花青素提取工艺试验

花青素提取工艺试验

实验仪器材料：

仪器：打浆机、干燥箱、粉碎机、超声波震荡器、培养箱、低温超速离心机、旋转蒸发仪、真空干燥箱、水浴锅、pH试纸

试剂：80%乙醇、山芋粉、蔗糖、硝酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、滤纸、石油醚、0.1%稀盐酸

材料：枸杞、黑曲霉

1.1称取枸杞加入去PH=2离子水中（按比例为1：120g/L），在60℃水浴中浸泡4h，分离样液和样品，（重复2次），样液待用1.2【脱脂处理】将1.1中的样品和样液与石油醚（30-60℃）按1:10g/L混合，浸泡1h后，于旋转蒸发仪中50℃加热回流2h，所得样品溶液，放在打浆机打碎

1.3加入微生物培养液中【固液1:5】(培养液配比: 山芋粉3. 7 5%、蔗糖1 5% 、硝酸铵0. 2%、磷酸二氢钾0. 1%和硫酸镁0. 025% ) , 120 ℃条件下灭菌20min,在超净工作台内接种。黑曲霉与培养液比例为1∶1 000。接种后放入培养箱中培养。温度30℃，pH4.5，培养时间72h

1.4培养后，在培养液中加入40倍pH3.0的80%乙醇，在超声波水浴中50℃提取3h（过滤后重复1-2次）

1.5粗过滤后，低温离心40℃，4000r/min，10min，去沉淀，取离心液

1.6 50℃旋转蒸发仪真空浓缩，减压浓缩0.076Mpa

1.7 放入真空干燥箱干燥，得粗品

1.8上述浓缩液再次离心，加入0.1mol/LHcl溶液调pH=4-4.5，离心分离，再次浓缩烘干

精提1

2.1上述粗品，加入温水中溶解

2.2常温下，在微滤机下0.12MPa，进行微滤收集液体

2.3所得滤液再次放入超滤机中过滤，0.1MPa，膜流速1500L/h 2.4取0.5g活化湿AB- 8 树脂和20ml液体常温吸附24h，离心2.5滤液加入60%乙醇洗脱，1-3h左右，后60℃，减压真空88kpa 下蒸馏回收乙醇

2.6所得液体加入一定量石油醚精致萃取，35℃减压浓缩回收，2.7真空干燥称重

方案二

1.1称取样品和样液与石油醚（30-60℃）按1:10ml混合，浸泡1h后，于旋转蒸发仪中50℃加热回流2h，所得样品溶液，干燥滤渣用于色素提取

1.2以料液比为1：40的PH=3的80%乙醇在50℃下浸泡3后，在超声波为40kHZ下，100W,20min，过滤去沉淀，重复1-2次1.3粗过滤后，低温离心40℃，4000r/min，10min，去沉淀，取离心液

1.4 50℃旋转蒸发仪真空浓缩，减压浓缩0.076Mpa

1.5 放入真空干燥箱干燥，得粗品

1.6上述浓缩液再次离心，加入0.1mol/LHcl溶液调pH=4-4.5，离心分离，再次浓缩烘干

精品提取

1、称取粗品50g左右加入170ml的pH3.5-4.0的浓盐酸化的95%乙醇，在40-50℃中搅拌提取4h，抽滤

2、滤渣用100ml酸性乙醇在同样条件下进行第二次提取3h，抽滤（也可进行重复多次）

3、合并滤液，边搅拌边加入浓氨水，并调溶液ph为7.2-7.5，室温静置0.5h，使之完全沉淀，抽滤，在沉淀未干燥前，用适量冰醋酸使之分解成稀糊状，可微微加热，静置1h，抽滤

理化因素：

A：最大波长的确定：

取处理过的枸杞粉末溶于乙醇中浸泡一段时间后利用紫外分光光度计进行光谱扫描，测定最大吸收波长。

B：提取溶剂的确定：

称取1g枸杞粉末分别放入盛有蒸馏水、无水乙醇、80%乙醇、80%酸性乙醇pH=3、石油醚、乙醚、三氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯的锥形瓶中各20ml，50℃浸泡3h后，过滤，定容50ml，取1ml 提取液用相应溶剂稀释至5倍，在最大波长下测定吸收波长

C：提取溶剂体积分数的确定：

取1g枸杞粉末，放入分别盛有50ml体积分数分别为30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的酸性乙醇溶液的锥形瓶中，50℃浸

泡3h后，过滤，定容至50ml，取取1ml提取液用相应溶剂稀释至5倍，在最大波长下测定吸收波长

D：提取温度的选择：

取1g枸杞粉末，放入盛有50mlpH=3的80%酸性乙醇溶液法锥形瓶中，分别至于30、40、50、60、70、80、90水浴中浸提2h，过滤定容至50ml，取1ml提取液用相应溶剂稀释至5倍，在最大波长下测定吸收波长

E：提取时间的选择：

取1g枸杞粉末，放入盛有50mlpH=3的80%酸性乙醇溶液法锥形瓶中，50℃条件下浸提3h，过滤定容至50ml，取取1ml提取液用相应溶剂稀释至5倍，在最大波长下测定吸收波长

F：料液比的选择

取1g枸杞粉末，分别加入20、30、40、50、60、70、80mlpH=3的80%酸性乙醇溶液中混合，50℃条件下浸提3h，过滤定容至100ml，取取1ml提取液用相应溶剂稀释至5倍，在最大波长下测定吸收波长

G辐射功率的选择：

取1g枸杞粉末，按料液比为1：50与PH=3的80%酸性乙醇中混合，在50℃下，超声波频率为50kHZ,设置功率为30w、40w、50w、60w、70w、80w、90w、100w，浸提3h，过滤定容至100ml，取取1ml提取液用相应溶剂稀释至5倍，在最大波长下测定吸收波长H:pH值的选择

称取1g枸杞粉末，加入50ml的80%乙醇溶液中，分别将提取液的PH值调为2、3、4、5、6、7、8，在50℃条件下浸提3h，过滤，定容。取取1ml提取液用相应PH值溶剂稀释至5倍，在最大波长下测定吸收波长

I：提取条件的正交实验

取上述各个单因素和在一起进行水平设计，重复三次，取平均值，选出最佳条件

J提取次数对色素浓度的影响

取10 g枸杞粉3份，加入100mLpH=3,80%酸性乙醇溶液，于50℃分别回流提取1, 2, 3次，每次60mino过滤，合并每组提取液并定容至一定体积，测定吸光度值

粗品或精品提出后.

色素用蒸馏水溶解适量色素，以紫外可见分光光度计在200nvr800nm范围内扫描测其吸光度，得色素的紫外吸收光谱最大吸收波长确定

A：溶解性测定

取水、甲醇、乙醇、乙二醇、丙酮、乙酸乙酷 .石油醚、四氯