20.叶绿体色素含量测定分光光度法
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实验器材和试剂
1、材料：菠菜叶片 2、 用具：分光光度计、天平、研钵、漏斗、 剪刀、容量瓶、烧杯、滤纸、滴管等
3、试剂：80%丙酮、石英砂和碳酸钙
实验步骤
1.叶绿体色素的提取
取新鲜菠菜叶片5克,擦干,去中脉,剪碎放入研钵;加入少许石英砂和 CaCO3,再加入80%丙酮3ml,研磨成匀浆,再加80%丙酮10ml,静置 10分钟;用漏斗滤去残渣,用丙酮反复冲洗研钵、残渣至无色;用容 量瓶定容至50ml 。
20. 叶绿体色素含量的 测定----分光光度法
Biblioteka Baidu
实验原理
利用80%丙酮提取叶绿体色素，叶绿素 a、叶绿素b和类胡萝卜素最大吸收峰的波 长分别是663nm、646nm和470nm。
根据分光光度计测定的吸光度值，可以 计算出丙酮提取液中叶绿体色素含量。
实验目的
掌握分光光度法对叶绿素a、叶绿素b、叶 绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的 方法。
附录：722分光光度计的使用
1、选择灵敏度旋纽至3；将波长调节到600nm，打开 样品室盖，打开电源开关预热20min。
2、打开样品室盖，将测定旋纽调至T（透光度），用 调节旋纽0调0；盖上样品室盖，用调节旋纽100调100。
3、将空白样品放入样品槽，按上述方法调0和调100。
4、将测定旋纽调至A（吸光度），用Abs旋纽调0，测 定待测样品的光密度。
作业
计算出叶绿素a、b的浓度及其叶绿素总浓度和 类胡萝卜素的浓度。
思考题
1. 叶绿素a、b在蓝色区也有吸收峰，能否用这 一吸收峰波长进行叶绿素的定量分析？为什么？ 2．为什么提取叶绿素时干材料一定要用80%的 丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提取？
2.吸光度的测定
取光径1cm比色杯，注入上述叶绿素提取液,以80%丙酮注入另一 同样的比色杯内作为空白对照,在波长663、646和470nm下测定吸 光度。
3.结果计算
依据下列丙酮提取液中色素浓度计算公式,分别计算出叶绿素a、 b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。
计算公式
80%丙酮提取液中色素浓度的计算
Ca（叶绿素a）=12.2A663-2.81A646 Cb（叶绿素b）=20.13A646-5.03A663 CT（叶绿素）=Ca+Cb=17.32A646+7.18A663 Cx.c（类胡萝卜素）=(1000A470-3.27Ca-104Cb)/229
叶绿体色素含量=
色素浓度（mg.L1） 提取液体积（L） 稀释倍数 样品鲜重（或干重、面积，g或m2）
1、材料：菠菜叶片 2、 用具：分光光度计、天平、研钵、漏斗、 剪刀、容量瓶、烧杯、滤纸、滴管等
3、试剂：80%丙酮、石英砂和碳酸钙
实验步骤
1.叶绿体色素的提取
取新鲜菠菜叶片5克,擦干,去中脉,剪碎放入研钵;加入少许石英砂和 CaCO3,再加入80%丙酮3ml,研磨成匀浆,再加80%丙酮10ml,静置 10分钟;用漏斗滤去残渣,用丙酮反复冲洗研钵、残渣至无色;用容 量瓶定容至50ml 。
20. 叶绿体色素含量的 测定----分光光度法
Biblioteka Baidu
实验原理
利用80%丙酮提取叶绿体色素，叶绿素 a、叶绿素b和类胡萝卜素最大吸收峰的波 长分别是663nm、646nm和470nm。
根据分光光度计测定的吸光度值，可以 计算出丙酮提取液中叶绿体色素含量。
实验目的
掌握分光光度法对叶绿素a、叶绿素b、叶 绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的 方法。
附录：722分光光度计的使用
1、选择灵敏度旋纽至3；将波长调节到600nm，打开 样品室盖，打开电源开关预热20min。
2、打开样品室盖，将测定旋纽调至T（透光度），用 调节旋纽0调0；盖上样品室盖，用调节旋纽100调100。
3、将空白样品放入样品槽，按上述方法调0和调100。
4、将测定旋纽调至A（吸光度），用Abs旋纽调0，测 定待测样品的光密度。
作业
计算出叶绿素a、b的浓度及其叶绿素总浓度和 类胡萝卜素的浓度。
思考题
1. 叶绿素a、b在蓝色区也有吸收峰，能否用这 一吸收峰波长进行叶绿素的定量分析？为什么？ 2．为什么提取叶绿素时干材料一定要用80%的 丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提取？
2.吸光度的测定
取光径1cm比色杯，注入上述叶绿素提取液,以80%丙酮注入另一 同样的比色杯内作为空白对照,在波长663、646和470nm下测定吸 光度。
3.结果计算
依据下列丙酮提取液中色素浓度计算公式,分别计算出叶绿素a、 b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。
计算公式
80%丙酮提取液中色素浓度的计算
Ca（叶绿素a）=12.2A663-2.81A646 Cb（叶绿素b）=20.13A646-5.03A663 CT（叶绿素）=Ca+Cb=17.32A646+7.18A663 Cx.c（类胡萝卜素）=(1000A470-3.27Ca-104Cb)/229
叶绿体色素含量=
色素浓度（mg.L1） 提取液体积（L） 稀释倍数 样品鲜重（或干重、面积，g或m2）