脂肪酶讲稿

脂肪酶与生物柴油的催化合成老师们同学们大家好，我们组要介绍的内容是脂肪酶，由于脂肪酶种类众多，不能一一介绍，我们先会对脂肪酶的一般性质做一个介绍，然后我们选取了在工业上有着很好前景的应用于生物柴油催化合成的脂肪酶——南极假丝酵母脂肪酶B来做讲解。

首先，是对脂肪酶这一类酶做一个系统的介绍：

1 脂肪酶

1.1 脂肪酶的简介

脂肪酶，又称甘油酯水解酶，是指分解或合成高级脂肪酸和丙三醇形成的甘油三酸酯酯键的酶，它是一类具有多种催化能力的酶，被广泛用于三脂酰甘油及其他一些水不溶性脂类的水解、醇解、酯化、转酯化及脂类逆向转酯反应酯类的逆向合成反应中。

脂肪酶的种类众多，包括磷酸酯酶、固醇酶和羧酸酯酶等。广泛存在于含有脂肪的动、植物和微生物（如霉菌、细菌等）组织中。比如高等动物的胰脏和脂肪组织、油料作物的种子、真菌和酵母等都含有较多的脂肪酶。（图中的是人的胰脂肪酶的示意图）脂肪酶的分子量因其来源不同而差异较大，不同来源的脂肪酶，其氨基酸组成数目从200-700不等，其分子量也从29-100kDa不等。

1.2 脂肪酶的功能

脂肪酶作为酯水解酶，自然可以催化酯的相关反应，比如酯的水解、酯的合成、酯交换等反应，脂肪酶对生命体的代谢起到了非常重要的作用：在动物体内，各类脂肪酶控制消化，吸收，脂肪重建和蛋白质代谢等过程；当油料种子发芽时，脂肪酶能与其他的酶协同发挥作用，催化分解油脂类物质生成糖类，提供种子生根发芽所必须的养料和能量；在发酵微生物中，如黑曲霉，假丝酵母等，脂肪酶通过分解脂质为其提供能量。

不同来源的脂肪酶的最适合的温度和最适合的PH差异比较大，最适温度一般在30-60℃之间，最适PH一般为6-10。

1.3 脂肪酶的结构及催化机理

1.3.1 脂肪酶的结构

脂肪酶的结构并不复杂，脂肪酶基本组成单位通常只有氨基酸，而且只有一条多肽链。

对脂肪酶活性中心的研究发现，八联体β一折叠被两亲的α一螺旋连接起来共同构成了脂肪酶的活性中心，不同的脂肪酶都有一个相似的起催化作用的“Ser-Asp／Glu-His”三联体，三个氨基酸残基分别位于活性中心具有疏水性的β5、β7、β8折叠片的后面。

丝氨酸残基位于β5链C末端高度保守的五肽“GXSXG”中(X代表任意氨基酸残基）。在脂肪酶参与催化反应时由丝氨酸残基发动亲核攻击。许多脂肪酶的活性中心丝氨酸残基在正常情况下被双亲性的短α一螺旋“盖子”(1id)盖住，被其保护起来。当脂肪酶活化时，酶分子构象发生变化，“盖子”打开暴露出活性中心，使脂肪酶参与反应。

活性中心附近有一个Ca2+结合点。Ca2+分别与脂肪酶主链上的4个羧基氧原子和2个水分子相互作用，形成一个稳定的八面体结构，有助于酶的激活和构象的稳定。

1.3.1 脂肪酶的催化机理

脂肪酶是一类特殊的酯键水解酶，因为α-螺旋“盖子”的存在，只有当脂肪酶暴露于油水界面时，盖子被打开，酶的活性才能被激发，这就是所谓的脂肪酶的界面活性。因此脂肪酶只在油水界面上作用，而且只有在当底物以微粒，小聚合分散状态或呈乳化颗粒时，脂

肪酶对底物水解才有显著的催化作用。

脂肪酶按催化特异性可分为三类：第一类脂肪酶对三脂酰甘油上酰基水解的位置没有特异性；第二类脂肪酶有1、3位酰基或2位酰基水解特异性；第三类脂肪酶对脂肪酸的碳链长度和饱和度有特异性。

在脂肪酶催化作用下，三脂酰甘油与甲醇等低碳醇的转酯反应动力学表现为连续反应机理，即三脂酰甘油和部分甘油酯(单脂酰甘油和二脂酰甘油)在脂肪酶作用下首先水解，游离脂肪酸和甲醇酯化反应生成脂肪酸甲酯，这与碱催化不同。在碱催化反应中，低碳醇首先在OH-的作用下发生离解，生成活性中间体甲氧基，然后进攻羧基中的碳原子，从而发生亲核取代反应，利用甲氧基将三脂酰甘油中的甘油基替代下来，从而生成脂肪酸甲酯。

理论上，脂肪酶催化可使所有的游离脂肪酸转化为脂肪酸甲酯，避免碱催化中皂化反应所产生的浪费。

1.4 脂肪酶的应用

脂肪酸在许多领域如食品、药品、日用化工等方面都有广泛的应用：

1.4.1 在食品加工方面

利用脂肪酶分解油脂释放出的短链脂肪酸增加或改进食品的风味、香味与质构，生产代可可脂，这是脂肪酶最早、最广泛的应用。

1.4.2 在医学方面

脂肪酶是一种重要的药物靶或中间体标记酶。作为诊断工具，脂肪酶可预测疾病。测定脂肪酶催化甘油三酸酯产生的甘油可间接获得血清中甘油三酸酯的含量，血清中脂肪酶还可用于检测急性胰腺炎和胰腺损伤。

1.4.3 脂肪酶在纺织物中的应用

织物表面脂质影响织物的柔软度、光亮度和着色与手感。传统脂处理法是用化学品脱除，效果不理想，且污染环境，成本高。脂肪酶能将织物表面脂质水解成易溶于水的脂肪酸，易于脱除。

1.4.4脂肪酶可以在生物传感器起到作用

用脂肪酶的催化特性研制生物传感器逐渐受到关注。固定在pH或氧化电极的脂肪酶联合葡萄糖氧化酶可作为脂质生物传感器，测定甘油三酯、血胆固醇含量。

1.4.5 脂肪酶也可以用于催化合成生物柴油

生物柴油是碳链长度为16-19的脂肪酸和甲醇或乙醇形成的酯类化合物的总称。近年，用脂肪酶催化合成生物柴油，代替石化能源成为研究热点。

接下来我们将介绍脂肪酶在催化生产生物柴油这一方面的应用：

2 脂肪酶催化合成生物柴油

2.1 生物柴油

随着工业化程度的提高，不可再生的化石能源越来越紧缺，对于新能源的研究也越来越迫切。

生物柴油作为(biodiesel )可再生能源的一种，逐渐成为当下研究的一个热点，生物柴油主要指以任何天然的油或脂为原料与甲醇、乙醇等进行醇解化反应得到的脂肪酸甲酯(或脂肪酸乙酯)混合物，不仅可以作为燃料直接燃烧，而且也可作为柴油清洁燃烧的添加剂。目前工业化生产主要使用化学法合成生物柴油，但存在工艺复杂、能耗较高、产品色泽较深、酯化产物难于回收、成本高等缺点。

2.2 脂肪酶催化合成生物柴油