病原生物学实验二

5.自选细菌进行培养(4个)
方法：取一普通平皿培养基，用棉签沾取生理盐水后， 在手机、台面等物品上擦拭，然后涂布在平板上。
下次实验
细菌的形态学检查
药敏试验 肠道致病菌分离培养
散生长，形成单个菌落，以便 获得纯菌。
方法：
分区划线法：适用于含菌量
较多的标本。
连续划线法：适用于含菌量
较少的标本。
分区划线
划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力
在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂.
第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面
积的1/4—1/5.
2.紫外线对细菌的影响 （每个实验室2个培养皿）
取一个平皿，用密涂法将细菌涂布于培养皿中， 打开一半平皿盖，置于紫外灯下照射30分钟，
然后盖好平皿，置37℃培养24h后取出观察结果。
密涂接种
分三次接种， 每次取一环。第 一次密涂接种后 旋转60度二次密 涂接种，然后同 方向旋转60度后 再次密涂接种。
划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重
复.
每次划完后应灭菌.
2.斜面接种法：
用于菌种移种，以进一步鉴定
和保存菌种。
3.半固体穿刺接种法：保存菌种或观察细菌的动力和生 化反应。 4.液体接种法：用于肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等液体 培养基的接种。
四 种 接 种 方 法
将上述已接种细菌的培养基置37℃恒温
培养箱中孵育18～24h，观察细菌的生
长现象。
（二）细菌在培养基上的生长现象
1. 细菌在固体培养基中的生长现象
菌落
定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，
形成单一肉眼可见的细菌集团。
菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、
透明度、湿润度、黏度、溶血性。
菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。
SS培养基中菌落特点
细 菌 SS平板 粉红色大菌落
无色细小，半透明菌落 无色细小 半透明菌落
大肠杆菌
痢疾杆菌 伤寒杆菌
(中间有黑色沉淀）
（三）粪便标本的分离培养
将粪便标本以平板分区划线法接种到SS培
养基。 (每个实验室8个SS平板，每组做好标记，班长用胶布 按班级绑好)
放入37℃温箱中培养24h；取出放4℃冰箱中保存备用。
硫代硫酸钠
10%柠檬酸铁溶液 1%中性红溶液
8.5
10ml 2.5ml
检测硫化氢的产生
检测硫化氢的产生 指示剂
琼脂
17
凝固剂
（二）SS培养基
胆盐抑制G+,枸橼酸钠和煌 绿能部分抑制大肠杆菌,致 病的沙门菌和志贺菌能大 量生长。
中性红指示剂和乳糖,中性 红遇酸变粉红。
常用于肠道致病菌的分离 培养。
3. 咽喉部细菌的检查（每班4个平皿）

取血琼脂平板1块，打开平皿盖，将培养基面置于 口腔前10cm处，受试者用力咳嗽几次； 盖上平皿盖，置37℃温箱中倒置培养24h后取出 观察结果。

4.化学消毒剂对细菌的影响
（每个实验室4个平皿） 方法：取一普通平皿培养基， 一部分写上“前”，另一部分 写上“后”，然后将手指在写 有“前”的部分沾一下，再将 手指用酒精进行消毒，在写 有“后”的部分沾一下。放入 37℃温箱培养24小时后观察。
菌落
菌苔
菌落与菌苔
2. 细菌在液体培养基中的生长现象
浑浊：大多数细菌，如E.c.
沉淀：多见于链状排列的细菌。
菌膜：专性需氧菌（如结核分枝杆菌、枯草杆
菌） 。
细菌在液体培养基中的生长现象
菌膜
对照
菌沉淀
均匀浑浊
3. 细菌在半固体培养基中的生长现象
有鞭毛细菌：
在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺
细菌在自然界的分布
1.空气中细菌的检查（每个班2个平皿） 原理：根据空气中携带有微生物气溶胶（以固体或液 体微小颗粒分散于空气中的分散体系称为气溶胶，其中的气 体是分散介质）粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方 式沉降到琼脂培养基上。
方法：在室内选择一处放一个平皿。揭开皿盖，皿盖 扣置于皿底下，暴露放置15min，即盖上皿盖，放入37 ℃ 培 养24小时，观察结果。
病原生物学实验（二）
病原生物学教研室 sqjcbwm@126.com
细菌接种技术
实验目的
1 2 掌握常用的细菌接种方法 熟悉细菌生长现象的观察方法
（一）细菌的分离培养和接种技术
接种工具
接种针和接种环
L型涂布棒
接种环境
接种罩、超净工作台或无菌室内进行。
接种方法
1. 平板划线接种法：
目的：使混合的细菌呈单个分
硫化氢
-
⊕
+
+
⊕
-
痢疾杆菌
伤寒杆菌
+/-
（二）SS培养基 （Salmonella Shigella Agar ）
成
牛肉膏
乳糖
分
含量（g/L）
5
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作
营养成分
营养成分，发酵
用
蛋白胨
胆酸钠、胆酸-脱氧胆 酸钠盐混合物（三号） 柠檬酸钠 0.1%煌绿溶液
5
3.5 8.5 0.33ml
营养成分
抑制G+、大部分大肠菌群和变形 杆菌 抑制G+、大部分大肠菌群和变形 抑制G+、大部分大肠菌群和变形
线边缘模糊。
无鞭毛细菌：
只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。
细菌在半固体培养基中的生长现象
无动力 现象
有动力 现象
肠道致病菌的分离培养(1)
主要内容
一.肠道杆菌的生物学性状 二.S-S培养基的特性及用途 三.分离培养方法
（一）肠道杆菌的生物学性状 肠杆菌科的重要菌属及代表菌种
埃希菌属：大肠埃希菌
沙门菌属：伤寒沙门菌
甲型、乙型、丙型副伤寒
志贺菌属：痢疾志贺菌
1.相似的形态染色—从形态上无法区别
多 有 鞭 毛 、 菌 毛 中等大小的G-杆菌
2.活泼的生化反应
乳糖发酵试验
初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌
肠道致病菌
多数不发酵乳糖
肠道非致病菌
多数发酵乳糖
三种细菌的生化反应
菌名
大肠杆菌
葡萄糖
乳糖