年初级检验技师《微生物检验》讲义第23章立克次体及检验

立克次体及检验

本章要点：

1.概述

2.致病性

3.立克次体的检测方法

一、概述

1.概念：立克次体是一类微小的原核细胞型微生物。

2.立克次体的共同特征：

大多是人畜共患病原体；以节肢动物为传播媒介或储存宿主；大小介于一般细菌与病毒之间，革兰染色阴性，呈多形性；除极少数外均专性活细胞内寄生；对多种抗生素敏感。

3.分类

对人类致病的立克次体有五个属：立克次体属（Rickettsia）、柯克斯体属、东方体属、埃立克体属和巴通体属。

4.外斐反应

立克次体的耐热多糖抗原与变形杆菌某些X株的菌体抗原（OX19、OX2、OX K

抗原）具有共同的抗原性，因而临床上常用后者代替相应的立克次体抗原进行非特异性凝集反应，这种交叉凝集试验称为外斐反应，用于立克次体病的辅助诊断。

二、致病性

（一）立克次体斑疹伤寒群主要包括普氏立克次体和莫氏立克次体。

1.普氏立克次体

常以人的体虱为传播媒介，通过虱粪擦入损伤的皮肤，引起人与人之间传播的流行性斑疹伤寒。

2.莫氏立克次体

莫氏立克次体的贮存宿主是鼠类，主要传播媒介是鼠蚤或鼠虱，通过蚤粪擦入损伤的皮肤，引起地方性斑疹伤寒。

3.恙虫病立克次体通过恙瞒幼虫叮咬传给人，引起恙虫病。

4.贝纳柯克斯体（又称Q热立克次体）

以蜱为传播媒介，也可不借助于媒介节肢动物而通过接触、呼吸道、消化道等途径传给人，引起Q热。

5.汉赛巴通体

为杆菌性血管瘤-杆菌性紫瘫和猫抓病的病原体，与猫抓伤、咬伤有关。

三、立克次体的检验

由于立克次体的传染性较强，病原体的分离鉴定必须保证在安全防护的条件下进行，以防止实验室感染的发生。

（一）标本的采集和处理

1.患者血液在病程第一周内并在使用广谱抗生素前采集患者血液5～

10ml，立即在患者床边接种于动物。血清学检查标本一般采集3份血液标本，分

别取自病程早期、病后10～14d及病后21～28d。如患者已使用抗生素治疗，因抗体产生较晚，故需采集第4份标本。

2.活检或尸检材料组织标本研磨制成10%～20%悬液，低速离心取上清接种，若标本有细菌污染，可加青霉素（100～l000IU／ml）置室温作用30min后接种动物。

（二）标本直接检查

1.立克次体的染色法多用于脏器标本的检查。标本印片、固定后用荧光抗体染色或常规染色镜检。必要时作切片检查。

2.核酸检测采用PCR技术和核酸探针检测。

（三）立克次体培养法

1.鸡胚卵黄囊培养或细胞培养。

2.动物接种常用动物有豚鼠、金黄地鼠、小白鼠、大白鼠及家兔等。

（四）血清学试验

血清学试验是研究立克次体的重要方法，也是立克次体病实验诊断和鉴定病原体的重要手段。患者双份血清的试验结果，有利于立克次体病现症诊断。

1.间接免疫荧光（IFA）试验、ELISA间接法是目前检测标本中特异性抗体的常用方法。间接微量免疫荧光技术的方法敏感，重复性好，又节省材料和时间，因而在血清学诊断及立克次体种别鉴定上广泛应用。单份血清滴度≥1：128者有现症诊断意义，一般滴度在1：16或以上即为阳性，4倍增长可作为立克次体病的现症诊断。

补体结合试验虽特异，但敏感性不如IFA和ELISA且操作繁琐，除Q热诊断外，此法已多被前两者取代。

2.凝集试验分为特异性凝集和非特异性凝集试验两种，具体方法如下：

特异性凝集试验：微量血凝试验、间接血凝试验、乳胶凝集试验。微量血凝试验以血清最高稀释度呈凝集者为其滴度，达1：8以上者为阳性。间接凝集试验滴度在1：50以上有诊断价值。乳胶试验结果与间接血凝结果相吻合。

非特异性凝集试验：外斐试验常用于立克次体属的三个生物型的诊断，缺乏敏感性和特异性。

一般血清滴度达1：160即为阳性，病程中双份或多份血清试验，至少效价有4倍增长才有诊断意义。

四、斑疹伤寒立克次体

（一）生物学特性

1.形态与结构斑疹伤寒立克次体比细菌小，呈多形性，有球形、球杆状、长杆状或长丝状。在感染细胞内大多聚集成团分布在胞浆内。细胞壁不含磷壁酸，但含有胞壁酸、葡萄糖胺和二氨基庚二酸，与革兰阴性菌的肽聚糖成分相似。斑疹伤寒立克次体最外表含有黏液层和微荚膜结构。

2.培养特性采用鸡胚成纤维细胞、L929细胞和Vero细胞进行分离培养，繁殖一代需要6-8小时，培养时需要CO2。

3.抗原构造立克次体有两种特异性抗原，一种为群特异性抗原，与黏液层的脂多糖有关；另一种为种特异性抗原，与细胞壁外膜的表面蛋白成分有关。大部分立克次体与普通变形杆菌某些X菌株的耐热多糖抗原有共同的抗原性，故可用这些X菌株代替立克次体抗原进行非特异性凝集反应去检测抗体，这种交叉凝集试验称为外斐反应（Wiel-Felix reaction），可作为立克次体病的辅助诊断。

4.基因组本病原体Madrid E株染色体为1111523bP组成的环状DNA，G+C 含量为29.1mol%；Wilmington株基因组全长为1111496bp，为单链环状DNA，G+C 含量为28.9mol%。

5.抵抗力对热敏感，耐低温和干燥，在干虱粪中能保持两个月左右。对四环素和氯霉素类抗菌药物敏感。磺胺可刺激其增殖。

（二）致病性斑疹伤寒立克次体是地方性斑疹伤寒的病原体，啮齿类动物是其主要储存宿主，主要传播媒介是鼠蚤或鼠虱，自然感染周期为鼠蚤-啮齿类动物-鼠虱、鼠蚤。本病原体主要致病物质有脂多糖、脂酶A及微荚膜样黏液层，患者以高热、头痛、全身皮疹为主要特征。有的伴有神经系统、心血管系统等症状和实质性器官损伤。

（三）微生物检验患者采集血液标本、活检或尸检材料作为检测标本。

1.标本直接检査

1）免疫荧光检测：多用于脏器标本的检査。荧光显微镜下可见脾、肺及心瓣膜赘生物中有立克次体，也可在肝、肾及皮疹活检组织中检出。