实验三 植物细胞骨架的光学显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察
首先，我们需要准备植物细胞标本。
可以选择一片老化或短时处理的叶片或根尖作为实验材料。
将其取下并迅速固定在伊红溶液中，避免细胞变形。
接下来，需要进行细胞固定和染色。
将固定好的细胞标本移至PBS （磷酸缓冲盐溶液）中进行洗涤，以去除残余的伊红溶液。
然后，在细胞中加入透明质酸，将其中和离子对骨架的结合，使骨架暴露出来。
接着，利用荧光染色剂如荧光素-鲍曼氏染液或Phalloidin染液来染色微丝以及微管。
准备好细胞标本后，我们可以将其放置在显微镜下进行观察。
在显微镜镜头下，可以看到细胞内微丝和微管形成的骨架结构。
微丝主要分布在细胞质内，形成一种网状结构，其中包括原生质流动的微丝束。
而微管主要分布在细胞中心，形成一个网络，并且辐放到细胞外围。
进一步观察时，可以调节显微镜的焦距和光源强度，以获得更清晰的图像。
可以使用高倍目镜观察细胞骨架的细节，并使用显微镜移动台来调整视野。
此外，还可以利用荧光显微镜技术，通过筛选不同波长的荧光滤光片，进一步突出特定荧光标记的细胞结构。
通过光学显微镜观察植物细胞骨架，可以更深入地了解细胞结构和功能。
通过观察微丝和微管的分布和连通性，可以了解细胞形态的维持和改变，细胞分裂以及细胞运动等生理过程。
此外，还可以观察植物细胞骨架在应对外界环境刺激，如生物逆境和激素信号的响应中的作用。
这些研究可以为揭示细胞生物学的本质和发展新的疾病治疗方法提供重要的参考。
8.细胞骨架和胞间连丝
植物细胞骨架和胞间连 丝的观察
一、植物细胞骨架的光学显微镜观察 （一）实验目的 掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法，观察光 学显微镜下细胞骨架的网状结构。 （二）实验原理 细胞骨架定义： 狭义的细胞骨架（cytoskeleton）概念是指真核细胞中的蛋 白纤维网络结构。它所组成的结构体系称为 “细胞骨架系 统”，与细胞内的遗传系统、生物膜系统、并称 “细胞内的 三大系统”。包含三类蛋白纤丝？？
植物细胞用适当浓度的 TritonX—100 处理 后， 可破坏细胞内蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白 质却保存完好。 考马斯亮蓝 R250 (Coomassie brilliant blue R250) 是一种蛋白质染料，处理后的材料用考 马斯亮蓝 R250 染色后，用光学显微镜观察， 可以见到一种网状结构，即是细胞骨架结构。
（二）实验材料、用品 1、材料：新鲜的红辣椒果实
2、仪器：显微镜，载玻片，镊子，玻璃吸 管，刀片，碘液，红墨水等。
（三）实验步骤
剪取一小块红辣椒，用刀片小心刮去果肉，留下一 层极薄露白的表皮，分别进行以下操作： 1. 放在载玻片上，滴一滴水，盖上盖玻片后即可观察。 镜检时光线不要太亮。 2. 加碘液染色制片观察。在高倍镜下，可以看见其表 皮是由不太规则的细胞群构成的，细胞中有着淡黄色 的细胞质。细胞壁很厚，着深黄色，壁上有小孔（纹 孔），孔里有细胞质丝穿过。 3. 用红墨水染色30 min，然后吸去多余的染料，加水封 片镜检，可见其细胞质被染成粉红色。也可观察到纹 孔和胞间连丝。
（四）实验结果
Байду номын сангаас
胞间连丝 连丝微管
胞间连丝
（五）实验报告
1 描绘所观察到的洋葱鳞叶细胞骨架图。 2 描绘所观察到的红辣椒细胞胞间连丝图。
植物细胞骨架光学显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察黄斌谢卓文徐安乐钟建良邹天生(中山大学生命科学学院00级生物科学专业，广州510275)【摘要】本实验根据细胞骨架的特性，利用适当浓度的TritonX-100处理洋葱鳞茎内表皮细胞，破坏细胞内大多数蛋白质而保存细胞骨架系统，再经考马斯蓝染色，在光学显微镜下观察细胞骨架，对细胞骨架的分布，膜骨架，核骨架，胞间连丝等进行了初步的研究。
【关键词】细胞骨架,光学显微镜,纤维,网络结构1 引言细胞骨架是真核生物细胞中的重要结构，起细胞支架的作用，并参与胞内物质运输、细胞运动、分泌吸收、细胞通讯、有丝分裂等。
由于与细胞各项功能的密切关系，细胞骨架的研究已成为当今细胞生物学中较具吸引力的领域之一。
对细胞骨架的研究须先对其进行观察。
本实验以洋葱鳞茎内表皮细胞为材料对细胞骨架进行观察研究，基本原理是细胞内脂质和大部分蛋白质可与去垢剂Triton-100形成去垢剂-蛋白/脂质复合物，从而溶于水中被提取，而结合成纤维状的细胞骨架蛋白则保持其在生活细胞中存在的状态。
之后用考马斯亮蓝对蛋白质染色，使骨架系统在光学显微镜下可见，从而对其进行观察研究。
2 材料与方法2.1 材料新鲜洋葱鳞茎，撕取内表皮，切成约0.5cm×0.5cm大小。
2.2 器材光学显微镜、精确天平、0.02ml移液枪、50ml烧杯、玻璃滴管、容量瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镊子。
2.3 试剂：•M-缓冲液：50mmol/L咪唑、50mmol/LKCl、0.5mmol/LMgCl2、0.1mmol/LEDTA、1mmol/LEGTA[乙二醇双（α-氨基乙基）醚四乙酸]、1mmol/L巯基乙醇。
•6mmol/LPH6.8磷酸缓冲液：0.2149g Na2HPO4·12H2O、0.0816g KH2PO4 加入100ml 蒸馏水。
•1％TritonX-100：0.5ml 100％TritonX-100加入A液49.5ml。
实验三细胞器及细胞骨架的观察总结
作业： 绘人口腔黏膜上皮细胞图和藻叶细胞图
3）中心体的观察 取马蛔虫子宫切片，在低倍镜下寻找其受精卵分裂中期的细胞， 然后换高倍镜观察，可见中期细胞中央有深蓝色条状的结构，这就 是染色体。在染色体两侧，各有一深蓝色的圆形小粒，即中心粒。 在中心粒周围的致密物质叫做中心球。中心粒和中心球构成中心体， 在中心体周围还可看到许多纤细的、呈辐射状分布的星射线。中心 体和星射线合称星体。有时因切面的关系，中心体仅出现在一侧或 两侧均无（该过程由教师示教)
实验三 细胞器及细胞 骨架的观察
一、实验原理
（一）细胞器的观察
光学显微镜由于分辨率较低，一般用于观察细胞的结构。细胞器 的结构主要在电子显微镜下观察，称为细胞的亚微结构。有一些特殊 细胞内的部分细胞器，可以直接在光镜下观察到（如叶绿体)，有些 通过特殊组织化学或组织免疫化学染色，能清晰的在光镜下显示。
1、用镊子撕取洋葱鳞叶内表皮若干片约lcm2大小，放入小烧杯 或小培养皿中，用磷酸盐缓冲液(PBS，pH 7.2) 洗3 次，每次约 0.5 min。 2、吸去PBS，用1％TritonX-100，37℃处理洋葱表皮20～30 min. 3、除去TritonX-100，用M-冲液充分洗3次，每次约2 min，以 使细胞骨架的稳定。 4、 加3.0％戊二醛固定10 min。
二、实验目的
1、观察动植物的各种细胞器。通过特殊组织化学或组织免疫化学染色， 了解细胞器结构。 2、了解洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布 3、能正确的绘图，并记录观察结果，并能理解每个实验步骤的意义
三、实验材料及仪器
(1)器材：光学显微镜、解剖镊、解剖针、手术剪、载玻片、盖玻片、吸管、 吸水纸、擦镜纸、小平皿、恒温培养箱、、1ml取液器、染色缸 。 (2)材料：洋葱鳞叶、脊神经节切片、小白鼠十二指肠横切片。 (3) 试剂：PBS缓冲液（PH=7.2）、1% TritonX-100、M-缓冲液、3.0%戊二 醛、0.2%考马斯亮蓝R250
实验三细胞骨架的光学显微镜观察（5篇）
实验三细胞骨架的光学显微镜观察（5篇）第一篇：实验三细胞骨架的光学显微镜观察实验三细胞骨架的光学显微镜观察一、实验目的掌握植物细胞骨架的光镜标本制作方法。
细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。
它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。
光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1% Triton X-100处理细胞，可使细胞膜溶解，而细胞骨架系统的蛋白质被保存，再用考马斯亮兰R250染色，使得胞质中细胞骨架得以清晰显现。
二、材料、试剂和仪器1．材料新鲜洋葱鳞茎、人口腔上皮细胞2．试剂1）M缓冲液（pH 7.2）各成分终浓度为：50mmol/L咪唑(MW:68.08)，50mmol/L KCl(MW:74.55)，0.5mmol/L MgCl2?6H2O(MW:203.30)，1mmol/L EGTA(MW:380.36)，0.1mmol/L EDTA-Na2(MW:372.24)，1mmol/L DTT(MW:154.3)2）6mmol/L PBS磷酸缓冲液（pH 6.5）:KH2PO4 : Na2HPO4?2H2O = 7:3(见附录3 查磷酸缓冲液的配置)3）0.7% NaCl生理盐水4）1% Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)溶于 M-缓冲液5）3% 戊二醛100mL: 25% 戊二醛取12mL ,PBS 88mL6）0.2% 考马斯亮蓝R250染液 200mL:考马斯亮蓝R250 0.2g，甲醇46.5mL，冰乙酸7mL，蒸馏水46.5 mL3．仪器光学显微镜，镊子，剪刀，试管，表面皿，滴管，载玻片，盖玻片,灭菌牙签，1.5mL离心管，1mL吸头，1mL取液器，酒精灯，染色缸细胞骨架动画三、实验程序四、结果与分析洋葱鳞茎外层与内层的表皮细胞比较（放大倍数10×20）五、思考题1．光镜下观察到的细胞骨架有何形态特征？2．对实验成功或失败的原因进行讨论。
细胞骨架的光学显微镜观察
4．0.2％考马斯亮蓝R250，其溶剂为：甲醇46.5mL、冰醋酸7mL、蒸馏 水46.5mL。
5．3％戊二醛，用6 mmol／L（pH6.8）磷酸缓冲液配制。
【方法与步骤】
一、植物细胞骨架的光学显微镜观察 1．撕取洋葱鳞茎内表皮（约1mm2大小若干片）置于装有 pH6.8磷酸缓冲液的青
霉素小瓶中，使其下沉。 2．吸去磷酸缓冲液，用1%Triton X-100 处理20～30min吸去。 3．吸去Triton X-100，用M-缓冲液洗2次，每次5min。 4．3％戊二醛固定15min。 5．pH6.8磷酸缓冲液洗2次，每次5min。 6．0.2％考马斯亮蓝 R250染色 5 min。 7．用蒸馏水洗1～2次，细胞置于载玻片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观
Microbubules
Microfilamemts
Intermediate filaments
【实验原理】
当用适当浓度的Triton X-100处理细胞时，可将细胞质膜中和细胞质中的 蛋白质和全部脂质被溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而 被保存，经戊二醛固定，考马斯亮蓝R250染色后，可在光学显微镜下 观察到微丝。
Actin-binding proteins(微丝结合蛋白)
◆ monomer-sequestering protein(单体隔离蛋白) ：维持高 浓度的单体肌动蛋白
◆ cross-linking protein(交联蛋白) ：改变细胞内肌动蛋白 丝的三维结构
◆ End-blocking (capping) proteins（封端（加帽）蛋白）： 调节肌动蛋白丝的长度
◆ filament-severing protein(纤维切割蛋白)：同肌动蛋白 丝结合并进行切割
三细胞骨架标本的制备及观察
细胞骨架标本的制备及观察
一、实验目的
• 1. 掌握细胞骨架的显示方法的原理。
• 2．熟悉光学显微镜下细胞骨架的基本形态结构。 • 3. 了解细胞骨架标本的制备方法。
二、实验材料
• 洋葱鳞茎、光学显微镜、水浴箱、载玻片、盖玻
片、吸管、培养皿、青霉素小瓶、镊子、剪子、 擦镜纸、吸水纸、二甲苯、香柏油、pH7.2 PBS
四、实验方法
• 1. 洋葱鳞茎表皮细胞细胞骨架标本制备
• （1） 撕取约5×5mm大小的洋葱鳞茎中层鳞片的
内表皮，浸入pH6.5 PBS中5min后，再放入盛有
2%TritonX-100液的小瓶中，37℃处理20～30min， 以溶解掉细胞骨架以外的蛋白质。 • （2）用吸管吸尽2%TritonX-100液，加入M-缓冲 液洗涤2～3次，每次5min，以使细胞骨架稳定。
四、实验方法
• （3）吸弃M-缓冲液，加人3%戊二醛固定液，固
定10min，再用PBS洗2～3次，每次3min。 • （4）吸尽缓冲液，加0.2%考马斯亮兰染液，染 色8～10min，再用PBS洗2～3次，每次3min。 • （5）取出洋葱鳞茎表皮，平展于载玻片上，盖上
盖玻片即可观察。
五、结果与分析
（无钙镁磷酸缓冲液）、pH6.5 PBS、M-缓冲液
（10×原液）、1% TritonX-100、2%TritonX-
100、3%戊二醛液、0.2%考马斯亮兰染液。
三、实验原理
• 细胞骨架是真核细胞内由蛋白质纤维构成的网络结构。当
用适当浓度的TritonX-100（聚乙二醇辛基苯基醚，是一 种非离子去垢剂）处理细胞时，可将质膜中及细胞内许多 蛋白质溶解，而细胞骨架系统的蛋白质却不被破坏，经固 定和考马斯亮兰（非特异性蛋白质染料）染色后，可使细 胞骨架蛋白着色而显示骨架显微结构。由于骨架系统中有 些纤维（如微管）在该实验条件下不够稳定，而有些类型 的纤维太细，在光镜下无法分辨，因此显示看到的主要是 微丝组成的微丝束。采用活体染色等方法制备细胞骨架标 本，加强动手能力和了解临时制片的方法。
植物细胞骨架的显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察一、【实验目的】1、掌握植物细胞骨架处理及染色方法。
2、对洋葱鳞茎内表皮细胞进行染色，观察其细胞骨架。
二、【实验原理】用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，后者用考马斯亮蓝R250染色，可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
三、【实验试剂】1、M-缓冲液；2、pH6.8磷酸缓冲液；3、1% TritonX-100，用M-缓冲液配制；4、0.2%考马斯亮兰R250；5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸缓冲液配制；四、【实验步骤】（Ⅰ）1、撕取洋葱鳞茎内表皮细胞约1cm2大小若干片，置于装有pH6.8磷酸缓冲液的培养皿中，使其下沉(约1-2min)；2、吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理30min；3、吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗3次，每次3-5min；4、3%戊二醛固定30min5、pH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次3-5min；6、0.2%考马斯亮蓝R250染色10min；7、用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺于载玻片上，加盖玻片，于显微镜下观察。
注意事项：1、用去垢剂 TritonX-100 的缓冲液处理材料时，应控制在30min 左右；2、每一次加液或染色后，应用 PBS 洗2 次，并用滤纸吸干。
3、加 3%戊二醛溶液对细胞骨架和细胞形态的维持十分重要，固定时间应不低于20min。
4、在用考马斯亮蓝染色的时候应该注意把洋葱鳞茎表皮摊开,使其染色均匀.利于以后观察.5、在染色之前用滤纸吸去缓冲液再进行染色或许观察到的效果更好.6、在观察时,很清楚的看到细胞核的分布,但细胞骨架有点模糊,不过也可以观察到它的基本轮廓及其分布的网状结构.四、【实验步骤】（II）1、取洋葱内皮1cm 左右2、置于含PBS 液的载玻片上3、湿润后，吸去PBS4、加2 滴1%Triton X-100/M-缓冲液，5min5、吸去缓冲液，加3%戊二醛-PBS溶液，固定30min6、加PBS 洗2 次，共3min7、加0.2%考马斯亮蓝R250 染色30min8、用PBS 洗2 次，共2min，吸干，加盖玻片，于显微镜下观察四、【实验步骤】（III）1、取内表皮约0.5cm2，放在盛有PBS缓冲液的小烧杯中，浸泡处理10min。
三植物细胞骨架的光学显微镜观察
46.5ml蒸馏水。
第三页，共六页。
四.实验方法步骤
1.撕取洋葱鳞茎内表皮1cm2假设干片，置于小烧杯中。 2.用磷酸缓冲液〔pH6.8〕提前浸泡2小时左右。
3.吸去磷酸缓冲液，用1% TritonX—100处理20分钟。抽提细胞骨架以外的蛋白质，从而使骨架图像更加清晰。 4.吸去TritonX-100，用M-缓冲液洗2次，每次5分钟。M-缓冲液有稳定细胞骨架的作用。
第二页，共六页。
三.实验用品
1.材料：洋葱 2.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、擦镜纸、50ml烧杯
药品：pH6.8的磷酸缓冲液； M-缓冲液 ：50mmolL-1 (PH 6.7)咪唑、 50 mmolL-1 KCl 、 0.5 mmolL-1 MgC12 、 1 mmolL-1 EGTA 、 0.1 mmolL-1 EDTA 、 1 mmolL-1巯基乙醇、 4 mmolL-1甘油 、 1 mmolL-1 HCl 调pH 至7.2；1%Triton-X100:用M-缓冲液配 制；3%戊二醛：用pH6.8的磷酸缓冲配制；0.2%考马斯亮蓝 R250 染液：0.8g考马斯亮蓝R250、46.5ml甲醇、7ml冰醋酸 、
实验三 植物细胞骨架的光学显微镜观察
一.实验目的
1.掌握考马斯亮蓝R250 对植物细胞骨架染色的方法。
2. 通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形 态观察。
二.实验原理
细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络
结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、
5.用3%戊二醛固定0.5～1h。 6.用磷酸缓冲液〔pH6.8〕洗2次，每次5分钟。
植物细胞骨架的光学显微镜观察
几种不同类型显微镜的使用及其对胞质环流的观察一、实验目的学会使用相差显微镜，掌握暗视野技术，以及荧光显微镜等技术二、实验原理在活细胞中，原生质流动是细胞活力强弱的重要标志，它的产生与细胞中微丝的作用是密不可分的。
微丝的纤维较细，直径为5－6nm，主要成分是肌动蛋白、肌球蛋白和原肌球蛋白，并像肌肉一样有收缩功能。
微管是由一种叫做微管蛋白的蛋白质组成的，位于原生质（静止的）外质，紧靠在质膜之下，离运动的内质至少有1µm的距离，与胞质川流运动无关，主要起保持细胞形状、承担细胞运动和细胞内物质运输的作用。
另外，用秋水仙素与细胞松弛素B处理也可产生不同的结果。
经秋水仙素处理后，细胞的纤维被扰乱，但不影响川流运动，这是与秋水仙素影响边缘微管作用有关。
相反，用细胞松弛素B处理，就可抑制细胞的川流运动，很明显，微丝担负着川流运动的功能。
胞质环流需要消耗能量，也受温度、渗透压以及离子浓度的影响。
三、实验材料新鲜洋葱鳞茎，刚毛藻等。
四、实验器材相差显微镜，普通光学显微镜，黑卡纸，载玻璃片，盖玻片，镊子，吸水纸，剪刀，滴管，擦镜纸。
五、实验药品100µg/ml秋水仙素溶液，20µg/ml细胞松弛素B(cytochalasin B)，蒸馏水，香玻油，二甲苯。
六、实验步骤1.取新鲜洋葱鳞茎内表皮约1cm2 或更小，放在干净的载玻片上，加一小滴水，将盖玻片倾斜盖上，并注意不出现气泡，即制成水封片。
2.取一块黑纸，把它剪成暗视野显微镜用的遮光板，并放入普通光学显微镜的聚光器下的光阑上，制成暗视野显微镜。
（须反复调整遮光板的尺寸以得到最佳效果）。
3.把制成的水封片放在暗视野显微镜下用10倍物镜观察，可以看到在明亮的细胞壁与半透明的细胞核之间有很多极小而明亮的“质点”或颗粒，仔细观察，可以看出这些正作有向的运动（速度很慢），水封片中多加些水会促进这种运动。
4.学习相差显微镜，荧光显微镜和倒置显微镜的使用方法和有关操作技术。
植物细胞骨架的光学显微观察
观察 • 本实验观察洋葱鳞茎细胞骨架
实验原理 观察
植物细胞骨架的
洋葱鳞茎细胞骨架
实验用品
• 器材：显微镜、50ml烧杯、滴管、容量瓶、载玻片、 片、镊子。 • 试剂： 1．M一缓冲液 2．6mmol／L PH6．8磷酸缓冲液。 3．1％Triton X-100，用M-缓冲液配。 4．0.2％考马斯亮蓝R250 5．3％戊二醛。 6．5％、7％、95％乙醇。 7．叔丁醇、正丁醇、二甲苯、树胶。 • 材料：洋葱鳞茎。 盖玻
实验原理
植物细胞骨架的观察
微观 细胞骨架 微丝 中间纤维
实验原理
植物细胞骨架的观察
显示细胞骨架的非特异性方法 解抽提细胞中的蛋白质和脂质，但不破 坏细胞骨架系统。 戊二醛固定、考马斯亮蓝R250染色后，光学显微镜可观察 到网状结构细胞骨架，主要成分为直径40nm左右的微丝 束。
实验方法
• 取洋葱鳞茎内表皮细胞(约lcm2大小)若干片温于装有PH6．8 磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉。 • 吸去磷酸缓冲液 • 用1％Triton X-100处理20-30分钟 • 吸去Triton X-100 • 用M-缓冲液洗3次，，每次10分钟。 ． • 3％戊二醛固定0.5-1小时(对照组开始处理)。 • PH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次10分钟。 • 用0.2％考马斯亮蓝R250染色20-30分钟。 • 用蒸馏水洗1-2次，材料置于载玻片上，加盖玻片，即可镜检。 • 如作永久制片，可使样品顺序通过如下试剂：50％乙醇，70％ 乙醇，95％乙醇，95％乙醇和叔丁醇混合液(1：1)，每次5-10 分钟，或正丁醇→正丁醇→二甲苯→二甲苯，每次5-10分钟。 然后捞取样品，平展于载玻片上，中性树胶封固。
植物细胞骨架的 光学显微观察
实验六植物细胞骨架的光学显微镜观察
光学显微镜观察
显微镜调试
调整显微镜的焦距和光源， 确保观察到的图像清晰。
样本放置
将制备好的切片放置在显 微镜的载玻片上，确保切 片平整且不移动。
观察记录
通过显微镜观察植物细胞 骨架的形态和分布，并记 录观察结果。
数据记录与分析
图像采集
使用显微镜配备的摄像系统或数码相机，将观察 到的细胞骨架图像采集下来。
03
对细胞骨架的动态变化进行观察，以更全面了解其 在细胞生命活动中的作用。
THANKS
感谢观看
结果分析2
实验结果还表明，细胞骨架的分布可能与细胞的功能和活动状态有关。 这为进一步研究细胞骨架在细胞活动中的作用提供了新的线索和思路。
03
结果分析3
染色处理对于突显细胞骨架的结构是有效的，但可能对细胞产生一定的
毒性作用。因此，在实验过程中需要权衡染色处理的效果和可能的副作
用。
结果与文献对比
文献对比1
数据整理
将采集到的图像进行整理，标注并分类，以便后 续分析。
数据分析
根据实验目的和观察结果，对数据进行统计分析， 得出结论。
04
结果与讨论
实验结果展示
实验结果1
通过光学显微镜观察，成功观察到了植物细胞骨架的形态 和分布。骨架呈现出复杂的网状结构，分布在细胞质中， 对维持细胞形态和功能起着重要作用。
与已有文献相比，本实验观察到的植物细胞骨架形态和分布特点与之前的研究结果基本一 致。这进一步证实了光学显微镜在观察细胞骨架方面的有效性。
文献对比2
与已有文献相比，本实验的结果提供了更多关于细胞骨架分布与细胞功能和活动状态之间 关系的细节信息。这些信息对于深入理解细胞骨架的作用机制具有重要意义。
植物细胞骨架的光学显微镜观察实验报告
植物细胞骨架的光学显微镜观察实验报告
1.了解植物细胞的组成和结构；
2.学习利用光学显微镜观察植物细胞；
3.观察和了解植物细胞骨架的结构和作用。
实验仪器：
光学显微镜、载玻片、镊子、荧光染料。
实验步骤：
1.将新鲜的姜或洋葱切成小片，用镊子将其轻轻夹在载玻片上；
2.将荧光染料滴在载玻片上，让荧光染料渗透进入细胞内；
3.用眼镜观察载玻片下的姜或洋葱片，找到一块合适的细胞及其骨架，调节显微镜的倍镜和焦距进行观察；
4.观察并记录该细胞骨架的形态、结构和分布情况，并拍摄照片。
实验结果：
经过观察和研究，我们发现植物细胞内部有一种关键的结构——细胞骨架。
植物细胞骨架主要由三个部分组成，分别是微丝、微管和中间纤维。
其中微丝是最细的部分，通过它们细胞可以保持形状和变形。
微管是较大的结构，可以支持细胞的分裂和胞吐作用。
中间纤维为肌动蛋白纤维和中间丝细胞内质网细胞丝组成的混合物，主要起到支撑和维持细胞结构稳定的作用。
实验结论：
通过本次实验，我们深入了解了植物细胞的组成和结构，并学会了如何用光学显微镜观察和研究植物细胞骨架。
植物细胞骨架的形态、结构和分布情况，对深入研究细胞生命活动的各个方面都有较大的帮助和意义。
实验三细胞骨架的显示和观察
细胞内由微丝、微管、中间纤维等交织 形成一个十分复杂的立体网络结构。它 们对于细胞形状的保持、细胞内物质运 输、细胞运动、细胞内各结构相对位置 的固定，故而称为细胞骨架；
对生长、分裂、分化，物质运输、能量 转换、信息传递、基因表达都有重要作 用。
实验目的 ： 1.了解细胞骨架的结构特征 2.掌握光镜标本的细胞骨架的制作方法。
实验仪器：显微镜、盖玻片、载冲液、1%TritonX-100、M-缓冲 液、0.2%考马斯亮蓝R250染液、3%戊二醛
标本：玉葱鳞叶
实验原理
细胞骨架在通常固定条件下不稳定，如低温、 高压、酸处理等。
当采用适当的手段，如当洋葱表皮细胞用适当 浓度的Tritonx——100(聚乙二醇辛基醚，是一 种非离子去垢剂)处理，能溶解质膜结构中及 细胞内许多蛋白质，细胞骨架系统的蛋白质却 不被破坏，
3、与抗原、抗体的结合方式简便，
不影响抗原或抗体的效价；
4、荧光明亮、不易淬灭； 5、性质比较稳定，易溶水。
荧光免疫染色类型： 直接、间接和补体介导
用抗α-tubulin抗体染色显示微管(绿色); 细胞核: 红色, DAPI染色(激光共聚焦显微镜照片)
思考题
1. 细胞分裂时细胞骨架发生哪些改变？ 可以采取哪些研究方法进行检测？
实验结果
细胞内有蓝色、粗细不均的纤维网状结 构，即为细胞骨架。
细胞生物学实验技术简介
免疫荧光染色显示细胞骨架
免疫荧光染色（Fluorescence immuno-staining）是利 用抗原－抗体特异性结合的原理，用经荧光染料标记的抗体 对细胞或组织内的蛋白质进行定性或定量研究的方法。该技 术与荧光显微镜观察相结合，可对特定的蛋白质进行细胞或 组织内的精确定位。近年来随着各种新基因和新蛋白的发现， 免疫荧光染色技术也得到越来越广泛的应用，免疫荧光技术 本身也不断得到改进。
植物细胞骨架的光学显微观察
10×40倍镜下可清楚观察到蓝色的网状结构 确实由线性纤维交织成，纤维间的结合点稍膨大。 细胞边缘骨架较稀疏，但可见由与胞壁相同走向 的纤维形成的细胞质膜的轮廓，与细胞内部的纤 维通过纵向的纤维相连。相邻细胞有纤维穿过胞 间的细胞壁。调节显微镜焦距可观察到细胞不同 横切面的网络结构的变化，表明细胞骨架以三维 立体结构的形式分布在整个细胞内。
三、实验用品 (一)器材：显微镜、50ml烧杯、滴管、容量瓶、载玻 片、盖玻片、镊子。 (二)试剂： 1．M一缓冲液：50mmol／L咪唑，50mmol／L KCl， 0.5 mmol／L MgCl2，lmmol／L EGTA(乙二醇双(a-氨 基乙酸)醚四乙酸)，0.1mmol／L EDTA，lmmol／L巯 基乙醇或DTT(二硫苏糖醇)。 2．6mmol／L PH6．8磷酸缓冲液。 3．1％Triton X-100，用M-缓冲液配。 4．0.2％考马斯亮蓝R250，其溶剂是甲醇46.5ml， 冰乙酸7ml，蒸馏水46.5ml。 5．3％戊二醛，用6mmol／L磷酸缓冲液(PH6．8)配 制。 6．5％、7％、95％乙醇。 7．叔丁醇、正丁醇、二甲苯、树胶。 (三)材料：洋葱鳞茎。
实验原理实验原理植物细胞骨架的观察植物细胞骨架的观察细胞骨架微观中间纤维实验原理实验原理植物细胞骨架的观察植物细胞骨架的观察显示细胞骨架的非特异性方法coomassiebluetritonx100可溶解抽提细胞中的蛋白质和脂质但不破坏细胞骨架系统
五、植物细胞骨架的光学显微观 察
一、实验目的 通过光学显微镜观察细胞骨架的结构， 并掌握显示植物细胞骨架的方法及原理。 二、实验原理 细胞骨架是指真核细胞中与保持细胞形 态结构和细胞运动有关的纤维网络。包括微 管、微丝和中间丝。
四、实验方法 (一)取洋葱鳞茎内表皮细胞(约lcm2大小)若干片温于装 有PH6．8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉。 (二)吸去磷酸缓冲液，用1％Triton X-100处理20-30分钟。 (三)吸去Triton X-100，用M-缓冲液洗3次，，每次10分 钟。 (四)3％戊二醛固定0.5-1小时(对照组开始处理)。 (五)PH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次10分钟。 (六)用0.2％考马斯亮蓝R250染色20-30分钟。 (七)用蒸馏水洗1-2次，材料置于载玻片上，加盖玻片， 即可镜检。 (八)如作永久制片，可使样品顺序通过如下试剂：50％ 乙醇，70％乙醇，95％乙醇，95％乙醇和叔丁醇混合液 (1：1)，每次5-10分钟，或正丁醇→正丁醇→二甲苯→二 甲苯，每次5-10分钟。然后捞取样品，平展于载玻片上， 中性树胶封固。
细胞实验三植物细胞骨架观察（参考）
实验三植物细胞骨架观察一、实验原理细胞骨架（cytoskeleton）是真核细胞中由纤维蛋白所组成的网状结构，对细胞形态的维持，细胞的生长、运动、分裂、分化，物质运输，能量转换、信息传递，基因表达等起到重要的作用。
广义的细胞骨架包括细胞质骨架、细胞膜骨架、细胞核骨架、细胞外基质四类，而狭义的细胞骨架指的就是细胞质骨架。
根据其组成成分和形态结构，细胞质骨架可分为微管（microtube）、微丝(microfilament)和中间纤维(intermediate filament)。
目前观察细胞骨架的手段主要有电镜、间接免疫荧光技术、酶标和组织化学等。
微丝是球形肌动蛋白单体（G-actin）构成的纤维(F-actin)结构，单根微丝直径7nm，在光学显微镜下看不到该细胞骨架的结构。
常用的观察微丝的方法主要有两种：罗丹明标记的鬼笔环肽染色法和考马斯亮蓝R-250染色法。
鬼笔环肽是一种从毒蕈中提取的双环杆肽，分子量小，容易进入细胞，能与微丝强烈结合，结合在微丝的亚单位之间，具稳定微丝和促进微丝聚合的作用。
由于鬼笔环肽分子量很小，即使加上荧光标记，也能很容易的进入细胞。
又由于它只与F-actin(F肌动蛋白; 纤维状肌动蛋白)结合而不与G-actin(G-肌动蛋白，球状肌动蛋白)结合，所以，用荧光标记的鬼笔环肽对细胞进行染色，可以很清晰地看到微丝（是双股肌动蛋白丝以螺旋的形式组成的纤维）的图象，微丝呈明亮的橘红色。
考马斯亮蓝是一种蛋白质染料，主要有R-250和G-250两种类型。
考马斯亮蓝可以和蛋白肽链中碱性氨基酸残基（Arg）或芳香族氨基酸残基结合，使蛋白变蓝。
由于反应时颜色的深浅与蛋白的含量相关，所以可依此进行蛋白浓度的测定。
考马斯亮蓝主要用于对蛋白含量的测定和对蛋白进行染色观察，在蛋白的定量分析、蛋白的电泳和细胞骨架观察中有非常重要的应用。
由于考马斯亮蓝R-250并非微丝专一性的染料，所以，在用它对微丝进行染色观察前，应首先用去垢剂抽提掉胞质中的除骨架以外的其他蛋白，以便清晰地显示细胞质中微丝的结构。
植物细胞骨架的光学显微镜观察ppt课件
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植物细胞骨架微丝构造图
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植物细胞骨架微丝构造图
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植物细胞骨架微丝构造图
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植物细胞骨架微丝构造图
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植物细胞骨架微丝构造图
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植物细胞骨架的形状特征
细胞骨架察看结果 光学显微镜下洋葱内表皮细胞的轮廓明晰可见〔如
图〕，细胞壁及其分界明显。10×10倍镜下可粗略 察看到细胞内粗细不等的蓝色纤维、团块构成的网状 构造。同一细胞内各处骨架的密集度不均匀，细胞核 区域的纤维相对密集，蓝色浓重，甚至分辨不出网络 构造，另外可见细胞壁区域有零星蓝色纤维分布；相 邻细胞的密集程度根本一致，但有少数细胞有较大不 同。
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植物细胞骨架的形状特征
细胞骨架察看结果 10×40倍镜下可清楚察看到蓝色的网状构造确实由
线性纤维交错成，纤维间的结合点稍膨大。细胞边缘 骨架较稀疏，但可见由与胞壁一样走向的纤维构成的 细胞质膜的轮廓，与细胞内部的纤维经过纵向的纤维 相连。相邻细胞有纤维穿过胞间的细胞壁。调理显微 镜焦距可察看到细胞不同横切面的网络构造的变化， 阐明细胞骨架以三维立体构造的方式分布在整个细胞 内。
实验六 植物细胞骨架的光学 显微镜察看
一 实验目的 1 经过对洋葱内皮细胞的处置，掌握植物
细胞骨架的制备方法与显微形状察看。 2 掌握考马斯亮蓝R250 对植物细胞骨架
染色的方法。
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二 实验原理
细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状 构造，成分有微丝、微管和中间纤维。
Triton X-100可溶解抽提细胞中的蛋白质 和脂质，但不破坏细胞骨架系统。
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四 实验方法
5 PH6.8 磷酸缓冲液洗 3次/10分钟 6 0.2%考马斯亮蓝R250染色 20~30分钟 7 蒸馏水洗 1-2次→装片→察看 8 制造永久切片
骨架的观察实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握利用光学显微镜观察细胞骨架的基本原理和方法。
2. 了解细胞骨架的组成、结构及其在细胞功能中的作用。
3. 培养实验操作技能和科学思维能力。
二、实验原理细胞骨架是真核细胞内的一种蛋白纤维网架体系，由微丝、微管和中间纤维组成。
它对于维持细胞的形态结构、细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等生理过程具有重要作用。
本实验采用去垢剂TritonX-100处理细胞，使细胞膜和大部分蛋白质溶解，而细胞骨架蛋白得以保留，随后使用考马斯亮蓝R250染色，以便在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱鳞片叶表皮细胞、TritonX-100、考马斯亮蓝R250、PBS缓冲液、Mbuffer、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、显微镜等。
2. 实验仪器：光学显微镜、离心机、冰箱、恒温培养箱等。
四、实验步骤1. 取洋葱鳞片叶表皮细胞，用镊子轻轻撕取约1cm²大小的组织，置于含有2ml PBS液的小皿中，湿润5分钟。
2. 吸去PBS液，向小皿中加入1.5ml 1%的TritonX-100，浸没细胞20分钟。
3. 吸去TritonX-100，向小皿中加入2ml Mbuffer，浸没细胞，置于摇床上5分钟，重复两次。
4. 将处理后的细胞滴于载玻片上，用盖玻片封片。
5. 将载玻片置于显微镜下观察，使用考马斯亮蓝R250染液染色，观察细胞骨架的网状结构。
6. 记录观察结果，并分析细胞骨架的形态、分布和功能。
五、实验结果与分析1. 观察到洋葱鳞片叶表皮细胞中存在明显的细胞骨架结构，呈网状分布。
2. 细胞骨架主要由微丝、微管和中间纤维组成，微丝呈细长的纤维状，微管呈管状结构，中间纤维呈较粗的纤维状。
3. 细胞骨架在细胞中分布均匀，覆盖整个细胞表面，与细胞膜紧密相连。
4. 细胞骨架在细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等生理过程中发挥重要作用。
六、实验结论通过本次实验，我们成功观察到了洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架结构，了解了细胞骨架的组成、结构及其在细胞功能中的作用。
实验4 植物细胞骨架的光学显微镜观察
二、实验原理
n 细胞骨架在通常条件下（如低温、高压、酸处理等） 不稳定。当采用适当的手段，如M-缓冲液洗涤细胞， 可以提高细胞骨架的稳定性，室温下经戊二醛固定 能较好的保存细胞骨架的成分；Triton X-100处理能 抽取掉一部分杂蛋白，可使骨架成分显现的更加清 晰。
n 本实验用考马斯亮蓝R250显示各种骨架蛋白，并在 显微镜下观察其形态、结构。
五、观察
1. 光学显微镜低倍镜下，可见规则排列的长方形 洋葱表皮细胞轮廓，细胞内可见被染成蓝色的粗 细不等的分枝状结构，这便是细胞骨架。转高倍 镜观察，可见细胞骨架立体结构。
六、实验结果
（1）描绘洋葱鳞茎细胞的细胞骨架图。
七、分析讨论
本实验所利用的原理、各种化学试剂的作用、操作中的 心得？
（7）考马斯亮蓝染色：吸去磷酸缓冲液，用0.2%考马斯亮蓝 R250染色20 min（实际用时可根据当时的室温及湿度作出相应改 变）。 （8）蒸馏水漂洗：用蒸馏水洗2次, 每次5 min。
注：漂洗是否充分是影响实验结果好坏的另一关键因素！！
（9）制片镜检：展平置于载玻片上，滴蒸馏水，盖片。
（一）洋葱鳞茎细胞的细胞骨架考马斯亮蓝R250染色
3. 仪器 显微镜、烧杯、镊子、玻璃滴管、载玻片和小培养皿等。
四、实验步骤
（一）洋葱鳞茎细胞的细胞骨架考马斯亮蓝R250染色 （1）取材：用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮约1cm2左右大小若干片， 置于直径约4cm的平皿中； （2）磷酸盐缓冲液处理：加入适量磷酸盐缓冲液（PBS， pH6.8），用镊子夹住鳞茎内表皮使其完全下沉浸没，处理约3 min； （3）去垢：吸去磷酸盐缓冲液,用吸水纸吸净，取2-3滴1%Triton X-100处理 20min左右，为保证去垢效果，可水浴加热至37℃。 （4）M缓冲液漂洗：吸去1%Triton X-100，用M-缓冲液洗3次， 每次5分钟。
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实验三植物细胞骨架的光学显微镜观察
一、实验目的
了解细胞骨架的结构特征及其制备技术。
二、实验器具及试剂
1．器具
普通光学显微镜、50ml烧杯、玻璃滴管、容量瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镊子、小剪刀、吸水纸、擦镜纸。
2．试剂
M-缓冲液：咪唑、KCL、MGCL2、EGTA【乙二醇双醚四乙酸】、EDTA、疏基乙醇或DTT(二硫苏糖醇)；（PH6.8）磷酸缓冲液（用NaHCO3调PH值）；Triton X-100，用M-缓冲液配制；考马斯亮蓝R250,其溶剂为：甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸馏水46.5ml；戍二醛、乙醇、叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶等。
3. 实验材料
洋葱鳞茎
三、实验内容
细胞骨架事由蛋白质丝组成的复杂网状结构，根据其组成成分和形态结构可分为微管、微丝和中间纤维。
它们对细胞形态的维持，细胞的生长、运动、分裂、分化，物质运输，能量转换，信息传递，基因表达等起到重要作用。
当用适当浓度的Triton X-100处理细胞时，可经细胞质膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存，经用戊二醛固定，考马斯亮蓝R250染色后，可在光学显微镜下观察到由微丝组成的微丝束为网状结构，就是细胞骨架。
（一）溶液配制
（1）M-缓冲液配制：
M-缓冲液(10×原液) ：咪唑34.04g，氯化镁 (MgCl2•6H2O)1.02g，EGTA（乙二醇双醚四乙酸） 3.8g，EDTA (乙二胺四乙酸)0.29g，巯基乙醇0.78g (0.7ml)蒸馏水加至1 000 ml。
使用时，取100 ml (10×原液)加900 ml蒸馏水。
（2）6mmol/L（PH6.5）磷酸缓冲液配制：
甲液：NaH2PO4•2H2O，0.938g 溶于蒸馏水中，最后稀释至1 000ml。
乙液：Na2HPO4 •12H2O，2.15g加蒸馏水溶解，最后加水至1 000ml。
取甲液685ml，乙液315ml加蒸馏水1000ml即成6mmol/LPH6.5的磷酸缓冲液。
（3）1%Triton X-100，用M-缓冲液配制：
取22ml Triton X-100液加M-缓冲液至200ml。
（4）0.2%考马斯亮蓝R250：
考马斯亮蓝R250为0.2g，甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸馏水46.5ml
（5）3%戍二醛，用磷酸缓冲液配制。
（二）实验方法与步骤
（1）撕取洋葱鳞茎内表皮（约1cm2大小若干片）置于装有PH6.8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉。
（2）吸去磷酸缓冲液，用1% Triton X-100处理20~30min。
（3）吸去Triton X-100，用M-缓冲液洗3次，每次10min。
（4）3%戊二醛固定0.5~1h。
（5）PH6.5磷酸缓冲液洗三次，每次10min。
（6）0.2%考马斯亮蓝R250染色20~30min。
（7）用蒸馏水洗1~2次，细胞置于载破片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观察。
（8）如观察效果好，可制作成永久切片。
在有样品的50ml烧杯中，顺序通过如下药物：50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇、1/2V95%乙醇+1/2V叔丁醇、叔丁醇（每级5-10min）；或正丁醇、正丁醇、二甲苯、二甲苯（每级5-10min），然后捞取样品，平展于载玻片上，经镜检，效果好的，可加一滴中性树胶，盖上盖玻片，即成永久片。
四、实验报告
1．绘出植物细胞骨架微丝结构图。
2．分析在光学显微镜下观察到的细胞骨架的形态特征。