生物安全评估及生物安全柜的使用和检测

生物安全评估及生物安 全柜的使用和检测
上海市临床检验中心 葛平
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生物安全意识至关重要
所有操作人员必须经过培训，通过考核，获得上岗证书； 在开始相关工作之前，应对所从事的病原微生物及相关操 作进行危险评估，根据国家对于各种微生物操作的危险等级 划分和防护要求以及危险评估的结果，制定全面、细致的标 准操作规程和程序文件，对于关键的危险步骤设计出可行的 防护措施并对这些细节了然于胸； 熟悉各级生物安全实验室运行的一般规则，掌握各种仪器、 设备、装备的操作步骤和要点，对于各种可能的危害应非常 熟悉； 应掌握各种感染性物质操作的一般准则和技术要点。
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临床检验相关生物危险等级分布
200
180
160
140
120
一级
100
二级
80
三级
60
四级
40
20
0
病毒
细菌
真菌
寄生虫
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《名录》有关说明
❖ 国外新发现（我国尚未发现）传染病病原体的操作级 别完全按照国外同类标准
❖ 非法定传染病病原微生物的操作级别主要参照国际相 关标准
❖ 本规定中所涉及病毒的操作级别主要指野生型病原微 生物，重组体另加说明
境 不 构 成 严 重 危 害 ， 传 作者、群体、家畜或环境不 室工作人员、社区、牲畜或
播 风 险 有 限 ， 实 验 室 感 会引起严重危害的病原微生 环境不易导致严重危害。实
染 后 很 少 引 起 严 重 疾 病 ，物。实验室感染不导致严重 验室暴露也许会引起严重感
并 且 具 备 有 效 治 疗 和 预 疾病，具备有效治疗和预防 染，但对感染有有效的预防
❖ II级生物安全柜美国/国际标准(NSF/ANS145-2002), ❖ WHO生物安全手册,第三版.2004.
❖ 上海市一、二级病原微生物实验室生物安全管理规范（上海市卫 生局沪卫科教〔2006〕34号 ）
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WHO 生物安全手册
Laboratory Biosafe ty Manual 1st edition
• 动物感染实验：指以活病原微生物感染动物的实验。
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• 未经培养的感染性材料的操作：指未经培养的感染性材 料在采用可靠的方法灭活前进行的病毒抗原检测、血清学 检测、核酸检测、生化分析等操作。 • 灭活材料的操作：指感染性材料或活病毒在采用可靠的 方法灭活后进行的病毒抗原检测、血清学检测、核酸检测、 生化分析、分子生物学实验等不含致病性活病毒的操作。 • 无感染性材料的操作：指针对确认无感染性的材料的各 种操作，包括但不限于无感染性的病毒DNA或cDNA操作。
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使用人类病原微生物的重组体
在卫生部发布有关的管理规定之前，对于人类病毒的重组 体（包括对病毒的基因缺失、插入、突变等修饰以及将病毒作 为外源基因的表达载体）暂时遵循以下原则： （1）严禁两个不同病原体之间进行完整基因组的重组； （2）对于对人类致病的病毒，如存在疫苗株，只允许用疫苗 株为外源基因表达载体，如脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒、乙型 脑炎病毒等； （3）对于一般情况下即具有复制能力的重组活病毒，其操作 时的防护条件应不低于其母本病毒；对于条件复制型或复制缺 陷型病毒可降低防护条件，但不得低于BSL-2的防护条件，例 如来源于HIV的慢病毒载体，为双基因缺失载体，可在BSL-2实 验室操作；
定（05年12月28日卫生部令第45号发布 ） ❖ 医疗废物管理条例（国务院第380号，2003） ❖ 人间传染的病原微生物名录（中华人民共和国卫生部令第45号） ❖ 实验室生物安全通用要求(GB19489-2008) ❖ 生物安全实验室建筑技术规范(GB50345-2004) ❖ 微生物和生物医学实验室生物安全通用准则(WS233-2002)
➢ 样本检测：包括样本的病原菌分离纯化、药物敏感性实 验、生化鉴定、免疫学实验、PCR核酸提取、涂片、显微 观察等初步检测活动。
➢ 霍乱弧菌：因属甲类传染病，流行株按第二类管理，涉 及大量活菌培养等工作可在BSL-2实验室进行；非流行株 归第三类。
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未列出的病原微生物
本表未列出之病毒和实验活动，由各单位的生物 安全委员会负责危害程度评估，确定相应的生物安全防 护级别。如涉及高致病性病毒及其相关实验的应经国家 病原微生物实验室生物安全专家委员会论证。
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对未知样本的操作
在保证安全的前提下，对临床和现场的未知样本检测 操作可在BSL-2或以上防护级别的实验室进行，涉及病毒分 离培养的操作，应加强个体防护和环境保护。要密切注意 流行病学动态和临床表现，判断是否存在高致病性病原体， 若判定为疑似高致病性病原体，应在相应生物安全级别的 实验室开展工作。
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有关细菌、真菌实验活动的说明
➢ 大量活菌操作：实验操作涉及“大量”病原菌的制备， 或易产生气溶胶的实验操作（如病原菌离心、冻干等）。 “大量”的病原菌制备，是指病原菌的体积或浓度，大 大超过了常规检测所需要的量。比如在大规模发酵、抗 原和疫苗生产，病原菌进一步鉴定以及科研活动中，病 原菌增殖和浓缩所需要处理的剂量。
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微生物危险度评估
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中华人民共和国国家标准（GB19489-2008）
《实验室生物安全通用要求》
3 风险评估及风险控制 3.1 实验室应建立并维持风险评估和风险控制程序，以持续进行危 险识别、风险评估和实施必要的控制措施。
3.1.2 应事先对所有拟从事活动的风险进行评估，包括对化学、物 理、辐射、电气、水灾、火灾、自然灾害等的风险进行评估。
3.1.3 风险评估应由具有经验的专业人员（不限于本机构内部的人 员）进行。
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《病原微生物实验室生物安全管理条例》
❖第四条 国家对病原微生物实行分类管理，对实 验室实行分级管理。
❖第五条 国家实行统一的实验室生物安全标准。 实验室应当符合国家标准和要求。
❖第二十一条 一级、二级实验室不得从事高致病 性病原微生物实验活动。
防措施的微生物。
措施，并且传播风险有限。 和治疗措施，并且疾病传播
的危险有限。
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《 病 原 微 生 物 实 验 室 生 《实验室生物安全通用要求》WHO《 生 物 安 全 手 册 》
物安全管理条例》
（GB19489-2004）
（第三版，2004）
二 类 ： 能 够 引 起 人 类 或 3级：（高个体危害，低群体 3级：（ 个体危险高，群体
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前言
事件：炭疽粉末、SARS、猪链球菌及各地的实验 室感染。
投入：各国政府对卫生部门加大投入。 实际：实验室相关感染在各地经常发生。
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相关文件
❖ 中华人民共和国传染病防治法（2004） ❖ 病原微生物实验室生物安全管理条例（2004年11日国务院第69次
常务会议通过） ❖ 可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规
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《名录》有关说明
• 病毒培养：指病毒的分离、培养、滴定、中和试验、活病 毒及其蛋白纯化、病毒冻干以及产生活病毒的重组试验等 操作。利用活病毒或其感染细胞（或细胞提取物），不经 灭活进行的生化分析、血清学检测、免疫学检测等操作视 同病毒培养。使用病毒培养物提取核酸，裂解剂或灭活剂 的加入必须在与病毒培养等同级别的实验室和防护条件下 进行，裂解剂或灭活剂加入后可比照未经培养的感染性材 料的防护等级进行操作。
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《 病 原 微 生 物 实 验 室 生 《实验室生物安全通用要求》WHO《 生 物 安 全 手 册 》
物安全管理条例》
（GB19489-2004）
（第三版，2004）
四 类 ： 在 通 常 情 况 下 不 1级：（低个体危害，低群体 1级：（ 无或极低的个体和
会 引 起 人 类 或 者 动 物 疾 危害）不会导致健康工作者 群体危险）不太可能引起人
病原微生物。
和治疗措施。
一 类 ： 能 够 引 起 人 类 或 4级：(高个体危害，高群体 4级：（ 个体和群体的危险
者动物非常严重疾病的 危害)能引起人类或动物非常 均高）病原微生物通常能
微 生 物 ， 以 及 我 国 尚 未 严重的疾病，一般不能治愈，引起人或动物的严重疾病 ，
发现或者已经宣布消灭 容易直接或间接或因偶然接 并且很容易发生个体之间
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2003
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2004
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实验室布局 危险度评估 生物安全柜的检测 生物安全柜的使用
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BSL-2实验室布局
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上海市一、二级病原微生物实验室生物安全管理规范
第二节 设施设备 第三十四条 二级病原微生物实验室的设施设备要求 （一）可设在共用建筑内，但应相对独立，设可自动关闭的 带锁的门。 （二）实验时门应呈关闭状态，在实验结束后实验室应呈锁 闭状态。实验室的门或墙上应有可视窗。 （三）在室内应配备生物安全柜，生物安全柜的型号应根据 实验的项目和对象确定。生物安全柜应放在气流流动少，人 员走动少，离出口处较远的位置，周围留有一定的空间。 （四）当对可能产生气溶胶的感染性材料样本的操作无法在 生物安全柜内进行而必须采取外部操作时，应加装负压罩。
病的微生物。
和动物致病的细菌、真菌、 或动物致病的微生物。
病毒和寄生虫等生物因子。
三 类 ： 能 够 引 起 人 类 或 2级：(中等个体危害，有限 2级：（ 个体危险中等，群
者 动 物 疾 病 ， 但 一 般 情 群体危害)能引起人或动物发 体危险低）病原微生物能够
况 下 对 人 、 动 物 或 者 环 病，但一般情况下对健康工 对人或动物致病，但对实验