(基础医学)免疫学实验技术
医学免疫学实验技术
医学免疫学实验技术概述免疫学是一门既古老又崭新的学科，涉及医学各个领域，并与理工农各学科相互渗透。
医学免疫学是生命科学的前沿学科，也是医学生的主干必修课程之一。
目前免疫学的研究已经进入了一个崭新的时代。
现代免疫学的研究和应用涉及到生物医学的各个领域。
它与分子生物学一样是生物医学基础研究和临床工作不可缺的工具。
医学免疫学是一门实践性、应用性很强的学科，教学过程分为理论教学和实验教学。
实验教学作为免疫学教学的重要环节，直接影响大人才的培养目标的实现，特别是在培养学生的科学态度、实践技能、创新能力方面，具有重要的地位。
一医学免疫学实验目的与要求医学免疫学实验课程的开设，目的在于不仅使学生验证部分理论知识和加深对课堂讲授内容的理解，更重要的是在掌握系统理论知识的基础上，学习和掌握免疫学实验的基本技术和技能，培养学生观察、思考、分析和解决问题的能力，以及严肃认真的科学态度和创新精神，提高学生的综合素质。
1．基础性实验要求学生系统学习和掌握常用的经典免疫学实验方法和现代免疫学实验技术，使学生理解和巩固所学的理论知识，掌握相应的实验方法和实验技能。
2．综合性实验实验内容涉及本课程的综合知识或相关课程知识的实验，往往由多种实验手段、技术和层次的实验内容所组成。
通过综合性实验，进一步训练学生对所学知识和实验技术的综合运用能力、独立工作能力和对实验结果的综合分析能力。
3．设计性实验是在完成基础性试验和综合性试验的基础上，给定实验目的、要求和所提供的实验条件，由学生自行查阅资料，自选题目、设计实验方案，并在老师指导下，进行试验，最后以论文形式写出实验报告。
目的在于激发学生的创新性思维，培养学生的科研能力，提高学生的综合素质。
二医学免疫学实验室规则1．学生在上实验课前，应对实验内容进行预习，明确实验目的、要求，了解实验原理和操作步骤，熟悉所要使用的仪器、药品的性质和注意事项，预测实验结果。
2．注意保持科学实验的严肃性、严格性和严密性。
深入剖析医学专业中常见的实验技术和方法
深入剖析医学专业中常见的实验技术和方法一、医学实验技术的分类与应用医学作为一门特殊的学科，其实验技术和方法在研究和治疗疾病中起着关键作用。
这些实验技术涉及到不同的领域和方向，包括分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学等。
本文将深入剖析医学专业中常见的实验技术和方法。
1. 分子生物学实验技术分子生物学是一门研究生命体内发生的化学变化以及基因组结构和功能的科学，其核心是DNA的提取、PCR扩增以及基因克隆等。
DNA提取可以通过多种方法进行，如酚-氯仿法、酵素法或者商业化试剂盒。
而PCR扩增则以稳定可靠的方式复制特定的DNA片段，并常用于基因突变筛查、基因表达检测等。
此外，在进行遗传工程方面，如构建重组蛋白表达载体或者基因敲除实验等，都需要运用到基因克隆技术。
2. 细胞生物学实验技术细胞是构成我们身体各个组织和器官的基本单位，因此细胞实验技术对于研究细胞的结构和功能至关重要。
在分离和培养细胞方面，可以采用组织块法、酶解法或者悬浮培养法。
一旦成功获得了体外培养的细胞，研究人员就可以进行多种实验，如细胞增殖和凋亡检测、蛋白质表达定量以及各种信号传导途径的研究等。
3. 遗传学实验技术遗传学是研究遗传物质如何在个体和种群间传播和改变的科学。
在遗传学中最为常见的方法之一是杂交杂交分析。
通过利用两株具有不同性状特征的个体进行配对杂交，并观察后代的性状并进行统计分析，可推断出某些基因是否与该性状相关联。
此外，在现代遗传学中，还经常运用到多态分子标记技术（如RAPD、SSR等）以及基因编辑技术（如CRISPR-Cas9），这些技术可以帮助科学家识别关键基因位点、探索潜在突变信息或者进行基因组改造。
4. 免疫学实验技术免疫学涉及到人体免疫系统如何与外界抗原相互作用以及产生相应的免疫反应。
在免疫学实验技术中，酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种被广泛采用的方法，能够定量测量特定抗原或抗体的浓度。
此外，流式细胞术也是一项重要的实验技术，可对复杂混合细胞群体进行单细胞检测、荧光标记等高级分析。
免疫学检验技术教案
免疫学检验技术教案一、教学目标1.掌握免疫学检验技术的基本概念、原理和方法；2.熟悉免疫学检验技术在临床医学中的应用；3.培养学生具备免疫学检验技术的实践操作能力。
二、教学内容1.免疫学检验技术概述介绍免疫学检验技术的定义、发展历程和应用范围，阐述免疫学检验技术在临床医学中的重要性。
1.免疫学检验技术原理详细讲解免疫学检验技术的基本原理，包括抗原与抗体的相互作用、免疫反应的调节机制等。
通过实例解释免疫学检验技术的原理，使学生深入理解其科学内涵。
1.免疫学检验技术方法介绍常见的免疫学检验技术方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光技术、免疫电泳等。
对每种方法的原理、操作步骤及应用范围进行详细阐述，使学生掌握各种免疫学检验技术的基本操作。
1.免疫学检验技术在临床医学中的应用阐述免疫学检验技术在临床医学中的应用，如感染性疾病的诊断、自身免疫性疾病的检测、肿瘤标志物的筛查等。
通过案例分析，使学生了解免疫学检验技术在临床实践中的价值。
三、教学方法1.理论教学：通过课堂讲授、多媒体演示等方式，向学生传授免疫学检验技术的基本理论和方法。
2.实践教学：组织学生进行免疫学检验技术的实验操作，培养学生实践操作能力。
3.案例教学：引入临床医学案例，引导学生分析免疫学检验技术在临床实践中的应用。
四、教学评价1.理论考试：通过闭卷考试形式，考查学生对免疫学检验技术理论知识的掌握情况。
2.实践操作考核：观察学生在实验操作过程中的表现，评价其实践操作能力。
3.案例分析报告：要求学生根据所学免疫学检验技术知识，分析临床案例并撰写报告，以评价其综合应用能力。
五、教学反思与改进1.在教学过程中，密切关注学生的学习状态，及时调整教学方法和进度，确保学生能够充分理解和掌握免疫学检验技术的相关知识。
2.根据学生的反馈和考核结果，对教学内容和方法进行反思，找出存在的问题和不足，提出改进措施。
3.不断优化教案，更新教学内容，以适应免疫学检验技术的不断发展和进步。
免疫学实验技术教学设计
04
实验技术在教学中的意义
01
提高学生的实践能力
0 2 培 养 学 生 的科学素养 和创新能力
03
帮助学生理解免疫学的基本原理和 概念
提高学生的实验操作技能和实验设 计能力
04
05
培养学生的团队合作精神和沟通能 力
实验技术发展现状与趋势
免疫学实验技术在医学、生物学等 领域的应用越来越广泛
实验技术的发展与创新，推动了免 疫学研究的深入
教师姓名：李明 教学经验：10年 教学成果：发表多篇论文，获得多项教学奖项 教学方法：注重实践操作，注重学生动手能力的培养 教学特色：注重实验技术的创新和应用，注重培养学生的创新思维和实践能力
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免疫学实验技术教学设计
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目录
01 02 03 04 05 06
免疫学实验技术概述
免疫学实验技术教学目标与内容
免疫学实验技术教学方法与手段
免疫学实验技术教学评价与反馈
免疫学实验技术教学资源与平台 免疫学实验技术教学师资队伍与建
设
01
免疫学实验技术概述
实验技术定义与分类
实验技术的自动化、智能化趋势明 显，提高了实验效率和准确性
实验技术的标准化、规范化，提高 了实验结果的可靠性和可比性
实验技术的绿色化、环保化趋势， 减少了对环境的污染和破坏
02
免疫学实验的基本原理和方法
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掌握免疫学实验的数据分析和结果 解释
01
免疫学实验技术：研究免疫反应和 免疫机制的实验方法
03
细胞免疫学实验技术：研究细胞免 疫反应的实验方法，如细胞培养、 细胞融合等
05
1000031基础医学实验(甲)_免疫实验技术_1002
荧光免疫技术 化学发光免疫技术 细胞免疫功能测定 流式细胞测定技术及HLA分型技术 请同学们参看免疫实验视听教材和 CAI课件
三种试剂：
①固相抗原或抗体 即把抗原或抗体用合适的方法连接到固相载体表 面，同时保留它们的免疫活性； ②酶标抗原或抗体 即把某些酶用合适的方法连接到抗原或抗体表面， 同时保留它们的免疫活性以及酶的催化活性。常 用的酶是辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶 (AP)； ③酶作用的底物 常用的底物是邻苯二胺
（1）单向扩散试验 （Single redial diffusion test）
预先混有抗 体
（2）双向扩散试验 （Double diffusion test）
（3）对流免疫电泳
_
Ag Ab
+
作用及特点：
抗体球蛋白移向阴极，抗原分子移向阳极，当两 者在适当比例处相遇，即形成灰白色沉淀线。 检查乙型肝炎抗原及甲胎蛋白，敏感度比双向扩 散法高约10倍，只需1～2小时即可获得检验结果。 不能定量测定。
三、 免疫标记技术
原理： 利用酶、荧光素、胶体金、发光物 质以及放射性核素等标记物来标记抗原或 抗体，再与标本中的抗体或抗原反应，最 后测定复合物中的标记物。 优点：特异、敏感、快速，可作定性、定 量或定位测定。
依据检测物分两类： 1.免疫组化技术(immunohistochemical technique)，用于组织/细胞中抗原或抗体的定位； 2.免疫测定(immunoassay)，用于液体标本中抗原 或抗体的检测。 依据标记物的不同，可分为： 酶免疫技术、荧光免疫技术、金免疫技术、 化学发光免疫技术和放射免疫技术。
免疫学实验技术
浙江大学医学院 陈玮琳
利用免疫学原理来检测抗原、多种免疫 分子(抗体、补体、细胞因子和粘附分 子等)及免疫细胞的实验过程。 有助于疾病的辅助诊断、治疗及预后判 断 。
医学免疫学实验四 小鼠脾脏、胸腺单个核细胞分离及流式染色实验
NK细胞表面标志
人类细胞表面标志主要以 CD16、CD56来 认定，临床上将CD3-CD56+CD16+淋巴 细胞认定为NK细胞。
流式细胞术(FCM)
流式细胞术(FCM)是一种对处在液流中的单个细胞或其它生物微 粒（如细菌）等进行快速定量分析和分选的技术，它将免疫荧光 与细胞生物学、流体力学、光学和电子计算机等多种学科的高新 技术结合，进行细胞和分子水平的基础理论与临床应用研究。
MACS
磁性微珠是20世纪80年代初以高分子材料和金属离子（如Fe3O4 ）为原料聚合而成的一种以金属离子为核心、外层均匀地包裹高 分子聚合体的固相微粒。
以磁性微珠为载体，包被上针对某种细胞表面抗原的特异性抗体 即可制成免疫磁性微珠。
通常有二种分离方式：阳性分离和阴性分离。 基本原理及步骤：首先将抗特异细胞表面抗原的抗体致敏到磁珠
胸腺功能： （1）产生T淋巴细胞 （2）产生和分泌胸腺素和激素类物质
免疫细胞分离方法
1. 根据不同免疫细胞表面标志:FAC： 1）根据细胞比重差异：自然沉降法、密度梯 度离心法、改变细胞密度法 2）根据细胞黏附特性：B细胞黏附于尼龙棉 3）根据细胞对渗透压变化的敏感度：红细胞 对低渗敏感
（二）制备单个核细胞悬液：
1. 将取出的脾脏置于盛有PBS缓冲液(10ml)的平皿中，然后再 置于尼龙指套中。用针芯轻轻碾磨使单个核细胞通过尼龙指 套悬浮于平皿中；
2. 吸取平皿中细胞悬液置于15ml离心管中，再取5mlPBS冲 洗培养皿后移入15ml离心管。以1500rpm离心5min。弃 去上清，轻轻弹散细胞沉淀,加红细胞裂解液ACK至2-3ml ，轻轻吹打混匀并放置3-4min，以破坏红细胞。然后加 PBS缓冲液至10ml，以1500rpm离心5min；
医学免疫学实验
第一章免疫学概要1.免疫：免疫是指机体免疫系统识别“自身”与“非己”抗原，并通过面已经打排除抗原异物，以维持机体生理平衡的功能。
2.免疫防御：免疫防御是指机体排斥外源性抗原异物的一种免疫保护功能，这是机体不受外来物质干扰，保持物种纯洁的生理机制。
3.免疫自稳：免疫自稳是指机体识别和清除自身衰老残损的组织、细胞的能力，是机体维持正常内环境稳定的重要生理机制。
4.免疫监视：免疫监视是指机体识别和清除病毒感染的细胞和异常突变细胞的一种生理功能，借以监视和抑制恶性肿瘤在体内生长。
5.TCR：TCR即T细胞抗原受体，是T细胞表面特异性识别和结合抗原的结构。
6.SIg：即B细胞表面的膜免疫球蛋白，为B细胞的抗原受体，是B细胞特异识别和结合抗原的结构。
7.免疫细胞：是指参与免疫应答或免疫应答有关的各类细胞，主要有免疫活性细胞、嗜酸性粒细和嗜碱性粒细胞及组织中的肥大细胞等。
8.CD：CD即白细胞分化抗原，是白细胞（还包括血小板、血管内皮细胞等）在正常分化成熟和记过过程中的不同阶段出现或消失的细胞表面抗原标志。
9.APC：APC即抗原呈递细胞，也称为免疫辅佐细胞，能将抗原信息呈递给T细胞，从而使T细胞活化。
主要有单核巨噬细胞和树突细胞两大类。
10.外周免疫器官：包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织等，是免疫细胞聚集和免疫应答发生的场所。
11.中枢免疫器官：中枢免疫器官又称一级免疫器官，包括骨髓、胸腺。
中枢免疫器官是免疫活性细胞的产生、增值和分化成熟的场所，对外周淋巴器官发育和全身免疫功能起调节作用。
12.ADCC：ADCC即抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用。
当IgG类抗体与靶细胞表面相应抗原表位特异性结合后，可通过其IgGd Fc段与NK细胞表面Fc受体结合，定向非特异性杀伤靶细胞。
填空题：1.免疫功能主要是免疫防御、免疫自稳和免疫监视。
2.世界上第一例成功的疫苗是E.Jenner发明的牛痘苗，可预防天花。
3.淋巴细胞包括T细胞、B细胞和大颗粒淋巴细胞（NK细胞）。
免疫学实验技术设计
免疫组织化学染色
利用特异性抗体与组织切片中的抗原结合，通过显色反应显示抗原在组织中的分 布和定位，适用于病理诊断和科研研究。
原位杂交技术
将标记有特异性探针的核酸序列与组织切片中的靶序列结合，通过显色或荧光反 应显示靶序列在组织中的位置和表达情况，用于基因表达和调控研究。
04 免疫学实验技术设计步骤
生物科学领域的应用举例
免疫细胞研究
利用免疫学实验技术研究免疫细胞的种类、功能及其相互作用， 揭示免疫应答的细胞基础。
免疫分子研究
通过免疫学实验技术，研究抗体、细胞因子等免疫分子的结构、功 能和调控机制。
免疫遗传学研究
运用免疫学实验技术，研究免疫相关基因的遗传变异及其对免疫功 能的影响。
农业领域的应用举例
生物医学应用
免疫学实验技术在生物医学领域具有广泛的应用价值，如疫苗研发 、抗体药物筛选、免疫诊断等。
02 免疫学实验技术设计原理
抗原抗体反应原理
抗原识别
01
抗原被免疫系统识别，通过特定的抗原受体与免疫细胞结合。
抗体产生
02
B细胞在抗原刺激下活化、增殖并分化为浆细胞，浆细胞分泌特
异性抗体。
抗原抗体结合
Western blot
将蛋白质样品通过凝胶电泳分离后，转移到固相支持物上， 利用特异性抗体进行免疫学检测，可实现对蛋白质的表达、 修饰和相互作用研究。
免疫共沉淀（Co-IP）
利用特异性抗体与靶蛋白结合，通过沉淀反应将与之相互作 用的蛋白质一同沉淀下来，用于研究蛋白质复合物或蛋白质 相互作用。
免疫组化技术
免疫学实验技术设计
汇报人：XX 2024-01-19
目录
• 免疫学实验技术概述 • 免疫学实验技术设计原理 • 免疫学实验技术类型及特点 • 免疫学实验技术设计步骤 • 免疫学实验技术操作规范与注意事
基础医学实验技术
环境和人员造成危害。
个人防护措施
实验服与护目镜
穿戴合适的实验服和护目镜，防止实验过程中化学品飞溅或粉尘 对皮肤和眼睛造成伤害。
手套与口罩
根据实验需要选择合适的手套和口罩，防止化学品接触皮肤和吸 入有害气体。
安全鞋与防护帽
穿戴安全鞋和防护帽，降低实验过程中意外摔倒或重物砸伤的风 险。
06
实验技术应用与拓展
02 动物饲养环境
提供适宜的温度、湿度、光照和通风条件，确保 动物健康。
03 动物饲料与饮水
提供充足的饲料和清洁的饮水，保证动物正常生 长。
实验器材准备
实验仪器
根据实验需求选择合适的 仪器，如显微镜、分光光 度计、电泳仪等。
消毒与清洁用品
准备消毒液、酒精棉球、 无菌纱布等，确保实验过 程无菌操作。
可视化呈现技巧
合理运用颜色、标注和排 版等，提高图表的可读性 和美观度。同时，注意避 免图表误导和过度解读。
05
实验安全与防护
实验室安全规范
实验室准入制度
确保只有经过培训和授权的人员 才能进入实验室，降低意外风险
。
安全操作规程
制定详细的实验操作步骤和注意 事项，确保实验人员能够正确、
安全地进行实验。
治疗技术
通过基础医学实验技术研究疾病的发生发展机制，为临床治疗提供 了新的思路和方法，如基因治疗、细胞治疗等。
预防技术
利用基础医学实验技术对人群进行健康筛查和疾病预防，如疫苗接种 、基因检测等。
未来发展趋势预测
交叉融合
随着多学科交叉融合的发展，基础医学实验技术将与更多领域相 结合，产生新的研究思路和方法。
细胞培养与传代
细胞培养基本知识
学习细胞培养的基本概念、原理及培养基 的组成。
免疫学技术教学大纲和计划
免疫学技术教学大纲和计划免疫学技术教学大纲和计划免疫学作为一门重要的医学科目，对于培养医学生的免疫学基本理论和实践技能具有重要意义。
为了更好地组织和实施免疫学技术教学，制定一份科学合理的教学大纲和计划是必不可少的。
一、教学目标免疫学技术教学的目标是培养学生具备以下能力：1. 掌握免疫学的基本理论知识，包括免疫系统的组成、功能和调控机制等。
2. 熟悉常用的免疫学实验技术，包括细胞免疫学、分子免疫学和免疫组化等。
3. 能够独立设计和执行免疫学实验，包括样本采集、实验操作和数据分析等。
4. 具备科学研究和问题解决的能力，能够运用免疫学技术解决实际问题。
二、教学内容1. 免疫学基础知识在免疫学技术教学中，首先要讲授免疫学的基础知识。
包括免疫系统的组成、功能和调控机制等内容。
学生需要了解免疫系统是如何识别和清除病原微生物的，以及免疫系统在疾病发生和发展中的作用。
2. 免疫学实验技术为了使学生能够掌握免疫学实验技术，教学中应该重点讲授细胞免疫学、分子免疫学和免疫组化等方面的知识。
细胞免疫学包括细胞培养、细胞分离和细胞检测等技术；分子免疫学包括PCR、Western blot和ELISA等技术；免疫组化则是研究免疫组织化学的技术。
3. 免疫学实验设计与分析在免疫学技术教学中，学生还需要学习免疫学实验的设计和数据分析。
教师可以通过案例分析和实验操作来培养学生的实验设计和数据分析能力。
学生需要学会如何选择合适的实验方法，如何设计实验方案，以及如何处理和解读实验数据。
4. 科研能力培养免疫学技术教学还应该注重培养学生的科研能力。
教师可以组织学生参与科研项目，让他们亲身体验科学研究的过程。
学生可以选择一个感兴趣的免疫学课题，进行文献调研、实验设计和数据分析等工作，最终撰写一份科研报告。
三、教学方法为了提高免疫学技术教学的效果，教师可以采用多种教学方法。
例如，可以通过课堂讲授、实验操作、案例分析和小组讨论等方式进行教学。
基础医学实验技术指南
细胞传代培养操作要点
01
贴壁细胞的消化
倒掉旧培养基，加入少量胰酶溶液覆盖瓶底，消化一定时间后倒掉胰酶
溶液，加入新培养基终止消化，用吸管吹打贴壁细胞使其悬浮。
02
悬浮细胞的传代
将原培养瓶中的培养基吸出，用吸管轻轻吹打使细胞悬浮，然后根据分
传瓶数补加一定量的新鲜培养基，分装到几个新的培养瓶中。
03
传代比例
离心操作
设置合适的转速和时间，启动 离心机进行离心操作。
样品处理
离心后，取出离心管，根据需 要进行上清液吸取、沉淀物收
集等处理。
移液器使用及液体转移
移液器类型与选择
根据实验需求，选择适当的移液器类 型，如手动移液器、电动移液器等。
移液器使用
吸取液体时，将移液器吸头插入液面 下，缓慢吸取；排放液体时，将吸头 贴紧容器壁，缓慢排放。
将转录组学和蛋白质组学数据进行整合分析，揭示基因表达调控和蛋白质功能之间的关 联。
THANKS
感谢观看
DNA质量检测
通过凝胶电泳、紫外分光光度计等方 法检测DNA的纯度和浓度。
DNA纯化
通过去除蛋白质、RNA等杂质，获得 高纯度的DNA。常用方法有酚/氯仿 抽提、乙醇沉淀等。
RNA提取与反转录过程
RNA提取
利用RNA在细胞中的存在形式，通过物理或化学方法破碎 细胞，使RNA释放到溶液中。常用方法有Trizol法、异硫 氰酸胍法等。
基础医学实验技术 指南
汇报人：XX 2024-01-18
目录
• 实验前准备 • 基本实验操作技术 • 细胞培养与传代技术 • 分子生物学实验技术 • 免疫学实验技术 • 遗传学实验技术 • 生物信息学在基础医学中应用
医学实验教案细胞免疫实验与技术
环保处理
02
03
减少废弃物产生
废弃物需交由专业机构进行无害 化处理，确保不对环境和人体健 康造成影响。
合理规划实验步骤和试剂用量， 减少不必要的浪费和废弃物产生 。
个人防护措施及应急处理
个人防护
实验人员需定期进行健康检查，了解自身健康状况，并采 取相应的防护措施，如接种疫苗、避免接触有害物质等。
应急处理
02
应用细胞免疫技术开发特异性高、灵敏度好的免疫检测试剂盒
，用于临床诊断和科研。
细胞免疫治疗技术转化
03
将细胞免疫治疗技术转化为临床应用，推动生物医药产业的发
展。
05
细胞免疫实验注意事 项及安全规范
实验室安全操作规范
01
02
03
04
实验前准备
熟悉实验流程，检查实验器材 和试剂的完整性和有效性，确 保实验环境符合安全标准。
实验步骤与操作规范
细胞培养
将所需的免疫细胞在适宜条件 下进行培养，保持细胞状态良 好。
细胞处理
在特定时间点收集细胞，进行 相应的处理，如， 如培养基、抗体、细胞株、显 微镜、离心机等。
免疫刺激
向培养体系中加入特定的抗原 或抗体，模拟免疫应答过程。
结果观察
02
细胞免疫实验技术与 方法
细胞培养技术
细胞培养基本概念
细胞培养是指将细胞从机体中取 出，在人工模拟体内环境的条件 下，使其生长、繁殖并维持主要
结构和功能的技术。
细胞培养类型
包括原代细胞培养、传代细胞培养 、细胞株与细胞系培养等。
培养条件与方法
包括培养基的选择与配制、培养环 境的控制（温度、湿度、pH值等） 、细胞传代与冻存等。
基础医学研究中的技术和方法
基础医学研究中的技术和方法在医学研究中，基础医学研究是一个非常重要的领域。
基础医学研究的主要任务是探究人体生命活动的基本规律，从分子、细胞、组织、器官等不同层面上对人体进行研究，为临床医学提供科学理论和实验基础。
而在基础医学研究中，技术和方法的应用至关重要。
一、生物学和生化学技术在基础医学研究中，生物学和生化学技术是最为常用的技术之一。
其中，分子生物学技术是目前研究最多的一个领域。
生物学的技术主要包括PCR扩增技术、原位杂交、蛋白质分离纯化技术、人工DNA合成技术等。
而生化学技术主要包括酶活性、凝胶电泳和细胞学分析等。
1.PCR扩增技术PCR扩增技术是生物学家用来制备大量DNA片段的一种方法。
这种技术可以在不用培养细胞的情况下，从微量样品中扩增大量的DNA。
在基础医学研究中，PCR技术广泛应用于基因定位、DNA序列、突变检测等方面。
2.原位杂交技术原位杂交技术是一种广泛应用于基础医学研究和疾病诊断中的分子生物学技术。
在这项技术中，我们使用荧光标记链或酶标记的DNA或RNA样品，对特定基因可能存在的位置进行检测。
这种技术可以用于检测基因的表达情况，也可以用于定位基因在染色体上的位置。
3.蛋白质分离纯化技术在基础医学研究中，蛋白质分离纯化技术是非常关键的技术之一。
经过蛋白质分离纯化技术，可以获得高纯度的蛋白质样品，从而对蛋白质的性质、功能等进行研究。
而目前常用的蛋白质分离纯化技术包括凝胶电泳、柱层析等技术。
二、细胞生物学和免疫学技术在基础医学研究中，细胞生物学和免疫学技术是另外两种比较重要的技术领域。
细胞生物学技术主要是用来对细胞进行分析和研究的，而免疫学技术主要是用来对人体免疫反应进行分析和研究的。
1.细胞培养技术在细胞生物学研究中，细胞培养技术是一个基础性的技术。
细胞培养可以为生物学家提供大量的生物材料，进而用于细胞生物学、免疫学、生化学等领域的研究。
目前常见的细胞培养技术有单层细胞培养技术和三维细胞培养技术。
免疫学实验报告
免疫学实验报告免疫学是研究免疫系统功能和疾病的科学。
在医学、生物学等领域都具有重要的应用价值。
免疫学实验是免疫学教学和研究的基础。
在这篇实验报告中，将介绍几种常见的免疫学实验。
ELISA实验ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种检测抗原或抗体的方法。
它利用酶偶联物将抗原或抗体与微孔板上的特定抗体相结合，然后通过荧光或颜色反应检测物质的数量。
这种实验被广泛应用于诊断和治疗疾病，例如艾滋病、乙肝和结核病等。
实验步骤：1. 预处理和制备样品2. 用微孔板包被抗体，洗涤板子3. 加入样品4. 加入检测抗体5. 再加入酶偶联物6. 加入底物（颜色或荧光染料）7. 洗涤平板8. 读取光密度（或荧光）测量检测物质的数量流式细胞术流式细胞术是一种检测和分离单个细胞的技术。
它通过标记细胞表面的抗原，然后使用激光逐个检测单个标记的细胞。
这个技术可以分离出一种特定的细胞类型、计量特定的细胞数量、定量分析生物标志物和研究细胞亚群之间的关系等。
实验步骤：1. 收集细胞样本并处理成单个单元。
2. 加入荧光素标记，使单元表面上的特定抗原能够被识别。
3. 加入流动介质，并通过细胞传递。
4. 流式细胞术仪器通过激光逐个检测每个单元，并用荧光探测器测量荧光信号。
5. 得到具有荧光标记的单元数量和荧光强度，可以用于特定标记的细胞分析和定量分析。
西伯利亚血清学实验西伯利亚血清学实验是一种检测抗中毒素效价的技术。
它根据抗中毒素与毒素之间的反应来测量中毒素的浓度。
这种实验被广泛应用于检测狂犬病、肉毒病、天花病等。
实验步骤：1. 洗涤载玻片，准备供试血清和供比较血清。
2. 将血清稀释，将其缩小。
3. 将血清和毒素混合，观察混合物效果。
4. 根据混合物效果，测量抗体对毒素的浓度。
总结免疫学实验的应用远远不止于此，但以上三种实验是比较典型的。
ELISA能检测到各种抗原和抗体，是临床检验和学术研究的常用方法之一。
流式细胞术因其高精度、快速和敏感性而广泛应用于细胞学研究和诊断学。
医学免疫学实验设计
实验后应对实验结果进行严格 的审核和分析，确保实验结果
的准确性和可靠性。
安全管理制度完善及执行情况检查
免疫学实验室应建立完善的安全管理制度，包括实验室安全、生物安全、化学品安 全等方面的管理制度。
实验室人员应严格遵守安全管理制度，加强安全意识教育，提高安全防范能力。
定期对实验室进行安全检查，及时发现和排除安全隐患，确保实验室的安全运行。
数据分析方法
根据实验目的和数据特点，选择合适的数据分析方法，如 描述性统计、假设检验、方差分析等。
结果呈现
将分析结果以图表、表格等形式呈现，使结果更加直观和 易于理解。同时，撰写实验报告或论文，将实验结果和结 论进行交流和分享。
05
免疫学实验结果解读与讨论
结果呈现方式选择及优缺点比较
表格呈现
适用于展示大量数据，便于比较和分析，但可能 缺乏直观性。
医学免疫学实验设计
汇报人：XX 2024-01-23
contents
目录
• 实验设计概述 • 免疫学实验技术 • 实验动物与模型选择 • 免疫学实验方案设计与实施 • 免疫学实验结果解读与讨论 • 免疫学实验质量控制与安全管理
01
实验设计概述
实验目的与意义
01
02
03
探究免疫学机制
通过实验手段深入探究免 疫系统的组成、功能及调 控机制，为免疫学理论研 究提供实验依据。
设计实验方案
制定详细的实验计划，包括实 验分组、样本处理、观察指标 、数据收集与分析等。
结果分析
对实验数据进行统计分析，验 证实验假设并得出结论。
02
免疫学实验技术
抗原抗体反应技术
酶联免疫吸附试验（ELISA）
免疫学技术实验指导
免疫学技术实验指导硕士研究生使用上海交通大学医学院免疫学教研室2010年11月免疫学实验须知本课程是以实验为主的综合技术性课程，旨在提高和发掘同学们的创造性思维及实验操作能力，培养同学们严谨、严肃、求实、创新的科学作风。
通过实验教学力求使同学们掌握免疫学技术的基本原理、基本方法与基本操作。
为此，对所有参加本课程的同学特要求如下：1．参加本课程学习的同学，在每次实验前务必认真预习本实验指导，对实验的原理、操作方法和实验用的器材、试剂以及预期的实验结果必须做到“心中有数”。
2．参加本课程学习的同学，在进入实验室时应自觉穿好白大衣，保持实验室环境的安静和整洁，遵守课堂秩序。
3．参加本课程学习的同学，在实验过程中必须爱护实验器材与设备，节约实验试剂。
使用贵重仪器时应该获得指导教师的许可和指导。
如遇器材损坏或其它意外情况应及时报告指导教师。
4．参加本课程学习的同学，在实验完成后必须按照指导老师的要求，清洗、整理好实验器具，并按要求妥善处理各类实验废弃物。
5．参加本课程学习的同学，在实验完成后应按照指导老师的要求，本着实事求是的科学精神，详尽完成实验报告，并能对实验结果做出一定的分析与讨论。
目录第一章抗原获取与抗体的制备 (3)实验一免疫球蛋白的分离与纯化 (4)实验二动物免疫与佐剂制备 (6)第二章体外抗原抗体反应及其应用 (8)实验三凝集抑制试验—妊娠试验 (9)实验四双向琼脂扩散试验—免疫球蛋白鉴定 (10)实验五免疫电泳—免疫球蛋白鉴定 (11)第三章免疫标记技术 (12)实验六荧光抗体标记 (13)实验七酶联免疫吸附试验（ELISA）—双抗体夹心法 . 14 实验八酶联免疫吸附试验（ELISA）—间接法 (15)第四章免疫细胞的检测 (17)实验九外周血单个核细胞的分离—密度梯度离心法 (18)实验十外周血T细胞的数量检测—E-花环形成试验 (20)实验十一淋巴细胞表面抗原检测—免疫荧光法 (22)实验十二细胞膜表面抗原检测—补体依赖的微量淋巴细胞毒试验24实验十三NK细胞杀伤功能检测 (26)第五章细胞因子检测 (28)实验十四肿瘤坏死因子检测 (29)附录：免疫学技术实验常用试剂配方 (31)第一章抗原获取与抗体的制备在以抗原和抗体的特异性结合为基础的免疫学应用技术中，抗原的获取与抗体的制备构成了免疫应用技术的重要基础。
医学实验技术专业基础设置
医学实验技术专业基础设置引言医学实验技术专业是培养专业技术人才，掌握医学实验技术基础理论知识和实验操作技能的专业。
基础设置是医学实验技术专业课程体系的重要组成部分，为学生打下坚实的理论基础和实验技能，为其未来的实验工作和研究提供支持。
本文将介绍医学实验技术专业基础设置的主要内容。
一、解剖学解剖学是医学实验技术专业的基础科目之一，主要包括人体解剖学和组织胚胎学。
通过学习解剖学，学生能够掌握人体的器官结构、位置与相互关系。
此外，通过解剖学实验，学生还可以加深对人体内部结构的理解，并培养精细操作的能力。
二、生化学生化学是医学实验技术专业的另一个基础科目，主要包括生物化学和生物分子学。
生化学的学习内容涉及生物分子的结构、功能和相互作用等，为学生理解生物体的基本生理、病理过程和检验方法提供理论基础。
通过生化学实验，学生还可以熟悉实验操作流程，掌握基本的实验技能。
三、细胞生物学细胞生物学是医学实验技术专业的重要基础课程，主要包括细胞结构与功能、细胞代谢和细胞增殖与分化等内容。
学习细胞生物学可以帮助学生了解细胞的基本结构和功能，深入了解疾病的发生与发展机制，为临床诊断提供基础知识和实验依据。
四、免疫学免疫学是医学实验技术专业的重要组成部分，主要包括免疫细胞学、免疫分子学和免疫学实验技术等。
通过学习免疫学，学生能够了解免疫系统的结构和功能，掌握不同疾病的免疫机制，为临床诊断和治疗提供理论依据。
五、病理学病理学是医学实验技术专业的重要基础科目之一，主要包括病理生理学和病理解剖学。
通过学习病理学，学生可以了解疾病的基本过程和机制，培养对疾病诊断与治疗的能力。
同时，通过病理学实验，学生可以掌握病理标本的制备和鉴定技术，提高实验操作和分析病变的能力。
结论医学实验技术专业基础设置是培养医学实验技术人员的重要组成部分。
解剖学、生化学、细胞生物学、免疫学和病理学等基础科目的学习，为学生打下坚实的理论基础，并培养他们的实验技能。
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什么情况下需要制备单克隆抗体
目的蛋白有结构类似物 抗原不纯，无法分开 多抗效果不好（已排除非特异性反应） 希望将抗体用于治疗，研制成药品 希望将抗体用于诊断，研制成诊断试剂
单抗制备原理
如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养，就可得到由 单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成针 对一种抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体。
利用培养或小鼠腹腔接种的方法，便能得到大量的、高浓度的、非 常均一的抗体，其结构、氨基酸顺序、特异性等都是一致的，而且 在培养过程中，只要没有变异，不同时间所分泌的抗体都能保持同 样的结构与机能。
单抗制备原理
HGRPT：次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 TK：胸腺嘧啶核苷激酶 HAT：次黄嘌呤（H)、胸腺嘧啶核苷（T)、氨基蝶呤（A)
比单抗更容易捕捉抗原。因为含有抗不同表位的抗体， 多种抗体都可与抗原结合。
特异性相对较差：因为由不同性质的抗体组成，只要其 中含交叉反应的抗体，多抗就有交叉反应，所以多抗更 容易有交叉反应。
抗体的纯化、标记比单抗难：因为含有各种不同类型、 亚类的抗体，提纯、标记的方法有所差别。同时,血清 中含有的杂蛋白比较多。
实验方法
免疫3~4次以后从耳静脉取血检测效价 • 酶联法：1:104以上，能达到1:106。 • 免疫双扩散： 1:16以上，能达到1:64
效价达到要求的可放血制备血清 • 可一次放血(颈动脉) • 也可多次取血(耳静脉)
多抗的特点
多抗是单抗的混合物，因此多抗的性质是一个群体综合 的性质。
阳性细胞筛选
细胞培养器皿中培养5天后，用HAT培养基换液一次，第10天用HT培养基换液，等到融合细胞 覆盖孔底10%-50%时，常规间接ELISA方法筛选阳性孔。
阳性孔的特异性鉴定采用间接ELISA方法，用包被液稀释成1－10ug/mL的抗原100ul/孔包被 ELISA板，4℃过夜，使其吸附于聚苯乙烯板孔；PBST洗涤三次后用1－10％的脱脂奶粉或1－ 3％ BSA或3－6％牛血清封闭30-60min;加入阳性孔培养上清100ul/孔，37℃ 1－2 小时；PBST 洗涤三次后加入按说明书稀释10000倍的辣根过氧化物酶标记兔抗鼠IgG二抗（Sigma公司） 1应 性0反后0u应，l/孔的用，阳酶3性标7℃孔仪。读1－取2O小D时49，2的P值BS，T以洗与涤阴四性次O后D，值用比O值P大D-于H22O.12为底阳物性显。色获，分2m别o对l/L上H述2S抗O4原终有止特反异
质免疫共沉淀、免疫荧光技术、ELISA等
多抗来源
动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，具有 不同基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当 机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇 分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的 B细胞分裂增殖形成效应B细胞（浆细胞）和记 忆B细胞，大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的 抗体分子分布到血液、体液中，即为多克隆抗 体。
1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术的基 础上，创建立杂交瘤技术，他们把可在体外培养和大量增殖的小鼠 骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠脾细胞融合，成为杂交细胞 系，既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性，又具有抗体形成细 胞的合成和分泌特异性抗体的特点。将这种杂交瘤作单个细胞培养， 可形成单细胞系，即单克隆。
基本步骤
实验方法
免疫小鼠
选择体重18－20g BALB/C 雌性小鼠，用制备抗原免疫。50—100ug 抗原/只与等体积福氏完全佐剂混合，充分乳化后，经背腹部皮下 多点注射0.5ml每只，间隔3周，取与一免等量抗原和等体积的福氏 不完全佐剂充分乳化后，第二次皮下多点注射0.5ml每只，过3周后 用加倍剂量的抗原进行腹腔注射，3天后取脾细胞进行融合。
基础免疫 • 0.5ml抗原(含0.25~0.5mg蛋白或108颗粒抗原) • 0.5ml佛式完全佐剂(CFA) • 制备抗原-佐剂乳化液 • 背部、颈部皮下多点注射或腿部肌肉注射
加强免疫 • 间隔2-4周,可进行多次 • 0.5ml抗原(蛋白量减半) • 0.5ml佛式不完全佐剂(IFA) • 制备抗原-佐剂乳化液 • 背部、颈部皮下多点注射或腿部肌肉注射
多克隆抗体制备
动物选择：
• 兔子（rabbit）：最常用于自制抗体，抗体量较多。（新西兰,大耳 白）
• 小鼠（mouse）：可用于自制抗体，但抗体量很少。（BALB/C,昆 明鼠）
• 大鼠（rat）：可用于自制抗体，免疫过程要麻醉动物。（Wistar大 鼠）
• 羊（sheep、goat）：常用于较大批量地生产抗体（商品）。 • 马（horse）：常用于大批量生产治疗用抗体（商品）。 • 豚鼠（guinea pig）：国外实验室常用机体的免疫系统在抗原刺激下，由B淋巴细胞或记忆细胞 增殖分化成的浆细胞所产生的、可与抗原发生特异性结合的免疫球 蛋白。
1.诊断：各类血清学检测， 抗人球蛋白测试，早孕检 测等
医学应用：
2.治疗：单克隆抗体疗法 （类风湿性关节炎多发性 硬化症等），肿瘤治疗。
科研应用：免疫共沉淀、免疫印迹、染色
细胞融合
取上述免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞（SP2/0）按5-10：1的比 例，在无血清的RPMI-1640培养基中混匀，1500rpm离心5min，去 除培养基，用50% PEG（Sigma）作为融合剂，在37℃下水浴下加 入0.5-0.7ml，使其融合2min，用无血清的RPMI-1640培养基终止融 合后1500rpm离心5min，沉淀用HAT培养基悬浮，分装到96孔含有 饲养细胞的细胞板中，37℃，5%CO2的细胞培养器皿中培养。
放血制备血清： 可一次放血(颈动脉) 也可多次取血(耳静脉)
佐剂的作用机理： 延长抗原的作用时间 增强吞噬作用 刺激抗原提呈
取血测效价： 加强免疫两次或 三次以后的第7天取
血。
促进细胞因子分泌 诱导淋巴细胞分裂、增殖 影响T细胞“极化”
实验方法
新西兰大耳白，2000g(雌雄均可),健康,无病原
基本步骤
抗原制备： 商品化或自行表达
基础免疫：首次，抗 原用量大，用佛式完 全佐剂（Complate Freund’ adjuvand , 含矿物油,卡介苗等)。
•加强免疫：第2次以后，抗 原量减半，多次，间隔2-4 周，用佛式不完全佐剂
(Incomplate Freund’ adjuvand ,不含卡介苗).