脐橙渣中柠檬苦素类化合物提取工艺
天然低共熔溶剂提取柑橘籽类柠檬苦素的工艺优化
天然低共熔溶剂提取柑橘籽类柠檬苦素的工艺优化王夜梅;李江南;尹会平;张耀海;苏学素;焦必宁【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2024(50)3【摘要】为建立柑橘籽中柠檬苦素类化合物的绿色环保提取方法,该研究制备了13种天然低共熔溶剂,并对其理化性质进行了测定。
采用超声辅助提取法从柑橘籽中提取柠檬苦素类化合物,并应用超高效液相色谱检测3种主要的柠檬苦素类化合物(柠檬苦素、诺米林和黄柏酮)。
与传统乙醇溶剂(体积分数80%)相比,由氯化胆碱和甲酸(物质的量之比1∶4)组成的天然低共熔溶剂具有较好的提取效率。
在此基础上,采用响应面法对含水量、液固比、提取温度和提取时间进行优化。
结果显示,含水量12%(体积分数)、液固比10∶1(mL∶g)、提取温度60℃、提取时间34 min为最佳提取工艺,类柠檬苦素得率为13.87 mg/g。
该研究表明,制备的天然低共熔溶剂可以作为从柑橘籽中提取类柠檬苦素的替代溶剂,为进一步应用天然低共熔溶剂从天然产物中提取生物活性物质提供参考。
【总页数】8页(P174-180)【作者】王夜梅;李江南;尹会平;张耀海;苏学素;焦必宁【作者单位】西南大学柑桔研究所(重庆);西南大学化学化工学院【正文语种】中文【中图分类】R28【相关文献】1.超声辅助低共熔溶剂提取沙棘籽粕多酚的工艺优化2.响应曲面法联合遗传算法优化天然低共熔溶剂提取肉苁蓉中苯乙醇苷类成分的工艺3.低共熔溶剂提取油茶籽壳中原花青素的工艺优化4.柠檬籽中类柠檬苦素反胶团萃取工艺优化及抑菌活性分析5.亚麻籽饼粕多糖微波辅助低共熔溶剂提取工艺优化及其生物活性研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脐橙渣中柠檬苦素类化合物提取工艺
存档编号赣南师范学院学士学位论文从脐橙渣中提取类柠檬苦素的工艺研究教学学院化学与生命科学学院届别 2011专业生物科学学号 070907029姓名孙禹晗指导老师吴笑臣完成日期 2010-5-13目录摘要 (2)关键词 (2)Abstract (2)Keywords (3)1前言 (4)1.1 研究的背景与意义 (4)1.2 脐橙中的柠檬苦素类化合物 (4)1.3柠檬苦素类似物提取方法研究进展 (5)1.4选题意义、目的和研究内容 (6)2实验部分 (7)2.1材料与试剂 (7)2.2实验方法 (7)3结果分析 (10)3.1Plackett-Burman实验 (10)3.2最陡爬坡实验 (12)3.3响应面优化实验 (12)3.4柠檬苦素类似物提取最佳条件的确定与验证 (19)4结论 (19)参考文献 (20)致谢 (22)从脐橙渣中提取类柠檬苦素的工艺研究摘要：以赣南脐橙渣为原料，以乙醇为提取溶剂。
利用Design Expert软件、采用Plackett-Burman(PB)实验设计和响应面分析法，对脐橙渣中柠檬苦素类似物的提取条件进行了优化研究，选取乙醇浓度、超声时间、浸提温度为响应变量，以柠檬苦素类似物得率为响应值，利用Box-Behnken试验设计方案和响应面分析法，建立了柠檬苦素类似物得率与响应变量的回归方程，并确定最佳提取条件为乙醇浓度82%、超声时间18min、浸提温度60℃此条件下柠檬苦素类似物得率为1.630‰，与预测值1.651‰较为一致。
关键词：脐橙渣柠檬苦素类化合物提取响应面分析法优化Study on Extraction of Limonoids from NavelOrange ResidueAbstract:Navel orange residue was used to extract limonoids with ethanol.The extraction parameters including ethanol concentration , time of ultrasonic and temperature of lixiviate were optimized using Box-Behnken design and response surface methodology based on Plackett - Burman (PB) design of experiment for achieving maximum yield of limonoids. A regression equation reflecting the relationship between the yield of limonoids and the above extraction parameters was set up.The optimal extraction parameters were found as follows: ethanol concentration82%; time ofultrasonic 18min; temperature of lixiviate 60℃.Under the optimized conditions, the actual yield of limonoids was1.630‰, close to the predicted value of 1.651‰.Keywords: navel orangeresidue; limonoids; extraction; response surface methodology; optimization1前言1.1研究的背景与意义脐橙是赣南地方经济发展的重要支柱产业，也是果农的主要经济来源，得到了国家、省、市各级政府的大力支持。
【文献综述】橘籽中柠檬苦素的提取工艺研究
文献综述应用化学橘籽中柠檬苦素的提取工艺研究柠檬苦素类化合物主要存在于芸香科植物果实中，如枳实（脐橙、柑桔、香橙）柚等中。
以果核（种子）中含量较高，果皮中含量较少（约万分之一至十万分之五）。
柑桔中的类柠檬苦素存在两种形式，一种为类柠檬苦素配基化合物, 已分离鉴定出37种，另一种为类柠檬苦素葡萄搪苷化合物，已分离鉴定出21种。
柠檬苦素的分子式：C26H30O8；分子结构如图1-1：图1-1柠檬苦素的分子结构最新研究表明柑橘中的三萜类物质在抗肿瘤方面有相当好的成效，柠檬苦素(1imonin)及其类似物就是其中一类重要组分。
柠檬苦素及其类似物在抗肿瘤、镇痛、抗炎、改善睡眠、抗病毒、抗菌、利尿、抗焦虑，调节体内胆固醇含量、防止动脉粥样硬化和除虫等方面都具有显著效果。
日本、美国已报道了柠檬苦素类物质制作功能性食品和饮料的专利，柠檬苦素的应用前景极为可观。
目前，柠檬苦素主要采用热提取、浸泡提取及超临界萃取等提取方法从天然植物中提取，研究人员已经成功从芸香科和楝科的多种植物中提取出柠檬苦素及其类似物。
由于热提取和浸泡提取柠檬苦素，需要耗费大量的时间和不必要的溶剂浪费，而且，在提取柠檬苦素的过程当中，脱脂和提取过程中所需要的溶剂对人体健康又有影响，而对于用超临界萃取的提取方法来说，节省了时间与溶剂的用量，并且无污染。
然而，对于现阶段的科技发展，超临界萃取的方法，无法得到广泛的应用。
因此，对于如何在最有效的时间，用最合适的溶剂和溶剂用量及尽最大限度来控制提取过程中溶剂对人体健康的影响的研究，显得越来越重要。
1、类柠檬苦素的应用进展类柠檬苦素是一类在农业、食品和健康上有重要价值的功能性化合物，许多研究发现，它们有抗癌作用、杀虫作用以及在柑桔化学分类上有重要意义。
2、抗癌作用1989年Lam等用柑桔类柠檬苦素在小鼠上做试验，发现类柠檬苦素能诱导GST （谷胱甘肽转移酶）的活性，能抑制化学致癌物诱导的肿瘤的发生。
其中诺米林在肝脏和小肠粘膜的诱导性最高，柠碱的诱导作用较弱。
219316082_柑橘中类柠檬苦素的提取、分离纯化及检测技术研究进展
王夜梅，李江南，尹会平，等. 柑橘中类柠檬苦素的提取、分离纯化及检测技术研究进展[J]. 食品工业科技，2023，44（12）：470−479. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022070069WANG Yemei, LI Jiangnan, YIN Huiping, et al. Research Progress on Extraction, Separation, Purification and Detection Technology of Limonins in Citrus[J]. Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(12): 470−479. (in Chinese with English abstract). doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022070069· 专题综述 ·柑橘中类柠檬苦素的提取、分离纯化及检测技术研究进展王夜梅1，李江南1，尹会平1，张耀海1，陈爱华1，苏学素2，焦必宁1,*（1.西南大学柑桔研究所，农业农村部柑桔产品质量安全风险评估实验室（重庆），农业农村部柑桔及苗木质量监督检验测试中心，农业农村部柑橘类果品质量安全控制重点实验室，重庆 400712；2.西南大学化学化工学院，重庆 400715）摘 要：柑橘是世界第一大类水果，每年有大量的柑橘加工副产品产生，这些副产品中含有丰富的类柠檬苦素化合物，具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒等多种生理作用，已被应用于食品、医药和农业等领域。
开发高效的类柠檬苦素提取、分离纯化技术，研发快速的类柠檬苦素分析检测方法，有着重要的理论和实践价值。
本文介绍了柑橘中类柠檬苦素结构特征及含量，重点综述了类柠檬苦素的提取、分离纯化及检测技术。
总结发现新兴技术如超声辅助、超临界流体提取类柠檬苦素的提取效率较好，联合应用大孔树脂吸附、高速逆流色谱、制备型高效液相色谱法分离效果好。
天然低共熔溶剂提取柑橘籽类柠檬苦素的工艺优化
天然低共熔溶剂提取柑橘籽类柠檬苦素的工艺优化天然低共熔溶剂提取柑橘籽类柠檬苦素的工艺优化主要包括以下几个方面：
1. 选择合适的低共熔溶剂：根据柠檬苦素的物理化学性质和溶解度特点，选择相对溶解度较高的低共熔溶剂，如甘油、聚乙二醇等，以提高柠檬苦素的提取效率。
2. 确定适宜的溶剂与料液比：通过调节低共熔溶剂与柑橘籽的配比，可以有效控制溶剂在提取过程中的溶剂消耗，提高柠檬苦素的提取效率。
3. 优化提取时间和温度：提取时间和温度是影响提取效果的重要因素。
通过系统的实验研究，确定合适的提取时间和温度，以保证柠檬苦素的提取量和提取效率。
4. 优化提取工艺条件：包括搅拌速度、料液比、提取时间等工艺条件的优化，以及对柑橘籽进行预处理等操作，可以显著提高柠檬苦素的提取效率。
5. 确定最佳操作参数：在上述优化工艺条件的基础上，通过系统实验，确定最佳操作参数，包括最佳提取时间、最佳提取温度、最佳溶剂浓度等，以实现柠檬苦素提取工艺的优化。
总之，通过合理选择低共熔溶剂、优化提取工艺条件和确定最佳操作参数等措施，
可以提高柑橘籽类柠檬苦素的提取效率，实现工艺的优化。
柠檬苦素的色谱研究进展
柠檬苦素的色谱检测方法研究进展摘要：赣南脐橙主要以鲜食为主，脐橙加工业落后，其主要原因为脐橙等柑橘类汁具严重的后苦作用，影响产品风味。
其中柠檬苦素为加工中主要苦味来源。
本文就柠檬苦素的色谱检测方法作简要的概述，旨在为脐橙的深加工中控制产品的质量提供一些参考。
关键词：脐橙；柠檬苦素；检测；色谱前言赣南是我国著名的脐橙生产基地，素有“中国脐橙之乡”之称。
赣南脐橙年产量已经突破150万吨，但目前国内对脐橙的开发利用率较低，95％以上产品仍依赖鲜销；且赣州以纽荷尔脐橙为主栽品种，占种植品种的90%以上，上市集中，常常出现“丰产不丰收”，脐橙滞销，果农“卖果难”等问题。
解决赣南脐橙滞销问题，最可行的办法就是大力发展脐橙深加工，而脐橙原料在深加工过程中变苦，是困扰脐橙果酒生产的难题。
脐橙鲜食或其鲜榨果汁并无苦味，但压榨的橙汁在室温中存放几个小时或在冰箱中冷藏过夜，会变苦。
这种脐橙果汁中的延迟苦味源于无苦味的前体物生成了柠檬苦素。
据报道，脐橙等柑橘类汁出现延迟苦味的原因主要是在酸性、加热、冰冻或机械损伤等逆境环境条件下，果实中所存在的非苦味的柠檬苦素A环内酯转变成了具有强烈苦味的柠檬苦素[1]。
脐橙苦味主要来自柠檬苦素类(limonin)的变化。
柠檬苦素含量的高低直接影响脐橙及其产品的品质，测定柠檬苦素的含量可用于控制脐橙及其相关产品的质量。
随着仪器分析技术的广泛应用和检测技术的发展，研究者建立了多种检测柠檬苦素类似物的方法，主要有分光光度法、薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)等。
1.薄层层析法薄层色谱法的优点是简便快捷，缺点是由于是目测，结果误差较大，所以分析重现性一直束缚着其的发展。
Dreyer 在最初的柠檬苦素检测方面做出了重要贡献，1965 年，Dreyer 首次使用薄层层析法( TLC) 对柠檬苦素类似物甙元进行了定量分析，用核磁共振技术（NMR）对柠檬苦素结构的解析[2]。
随后Hasegawa 和Bennett 利用这两种方法分离、鉴定30 种柠檬苦素苷配基和20 种柠檬苦素配糖体[3]。
一种柠檬苦素类似物的制备方法[发明专利]
![一种柠檬苦素类似物的制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1dc10ee67cd184254a3535bb.png)
专利名称：一种柠檬苦素类似物的制备方法专利类型：发明专利
发明人：杨槐
申请号：CN201010240480.0
申请日：20100729
公开号：CN102344483A
公开日：
20120208
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种柠檬苦素类似物的制备方法。
以柑桔种子、皮渣及其柑桔加工废液为主要材料，利用超临界CO/反相微乳萃取，并结合超临界CO吸附分离技术，建立多技术集合的一体化萃取/分离柠檬苦素类似物及其糖苷的制备工艺。
采用先进的分析测试手段如HPLC、LC-MS、NMR等及其相应的指纹图谱技术，结合生理活性评价。
申请人：杨槐
地址：400711 重庆市北碚区胜利村5号
国籍：CN
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一种柠檬苦素的提取方法[发明专利]
![一种柠檬苦素的提取方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/992b42fbcc7931b764ce1539.png)
专利名称：一种柠檬苦素的提取方法
专利类型：发明专利
发明人：倪辉,蔡慧农,杨远帆,高秋芬,陈峰,杜希萍,黄高凌,伍菱,肖安风
申请号：CN201410259115.2
申请日：20140612
公开号：CN104004051A
公开日：
20140827
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种柠檬苦素的提取方法，包括以下步骤：步骤一、原料浸提或榨汁：将原料用水直接浸泡或者采用压榨机直接将原料榨汁，得到提取液；步骤二、加盐及调pH：向上述提取液中，加入硫酸盐固体物质或硫酸盐饱和溶液；调节pH为3-7；步骤三、加热保温：加热至温度20-100℃，保温时间10-110min；步骤四、离心：在转速为2500×g的条件下离心10min，制得柠檬苦素沉淀。
采用本发明后，与传统方法相比，原料不需要干燥就可直接用浸提液或榨汁液，采用沉淀法回收水中的大部分柠檬苦素，不需要复杂的设备，操作简便，工艺成本低。
申请人：集美大学
地址：361000 福建省厦门市集美区银江路185号
国籍：CN
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柠檬苦素衍生物及其制备方法和用途
柠檬苦素衍生物及其制备方法和用途一、柠檬苦素衍生物的概述。
1.1 柠檬苦素本身是一种很有趣的物质。
它就像大自然隐藏在柠檬里的一个小秘密。
柠檬苦素存在于柠檬等柑橘类水果中，有着独特的化学结构，这个结构就像是一把独特的钥匙，有着很多潜在的功能等待我们去发现。
1.2 柠檬苦素衍生物呢，是在柠檬苦素的基础上经过一些化学变化产生的。
这就好比是给原本的东西穿上了不同的“衣服”，让它有了新的面貌和可能的新功能。
二、柠檬苦素衍生物的制备方法。
2.1 化学合成法。
这就像是在化学的厨房里进行一场烹饪。
化学家们按照一定的配方，利用各种化学试剂，像搭积木一样，一步一步地构建出柠檬苦素衍生物。
不过这可不是一件轻松的事儿，就像走钢丝一样，每一步都得小心翼翼，一个小失误就可能导致失败。
2.2 从天然产物中提取后修饰。
我们先从柠檬等水果里把柠檬苦素提取出来，这就像在宝藏里找到一颗宝石。
然后再通过一些特殊的化学手段对它进行修饰，就像是给宝石进行雕琢，让它变成更加精美的艺术品，也就是我们想要的柠檬苦素衍生物。
2.3 生物合成法。
这里我们就借助微生物或者植物细胞这些小助手。
它们就像一个个勤劳的小工匠，在合适的环境下，按照自己的“工作流程”，把一些简单的原料转化成柠檬苦素衍生物。
这有点像“借鸡生蛋”的做法，利用生物自身的能力来为我们制造有用的东西。
三、柠檬苦素衍生物的用途。
3.1 在医药领域的用途。
它就像一个潜在的医药宝库。
有研究发现柠檬苦素衍生物可能具有抗癌的潜力，这就像给癌症患者带来了新的希望曙光。
还可能对一些炎症有抑制作用，就像是一个灭火器，扑灭身体里炎症的“小火苗”。
而且在抗菌方面也可能有所作为，就像一个小卫士，守护着人体的健康防线。
3.2 在食品工业的用途。
它可以作为一种天然的防腐剂，这可比那些人工合成的防腐剂好多了，是真正的“绿色守护者”。
能够延长食品的保质期，就像给食品穿上了一层保护罩。
同时，它还可能对食品的风味有一定的影响，说不定能给食品带来一种独特的“小清新”味道，让食品更加美味可口。
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存档编号赣南师范学院学士学位论文从脐橙渣中提取类柠檬苦素的工艺研究教学学院化学与生命科学学院届别 2011专业生物科学学号 070907029姓名孙禹晗指导老师吴笑臣完成日期 2010-5-13目录摘要 (2)关键词 (2)Abstract (2)Keywords (3)1前言 (4)1.1 研究的背景与意义 (4)1.2 脐橙中的柠檬苦素类化合物 (4)1.3柠檬苦素类似物提取方法研究进展 (5)1.4选题意义、目的和研究内容 (6)2实验部分 (7)2.1材料与试剂 (7)2.2实验方法 (7)3结果分析 (10)3.1Plackett-Burman实验 (10)3.2最陡爬坡实验 (12)3.3响应面优化实验 (12)3.4柠檬苦素类似物提取最佳条件的确定与验证 (19)4结论 (19)参考文献 (20)致谢 (22)从脐橙渣中提取类柠檬苦素的工艺研究摘要：以赣南脐橙渣为原料，以乙醇为提取溶剂。
利用Design Expert软件、采用Plackett-Burman(PB)实验设计和响应面分析法，对脐橙渣中柠檬苦素类似物的提取条件进行了优化研究，选取乙醇浓度、超声时间、浸提温度为响应变量，以柠檬苦素类似物得率为响应值，利用Box-Behnken试验设计方案和响应面分析法，建立了柠檬苦素类似物得率与响应变量的回归方程，并确定最佳提取条件为乙醇浓度82%、超声时间18min、浸提温度60℃此条件下柠檬苦素类似物得率为1.630‰，与预测值1.651‰较为一致。
关键词：脐橙渣柠檬苦素类化合物提取响应面分析法优化Study on Extraction of Limonoids from NavelOrange ResidueAbstract:Navel orange residue was used to extract limonoids with ethanol.The extraction parameters including ethanol concentration , time of ultrasonic and temperature of lixiviate were optimized using Box-Behnken design and response surface methodology based on Plackett - Burman (PB) design of experiment for achieving maximum yield of limonoids. A regression equation reflecting the relationship between the yield of limonoids and the above extraction parameters was set up.The optimal extraction parameters were found as follows: ethanol concentration82%; time ofultrasonic 18min; temperature of lixiviate 60℃.Under the optimized conditions, the actual yield of limonoids was1.630‰, close to the predicted value of 1.651‰.Keywords: navel orangeresidue; limonoids; extraction; response surface methodology; optimization1前言1.1研究的背景与意义脐橙是赣南地方经济发展的重要支柱产业，也是果农的主要经济来源，得到了国家、省、市各级政府的大力支持。
近年来，随着赣南脐橙种植面积的增大、榨汁加工业的快速发展，每年都会产生大量的脐橙渣。
这些残渣中含有许多重要的生物活性物质，如类柠檬苦素、黄酮类化合物、香精油等。
目前国内柑橘加工后的皮渣一般作为饲料、肥料或废弃物处理，利用率及经济效益低，且易污染环境。
研究表明，柠檬苦素及其类似物在抗肿瘤、镇痛、抗炎、改善睡眠、抗病毒、抗菌、利尿、抗焦虑[1]，调节胆固醇含量、防止动脉粥样硬化和除虫等方面都具有显著效果[2-3]，它还是一种新型的食品添加剂，市场价格昂贵（进口价至少在2500元/50mg以上），而且国内生产极少，市场潜力很大。
目前美国、日本已出现柠檬苦素类似物制作药物、功能性食品和饮料的专利[4-5]。
因此，充分开发脐橙渣资源，提取其中的活性物质，最大限度地提高脐橙产业的科技含量和产品附加值是十分必要的，这对减少环境污染、发展地方经济等都具有非常重要的意义。
1.2脐橙中的柠檬苦素类化合物柠檬苦素类物质（limonoids）是一种三萜类的植物次生代谢产物[6]，主要存于芸香科植物和楝科植物中，现今已分离得300多种柠檬苦素类化合物，柑橘属中分离出36种柠檬苦素类物质和19种配糖体[7-9]，主要有柠檬苦素(limonin)、诺米林(nomilin)、柠檬苦素A一环内酯(limonoate A-ring Lacton)、柠檬苦素17-β-D吡喃葡萄糖苷(limonin17-β-D-glucopyranoside)、宜昌素(ichangin)和诺米林酸(nominic acid)等物质[10]。
部分柠檬苦素类化合物的分子结构如图1。
图1 部分柠檬苦素类化合物的结构式1.3柠檬苦素类似物提取方法的研究进展[11]随着对柑橘柠檬苦素类似物生理活性的阐明，对柠檬苦素类化合物的提取分离以及作为功能性食品添加剂的应用已经开始，柠檬苦素类似物的提取方法主要有有机溶剂提取法、水—醇浸提法以及微波或超声波、涡流振荡提取。
有机溶剂浸提法：有机溶剂提取法是目前国内外使用最广泛的方法，易用于生产。
首先是脱脂，使用石油醚、乙醚或正己烷进行脱脂；第二步是浸提或萃取，常用萃取剂有：三氯甲烷、二氯甲烷、己烷、正己烷、丙酮等进行提取4—12h，将所得提取液过滤并浓缩至干得到粗产品为柠檬苦素类似物。
水—醇浸提法：由于柠檬苦素类似物水溶性较差，所以采用有机溶剂提取较多，但丙酮、石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷等有机溶剂具有一定的毒副作用，而且最终产品较难去除干净，易残留于产品中。
为此可采用水—乙醇作为萃取剂进行提取，具有无毒、安全性高、易回收利用等特点。
主要采用水醇浸提、酸醇浸提。
微波或超声波、涡流振荡提取：利用微波或超声波、涡流振荡处理产生的激流、乳化、扩散、击碎、振荡等综合效应，可加速柠檬苦素类似物从组织中转移、扩散到溶剂中，从而提高柠檬苦素的浸出效率和产品纯度。
1.4选题意义、目的和研究内容在已有的类柠檬苦素提取方法中，或是采用丙酮、氯仿等毒性较强的有机溶剂, 造成有机溶剂残留严重，或是设备一次性投资大。
因此，寻找绿色环保的提取剂，研究高效的提取工艺是制取脐橙类柠檬苦素的关键，对提高赣南脐橙产品经济效益和科技附加值具有重要的意义。
本工作拟用脐橙渣质为原料，以乙醇为溶剂，超声波辅助提取类柠檬苦素，研究最佳工艺条件，其研究内容有：（1）Plackett-Burman实验设计法：一种两水平的实验设计方法，其基于非完全平衡块原理，可以用最少实验次数估计出因素的主效应，适用于从众多的考察因素中快速有效地筛选出最为重要的几个因素，供进一步研究用。
（2）最陡爬坡实验：以实验值变化的梯度方向为爬坡方向，根据各因素效应值的大小确定变化步长，能快速地逼近最佳区域。
（3）响应面分析法：利用响应面分析法中的Box-Behnken实验方案进行实验，对实验数据拟合得到二阶响应面模型，最终确定最优实验条件，并进行验证。
2实验部分2.1材料与试剂2.1.1实验原料新鲜脐橙榨汁后剩余皮渣，由江西省脐橙工程技术研究中心提供。
2.1.2主要试剂石油醚分析纯天津市大茂化学试剂厂无水乙醇分析纯天津市大茂化学试剂厂95%乙醇分析纯天津市大茂化学试剂厂浓硫酸化学纯江西洪都生物化学有限公司对-二甲氨基苯甲醛分析纯天津市天新精细化工开发中心柠檬苦素进口2.1.3主要仪器DZF-6090型真空干燥箱上海三发科学仪器有限公司KQ-600B型超声波清洗器昆山市仪器有限公司HH-2型数显恒温水浴锅常州国华电器有限公司SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵郑州长城科工贸有限公司RE-52A旋转蒸发器上海亚荣生化仪器厂WFJ 7200分光光度计尤尼柯上海仪器有限公司电子天平；榨汁机。
2.2实验方法2.2.1试剂的配制[7](1)柠檬苦素标准液：用电子天平准确称取0.0092g柠檬苦素，用适量蒸馏水溶解，待溶解后转移至50mL容量瓶中，定容，摇匀，制得质量浓度为184mg/L的柠檬苦素标准溶液。
(2)显示剂：量取65mL 浓硫酸和35mL 无水乙醇，将其混合，待冷却后加入125mg 对-二甲氨基苯甲醛。
使用时再向该溶液中加入9%的三氯化铁溶液0.05mL 并混匀，现用现配。
(3)9%三氯化铁溶液:称取 4.5g 三氯化铁固体，将固体溶于45.5mL 蒸馏水中，待冷却转移至棕色试剂瓶中保存。
2.2.2 制作标准曲线取6支试管，分别加入0、0.4、0.8、1.2、1.6和2mL 上述柠檬苦素标准溶液，并以无水乙醇稀释至2mL ，再分别加入5mL 显色试剂，以柠檬苦素空白液为参比，显色30min 后在550nm 处测定其吸光度。
以吸光度A 对柠檬苦素的质量浓度作图，得出柠檬苦素的标准曲线，见图2。
回归方程为y=0.0024x+0.0007，线性相关系数为0.9994。
图2柠檬苦素比色测定标准曲线 2.2.3实验步骤将湿脐橙渣晾晒后过40目筛，取干燥脐橙渣于索氏提取器中用石油醚（60℃～90℃）回流脱脂24h ，干燥备用。
准确称取5g 样品，在不同的影响因素下按相应的液料比加入乙醇溶液，超声一定时间后放入水浴锅中浸提，一定时间后进行抽滤，将滤液用吸光值旋转蒸发器蒸干得浸膏，用少量二氯甲烷溶解浸膏，再抽滤，将滤液旋转蒸干，加10mL 无水乙醇溶解，得柠檬苦素类似物提取液。
以2.2.2节方法测其吸光度，计算得率。
2.2.4柠檬苦素的定量分析方法式中：c 为提取液中柠檬苦素类似物质量浓度（ug/mL ）；V 为提取液体积（mL ）；m 为脐橙渣的质量(g)。
2.2.5 Plackett-Burman 实验Plackett-Burman 建立在不完全平衡板块原理的基础上，通过 N 个实验至多可以研究(N －1)个变量(N 一般为 4的倍数)。
在实验过程中，通常会预留出虚拟变量作为误差分析[12]。
每个变量有高、低两个水平，分别以+1、-1 标记，各因素水平设置见表 1。