细胞培养的过程及注意事项
细胞培养方法总结
细胞培养方法总结细胞培养是生物学研究中重要的实验技术之一，通过在体外人工创造和维持细胞生长环境，使细胞能够持续繁殖、生长和分化。
本文将对常用的细胞培养方法进行总结，并介绍其步骤和注意事项。
一、细胞培养基的配制细胞培养基是细胞生长所必需的营养物质和生长调节因子的混合物，根据细胞类型和实验需求的不同，培养基种类繁多。
在配制培养基时，应按照标准操作流程，确保成分准确无误并避免细菌和真菌的污染。
二、细胞的分离和传代1. 细胞的分离：将细胞从原来的培养皿中取出，并用消化酶、细胞分离酶等方法进行细胞的离散处理，以获得单细胞悬浮液或小团的细胞群。
2. 细胞的培养：将悬浮的细胞或细胞小团转移至新的培养皿中，添加适量的培养基，并静置于恒温培养箱中，创造适宜的生长环境，促进细胞的生长。
3. 细胞的传代：当原始细胞群生长至饱和状态时，需进行细胞的传代，即将部分细胞转移到新的培养皿中，以保持细胞的活力和增长。
传代过程中，注意维持传代比例和规律的同时，避免细胞超密植或过稀。
三、细胞冻存和解冻细胞冻存是将培养好的细胞保存在低温下，以延缓其代谢过程，以备后续使用。
具体步骤包括：1. 预处理：加入冻存保护剂，如二甲基亚砜(DMSO)或甘油，以降低冻存过程对细胞的伤害。
2. 储存管制备：将细胞转移到冻存管中，并标记相关信息，如细胞类型、培养时间等，以方便后续的识别。
3. 冷冻：将装有细胞的冻存管放置在低温环境中，逐渐降温至最终低温储存条件下，一般为液氮温度（-196°C）。
4. 解冻：将冻存管取出，快速置于37°C预热的培养基中解冻，然后将细胞转移至培养皿中，尽快恢复细胞活性。
四、细胞凋亡检测细胞凋亡是指细胞主动发生的自我死亡过程。
为了研究细胞凋亡的发生机制，需对细胞进行凋亡检测。
以下是常用的细胞凋亡检测方法之一：1. Annexin V/PI双染法：利用Annexin V亲和素与磷脂酰丝氨酸的结合，通过荧光检测乙酰胆碱酯酶的失活，以区分早期和晚期凋亡。
细胞培养过程及注意事项
细胞培养过程及注意事项
嘿，朋友！你知道细胞培养是咋回事不？这就好比是在给一群“小生命”打造一个舒适的家。
细胞培养，简单说就是在实验室里，给细胞提供合适的环境，让它们好好生长、繁殖。
那这个过程是咋样的呢？
先得准备好“家”的材料，比如培养皿、培养基这些。
培养皿就像是细胞的小房子，得干净、无菌。
培养基呢，那可是细胞的“美食”，里面有各种营养成分，得调配得恰到好处，不然细胞可要闹脾气啦！
然后，要把细胞小心翼翼地放进去。
这可得轻手轻脚，就像抱小婴儿一样，生怕弄疼了它们。
放进细胞后，环境控制可重要了！温度得合适，就像咱们夏天得开空调，冬天得有暖气，细胞也喜欢舒适的温度。
还有湿度，太干太湿都不行，这就像咱们待在太干燥的地方会皮肤干裂，太潮湿又浑身难受。
再说说细胞的“吃喝”。
要定期给它们换新鲜的培养基，不然“吃剩菜剩饭”，细胞能长得好吗？
那细胞培养有啥注意事项呢？
你想啊，细胞那么小，那么脆弱，稍微有点细菌、病毒啥的，它们就得遭殃。
所以整个操作过程必须严格无菌，这可不是开玩笑的！你
要是不小心带进去一点脏东西，那可就像在一锅好汤里掉进了一只苍蝇，全毁啦！
还有啊，细胞的生长速度不一样，你得时刻盯着，别等它们长满了还不知道，那可就挤得没法好好过日子啦！
每次操作都得认真记录，这就跟记账一样，不然你都不知道细胞啥时候长得好，啥时候出问题。
细胞培养可不简单，就像照顾一群娇气的“小公主小王子”，得有耐心，得细心。
你要是马马虎虎，它们可不会给你好脸色看哟！
总之，细胞培养是个精细活，需要我们用心去做，才能让这些小生命茁壮成长，为我们的科学研究贡献力量！。
细胞培养过程中的注意事项及试剂配制
细胞培养过程中的注意事项及试剂配制一.常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO孵箱（孵育培养物）、2水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。
二.无菌操作无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。
2.CO孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者20.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。
2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75％酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。
3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。
三.器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：(1)新的玻璃器皿的洗消：1.自来水刷洗，除去灰尘。
2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。
细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项
【1】细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项细胞培养是生物学实验中常见的一项重要技术，它广泛应用于细胞生物学、分子生物学、药理学等领域。
通过细胞培养，科研人员能够研究细胞的生长、分化、凋亡等生物学过程，同时也可以进行药物筛选、生物学效应观察等实验。
然而，细胞培养是一项复杂的工作，需要严格遵循一系列步骤和要求，并且需谨慎对待各项注意事项。
在本文中，我将以从浅入深的方式，全面探讨细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项，帮助你更深入地理解这一技术。
【2】细胞培养的具体步骤和要求让我们来了解细胞培养的具体步骤。
通常情况下，细胞培养的主要步骤包括：细胞分离、细胞计数、细胞传代、培养基准备、细胞接种、培养条件控制等。
具体来说，细胞培养的步骤包括收获细胞、细胞解聚、细胞计数、调整细胞密度、接种细胞、培养细胞、处理细胞等。
在进行这些步骤时，需要保持实验操作台面清洁整洁，常备所需培养工具、培养耗材和培养试剂，并且要准确记录实验过程中的重要参数和数据。
细胞培养的要求也是至关重要的。
要选择合适的细胞系，确保来源纯净、鉴定正确、培养活力好。
培养基的选用也十分重要，要根据不同细胞类型的需求来选择适当的培养基，并添加必要的生长因子、氨基酸、维生素等。
培养条件的控制也十分重要，包括温度、湿度、二氧化碳浓度、通风情况等。
细胞培养的灭菌和无菌操作更是必不可少，细胞培养过程中的任何污染都可能对实验结果产生影响。
【3】细胞培养的注意事项在进行细胞培养时，需要特别注意一些细节和注意事项。
要保持室内整洁，操作台面、培养箱、生物安全柜等工作台要保持干净，并且要经常消毒。
要做好个人防护工作，戴口罩、手套、工作服等，避免人体细胞对培养的影响。
要定期检查培养箱、生物安全柜等设备的运行情况，确保培养环境的稳定性和安全性。
对细胞的培养时间、传代次数、细胞密度等也需要严格控制，不可随意增加培养时间或传代次数，以免细胞出现突变或异常。
【4】对细胞培养的个人观点和理解从事细胞培养工作多年，我深知细胞培养的重要性和复杂性。
贴壁细胞培养步骤及注意事项
贴壁细胞培养步骤一、复苏1.把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。
液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2.把上述细胞悬液吸到装有10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。
3.把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。
吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。
4.标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。
5.3天换一次培养基（具体看细胞生长状态及培养液情况）。
二、传代1.培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2.把原有培养基吸掉。
3.加入2毫升PBs洗两遍，最后吸净培养皿中的PBS4.加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化（消化时长看情况而定）。
5.当看到细胞开始脱离培养皿时倒掉酶液，加入2毫升左右含血清的培养基终止消化。
6.用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。
7.把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。
8.倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。
9.根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。
一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个，继续培养。
10.若是只培养一皿，只需吹散后倒剩1/4左右，重新加入培养液继续培养。
三、冻存1.把原有培养基吸掉。
2.加入2毫升PBs洗两遍，最后吸净培养皿中的PBS3.加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化（消化时长看情况而定）。
4.去掉酶液，加入2毫升左右含血清的培养基终止消化。
5.吹落后把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。
6.加入1毫升冻存液悬浮细胞，装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。
7.4℃30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。
配制溶液一、培养基配制（1）（DEME培养基）89%基础培养基+10%血清（FBS）+1%双抗45毫升培养基+5毫升血清+0.5毫升双抗（2）（1640培养基）89%基础1640培养基+10%血清（FBS）+1%双抗45毫升培养基+5毫升血清+0.5毫升双抗二、冻存液90%血清+10%DMSO；DMSO要慢慢滴加，边滴边摇三、消毒液75%的酒精注意事项（1）进入细胞间必须严格按照下列步骤操作①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。
细胞培养详细过程及注意事项
细胞培养详细过程及注意事项细胞培养是在体外培养和维持生物细胞生长和繁殖的一种技术，它是生物学、医学研究和药物研发等领域的重要实验手段。
细胞培养的过程需要遵循一定的步骤和注意事项，以确保细胞的正常生长和繁殖。
细胞培养的详细过程如下：2.细胞分离：将组织或细胞样品分离，去除多余的组织或细胞，获得单个细胞的悬浮液。
分离的方法包括酶消化、机械或化学分离等。
3.细胞培养基准备：准备培养基，培养基的配制根据细胞的要求而定，可以是无血清培养基、低血清培养基或含血清的培养基。
培养基提供了细胞所需要的营养物质和生长因子。
4.细胞接种：将细胞悬浮液接种到含有培养基的培养皿或培养瓶中，密度通常在1×105至1×106个细胞/mL之间。
接种后，培养皿或培养瓶需放入培养箱中，设定适当的温度、湿度和气体环境。
5.细胞培养条件控制：细胞的生长和繁殖需要适宜的培养条件。
常规的培养条件包括37℃、5%CO2和95%湿度。
通过调节培养基的pH值、温度和培养箱内的CO2和湿度等参数，来维持良好的培养环境。
6.细胞观察和培养基更换：培养过程中，需要定期观察细胞的生长状态和形态，通过显微镜观察细胞的形态变化和细胞层的覆盖率等指标。
根据需要，定期更换培养基，以确保提供足够的营养物质和维持适宜的细胞密度。
7.细胞传代：当细胞达到充分生长的状态时，需要进行传代，即将细胞从当前培养皿或培养瓶中移至新的培养皿或培养瓶中，以保证细胞的健康和生长。
用一句话总结上述细胞培养的过程就是从细胞分离到细胞培养，并按照一定条件进行观察和传代。
在进行细胞培养时，需要注意以下事项：1.无菌操作：细胞培养需要在无菌条件下进行，避免细胞被异物或外源性微生物污染。
操作前，材料和设备需要进行消毒。
2.培养基筛选：根据细胞的特性和需求选择合适的培养基，确保细胞能够获得必要的营养物质和生长因子。
3.冻存细胞库：定期将细胞进行冻存，以备后续使用，以避免病毒污染或细胞失活。
植物细胞培养的基本流程
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请简述细胞原代培养(组织块培养法)的实验步骤及注意事项
请简述细胞原代培养(组织块培养法)的实验步骤及注意事
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细胞原代培养也被称为组织块培养法，是一种从组织中分离和培养原代细胞的方法。
以下是细胞原代培养的实验步骤和注意事项：
1.组织分离：首先需要从生物体中收集组织样本，如肝、肺、心脏等。
样本需要通过消化或机械分离等方法分离出单个细胞或小组织块。
消化方法可以使用胰酶或胰蛋白酶等酶类来消化样本，机械分离则需要使用切割器或剪刀等工具。
2.细胞培养：分离出的组织块需要在含有营养物质和生长因子的培养基中培养。
在培养过程中需要注意不要过度培养，否则会导致细胞老化或死亡。
3.传代：当细胞达到一定密度时，需要将其分离并移至新的培养皿中进行传代，以维持细胞的生长和繁殖。
注意事项：
1.细胞的培养需要在严格的无菌条件下进行，以避免细胞污染。
2.选择适当的培养基和生长因子，以保证细胞的生长和分化。
3.细胞培养过程中需要定期观察细胞的形态和生长情况，以及细胞浓度，以便及时进行传代。
4.细胞应该在体外保持与体内相似的环境和温度，以提高细胞的存活和生长率。
5.尽量使用新鲜的组织样本，避免长时间冷藏或保存，以保证细胞质量和数量的优良。
细胞培养详细过程及注意事项
细胞培养详细过程及注意事项细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。
细胞培养的培养物可以是单个细胞，也可以是细胞群。
细胞培养目的与用途1、科学研究：药物研究开发与基础研究药物研究与开发(1) 新药筛选：如化学合成药物药效研究、中药有效成分筛选与鉴定等。
(2) 疫苗研究与开发：如病毒性疫苗的研究与开发（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。
(3) 基因工程药物研究与开发：如干扰素研究与开发，细胞生长因子研究与开发等。
(4) 细胞工程药物研究与开发：生物活性多肽研究与开发，人参皂甙、紫杉醇等生物活性成分研究与开发。
(5) 单克隆抗体制备：包括诊断用单克隆抗体，治疗用单克隆抗体。
基础研究(1) 药物作用机理(2) 基因功能(3) 疾病发生机理2、生物制药(1) 疫苗生产：如病毒性疫苗（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。
(2) 基因工程药物生产：如在临床医学中具有治疗价值的一些细胞生长因子如干扰素、粒细胞生长因子、胸腺肽等(3) 诊断用和药用单克隆抗体生产(4) 细胞工程药物生产：生物细胞内的一些生物活性多肽，生物活性物质等细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
细胞培养的步骤以及注意事项
细胞培养的步骤以及注意事项
细胞培养是一种重要的实验技术，它有助于我们了解细胞生物学、生理学以及疾病的发生和发展机制。
以下是细胞培养的步骤以及注意事项：
步骤：
1. 细胞的收集：从组织样本中得到细胞，比如从动物、植物或
人类的器官中取得。
2. 细胞的处理：将细胞进行脱离、切割、分离等处理，从而得
到单个的细胞。
3. 细胞的培养基准备：选择适合细胞类型的培养基，加入营养
物质和生长因子以维持细胞的生长和分裂。
4. 细胞的接种：将处理好的单个细胞加入到培养基中，并放置
于培养箱中，控制其温度、湿度、氧气和二氧化碳浓度等环境因素。
5. 细胞的观察和维护：观察细胞的形态、生长速度、分裂情况等，同时需要定期更换培养基、检测细胞的纯度和健康状态。
注意事项：
1. 保持无菌环境：细胞培养需要在无菌环境下进行，防止培养
基和细胞被细菌、真菌等污染。
2. 确保细胞的纯度：细胞培养需要保证细胞的纯度，避免异质
性细胞或细胞株的混淆。
3. 控制培养环境：细胞培养需要控制培养环境，包括温度、湿度、氧气和二氧化碳等，以确保细胞的正常生长和分裂。
4. 定期更换培养基：培养基中的营养物质和生长因子会随着时间的推移而减少，因此需要定期更换培养基，以维持细胞的生长和分裂。
5. 避免过度培养：过度培养会影响细胞的健康和生长速度，因此需要在适当的时候停止培养，或将细胞进行冻存以备后续使用。
细胞培养的过程及注意事项
36细胞培养旳过程及注意事项细胞旳培养过程及注意事项；根据培养过程中与否需要分割培养物进行再培养而将细；一、原代培养；（一）过程；原代培养旳基本过程包括取材、培养材料旳制备、接种；1.组织块培养法；(1)基本操作过程；1）、用培养液湿润所取组织材料, 并用锋利旳眼科剪；2）、用湿润旳吸管吸取切碎旳组织块, 清清吹到培养；3）、将培养瓶翻转, 使瓶底朝上, 在种植了组织块一；4）、将种植了组织块细胞旳培养过程及注意事项根据培养过程中与否需要分割培养物进行再培养而将细胞培养分为原代培养和传代培养。
一、原代培养（一）过程原代培养旳基本过程包括取材、培养材料旳制备、接种及培养等环节。
原代培养旳措施诸多, 基本和最常用旳是组织块培养法和分离细胞法。
1.组织块培养法(1)基本操作过程1）、用培养液湿润所取组织材料, 并用锋利旳眼科剪将附在其上旳脂肪和结缔组织清除洁净。
再用平衡液（PBS）或Hanks液漂洗；用锋利旳眼科弯剪将组织块剪成小块；再用PBS或Hanks液漂洗多次, 直至液体不浑浊、无油滴、清亮为止。
2）、用湿润旳吸管吸取切碎旳组织块, 清清吹到培养瓶皿中, 并将其按一定间距均匀放在培养瓶底壁上, 量不要过多, 要将组织块切面贴在培养瓶底壁上；3）、将培养瓶翻转, 使瓶底朝上, 在种植了组织块一侧旳对侧面加足培养液, 勿使组织块与培养液接触, 塞紧瓶塞；4）、将种植了组织块旳一侧朝上, 静置于37℃培养箱中；待组织块贴壁1 h到3h后翻瓶, 使贴壁旳组织块浸没与培养液中, 静置；5）、每隔2到3天更换一次培养液, 或者根据培养瓶种颜色旳变化确定换液时间。
2.注意事项1）、组织块接种后旳前3天, 从组织块向外迁徙旳细胞数很少, 组织块旳黏附不牢固, 在观测和移动旳过程中, 注意不要引起液体旳振荡。
要防止常常翻动和振动, 否则组织块不易附着于瓶壁上或附着后也会脱落飘起。
2）、加入旳培养液不适宜过多, 防止浸泡旳组织块受轻微旳波动而脱落下来。
贴壁细胞培养步骤及注意事项
贴壁细胞培养步骤及注意事项第一步：准备工作1.1清洁实验台面和培养器具在开始培养之前，应先清洁培养器具和实验台面，以确保无菌环境。
1.2准备培养基根据不同实验的要求，准备需要的培养基，并确保其无菌。
1.3预热培养基和器械将培养基和器械置于37℃的培养箱中，使其达到需要的温度。
第二步：细胞分离2.1收集细胞使用无菌技术，收集需要培养的细胞，最好使用处于快速生长期的细胞。
2.2细胞计数使用显微镜和计数板计数细胞数目，以便确定接种的细胞数量。
2.3离心细胞将细胞离心，去除上清液。
第三步：贴壁培养3.1接种细胞将细胞重新悬浮在预热的培养基中，并根据需要的细胞浓度接种到培养器皿中（例如培养皿、培养瓶等）。
3.2倾斜培养器具倾斜培养器具，以确保细胞均匀分布并黏附于底部。
3.3培养器出现倒置的小液滴密封培养器，以防止培养基蒸发和外界污染。
第四步：培养条件4.1恒温条件将培养器放在恒温箱中，维持适当温度（通常为37℃）和湿度。
4.2CO2条件对于一些细胞，需要提供CO2环境以保持合适的pH值。
可以通过加入CO2气体或培养箱添加CO2控制器来实现。
4.3培养时间根据细胞类型和所需实验目的，确定合适的培养时间。
第五步：观察和维护细胞5.1细胞观察使用显微镜定期观察细胞的形态和增长情况。
注意检查细胞的黏附性和细胞层的均一性。
5.2细胞维护根据需要，定期更换培养基，以保持细胞的正常生长和功能。
5.3细胞传代根据细胞生长状态，当细胞层达到一定的密度时，可进行细胞的传代，以保持细胞的活性和健康。
注意事项：1.确保所有用于细胞培养的器具和培养基都是无菌的，以防止细胞受到外界污染。
2.严格遵循无菌技术，避免任何可能导致细菌和真菌污染的操作。
3.细胞培养过程中，保持实验室卫生，定期清洗工作台和设备。
4.在细胞培养中，要注意避免细胞的过度处理和操作。
5.对于一些特殊类型的细胞，如原代细胞，可能需要特殊的培养条件和技术，需要进行额外的注意和维护。
细胞培养流程及注意事项
细胞培养流程及注意事项一、材料准备：1. 设备：细胞培养箱、培养瓶、冰箱、高压灭菌炉、恒温箱、离心机、倒置显微镜、液氮罐、冻存管、离心管、吸管等2、试剂：0.25％胰酶、培养基（DMEM）、胎牛血清（CBS）、二甲基亚砜（DMSO）、双抗(青霉素及链霉素溶液)、PBS缓冲液等3、操作台：放入酒精灯、试管架、镊子、废液缸、离心管、吸管等，并按需要放入培养基、胰酶等试剂，紫外照射30min以上。
（条件允许时实验室紫外照射30min以上）二、复苏细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞最易受损的－5～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。
1、准备一个茶缸或水浴盘，内盛37℃的温水。
2、从液氮中取出冻存管，迅速置于温水中并不断搅动。
尽量使其在1--2分钟之内融化。
3、打开冻存管，将细胞悬液吸到离心管中。
（必要时可加入少许培养液）4、1000rpm离心3--5分钟，弃去上清液。
5、加适当培养基后将细胞转移至培养瓶中，37℃培养。
6、记录复苏日期，第二天观察生长情况。
三、观察和换液1、在倒置显微镜下观察细胞生长情况（培养液颜色变化、细胞是否贴壁、密集度如何等）。
2、换液：依据细胞生长快慢，培养液消耗情况（由红到黄），1—3天一换。
操作较简单四、传代（分装）1、取出细胞在倒置显微镜下观察，当细胞长到很密集时需要分装培养（即传代），或只需维持培养时要稀释。
2、将培养液吸出，加入2--3ml胰酶，放入培养箱3-5分钟取出观察确认细胞被完全消化后，加入2-3ml培养液冲洗底壁。
3、将细胞悬液移至离心管，1000rpm离心3--5分钟，弃去上清液。
4、加适当培养液后冲匀细胞，分装到2—3个培养瓶中，每个只需1--2滴细胞悬液即可。
5、培养瓶中加入适当培养基后，做好标记放入培养箱。
五、冻存原理：在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。
细胞培养技巧与注意事项分享
细胞培养技巧与注意事项分享细胞培养是生物学研究中常用的实验技术之一，它可以帮助研究人员了解细胞的生理功能、疾病发生机制以及药物的作用机制等。
然而，细胞培养过程中存在着一系列的技巧和注意事项，下面将分享一些经验和建议。
首先，细胞培养的基本步骤包括细胞的分离、传代和培养。
在细胞分离过程中，要注意使用合适的酶或缓冲液来解离细胞，避免对细胞造成损伤。
此外，细胞的传代过程中需要注意细胞密度的控制，过高的细胞密度会导致细胞凋亡或细胞间的竞争，影响细胞的生长和健康状态。
其次，培养基的选择也是细胞培养中的重要环节。
常用的培养基包括DMEM、RPMI-1640、MEM等，不同类型的细胞需要选择适合其生长的培养基。
此外，培养基中添加适量的血清、生长因子和抗生素等物质，可以提供细胞所需的营养和生长因子，并抑制细菌和真菌的污染。
细胞培养过程中，细胞的环境条件也需要合理控制。
细胞需要在适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度下生长。
常见的细胞培养箱可以提供恒温、恒湿和恒气体环境，确保细胞处于最佳的生长状态。
此外，细胞的培养器皿也需要选择适合的类型，如培养皿、培养瓶、多孔板等，以满足不同实验需求。
细胞培养中还需要注意细胞的检测和鉴定。
细胞的纯度和活性对实验结果的准确性和可靠性有着重要的影响。
常用的方法包括细胞形态观察、细胞计数、细胞凋亡检测、细胞周期分析等。
此外，细胞的鉴定也需要通过免疫组化、PCR等技术来确认细胞的种类和来源。
在细胞培养中，细胞的污染是一个常见的问题。
细胞的污染来源包括细菌、真菌、支原体、病毒等。
为了避免细胞的污染，需要在实验室中建立严格的无菌操作规范，使用无菌器皿和试剂，并定期对培养环境进行消毒和清洁。
此外，细胞培养中的实验数据的记录和管理也是非常重要的。
及时、准确地记录实验操作步骤、培养条件和结果，有助于实验的重复性和可比性。
同时，对细胞的来源、传代次数和培养时间等信息进行管理，可以避免实验数据的混乱和错误。
细胞培养作为一项基础的实验技术，对于生物学研究具有重要的意义。
细胞传代铺板冻存复苏等细胞培养相关操作步骤和注意事项
细胞传代铺板冻存复苏等细胞培养相关操作步骤和注意事项细胞传代：细胞传代是指将已经培养得到的细胞进行继代，以维持细胞的健康生长和增殖。
具体步骤如下：1.预备培养基和消化液：准备需要的培养基和细胞消化液，将培养基预暖在37摄氏度保温箱中。
2.消化细胞：将已经生长到80-90%的细胞培养皿放到细胞消化液中消化，消化时间根据细胞的种类和生长状态而定。
消化完成后，在显微镜下观察，确保细胞基本脱落。
3.细胞计数与离心：将细胞消化液转移到离心管，进行细胞计数。
根据所需细胞数量计算所需消化液的体积，并用预暖的培养基配置所需的细胞悬液。
离心细胞消化液以去除细胞消化的消化液。
4.铺板：将计算好的细胞悬液转移到铺板中，轻轻摇晃铺板使细胞均匀分布。
放置在培养箱中，培养条件根据细胞类型而定。
注意事项：-消化时间不宜过长，否则细胞会受到过度损伤。
-细胞计数时要使用显微镜和相关计数仪器，确保准确性。
-铺板时要轻轻摇晃铺板以均匀分布细胞，避免气泡产生。
冻存：冻存是将细胞保存在低温条件下，以备日后使用。
具体步骤如下：1.细胞准备：选择处于对称生长期的细胞进行冻存。
对细胞进行消化并离心，将细胞沉淀取出至干燥的离心管。
2.冻存液准备：根据细胞的特性和保存要求选择合适的冻存液，如含有二甲基亚砜（DMSO）和甘油的培养基。
将冻存液预暖。
3.冻存管装填：将已洗净的冻存管放入液氮中预冷，稍微干燥后将细胞沉淀均匀加入冻存管中。
用塑料冻存盖或冷却后的金属冻存夹紧。
4.冷冻：将装有细胞的冻存管放入-80摄氏度的深冷冰箱中，预冻24小时到48小时。
等冷冻固化后将管子迁移到液氮冷冻罐中。
注意事项：-使用合适的冻存液，避免对细胞造成过度伤害。
-在严格消毒和无菌条件下进行冻存操作。
-细胞冷冻时，必须迅速并且均匀降温，以避免冷冻诱导的细胞损伤。
复苏：复苏是指冻存的细胞被解冻、恢复生长和增殖的过程。
具体步骤如下：1.细胞解冻：将冻存的细胞管迅速取出，直接放入37摄氏度的水浴中，轻轻摇动直至融化。
细胞培养操作及其注意事项
六、操作完处理
• 1.试剂瓶瓶口喷酒精，用封口膜封住后，拿回冰箱应该放置的位置。 • 2. 清理工作台面，并用酒精消毒。下拉门，开紫外照射一般30分钟。 • 3. 垃圾袋封口，拿出高压蒸气灭菌（如果有感染试剂）。 • 4. 关掉37℃水浴箱的电源，细胞培养箱CO2浓度恢复至5%后，关掉
次解冻。10%浓度配制冻存液。 • 3. 由于DMSO稀释时会放出大量热量，故不可将DMSO直接加入细胞液中，
必须使用前先行配制完成。 • 4. adherent tumor lines: 5-7 x 106，依细胞种类而异。Adenocarcinoma 解
冻后须较高之浓度，而HeLa 只需1-3 x 106 cells/ml。other suspensions: 510 x 106 cells/ml, human lymphocyte 须至少5 x 106cells/ml。 • 5. 回收动物细胞，其离心速率一般为300×g(约1,000rpm），过高的转速， 将照成细胞死亡。
• 3. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如移液器和枪头盒等可以暂时 放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以酒精擦拭后才带 入无菌操作台内。实验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
• 4. 操作人员应注意自身的安全，须穿戴实验衣及手套Байду номын сангаас才进行实验。用酒精擦拭手套 后才可进行操作。
• 5. 实验服应该定期灭菌和更换。进出细胞间时，不要同时打开相邻两个房间的门。
二、贴壁细胞的换液及传代
• 1. 换液 • 当培养基中有较多漂浮的死细胞或者培养基颜色变黄，而细胞密度未
细胞培养操作步骤及注意事项
细胞培养操作步骤及注意事项细胞培养操作步骤1. 准备培养基和培养器具：选择适合细胞生长的培养基，如DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium），RPMI 1640（Roswell Park Memorial Institute 1640）等。
准备培养器具，如细胞培养瓶、组织培养皿、离心管等。
2. 培养器具的消毒：将培养器具放入70%的乙醇或漂白水中浸泡约15-30分钟，然后用无菌PBS（磷酸盐缓冲液）清洗3次。
将培养器具在100摄氏度的烘箱中高温烘干或使用紫外线灯照射15-30分钟。
3. 细胞传代：将细胞从旧的培养瓶中移至新的培养瓶中，以防止细胞过度增殖和细胞衰老。
首先将培养瓶中的培养基抽吸掉，然后用PBS洗涤细胞2次，最后加入适量的胰酶消化细胞，使其与培养基充分接触，放置一段时间，观察细胞的离培情况，离心沉积细胞，弃去上清液，加入新的培养基。
4. 细胞培养条件控制：维持培养环境的适宜条件，包括温度、湿度、CO2浓度和培养基的pH值等。
通常细胞在37摄氏度、5%的CO2和95%湿度下生长。
定期检查培养器的培养基水平，保持培养基的适当量。
5. 细胞观察和记录：使用显微镜观察细胞的形态和数量，记录细胞培养的过程和实验结果。
注意控制细胞的密度，防止过度密集或过度稀疏。
6. 细胞分化和实验处理：根据需要，可以进行细胞的分化处理或实验处理，如加入药物、生化试剂等。
在处理时要注意药物的浓度、处理时间和处理温度等。
7. 细胞冻存：当需要长期保留细胞时，可以进行细胞冻存。
将细胞与冻存液混合，分装入冻存管中，置于液氮中冻存，以备将来使用。
细胞培养注意事项- 细胞培养实验应在无菌条件下进行，避免污染。
- 培养器具应事先消毒处理，防止细菌、真菌和病毒的污染。
- 培养基的配制要准确无误，严格按照操作手册或厂家提供的方法进行。
- 培养过程中要保持培养器的密闭性，以确保适宜的气体交换和温度控制。
细胞培养流程
细胞培养流程细胞培养是生物学实验中常用的一种技术手段，通过细胞培养可以使细胞在体外环境中持续生长和繁殖。
细胞培养流程包括细胞的分离、传代、培养和检测等步骤，下面将详细介绍细胞培养的流程及注意事项。
1. 细胞分离。
细胞培养的第一步是从组织或细胞悬液中分离出需要的细胞种群。
常用的方法包括机械分离、酶消化和细胞筛选等。
在进行细胞分离时，需要注意避免对细胞造成损伤，保证细胞的完整性和活力。
2. 细胞传代。
细胞传代是指将细胞从一个培养皿中移植到另一个培养皿中，以维持细胞的生长和增殖。
在进行细胞传代时，需要注意细胞的密度和培养基的配比，以确保细胞的正常生长和分裂。
3. 细胞培养。
细胞培养是指将分离和传代后的细胞放置在含有营养物质和生长因子的培养基中进行培养。
培养基的选择和配制对细胞的生长和表型具有重要影响，需要根据不同类型的细胞进行合理选择。
4. 细胞检测。
在细胞培养过程中，需要对细胞进行定期的检测，包括形态学观察、生长曲线分析、细胞纯度检测等。
通过对细胞的检测，可以及时发现细胞的异常情况，并采取相应的措施进行处理。
细胞培养过程中需要注意的事项：保持无菌操作，细胞培养过程需要在无菌条件下进行，避免细胞受到外界污染。
控制培养条件，包括温度、湿度、CO2浓度等，确保细胞在适宜的环境中生长。
定期更换培养基，培养基中的营养物质和生长因子会随着时间逐渐耗尽，需要定期更换新的培养基。
避免细胞过度传代，过度传代会导致细胞老化和突变，影响细胞的生长和功能。
总之，细胞培养是一项复杂而又重要的实验技术，正确的细胞培养流程和操作规范对于细胞生物学研究具有至关重要的意义。
希望本文介绍的细胞培养流程及注意事项能够对您有所帮助，祝您的细胞培养工作顺利进行！。
动植物细胞实验相关流程及注意事项总结
动植物细胞实验相关流程及注意事项总结动植物细胞实验是生物学研究中常见的实验手段，通过对细胞的观察和分析，可以帮助科学家们了解细胞的结构和功能，以及细胞在生物体内的角色和作用。
本文将就动植物细胞实验的相关流程和注意事项进行总结，为对该领域感兴趣的读者提供一些基础知识和实验指导。
一、动植物细胞实验的基本流程1.细胞培养准备在进行动植物细胞实验之前，首先需要准备好细胞培养基和适当的培养条件。
培养基可以根据实验需求选择不同种类的培养基，比如常用的DMEM培养基适合哺乳动物细胞的培养，而Murashige-Skoog培养基适合植物细胞的培养。
培养条件包括温度、湿度和CO2浓度等因素，需要根据细胞类型的不同进行调整。
2.细胞收集和处理收集动植物组织样本后，需要将组织样本切割成小块，并使用酶类物质进行消化处理，从而获得单个的细胞。
消化处理的时间和酶的种类需要根据组织的特性进行调整，以确保细胞可以得到有效的释放。
3.细胞培养和传代将获得的细胞悬浮在培养基中，并放置在恒温培养箱中进行培养。
在培养过程中，需要定期更换培养基，以及定期观察细胞的状态。
当细胞密度逐渐增加时，需要进行传代操作，将细胞重新分装到新的培养皿中，以维持细胞的活力和生长状态。
4.实验操作和观察在细胞培养的基础上，可以进行各种实验操作，比如细胞凋亡实验、细胞增殖实验、细胞染色实验等。
在实验操作过程中，需要掌握好实验方法和技巧，确保实验操作的准确性和可重复性。
实验结束后，需要对细胞进行观察和分析，获取实验数据并进行结果总结。
二、动植物细胞实验的注意事项1.实验室安全在进行动植物细胞实验时，需要严格遵守实验室的安全规定，佩戴好实验室必要的防护装备，避免化学药品和生物制品对人体的伤害。
同时要注意消毒操作，确保实验环境的清洁和安全。
2.细胞培养条件在细胞培养过程中，需要控制好培养条件，包括温度、湿度和CO2浓度等因素。
尤其是对于植物细胞的培养，需要特别关注光照条件，确保植物细胞可以正常进行光合作用。
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细胞的培养过程及注意事项根据培养过程中是否需要分割培养物进行再培养而将细胞培养分为原代培养和传代培养。
一、原代培养（一）过程原代培养的基本过程包括取材、培养材料的制备、接种及培养等步骤。
原代培养的方法很多，基本和最常用的是组织块培养法和分离细胞法。
1、组织块培养法(1)基本操作过程1）、用培养液湿润所取组织材料，并用锋利的眼科剪将附在其上的脂肪和结缔组织去除干净。
再用平衡液（PBS）或Hanks液漂洗；用锋利的眼科弯剪将组织块剪成小块；再用PBS 或Hanks液漂洗多次，直至液体不浑浊、无油滴、清亮为止。
2）、用湿润的吸管吸取切碎的组织块，清清吹到培养瓶皿中，并将其按一定间距均匀放在培养瓶底壁上，量不要过多，要将组织块切面贴在培养瓶底壁上；3）、将培养瓶翻转，使瓶底朝上，在种植了组织块一侧的对侧面加足培养液，勿使组织块与培养液接触，塞紧瓶塞；4）、将种植了组织块的一侧朝上，静置于37℃培养箱中；待组织块贴壁1h到3h后翻瓶，使贴壁的组织块浸没与培养液中，静置；5）、每隔2到3天更换一次培养液，或者根据培养瓶种颜色的变化确定换液时间。
2、注意事项1）、组织块接种后的前3天，从组织块向外迁徙的细胞数很少，组织块的黏附不牢固，在观察和移动的过程中，注意不要引起液体的振荡。
要避免经常翻动和振动，否则组织块不易附着于瓶壁上或附着后也会脱落飘起。
2）、加入的培养液不宜过多，避免浸泡的组织块受轻微的波动而脱落下来。
3）、用组织块培养时，要及时观察，当细胞向外迁徙出来后要注意记录并去除漂浮的组织块和残留的细胞，因为已漂浮的组织块和那些细胞碎片已经死亡，它们产生的有毒物质会影响原代细胞的生长，要及时清除。
4）、为促进组织块尽快粘贴在培养瓶皿上，可以在种植前先将胶原薄层涂在培养瓶底壁上。
细胞培养过程中，胶原中的促细胞贴附因子先吸附于培养瓶底壁上，悬浮的圆形细胞再与已吸附有促贴物质的底壁附着。
2、分离细胞培养法—贴壁型细胞培养（1）基本操作过程1）、首先用细胞分散法收获细胞，随时吸取少量消化液在镜下观察，并根据组织是否分散成细胞团或单个细胞，采取终止消化措施。
用筛网滤掉未消化的组织块。
2）、低速离心细胞悬液，弃掉上清液，加入含血清的培养液，轻轻吹打制成细胞悬液，计数并用培养液调整细胞密度。
3）、根据培养的细胞类型和实验要求，用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养瓶中。
对于需要特殊底物的细胞，要先将底物涂一层于培养瓶皿底壁，然后接种细胞。
4)、将培养瓶放入37℃恒温箱中培养。
5）、每隔2到3天更换培养液一次或根据培养液颜色的变化确定换液时间。
（2）注意事项1)原代培养的分离细胞在初次接触体外环境时，虽然被分散成单个细胞，但它们之间的互相影响还是存在的，而且这种影响对细胞能否存活是非常重要的。
在这些细胞之间能产生一些促生长的活性物质，使细胞彼此互相促进存活和生长。
如果接种的细胞密度过低，细胞之间的促生长作用很小，虽然营养物质很充足，也很难使细胞适应从体内的组织环境到被分散后进入独立生存环境的变化过程。
如果接种的细胞密度过大，会导致营养物质供应不足，代谢废物积累较快需要经常换液和传代。
2）原代培养时初始培养在组织分散和分离细胞时细胞可能会受到严重的损伤。
适当增大原代培养接种的细胞密度，给培养的细胞提供更多的类似于在体内时细胞之间的相互作用，会极大提高原代培养的细胞在体外存活率。
待细胞适应体外环境后进行传代培养时再以较低的密度接种和培养。
3）由于细胞之间的相互的内在联系被打破，分离细胞在体外培养时经历的生存环境改变很大，在体外存活和生长的难度相应增加。
对于贴壁依赖性细胞来说，尽快使接种的细胞贴壁，是决定培养能否成功的关键。
可以在接种后先将培养瓶置培养箱内培养3h到5h，由于细胞悬液中带有少量培养液，细胞即可以维持存活，又可以很快接触到培养瓶底壁，是细胞迅速黏附于底物，待细胞贴壁后，再补足培养液继续培养。
3、分离细胞培养法—悬浮型细胞培养（1）操作过程1）制备细胞悬浊液，计数并用培养液调整细胞密度。
2）在培养皿中加入足够的培养液。
3）将欲接种的细胞接种到培养器皿中。
4）在培养皿内放入一个有聚四氟乙烯包被的磁棒。
将培养皿封口，送入恒温箱内。
在磁力搅拌器上边搅拌边培养。
若接种培养瓶或试管中，封口后可将培养器皿固定在恒温摇床上，边摇动边培养，无需放置磁棒。
有些细胞也可以不用磁棒或磁力搅拌器，也不必使用恒温摇床，接种于预先用硅脂包被的培养器皿内直接在培养箱中静置培养即可。
5）培养液略呈黄色换液。
吸出部分旧培养液，加入新鲜培养液即可。
（2）注意事项1）进行悬浮细胞培养时必须保持细胞的悬浮状态。
可以通过增加培养液的黏度来帮助细胞呈悬浮状态，如给培养液中加入低浓度的透明质酸复合物。
在有搅拌装置的培养器皿内加入培养液是，以5ml为最低限度，否则搅拌时会产生气泡对细胞造成伤害。
使用这种方式需注意勿使搅拌速度过快，否则即可使培养液溢出又容易造成污染。
如果培养液的量在5ml以下，可以采用旋转瓶培养。
给悬浮培养的细胞换液时要注意不要吸出细胞。
2）能够进行悬浮培养的细胞，其生命力一般都比较旺盛，体外分裂增殖的速度较快，营养成分消耗大，换液时间隔一般较短。
（二）原代培养的注意事项1、在原代培养的1天到2天内，要特别注意观察是否有细菌、真菌的污染，一旦发现，要及时清除，防止造成其它细胞的交叉感染；2、随着培养的进程，培养液中的营养物质被逐渐的消耗，营养成分越来越少，细胞代谢产物越来越多，有细胞呼吸过程中释放出来的CO2及其它产物如乳酸、丙酮酸等也逐渐增加。
随着酸性物质的增加，培养液中的pH值越来越低，培养液的颜色也越来越黄。
因此，在细胞培养的过程中，要注意培养液颜色的变化，并根据培养液的颜色来决定换液时间。
正常情况下，培养液呈桃红色；当培养液呈橙黄色时，细胞一般生长情况良好；呈淡黄色时，可能培养时间较长，营养不足，死亡细胞较多；呈紫红色时，可能是细胞生长状态不好或已经死亡。
所以，应在培养液略黄时吸出部分旧培养液，然后补加同等数量的新鲜培养液。
换液过程中，不要吸出细胞，不要使培养液溢出培养瓶，避免各种微生物的污染。
换液时，应将培养液事先预温至37℃。
一般培养一天，组织细胞即可在培养瓶皿底壁黏附并贴壁生长。
2天到3天后，细胞恢复增殖活动。
随着培养时间的延长，细胞数量逐渐增多，消耗的营养物越来越多，需要换液的时间越来越短，当细胞逐渐长满培养瓶壁并形成一单层细胞时，细胞之间相互发生接触和联系，逐渐产生接触抑制作用，培养物生长速度减慢。
当培养物最后形成一层完整的细胞单层时，生长几乎停止。
在细胞高达80%融合时就需要进行传代了。
二、传代培养(一)传代培养的过程1、组织块培养物的传代过程基本操作过程：（1）将原代培养物连同底物盖玻片一同取出，置于无菌的培养皿上。
（2）用刀将培养物分割，刮去多余的部分，剩余继续培养的部分。
一般是分割刮去组织块外围的部分组织，留下中央的部分组织继续培养。
或部分分割并挑去组织块，留下迁移出来的细胞于底物盖玻片上继续培养。
也可以将组织块挑出，再种植于新的底物盖玻片上继续培养。
（3）给剩余的培养物加上培养液，放入培养箱中继续培养。
2、分离细胞培养物—贴壁型细胞的传代过程：有两项核心工作：一是分割培养物，二是再接种。
基本操作过程：（1）取出培养瓶，打开瓶盖，用吸管吸出旧的培养液。
（2）用无Ca2+、Mg2+的平衡盐溶液轻轻漂洗培养物1次到2次，洗去残余血清后弃去平衡盐溶液。
（3）在培养皿内加入胰蛋白酶溶液，室温下消化5min到15min显微镜下观察细胞突起缩回近似圆形、细胞之间的间隙增大时停止消化。
（4）吸管吸去消化液后立即加入含血清培养液或蛋白酶抑制剂，抑制胰蛋白酶的活性，使消化终止。
（5）用弯头吸管吸取培养皿内的培养液反复吹打瓶皿底壁，使已经消化的细胞脱离瓶皿底壁。
（6）低速离心，弃去上清液。
（7）用新鲜培养液将细胞沉淀重新悬浮，计数并调整细胞密度。
（8）根据传代目的将细胞悬浮液接种到一个或多个新的培养器皿中。
3、分离细胞培养物—悬浮型细胞的传代过程基本操作过程：（1）将培养物移入离心管低速离心。
根据传代目的将细胞悬液接种在一个或多个新的培养皿中。
（2）用吸管吸去上清液，加入新鲜培养液使细胞沉淀重新悬浮（3）根据传代目的将细胞悬液接种在一个或多个新的培养皿中。
（4）加足培养液，加盖封口，加入恒温箱中继续培养。
（二）传代培养的注意事项1、离体培养的细胞生命力比较脆弱，因此传代时细胞没有生长到培养瓶底壁面积的80%以前，不要急于传代。
2、首次传代，由于原代培养中各种类型的细胞常混杂生长，传代时不同细胞又不同的消化时间，因而要根据需要注意及时处理。
3、对贴壁细胞消化后的吹打过程要有序进行，要从一边开始到另一边结束，尤其是器皿的四角处，确保瓶皿底壁各处的细胞都被吹打脱离。
吹打时动作不宜过猛，吹出液体的力度要适中，否则会直接损伤细胞并产生能伤害细胞的气泡。
4、对于贴壁能力较弱，容易脱壁的细胞，可以不经蛋白酶原消化处理和终止消化这两步，直接对原代培养物或经漂洗后用吸管进行吹打使细胞脱离瓶皿底壁。
这种直接吹大的方法对生命力旺盛的细胞如某些肿瘤细胞较为合适。
高强度机械吹打易对细胞造成伤害较大，细胞也常有较大数量的丢失，因而绝大部分贴壁生长的细胞需消化后才能吹打，一般不单独采用高强度机械吹打。
5、首次传代时适当增大接种的细胞密度，使培养的细胞间尽快发生相互作用，有利于传代细胞的存活。
6、传代数是指对培养物传代的次数，它不等于细胞分裂的次数或细胞的代数，而仅代表传代操作的次数。
7、传代对细胞的影响或伤害程度仅次于将活细胞从生物体内取出并进行原代培养的程度。
只是因为传代后的细胞生长并不像刚开始原代培养时那样缓慢罢了。
8、每经过一次传代，细胞的生长环境就相应发生一次较大变化。
体外生长的细胞若处于动荡的生活环境中，细胞的遗传特性往往容易发生改变。
经过多次传代培养的细胞，往往容易转化为恶性细胞。
因此，传代对细胞生长和性状会产生不利影响，一般情况下要尽可能减少传代次数。