得到。
通过本次实验，我们成功地制备了酪蛋白，并掌握了相关的实验操作技能。
酪
蛋白在食品工业、生物工程等领域有着广泛的应用，本实验的成功对我们今后的学习和科研工作具有重要意义。
希望通过不断的实践和探索，能够进一步提高我们的实验技能，为将来的科研工作打下坚实的基础。
实验5酪蛋白的制备
实验5酪蛋白的制备
酪蛋白的制备方法：
(1)新鲜牛奶脱脂，加酸(乳酸、乙酸、盐酸或硫酸)，将pH调至4.8，使干酪素微胶粒失去电荷而凝固沉淀。
用这种方法得到的干酪素称为酸酪蛋白，加酸的种类不同得到的酸酪蛋白却几乎毫无区别。
酸酪蛋白是白色至淡黄色粉末或颗粒，稍有奶臭和酸味。
在水中只是溶胀，若加入氨、碱及其盐时，则可分散溶解于水中。
可溶于强酸、二乙醇胺、吗啉、尿素、甲酰胺、热苯酚和土耳其红油。
(2)将牛奶与粗制凝乳酶作用，形成凝固沉淀物，称为粗制凝乳酶酪蛋白，呈白色粒状，几乎无味无臭，加热灼烧会产生特有的臭味。
凝乳酶酪蛋白比酸酪蛋白的灰分含量高。
酪蛋白是一种含磷钙的结合蛋白，对酸敏感，pH较低时会沉淀。
酪蛋白是哺乳动物包括母牛，羊和人奶中的主要蛋白质，又称：干酪素、酪朊、乳酪素。
α-酪蛋白是哺乳动物的主要蛋白，人乳中没有α-酪蛋白，以β-酪蛋白为主要酪蛋白形式。
酪蛋白对幼儿既是氨基酸的来源，也是钙和磷的来源，酪蛋白在胃中形成凝乳以便消化。
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告
实验目的，通过酸性条件下酪蛋白的沉淀和洗涤，掌握酪蛋白的制备方法，并
对其纯度进行初步检测。
实验原理，酪蛋白是存在于乳制品中的一种蛋白质，它在酸性条件下会发生沉淀。
在本实验中，我们将利用这一特性来制备酪蛋白。
首先将乳清酸化至pH4.6以下，使酪蛋白发生沉淀，然后进行洗涤和干燥，最终得到酪蛋白的粗品。
实验步骤：
1. 准备工作，取适量乳清，准备醋酸和蒸馏水。
2. 酸化，将乳清倒入容器中，加入适量的醋酸，搅拌均匀，使其pH值降至4.6以下。
3. 沉淀，将酸化后的乳清静置一段时间，观察到白色沉淀物即为酪蛋白。
4. 洗涤，用蒸馏水将沉淀物洗涤数次，去除余酸和杂质。
5. 干燥，将洗涤后的酪蛋白沉淀放置于通风处自然干燥，直至完全干燥。
实验结果，通过上述步骤，我们成功地制备出了酪蛋白的粗品。
经过初步检测，得到的酪蛋白呈现白色粉末状，无异味，初步符合酪蛋白的特征。
实验结论，本实验通过酸化乳清的方法，成功制备出了酪蛋白的粗品，并进行
了初步检测。
制备过程简单，操作方便，得到的酪蛋白粗品可用于后续的纯化和分析。
实验注意事项：
1. 实验过程中需注意安全，避免醋酸溅入眼睛或皮肤。
2. 实验操作需在通风处进行，避免吸入醋酸蒸气。
3. 酪蛋白粗品需储存在干燥通风处，避免潮湿和阳光直射。
通过本次实验，我们成功掌握了酪蛋白的制备方法，并对其纯度进行了初步检测。
这对我们进一步深入了解酪蛋白的性质和应用具有重要意义。
希望本实验能为相关研究和应用提供一定的参考价值。
酪蛋白的制备
酪蛋白的制备目的和要求学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。
原理鲜乳中蛋白质的含量为3.4（W/V）%，但因地因时而异，蛋白质含量夏天最低，而秋冬季高。
牛乳总蛋白的80%为酪蛋白。
实际上酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.6，利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH值调至4.6，酪蛋白就沉淀出来。
酪蛋白不溶于乙醇，利用这个性质用乙醇洗涤沉淀物从酪蛋白粗制品中除去脂类杂质。
仪器与试剂恒温水浴，离心机，精密试纸，布氏漏斗，抽滤瓶，温度计。
鲜牛奶，95%乙醇，无水乙醚，0.2mol/l pH4.6醋酸-醋酸钠缓冲液，乙醇-乙醚混合液（1:1 V:V）操作方法1. 将20ml牛乳放到50毫升烧杯中加热到40℃，在搅拌下慢慢加入预热到40℃的pH4.6的醋酸缓冲液20毫升，用精密pH试纸调pH至4.6；2. 将上述悬浮液冷却至室温，5000转/分离心5分钟，弃去上清液，得酪蛋白粗制品；3. 用无离子水洗涤沉淀3次，5000转/分离心5分钟，弃去上清液；4. 在沉淀中加入20毫升95%乙醇，搅拌片刻，将全部旋浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇-乙醚混合液洗涤两次，最后用乙醚洗沉淀两次，抽干；5. 将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品；6. 准确称量，计算含量和得率。
含量：酪蛋白g/100毫升牛乳（g%）得率：，式中理论含量为3.4g/100毫升。
酪蛋白含量与季节有关，另外在热处理乳过程中也有一些乳清蛋白沉淀出来，其沉淀量依热处理条件不同而有差异，因此测定出来的酪蛋白值可能要高于相应的实际值或理论值。
醋酸盐缓冲液母液：A：0.2mol/L醋酸液（11.5 ml，稀释至1000ml）B：0.2mol/L醋酸钠溶液（16.4g C2H3O2Na或27.2g C2H3O2Na·3H2O容至1000ml）。
酪蛋白的提取与测定
牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定一、实验目的1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使用4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度二、实验原理1、准备酪蛋白原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。
酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。
乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水和能力很强，分散性高，在乳中呈高分子状态。
本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。
2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理：大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。
但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。
3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。
当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。
在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。
三、实验器材与试剂1、制备酪蛋白：烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚2、紫外光吸收法：紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液3、考马斯亮蓝法：紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿牛血清白蛋白（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl四、实验步骤制备酪蛋白1、将20mL pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液预热至40℃2、将20mL牛奶加热至40℃，在搅拌下缓慢地加入20mL预热的pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3、用精密pH试纸调pH至4.7，可见溶液变为乳白色悬浮液4、待悬浮液冷却至室温，4000rpm离心5min，弃上清，得酪蛋白粗制品5、用蒸馏水洗沉淀3次，3000rpm离心5min，弃上清6、在沉淀中加入20mL95％乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤7、用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次（10ml/次），最后用乙醚洗涤沉淀2次（10ml/次），抽干8、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品9、准确称量，计算含量和得率紫外光吸收法1．取待测样品溶液置于的石英比色皿中，于分光光度计波长280nm和260nm，分别读取A280nm和A260nm，用生理盐水为比色空白对照。
牛乳中酪蛋白的制备
操作方法
1．将25mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、 醋酸缓冲液25mL。用精密试纸调pH。
2. 将上述悬浮液冷却至室温。离心10min(3000r/min)弃 去上清液，得酪蛋白粗制品。
3．用水洗沉淀两次，离心5min(3000r/min)，弃去上清液。
3．用乙醇洗沉淀1次，离心5min(3000r/min)，弃去上清 液。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀1次。最后用乙醚洗沉淀1次， 各离心5min(3000r/min) 。
离心10min(3000r/min)弃去上清液，得酪蛋白粗制品。
95%乙醇；乙醇—乙醚混合液 实验七 牛乳中酪蛋白的制备
g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。
(V/V=1∶1);无水乙醚
实验七 目的要求 学习从牛乳中分离纯化酪蛋白的原理和方法。
醋酸—醋酸钠缓冲液 利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.
纯牛奶(蒙牛) 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
在搅拌下慢慢加入预热至40℃、醋酸缓冲液25mL。
目的要求 学习从牛乳中分离纯化酪蛋白的原理和方法。
用乙醇—乙醚混合液洗沉淀1次。
目的要求 学习从牛乳中分离纯化酪蛋白的原理和方法。
将上述悬浮液冷却至室温。
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
4．将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。
5．准确称重，计算含量酪蛋白g/100mL牛乳（g%）,并和 g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。
思考题
1．制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？
谢谢观看
试剂和器材
5．准确称重，计算含量酪蛋白g/100mL牛乳（g%）,并和
3．用水洗沉淀两次，离心5min(3000r/min)，弃去上清液。
牛乳中酪蛋白的制备
目的要求
学习从牛乳中分离纯化酪蛋白的原理和方法。
实验原理
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。 35g/L 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白 ， 含量约为 35 g/L。 酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物 等电点为4 混合物， 酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。 利用等电点时溶解度最低的原理， 将牛乳的pH pH调至 利用等电点时溶解度最低的原理 ， 将牛乳的 pH 调至 酪蛋白就沉淀出来。 4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
离心注意事项： 离心注意事项：
1.样品倒入玻璃离心管不能太满； 1.样品倒入玻璃离心管不能太满； 样品倒入玻璃离心管不能太满
2.离心前玻璃离心管（套上塑料管套） 2.离心前玻璃离心管（套上塑料管套）放在 离心前玻璃离心管 天平上平衡 平衡好 天平上平衡好； 3.离心机中对称放置； 3.离心机中对称放置； 离心机中对称放置 4.接通电源前确认速度旋钮是否归零， 4.接通电源前确认速度旋钮是否归零，调节 接通电源前确认速度旋钮是否归零 定时旋钮设定时间，按开始键开始离心， 定时旋钮设定时间，按开始键开始离心， 缓慢调节速度至实际需要速度。 缓慢调节速度至实际需要速度。 5.等到离心机完全停止后，机盖取出离心管。 5.等到离心机完全停止后，机盖取出离心管。 等到离心机完全停止后
4．用95%乙醇洗沉淀1次，离心5min(3000r/min)，弃去上 95%乙醇洗沉淀1 乙醇洗沉淀 离心5min(3000r/min)， 清液。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀1 最后用乙醚洗沉淀1 清液。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀1次。最后用乙醚洗沉淀1 各离心5 洗涤试剂用量4毫升/ 次， 各离心5min(3000r/min) 。洗涤试剂用量4毫升/管 5．将沉淀摊开在培养皿上，电吹风吹干；得酪蛋白纯品。 将沉淀摊开在培养皿上，电吹风吹干；得酪蛋白纯品。 6．准确称重，计算含量酪蛋白g/100mL牛乳（g%）,并和 准确称重，计算含量酪蛋白g/100mL牛乳（g%） g/100mL牛乳 理论含量为3.5g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。 理论含量为3.5g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。 3.5g/100mL牛乳相比较
从牛奶中提取酪蛋白
实验二从牛奶中提取酪蛋白一、实验目的要求1.学习从牛乳中制备酪蛋白的方法。
2.了解从牛奶中制取酪蛋白的原理。
二、实验原理牛乳中的主要蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/100ml。
酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，相对密度1.25-1.31，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH值调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。
三、原料与器材鲜牛奶、恒温水浴锅、台式离心机、抽滤装置。
四、试剂1.95%乙醇2.无水乙醚3.0.2mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液A液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取NaAc.3H2O54.44g，定容至2000ml。
B液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取优级纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g，定容至1000ml。
取A液1770ml与B液1230ml混合即得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。
4.乙醇-乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（体积比）。
五、操作步骤1.将5ml牛奶置试管或小烧杯中，在水浴中加热至40℃，在搅拌下漫漫加入预热至40℃（应注意两种液体都应先预热至40℃再用），pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液5ml，用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7(用1%NaOH或10%醋酸溶液进行调整)。
观察牛奶开始有絮状沉淀出现后，保温一定时间使沉淀完全。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心分离8min（8000r/min）或15min（2000r/min），弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。
2.用蒸馏水洗涤沉淀3次（洗涤时将沉淀颗粒用干净吸管吹开或用毛细管的封闭一端搅开，充分洗涤），离心5min（12000r/min）或10min（3000r/min），弃去上清液。
3.在沉淀中加入3ml95%的乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次，最后用乙醚洗涤沉淀2次，抽干。
酪蛋白的制备
（3）加塞放置过夜，乳糖结晶析出，抽滤，用 95%乙醇洗涤产品。 （4） 乳糖成脎试验 取自制乳糖溶于少量水中，浓度约为5%，在试管 中加入1ml乳糖溶液，1ml苯肼试剂，摇匀，试管 口用棉花塞住，在沸水浴中加热，并不时振摇， 加热10～15分钟后，取出放置冷却，乳糖脎成结 晶析出。取少量乳糖脎在显微镜下观察其结晶形 态，可证实为乳糖。 ①苯阱试剂有毒，小心使用，勿触及皮肤，如触 及皮肤先用稀醋酸洗，再用水洗。（选做） （5）旋光法测定含量（选做） 见资料中nunai
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考 马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在 488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色 素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值 与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测 定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时 间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室 温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立， 试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵 敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量， 测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常 用的微量蛋白质快速测定方法。
4．计算酪蛋白的质量浓度和得 率
准确称量从牛奶中分离出的酷蛋白纯品。 (1)计算酪蛋白实际的质量浓度 实际质量浓度以1L，牛奶中酪蛋白的质 量(g)表示。 (2)计算得率 酪蛋白得率／％＝酪蛋白实际的质量浓度 /酪蛋白的理论质量浓度×100 式中：牛奶中酪蛋白的理论质量浓度为35g/L
5．酪蛋白纯度测定 － 考马斯亮蓝法
1 000µg／mL标准蛋 白液（mL） 蒸馏水（mL）
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告摘要本实验旨在探究酪蛋白的制备方法以及酪蛋白的功能。
通过不同的制备方法，得到不同形态的酪蛋白，并进行生化实验来验证其功能。
实验结果表明，通过不同方法制备的酪蛋白在功能上存在差异，且不同形态的酪蛋白具有不同的功能。
关键词：酪蛋白；制备方法；功能一、引言酪蛋白是牛乳中含量最多的蛋白质，为一种水溶性球形蛋白。
酪蛋白由几种不同的蛋白质组成，其中酪蛋白α和酪蛋白β为主要成分。
酪蛋白具有多种生物功能，如维持皮肤、毛发和指甲的健康，促进骨骼健康等。
因此，研究酪蛋白的制备方法以及其功能对于了解酪蛋白的生物学作用具有重要意义。
二、实验材料1.牛乳；2.酶（胃酸、胰蛋白酶）；3.氨基酸检测试剂盒；4.凝胶电泳试剂盒。
三、实验方法1.酸酶法制备酪蛋白（酪蛋白A）将1L牛乳加热至80°C，加入5mL1M HCl调节pH至4.6左右，搅拌30min。
冷却至室温后放置静置3h，用100μm滤网过滤得到酸性乳清。
乳清加入2mg/mL胃蛋白酶，在37°C下水浴搅拌4h，定时加酸至pH4.0，继续处理1h。
取出混浊的酪蛋白A沉淀；通过离心或过滤等方法，得到纯化后的酪蛋白A。
3.生化实验将纯化后的酪蛋白A和酪蛋白B溶解至同一浓度，进行氨基酸含量测定，比较两者的差异。
将酪蛋白A和酪蛋白B进行凝胶电泳，观察两者的分子量和运动轨迹的差异。
四、实验结果通过酸酶法制备的酪蛋白A表现为曲线状纤维丝状，胰蛋白酶法制备的酪蛋白B为球状结晶状，两者的形态差异明显。
通过氨基酸含量分析发现，酪蛋白A中含有较高含量的脯氨酸和苯丙氨酸，而酪蛋白B中则含有较高含量的谷氨酸和组氨酸。
凝胶电泳结果显示，酪蛋白A分子量大于酪蛋白B，且两者的运动轨迹存在明显差异。
五、实验讨论通过不同的制备方法制备的酪蛋白形态、氨基酸组成和分子量存在差异，这些差异可能影响酪蛋白的生物学作用。
例如，酪蛋白A中较高的脯氨酸和苯丙氨酸含量可能与其维持皮肤、毛发和指甲的健康有关。
酪蛋白的制备
实验45 酪蛋白的制备一、实验目的掌握从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。
二、实验原理酪蛋白是牛乳中主要的蛋白质，它在牛乳中的含量约为每升35克。
实际上酪蛋白不是一种简单的蛋白质，而是一些含磷蛋白的混合物，酪蛋白在其等电点时溶解很低，利用这一性质，将牛乳调到PH4.8，酪蛋白就可以从牛乳中分离出来。
酪蛋白不溶于乙醇，可利用此性质从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。
三、实验试剂与材料仪器（一）试剂1.牛乳2.醋酸钠缓冲液0.2M，PH4.63.乙醇（AR）95％4.乙醚（）AR5.乙醇-乙醚混合液（1：1体积比）（二）仪器1.1000C温度计；2.电炉；3.细布；4.玻璃大漏斗；5.布氏漏斗（5mm）；6.抽滤瓶(250ml);7.烧杯(500ml、100ml各一只)；8.PH试纸活酸度计；9.量筒(500ml、100ml各一只)；10.表面皿一块，玻棒一根；11.容量瓶(500ml一只)；12.托盘天平；13.分析天平；14.研钵一套（￠9cm）；15.离心机4000转/分；16.冰箱。
四、实验方法1.将100ml牛乳放到500ml烧杯中，加热到40℃，水浴控温。
再在搅拌下慢慢加入100ml 40℃左右醋酸缓冲溶液，调pH4.8左右，冷却至室温，（放至5分钟用细布过滤，收集沉淀）得酪蛋白粗品。
2.用蒸馏水洗去沉淀三次（每次30ml左右）。
搅碎离心10分钟，（3000转/分），弃去上清液。
3.将沉淀置于研钵中，渐加30毫升95%乙醇，静置片刻将此悬浮液倾于布氏漏斗中，抽滤，抽干后的制品移于小烧杯中，用乙醇-乙醚混合液洗二次（每次20毫升，洗一次，抽一次）最后用无水乙醚洗沉淀两次（每次10-20毫升），抽干。
4．将沉淀从布氏漏斗中移出，摊于表面皿上，烘干，得酪蛋白纯品。
5.称重计算含量和得率。
含量：酪蛋白克/100毫升牛奶（克%）得率：测得含量/理论含量×100%五.思考题1.等电点沉淀蛋白质的原理是什么？2.如果不用PH酸度计，用更简单的方法本实验是否也能进行？。
酪蛋白的制备3
酪蛋白的制备一，原理等电点沉淀（选择性沉淀）利用蛋白质在等电点时溶解度最低的性质。
注意：调节溶液到蛋白质等电点时，可以使蛋白质溶解度最低，但是并不意味着蛋白质会沉淀出来。
二，40℃水浴预热10分钟(HAC缓冲液同时预热)用滴管加入醋酸缓冲液约2ml(pH4.8)离心，10000转/分，5分钟。
1、布朗运动加速蛋白分子的碰撞2、等电点附近蛋白质的溶解度最低用4ml蒸馏水洗涤离心，10000转/分，5分钟除去沉淀中的可溶部分95%乙醇洗涤离心，10000转/分，5分钟除去沉淀中的脂类物质脱水乙醚2ml洗涤离心，10000转/分，5分钟进一步脱水0.1mol/L NaOH 2ml溶解酪蛋白是酸性蛋白质，溶解于碱性溶液中，方便下次双缩脲法测定其含量。
三，仪器操作和基本操作离心机操作的注意事项1.使用各种离心机时，必须事先在天平上精密地平衡离心管和其内容物，平衡时重量之差不得超过各个离心机说明书上所规定的范围，每个离心机不同的转头有各自的允许差值，转头中绝对不能装载单数的管子，当转头只是部分装载时，管子必须互相对称地放在转头中，以便使负载均匀地分布在转头的周围。
2.离心过程中不得随意离开，应随时观察离心机上的仪表是否正常工作，如有异常的声音应立即停机检查，及时排除故障。
离心时不准开盖，不准用手停止转头。
3.装载溶液时，要根据各种离心机的具体操作说明进行，根据待离心液体的性质及体积选用适合的离心管，有的离心管无盖，液体不得装得过多，以防离心时甩出，造成转头不平衡、生锈或被腐蚀，而制备性超速离心机的离心管，则常常要求必须将液体装满，以免离心时塑料离心管的上部凹陷变形。
每次使用后，必须仔细检查转头，及时清洗、擦干，转头是离心机中须重点保护的部件，搬动时要小心，不能碰撞，避免造成伤痕，转头长时间不用时，要涂上一层上光腊保护，严禁使用显著变形、损伤或老化的离心管。
四，思考1、请问用缓冲液、乙醚、乙醇洗涤沉淀的目的是什么？2.如何正确使用移液管量取溶液？3.使用离心机时有哪些注意事项？。
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告酪蛋白的制备实验报告一、引言酪蛋白是一种重要的蛋白质，在食品工业、医药领域和生物科学研究中都具有广泛的应用价值。
本实验旨在通过酪蛋白的制备过程，了解其制备原理和方法，并探究实验条件对酪蛋白产率的影响。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 牛乳：新鲜牛乳1000ml- 醋酸：纯醋酸100ml- 酪蛋白试剂：酪蛋白提取试剂盒2. 实验方法：- 步骤一：将1000ml牛乳倒入锅中，加热至80℃，保持温度10分钟。
- 步骤二：将100ml纯醋酸加入牛乳中，搅拌均匀。
- 步骤三：将混合液静置20分钟，待凝块形成。
- 步骤四：用纱布过滤凝块，收集蛋白质沉淀。
- 步骤五：将沉淀与酪蛋白试剂按比例混合，制备酪蛋白溶液。
三、实验结果与分析1. 实验结果：- 经过实验操作，成功制备了酪蛋白溶液。
- 蛋白质沉淀的收率为40%。
2. 实验分析：- 在实验过程中，加热牛乳能够破坏脂肪膜，使蛋白质易于析出。
- 醋酸的加入能够改变牛乳的酸碱度，促使酪蛋白凝聚成块。
- 过滤凝块时使用纱布能够有效分离酪蛋白沉淀与乳清。
四、实验讨论1. 实验条件对酪蛋白产率的影响：- 温度：在80℃下加热牛乳能够促进蛋白质的析出，但过高的温度会导致蛋白质变性，影响产率。
- 酸度：适量的醋酸能够使酪蛋白凝聚成块，但过多的醋酸会使酪蛋白溶解度增加，降低产率。
- 时间：静置时间过短，酪蛋白凝块未充分形成；静置时间过长，酪蛋白易被细菌污染，影响产率。
2. 酪蛋白的应用价值：- 食品工业：酪蛋白可用于制作乳制品、奶酪、酸奶等，增加产品的营养价值和口感。
- 医药领域：酪蛋白具有抗菌、抗炎、抗氧化等生物活性，可用于药物载体和医用材料的制备。
- 生物科学研究：酪蛋白在细胞培养、基因工程和生物学实验中具有重要作用，可用于细胞培养基的配方和蛋白质分离纯化。
五、实验总结通过本次实验，我们成功制备了酪蛋白溶液，并了解了酪蛋白的制备原理和方法。
实验条件对酪蛋白产率有一定影响，需要在适宜的温度、酸度和时间下进行操作。
牛乳中酪蛋白的制备实验报告
牛乳中酪蛋白的制备实验报告实验目的：掌握牛乳中酪蛋白的制备方法。
实验原理：牛乳中含有丰富的酪蛋白，可以通过调节pH值和添加酸性物质来使酪蛋白凝聚并沉淀。
实验器材与试剂：1. 牛乳2. 醋酸或柠檬汁3. pH试纸4. 试管或锥形瓶5. 酒精灯或电热板6. 离心机或漏斗和滤纸7. pH调节剂实验步骤：1. 取适量的牛乳倒入试管或锥形瓶中。
2. 添加少量的pH调节剂（醋酸或柠檬汁），同时观察试管中的液体颜色变化。
3. 使用pH试纸检测试管中的pH值，确保其达到需要的酸性条件。
4. 将试管（或锥形瓶）置于酒精灯或电热板上加热，加热至牛乳开始沸腾。
5. 烧热约5分钟后，关闭酒精灯或电热板，待试管中的液体冷却至室温。
6. 可选择使用离心机进行离心，或者使用漏斗和滤纸将液体过滤，得到沉淀。
7. 将沉淀储存在干燥的容器中，即可得到制备好的酪蛋白。
实验结果与分析：根据实验操作可以得到一定量的酪蛋白沉淀。
如果沉淀量较少，可能是因为pH值的调节不当或加热时间过短导致酪蛋白无法充分凝聚。
实验注意事项：1. 操作过程中要注意使用酒精灯或电热板时的安全问题，避免发生火灾或烫伤。
2. 操作时要注意保持试管或锥形瓶的干净，以避免其他杂质对实验结果的影响。
3. 在添加pH调节剂时应慎重，防止pH值过低或过高的情况发生。
4. 在离心或过滤沉淀时，要注意避免将沉淀溅出或损坏滤纸。
实验总结：通过本实验，我们成功地制备了牛乳中的酪蛋白。
实验的成功与否与调节pH值的准确性和加热时间的充分性有关。
这个实验方法可以用于其他酪蛋白的制备和分离过程中。
酪蛋白的制备实验报告
一、实验目的1. 了解酪蛋白的基本性质及其在牛奶中的存在形式。
2. 掌握从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。
3. 学习利用等电点沉淀法提取蛋白质的实验操作。
二、实验原理牛奶中的主要蛋白质为酪蛋白，其含量约为35g/L。
酪蛋白是一种含磷蛋白质的混合物，具有等电点4.7。
在等电点时，酪蛋白的溶解度最低，因此可以通过调节牛奶的pH值至4.7，使酪蛋白沉淀出来。
随后，通过洗涤、离心等操作，可以得到纯净的酪蛋白。
三、实验材料与试剂1. 材料：新鲜牛奶2. 试剂：- 95%乙醇- 无水乙醚- 0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液- 精密pH试纸或酸度计- 离心机- 抽滤装置- 电炉- 烧杯- 温度计四、实验步骤1. 酪蛋白粗提- 将25mL新鲜牛奶加热至40℃。
- 在搅拌下慢慢加入预热至40℃的0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液25mL。
- 用精密pH试纸或酸度计调节pH值至4.7。
- 将上述悬浮液冷却至室温。
- 离心15分钟（3000r/min）。
- 弃去清液，收集沉淀物。
2. 酪蛋白纯化- 将收集到的沉淀物用水洗涤3次，离心10分钟，弃去上清液。
- 在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌。
- 将悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
- 用乙醇-乙醚混合液清洗沉淀2次。
- 最后用乙醚清洗沉淀2次，抽干。
3. 干燥与称重- 将得到的酪蛋白沉淀物在电炉上低温烘干。
- 称量干燥后的酪蛋白，记录质量。
五、实验结果与分析1. 通过实验，成功从牛奶中提取出酪蛋白。
2. 干燥后的酪蛋白呈白色粉末状，无味无臭。
3. 实验过程中，通过调节pH值至4.7，使酪蛋白沉淀出来，验证了等电点沉淀法的有效性。
六、实验总结本次实验成功从牛奶中提取出酪蛋白，并对其进行了初步纯化。
通过实验，我们了解了酪蛋白的基本性质及其在牛奶中的存在形式，掌握了从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。
同时，本次实验也验证了等电点沉淀法的有效性，为后续相关研究提供了基础。
酪蛋白(Casein)的提取
酪蛋白（Casein）的提取一、实验目的1、掌握一种提取蛋白的方法。
2、掌握一种检测牛乳质量的方法。
二、实验原理酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，约占乳蛋白的80～82%，酪蛋白不是单一的蛋白质，是一类含磷的复合蛋白质混合物，以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。
它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。
它在牛乳中的含量约为35g/L，比较稳定，利用这一性质，可以检测牛乳中是否掺假。
酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零，同种电荷间的排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，经牛乳调到pH4.6，酪蛋白就从牛乳中分离出来。
酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂质除去。
三、仪器和试剂仪器温度计、布氏漏斗、pH 试纸、抽滤瓶、电炉、烧杯、量筒、表面皿、天平等。
试剂1. 95%乙醇、乙醚2. pH4.6乙酸钠缓冲液0.2mol/L3. 乙醇、乙醚混合液：乙醇∶乙醚=1∶1(体积比)4. 市售牛乳四、实验步骤1.酪蛋白等电点沉淀将100mL 牛乳放到500mL 烧杯中，加热至40℃左右的乙酸钠缓冲液，直到pH 达4.6左右，用pH试纸或酸度计调试。
将上述悬浮液冷却至室温，然后放置5min，用细布过滤，收集沉淀。
2.除脂类杂质将上述沉淀用少量水洗数次，然后悬浮于30mL95%的乙醇中。
将此悬浮液倾于布氏漏斗中，抽滤除去乙醇溶液，再倒入乙醇—乙醚混合液洗涤沉淀两次，最后再用一米洗涤沉淀两次，抽干。
将沉淀从布氏漏斗中移去，在表面皿上摊开以除去乙醚，干燥后得到的是酪蛋白纯品。
准确称重后，计算出每100mL 牛乳所制备出的酪蛋白数量(g%)，并与理论产量(3.5g%)相比较，求出实际获得百分率。
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缓冲液，不时搅拌均匀，将悬浮液冷至室温，离心，3500r/min， 15min，弃上清，得酪蛋白粗制品。 3. 用蒸馏水洗沉淀（不要搅散）3次，再次离心，3000r/min， 10min，弃上清。 4. 在沉淀中加入约20mL95%乙醇，搅拌片刻，将悬浊液全部转移 到布氏漏斗中抽滤。用乙醇-乙醚混合液洗沉淀2次，最后用无水 乙醚洗沉淀2次，抽干。 5. 将沉淀摊开在表面皿上，风干（或烘干），得酪蛋白纯品。 6. 称量，计算含量和得率。 含量： 酪蛋白 g/100mL牛乳 （g%） 得率： 测得含量/理论含量×100% （理论含量为 3.5g/100mL牛乳）
2. 抽滤装置（布氏漏斗，抽滤瓶，圆形抽滤管， 橡皮塞）
3预热 ） 2. 95%乙醇 3. 无水乙醚 4. 0.2M pH4.7HAC-NaAC 缓冲液 （ 40℃预热 ） 5. 乙醇-乙醚混合液（V/V=1/1） 1000mL
操作
1. 将牛奶和pH4.7HAC-NaAC 缓冲液预加热至40℃， 2. 用离心管取50mL的牛奶再缓缓加入50mL的pH4.7HAC-NaAC
酪蛋白的制备
目的
学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法
原理
牛乳中主要蛋白质是酪蛋白，含量35g/L， 酪蛋白是一些含磷蛋白的混合物，pI为 4.7。利用等电点时溶解度最低原理，将 牛乳的pH调至4.7，酪蛋白沉淀下来，再 用乙醇和乙醚洗涤沉淀除去脂类杂质可得 纯的酪蛋白。
主要器材设备
1. 离心机， 天平，滤纸（Φ=9cm），打孔器， 表面皿