限制性核酸内切酶
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根据导入外源基因种类数 的不同,转基因抗虫棉又 可分为： 单价转基因抗虫棉、 双价转基因抗虫棉、 多价转基因抗虫棉等
《棉花与节气》 ----吴广深
清明谷雨紧相连，西北中原齐种棉； 立夏小满轻施肥，滋润幼苗壮棉田； 芒夏连暑勤追肥，促发棵来花铃现； 立秋处暑收获季，采摘归仓笑开颜。
预祝各位同学
高考顺利！
A培养基 含四环素
B培养基 含氨苄青 霉素
1.请指出符合生产要求的大肠杆 菌菌落
2.除利用标记基因筛选是否导入 目的基因之外，你还有什么办法 进行筛选？
核酸分子杂交
3.上述筛选出来的受体细胞是否 一定能表达目的基因？
7.请猜测郭三堆团队检测目的基因表达的方法
个体 让棉铃虫吃棉花叶片，若表达成 水平 功，棉铃虫会死亡
株（假定Bt基因都能正常表达）。某些抗虫植株体细
胞含两个Bt基因，这两个基因在染色体上的整合情况
有下图所示的三种类型（黑点表示Bt基因的整合位
点）；让这些含两个Bt基因抗虫的植株自交，后代含
抗虫基因的个体的比例由大到小顺序为
A．甲、丙、乙 B．甲、乙、丙 C．丙、乙、甲 D．乙、甲、丙
A
9.单一基因培育出的转基 因抗虫棉,虽然具有许多 优点,但也存在着许多不 足,如抗虫范围相对较窄, 抗虫性还不是特别强。为 提高棉花对害虫的抗虫能 力，可采取什么措施？
如何将目的基因导入细菌？
用Cacl2处源自文库细胞，增大细胞壁的通透性
6.若某受体细胞表达了标记基因，是否意 味着导入了目的基因？
目的基因
四环素抗性基因 四环素抗性蛋白
受体细胞
氨苄青霉素 抗性基因
目的基因
四环素抗性基因 四环素抗性基因
为了检测目的基因是否导入原本没有氨苄青霉素抗性基因和四 环素抗性的大肠杆菌，将大肠杆菌在含四环素的培养基上培养， 得到如图二的菌落。再将灭菌绒布轻轻按在培养基上，使绒布 面沾上菌落，然后将绒布平移按到含氨苄青霉素的培养基上培 养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。
基因工程 ——抗虫棉的培育
考纲考情
基因工程的诞生 I
2009选择题T3
基因工程的原理和技术 II 2010选择题T2
2011选择题T6
2012选择题T6
2013非选择题T32
基因工程的应用 I
郭三堆
2013年CCTV年度科技创新人物 中国“抗虫棉”之父
郭三堆的团队在抗虫棉的培育中运 用了哪些技术？ 所用技术主要包括哪些具体环节？
为载体，如λ噬菌体和T2噬菌体
（2） 载体的必要条件
能在受体生物细胞内稳定保存，并大量复制和表达 有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段插
入。 具有某些标记基因，便于筛选。
5.抗虫基因是如何导入棉花细胞的？
①农杆菌转化法 ②花粉管通道法
如何将目的基因导入动物细胞？
显微注射技术：将基因表达载体提纯，用显微仪 注射到受精卵中
（1） 载体的种类： 质粒、 λ噬菌体和动植物病毒。
下列与基因工程载体有关的叙述正确的是（A ）
A．质粒是最常用的载体，在细菌中以独立于拟核 之外的方式存在
B．质粒作为载体的原因之一是它为环状，便于切 割后与目的基因连接
C．载体中的标记基因可促进目的基因的表达 D．当受体细胞为大肠杆菌时，多种噬菌体均可作
转基因烟草过程中，如下操作错误的是
(A )
A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸
B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体
C．将重组DNA分子导入烟草原生质体
D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞
（2）作用特点： 识别和切割DNA分子内一小段 特殊核苷酸序列
5’
3’
5’
3’
3’
5’
3’
5’
G使A用ADTNTAC连接目酶的制作G 重A 组A TDTNAC 分子
C T T A A G 基因 C T T A A G
CTTCATG GAAGTACTTAA
AATTCCCTAA GGGATT
质 粒
加入DNA连接酶后，可能生成的产物有哪些? 目的基因和质粒的连接产物是否一定符合要求?
4.郭三堆团队选用的载体是什么？常用载 体有哪些？
1.郭三堆团队是如何获取目的基因的?
化学合成法
目的基因的核苷酸序列已知
聚合酶链式反应 （PCR）扩增
目的基因的核苷酸序列未知
从基因文库中获取
2.基因工程的核心是什么?
构建重组DNA分子
3.需要用到哪些工具?
限制性核酸内切酶、DNA连接酶、载体
限制性核酸内切酶
（1）作用对象： DNA
(2010·浙江卷，2)在用基因工程技术构建抗除草剂的
若某些目的基因表达后在个体水平的表现不明
显，你还有什么办法检测目的基因是否成功表
达？
分子 水平
抗原—抗体杂交
8.抗虫基因会导入到什么部位呢？会导入几个？
目的基因插入位置和数目具有随机性
B B
A
B B
B
B B
C
某农业研究所将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因（Bt）导
入棉花，筛选出Bt基因成功整合到染色体上的抗虫植
《棉花与节气》 ----吴广深
清明谷雨紧相连，西北中原齐种棉； 立夏小满轻施肥，滋润幼苗壮棉田； 芒夏连暑勤追肥，促发棵来花铃现； 立秋处暑收获季，采摘归仓笑开颜。
预祝各位同学
高考顺利！
A培养基 含四环素
B培养基 含氨苄青 霉素
1.请指出符合生产要求的大肠杆 菌菌落
2.除利用标记基因筛选是否导入 目的基因之外，你还有什么办法 进行筛选？
核酸分子杂交
3.上述筛选出来的受体细胞是否 一定能表达目的基因？
7.请猜测郭三堆团队检测目的基因表达的方法
个体 让棉铃虫吃棉花叶片，若表达成 水平 功，棉铃虫会死亡
株（假定Bt基因都能正常表达）。某些抗虫植株体细
胞含两个Bt基因，这两个基因在染色体上的整合情况
有下图所示的三种类型（黑点表示Bt基因的整合位
点）；让这些含两个Bt基因抗虫的植株自交，后代含
抗虫基因的个体的比例由大到小顺序为
A．甲、丙、乙 B．甲、乙、丙 C．丙、乙、甲 D．乙、甲、丙
A
9.单一基因培育出的转基 因抗虫棉,虽然具有许多 优点,但也存在着许多不 足,如抗虫范围相对较窄, 抗虫性还不是特别强。为 提高棉花对害虫的抗虫能 力，可采取什么措施？
如何将目的基因导入细菌？
用Cacl2处源自文库细胞，增大细胞壁的通透性
6.若某受体细胞表达了标记基因，是否意 味着导入了目的基因？
目的基因
四环素抗性基因 四环素抗性蛋白
受体细胞
氨苄青霉素 抗性基因
目的基因
四环素抗性基因 四环素抗性基因
为了检测目的基因是否导入原本没有氨苄青霉素抗性基因和四 环素抗性的大肠杆菌，将大肠杆菌在含四环素的培养基上培养， 得到如图二的菌落。再将灭菌绒布轻轻按在培养基上，使绒布 面沾上菌落，然后将绒布平移按到含氨苄青霉素的培养基上培 养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。
基因工程 ——抗虫棉的培育
考纲考情
基因工程的诞生 I
2009选择题T3
基因工程的原理和技术 II 2010选择题T2
2011选择题T6
2012选择题T6
2013非选择题T32
基因工程的应用 I
郭三堆
2013年CCTV年度科技创新人物 中国“抗虫棉”之父
郭三堆的团队在抗虫棉的培育中运 用了哪些技术？ 所用技术主要包括哪些具体环节？
为载体，如λ噬菌体和T2噬菌体
（2） 载体的必要条件
能在受体生物细胞内稳定保存，并大量复制和表达 有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段插
入。 具有某些标记基因，便于筛选。
5.抗虫基因是如何导入棉花细胞的？
①农杆菌转化法 ②花粉管通道法
如何将目的基因导入动物细胞？
显微注射技术：将基因表达载体提纯，用显微仪 注射到受精卵中
（1） 载体的种类： 质粒、 λ噬菌体和动植物病毒。
下列与基因工程载体有关的叙述正确的是（A ）
A．质粒是最常用的载体，在细菌中以独立于拟核 之外的方式存在
B．质粒作为载体的原因之一是它为环状，便于切 割后与目的基因连接
C．载体中的标记基因可促进目的基因的表达 D．当受体细胞为大肠杆菌时，多种噬菌体均可作
转基因烟草过程中，如下操作错误的是
(A )
A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸
B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体
C．将重组DNA分子导入烟草原生质体
D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞
（2）作用特点： 识别和切割DNA分子内一小段 特殊核苷酸序列
5’
3’
5’
3’
3’
5’
3’
5’
G使A用ADTNTAC连接目酶的制作G 重A 组A TDTNAC 分子
C T T A A G 基因 C T T A A G
CTTCATG GAAGTACTTAA
AATTCCCTAA GGGATT
质 粒
加入DNA连接酶后，可能生成的产物有哪些? 目的基因和质粒的连接产物是否一定符合要求?
4.郭三堆团队选用的载体是什么？常用载 体有哪些？
1.郭三堆团队是如何获取目的基因的?
化学合成法
目的基因的核苷酸序列已知
聚合酶链式反应 （PCR）扩增
目的基因的核苷酸序列未知
从基因文库中获取
2.基因工程的核心是什么?
构建重组DNA分子
3.需要用到哪些工具?
限制性核酸内切酶、DNA连接酶、载体
限制性核酸内切酶
（1）作用对象： DNA
(2010·浙江卷，2)在用基因工程技术构建抗除草剂的
若某些目的基因表达后在个体水平的表现不明
显，你还有什么办法检测目的基因是否成功表
达？
分子 水平
抗原—抗体杂交
8.抗虫基因会导入到什么部位呢？会导入几个？
目的基因插入位置和数目具有随机性
B B
A
B B
B
B B
C
某农业研究所将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因（Bt）导
入棉花，筛选出Bt基因成功整合到染色体上的抗虫植