细菌的培养及鉴定思路
微生物的培养与鉴定
微生物的培养与鉴定微生物是一类微小而广泛存在于自然界中的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们在生物学研究、医学、工业等领域都起着重要的作用。
为了研究微生物的特性和功能，培养和鉴定微生物是必不可少的步骤。
微生物的培养是指将微生物样品引入含有适宜的营养物质的培养基中，为其提供生长和繁殖所需的条件。
培养基的成分和条件的选择取决于微生物的种类和需求。
一般来说，培养基需要包含碳源、氮源、矿质盐和微量元素等成分。
此外，还需要调节培养基的pH值、温度、氧气浓度等环境因素，以保证微生物的正常生长。
培养微生物的首要步骤是样品的采集。
样品可以来自于土壤、水体、食品、人体等各种环境。
采集样品时需要注意避免污染，并尽快将样品转移到无菌容器中。
然后，将样品制备成适合培养的形式，如悬浮液、悬浮固体或涂布在固体培养基上。
接下来，将培养基与样品接种混合，然后放置在适当的条件下培养。
微生物的培养需要注意以下几个方面。
首先，要确保培养基的无菌性，以避免杂菌的干扰。
其次，要根据微生物的特性选择适当的培养基和条件。
例如，对于好氧细菌，需要提供充足的氧气；而对于厌氧细菌，需要在无氧条件下培养。
此外，还需要控制培养基的温度，保持在微生物生长的最适温度范围内。
最后，要进行定期观察和记录微生物的生长情况，包括形态、色素、产物等特征。
鉴定微生物是指通过一系列实验和观察，确定微生物的种类和特性。
微生物鉴定的方法有很多种，包括形态学观察、生理生化特性测定、分子生物学技术等。
形态学观察是最基本的鉴定方法之一，通过显微镜观察微生物的形态、大小、结构等特征，可以初步确定其属于细菌、真菌还是其他类群。
生理生化特性测定则是通过对微生物进行一系列生理和生化试验，如产酸、产气、产胆汁酶等，来进一步确定其种类。
分子生物学技术则是最新的鉴定方法，通过提取微生物的DNA或RNA，利用PCR、基因测序等技术进行分析，可以确定微生物的亲缘关系和物种。
在微生物的培养与鉴定过程中，需要注意一些常见的问题和挑战。
细菌鉴定的基本思路(全)
细菌鉴定一、标本的处理：1、先按标准操作规程（SOP）对标本进行接种（一般种普通血平板和选择性麦康凯平板；真菌-沙保弱；链球菌-巧克力平板，CO2温箱；结核菌-罗氏;粪-SS）。
一般细菌置于35℃培养24h；真菌置于30℃培养2、后将标本涂片，进行革兰染色，判断是革兰阴性或阳性，杆状，球状，短杆，球杆及弧状。
二、根据菌落形态，颜色，光滑与否，边缘，大小，是否有溶血环等初步判断所属菌属。
三、生化鉴定（最主要的依据）定向实验(最重要两实验)API微生物鉴定系统生理生化鉴定：根据微生物对各种生理条件（温度、pH、氧气、渗透压）、生化指标（唯一碳氮源、抗生素、酶、盐碱性）代谢反应进行分析，并将结果转化成软件可以识别的数据，进行聚类分析，与已知的参比菌株数据库进行比较，最终对未知菌进行鉴定的一种技术。
生物梅里埃API试剂类型•API 20E革兰氏阴性杆菌鉴定•API 20NE非发酵菌鉴定•API STAPH葡萄球菌及微球菌常用5种•API STREP链球菌鉴定•API CORYNE棒状杆菌•API 20C AUX酵母菌•API 20A厌氧菌•API LISTERIA李斯特菌•API CAMPY弯曲菌属•API CH芽胞杆菌/乳酸杆菌三、药敏试验（辅助鉴定及指导临床用药）最常用的纸片扩散法即K-B法。
原理：该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。
同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，二抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。
结果分为敏感S、耐药R及中介I。
利用某些菌对某些药物天然耐药进而辅助鉴定结果正确与否,如嗜麦芽窄食单胞菌对亚胺培南(碳青霉烯类)天然耐药。
细菌培养及鉴定
细菌培养及鉴定
微生物的培养和鉴定是现代医学的重要科学技术和服务,它在临床诊断,分子生物学和生物科技方面有重要作用，是进行细菌分离、鉴定和品种筛选的重要手段。
同时，也是医学上许多治疗、预防和诊断技术的重要环节。
细菌培养和鉴定的步骤包括：第一步，样品的获取和分离，并将获得的纯细菌样本放置到壳斗中；第二步，培养，即复活细菌培养，将细菌培养在特殊的培养基中，未来的培养表现就可以被观察到；第三步，鉴定，判断细菌种类和数量，准备将细菌培养表现比较到已知菌株，从而确定细菌种类。
细菌培养需要恒温恒湿和特定PH值的环境，培养基的选择也是有许多变化的，它可以是常规的抗性別、非抗药和复合培养基，也可以是非常规的培养基，以满足特定细菌种类的需要。
此外，还需要实现细菌表面及毒力活性鉴定，以确定细菌类型及抗性基因，例如抗血清，优势抗生素，和发酵代谢物，以及放射性和分子生物学技术来推测大量细菌信息。
最后，通过上述步骤，细菌培养及鉴定的结果得到正确。
细菌的分离、培养和鉴定
鱼的解剖结构：
2）无菌操作
无菌操作是指在环境中一切有生命活动的微生物的 营养细胞及其芽孢或孢子都不存在的状态。微生物 研究过程中，既要避免各种外界的微生物进入操作 对象又要杜绝操作对象污染周围环境的操作技术。 无菌操作是对微生物学工作者最基本的要求，必须 经过严格训练才能形成无菌操作素养。不论何种情 况下，头脑中都应该有这个概念。 无菌操作贯穿于整个分离过程，例如：病料的采集、 器材的准备、具体的操作。所用器械及物品均应事 先灭菌备用，金属器具包装后高压灭菌或煮沸 30min，玻璃器皿可高压灭菌也可干热灭菌，胶皮 塞、培养基等则要高压灭菌。
3）细菌分离
► 工具：接种环（接种前后都要严格过火灭菌） ► 接种环境：无菌操作台 ► 接种方法：平板划线
* 以左手持平板，中指、无名指和小指托着平板底,拇指和食指打开上盖，使 盖与底成30º 角，以便划线。 * 右手握接种环，先灭菌铂丝部分，待丝烧红后，再于火焰上灭菌金属棒部 分。把接种环上的病料涂在培养基一侧，一般作5-8次划线。将环上的多余细 菌材料烧掉后，从第1次划线引出第2次划线；再从第2次划线引出第3次划线， 如此反复3-4次划线后，即可把整个平板表面划满，注意每一次划线只能与上 一次划线重叠，这样就可在最后的1-2次划线上出现多量的单个菌落，以便进 行纯培养。
生化鉴定管
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养 基质的分解能力也不一样，因而代谢产物 或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用
ATB Expression：自动化微生物鉴 定和药敏分析系统
分子生物学技术
分子生物学鉴定目前比较流行的主要是核 酸检测技术, 包括基因测序、指纹图谱技术、 基因探针技术、聚合酶链反应( PCR)、GC 含量测定等。 PCR和核酸杂交单独或结合在仪器已经形成 比较经典的核酸检测技术, 目前这两者已经 得到了较大范围的推广和应用
微生物的培养与鉴定
微生物的培养与鉴定微生物是指肉眼无法直接观察到的微小生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
微生物的培养与鉴定是微生物学研究中非常重要的一环，通过培养和鉴定微生物，可以了解其特性、功能和应用价值。
本文将从培养方法、鉴定技术和应用领域等方面进行阐述。
一、微生物的培养方法微生物的培养是指将微生物样本在适宜的环境下进行繁殖和生长的过程。
常用的微生物培养基包括富含营养物质的琼脂培养基、含有特定选择性成分的选择性培养基和含有生长因子的寡营养培养基等。
培养基的选择应根据所研究的微生物种类和目的来确定。
微生物的培养方法主要包括液体培养和固体培养两种。
液体培养适用于大量培养和菌体收集，而固体培养则适用于单菌落分离和纯培养。
在培养过程中，还需要控制温度、pH值、气体环境等因素，以提供适宜的生长条件。
二、微生物的鉴定技术微生物的鉴定是指通过对微生物的形态、生理特性、生化特性和分子生物学特性等进行分析，确定其属种和亚种。
常用的微生物鉴定技术包括形态观察、染色技术、生理生化试验和分子生物学方法等。
形态观察是最直观的鉴定方法之一，通过显微镜观察微生物的形态特征，如细菌的形状、大小、胞壁结构和运动方式等，可以初步确定微生物的分类。
染色技术则可以进一步加强形态观察的效果，如革兰氏染色可以区分细菌的革兰氏阳性和革兰氏阴性。
生理生化试验是通过检测微生物的代谢产物和生理功能来确定其分类和鉴定，如对微生物的碳源利用能力、氮源利用能力、酶活性等进行测定，可以得到更为准确的鉴定结果。
分子生物学方法是近年来发展起来的一种微生物鉴定技术，通过对微生物的DNA或RNA进行测序和比对，可以快速准确地鉴定微生物的种类和亚种。
这种方法具有高度的特异性和敏感性，对于无法通过传统方法鉴定的微生物尤为重要。
三、微生物的应用领域微生物的培养与鉴定在许多领域都有重要的应用价值。
在医学领域，微生物的培养与鉴定可以帮助诊断感染性疾病，确定病原微生物的种类和药物敏感性，指导临床治疗。
妇科一般细菌培养及鉴定
妇科一般细菌培养及鉴定
妇科细菌培养及鉴定是一种常见的检查方法，通常用于确定女性生殖系统感染的种类和病因，为临床治疗提供依据。
妇科细菌培养主要包括取样、培养和鉴定三个步骤。
取样：
在进行妇科细菌培养之前，需要先进行取样。
常用的取样方法有宫颈、阴道分泌物、宫内膜和输卵管液等。
采集前需要做好外阴清洁，并选择合适的取样器具。
培养：
将取样物置于适当的培养基上进行培养。
根据不同的细菌种类，选用不同的培养基，比如常用的是营养琼脂、血琼脂、大肠杆菌培养基等。
在培养过程中，需要控制好培养的温度、湿度和氧气含量等条件。
鉴定：
将培养出的细菌进行鉴定。
鉴定方法包括形态学和生化测试等。
形态学鉴定可以通过显微镜观察细菌的形态、大小、颜色和聚集状态等特征。
生化测试可以通过对不同的酶和代谢物进行测试来区分不同的细菌种类。
妇科细菌培养及鉴定的作用非常重要。
通过这种检查方法，可以有效地确定女性生殖系统的感染病因，指导临床治疗。
同时，还可以为开展妇科疾病的流行病学调查、疫情监测和防控提供重要的参考依据。
细菌的培养和检测方法
细菌的培养和检测方法细菌是一类微小的单细胞生物，广泛存在于自然界的各个角落中。
它们既可以对人类和其他生物造成危害，也可以为我们提供很多重要的服务。
因此，对细菌的培养和检测方法的研究非常重要。
本文将介绍一些常见的细菌培养和检测方法，希望能为读者提供一些有用的信息。
一、细菌的培养方法1. 培养基的选择细菌的培养需要提供适合其生长和繁殖的环境，而培养基就是提供这种环境的物质。
常见的培养基有富含营养物质的琼脂糖培养基、含有特定成分的选择性培养基等。
根据不同的细菌需求，选择合适的培养基对于细菌的培养至关重要。
2. 培养条件的控制细菌的培养需要一定的温度、湿度和氧气等条件。
一般来说，常见的细菌培养温度为37摄氏度，湿度保持在适宜的水分含量，氧气浓度也需要根据细菌的需求进行调控。
此外，光照条件对一些细菌的生长也有一定的影响。
3. 细菌的分离和纯化在进行细菌培养之前，需要对细菌进行分离和纯化。
分离是将不同种类的细菌从混合物中分开，纯化则是将同一种细菌的纯种分离出来。
这一步骤可以通过在琼脂糖培养基上进行菌落选择，或者使用特定的选择性培养基来实现。
二、细菌的检测方法1. 基于显微镜的观察显微镜是一种常用的细菌检测工具。
通过显微镜观察细菌的形态、大小和结构等特征，可以初步确定细菌的种类。
同时，显微镜还可以观察细菌在培养基上的生长情况，以及细菌与其他细胞或物质的相互作用。
2. 生物化学检测生物化学检测是通过检测细菌产生的代谢产物来鉴定细菌的种类。
例如，通过观察细菌在特定培养基上的气体产生情况，可以初步判断细菌是否产生某种代谢产物。
此外，一些特定的酶活性检测也可以用来鉴定细菌。
3. 分子生物学检测分子生物学技术在细菌检测中发挥着越来越重要的作用。
例如，通过PCR技术可以检测细菌DNA中的特定序列，从而确定细菌的种类。
另外，基于DNA测序的方法也可以用来鉴定细菌，并进一步研究其基因组结构和功能。
4. 免疫学检测免疫学检测是通过检测细菌与免疫系统之间的相互作用来鉴定细菌的方法。
细菌鉴定的方法和步骤
细菌鉴定的方法和步骤
细菌鉴定是通过一系列方法和步骤来确定细菌菌种的过程。
以下是常用的细菌鉴定方法和步骤：
1. 收集样品：从目标环境或感染部位收集细菌样品，如血液、尿液、唾液、食物等，以便后续实验。
2. 培养：将细菌样品接种到适当的培养基上，提供足够的营养物质和环境来促进细菌的生长。
3. 纯化：将单个细菌菌落分离出来，并通过连续的传代培养使其得到纯化，以避免不同细菌种类的混杂。
4. 形态观察：观察细菌在固体培养基上的形态特征，如菌落的形状、颜色、大小等，以及在显微镜下的细胞形态，如形状、大小、结构等。
5. 染色：将细菌样品进行染色，如革兰氏染色、抗酸染色等，以便观察不同细菌的染色特征。
6. 生理生化试验：进行一系列生理生化试验，如代谢产物的产生、酶活性、氧需求等，以确定细菌的代谢特征。
7. 耐受性检测：测试细菌对温度、pH值、氧气和抗生素等环境因素的耐受性，以进一步确认鉴定结果。
8. 分子生物学分析：利用分子生物学技术，如PCR、序列分析等，通过对细菌的基因组或特定基因进行分析，来确定细菌的物种。
9. 鉴定结果：根据以上步骤的结果和参考文献，将细菌归类到已知的菌属或菌种中，最终得出细菌的鉴定结果。
需要注意的是，细菌鉴定是一个复杂的过程，通常需要准备鉴别试剂和设备，以及具备相关实验操作的技术和经验。
细菌的分离培样及鉴定
革兰染色法： * 原理：机理仍不清楚，一般认为与细菌细胞壁的结构和化 学成分有关。 • 革兰阴性菌细胞壁含有较多的脂类，当以95%酒精脱色时 ，脂类被溶去，使细胞壁孔隙变大，尽管酒精处理能使肽 聚糖孔隙变小，但因为肽聚糖含量较小，细胞壁收缩有限 ，故能让结晶紫与碘形成的紫色染料复合物被酒精洗脱出 细胞壁之外，而被后来红色的复染剂染成红色。 • 革兰阳性菌细胞壁所含脂类少，肽聚糖多，酒精脱色时， 细胞壁孔隙缩小到不易让结晶紫与碘形成的紫色染料复合 物洗出细胞壁外，而被染成紫色。
注意事项
A 制作抹片固定时温度不能过高，温度过高会使细胞壁中蛋 白变性，染色中染液的渗出会有影响； B 革兰染色法中，酒精浓度不能过高，也不能过低。此外， 酒精脱色时间不宜过长，不要超过30s； C 瑞氏染色法中，由于染料中有沉淀，所以要避免沉淀附着 在抹片上影响镜检观察； D 染色水洗，水尽量用蒸馏水，水的流速不要过大，防止将 细菌洗脱。
*穿刺培养：半固体移植采用穿刺法接种，方法基本与纯培 养接种相同，差别在用接种针挑取单菌落，垂直刺入培养 基内。
注意事项：
A 接种环（针）火焰烧灼灭菌后要稍冷却后再挑取菌落； B 打开平皿，接种过程保持无菌状态，尽量靠近酒精灯燃心 ； C 接种后，培养小管或平板要置于适宜条件，利于细菌生长 ； D 穿刺培养，接种针要直刺直出，不要反复戳刺； E 芽孢菌耐杀灭，培养芽孢菌的实验室最好单独使用，否则 要彻底灭菌。
三、细菌生化试验
生理生化鉴定管的选择原则并非越多越好,应选择一组能鉴定 到种或属的关键性鉴定管 猪霍乱沙门菌和猪伤寒沙门菌:关键项目包括:阿拉伯糖、海 藻糖、卫矛醇、肌醇、硫化氢 鸡沙门菌、雏沙门菌、肠炎沙门菌：关键项目包括：卫矛醇 、麦芽糖、鸟氨酸脱羧、赖氨酸脱羧、动力
细菌培养与鉴定
细菌培养与鉴定细菌是一类微生物，它们存在于自然界的各个环境中，包括土壤、水体、空气等。
细菌的培养与鉴定是微生物学研究中的重要内容之一，也是许多生物学实验的基础。
通过细菌的培养与鉴定，我们可以了解细菌的形态、生长特性、代谢特点以及对它们产生影响的环境因素，为科研与实际应用提供重要的参考。
一、细菌培养技术细菌的培养是指将细菌微量悬浮液转移到富含适宜营养物的培养基中，通过提供适宜的温度、pH值和氧气氛等条件，使细菌能够进行正常的生长和繁殖。
细菌培养技术包括无菌操作、选用适宜培养基、菌液接种、培养条件控制等环节。
1. 无菌操作无菌操作是培养细菌的前提，也是避免培养中出现杂菌的关键步骤。
无菌操作要求工作台、培养器具和培养基等都必须经过高压灭菌或酒精消毒处理。
实施无菌操作时，操作者需穿戴手套、口罩和实验服，严格遵守无菌区域的规范。
2. 选用适宜培养基培养基是细菌生长所必需的有机和无机物质的混合物，可分为固体培养基和液体培养基。
常用的固体培养基包括琼脂培养基和石蜡培养基，而液体培养基包括大量种类，如肉汤培养基、蛋白胨培养基等。
在选择培养基时，要根据所培养的细菌种类和所需研究目的来确定。
3. 菌液接种菌液接种是将细菌悬浮液接种到培养基上的过程。
在接种前，需要用火焰对接种环或接种棒进行灭菌处理，然后取适量的细菌悬浮液接种到培养基表面或混合物中。
接种完毕后，要立即将培养皿上的接种环或接种棒再次进行灭菌处理。
4. 培养条件控制细菌的生长需要适宜的环境条件，如温度、pH值和氧气氛等。
不同细菌对这些条件的要求各有不同，因此在培养细菌时，要根据所培养细菌的特性进行合理的控制。
一般来说，细菌的培养温度在25-37摄氏度之间，pH值为7左右，氧气氛可以是无需氧、微需氧或需氧等。
二、细菌鉴定技术细菌鉴定是通过对细菌的形态特征、生理生化特性和分子遗传特征进行观察和检验，以确定细菌属种的过程。
细菌鉴定的技术手段包括形态学鉴定、生理生化鉴定和分子生物学鉴定等。
一般细菌培养及鉴定 yi
一般细菌培养及鉴定 yi一般细菌培养及鉴定引言：细菌是一类微小的生物体，广泛存在于自然界中的各种环境中，包括水体、土壤、空气等。
它们的数量庞大，种类繁多，对人类和环境有着重要的影响。
了解、培养和鉴定细菌，在微生物学研究和应用中具有重要的意义。
一、细菌培养细菌培养是指将细菌分离于自然环境或患者样品中，通过合适的培养基和环境条件，培养细菌使其生长繁殖。
常用的培养基有固体培养基和液体培养基两种。
一、固体培养基固体培养基是以琼脂作为凝胶剂制成，通常为糖和蛋白质组成的基础培养基，如普通营养琼脂培养基、肉膏蛋白琼脂培养基等。
它们透明或半透明，适合于分离单个细菌菌落并鉴定。
制备固体培养基时，需要先将琼脂与所需的营养物加入适量的水中，经加热至溶解，然后热纯化，最后倒入培养皿中，等待凝胶化。
在接种菌落时，可用支架将细菌接种环插入琼脂中，在清洁环境条件下进行。
二、液体培养基液体培养基是指无琼脂的培养基，通常为糖和蛋白质组成的溶液，如普通液体培养基、牛肉膏培养基等。
液体培养基适合于大量培养，为细菌提供了较好的营养环境。
制备液体培养基时，需要将所需的营养物加入适量的水中，按照一定的比例加入各种营养物质，然后进行煮沸和杀菌，最后配制成适合细菌生长的pH值。
二、细菌鉴定细菌鉴定是指通过一系列检测和实验手段，确定从样品中分离出的细菌的种类和特性。
细菌鉴定主要包括形态学特征、生理生化特性、免疫学性质和分子特征等几个方面。
一、形态学特征形态学特征是指通过显微镜观察细菌的形态结构、形态特点以及细菌间的排列方式进行鉴定。
包括细菌的形状、大小、胞内结构等。
常用的显微镜观察方法有普通显微镜观察和电子显微镜观察。
二、生理生化特性生理生化特性是指通过生物化学实验，了解细菌的生长特性、代谢能力和对不同物质的反应性。
常用的生理生化鉴定实验有氧气需氧性实验、产酸性实验、芳香化合物降解实验等。
三、免疫学性质免疫学性质是指通过免疫学实验，检测细菌对特定抗原的反应和免疫学特性进行鉴定。
《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定
《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定病原菌的鉴定是将一个未知菌株按其生物学特征，经过与所有已知菌种进行比较后到一个已知菌种的分析过程。
根据感染特性选择合适的培养基，首先要明确被鉴定菌种已获得纯培养。
然后确定革兰氏染色性、形态，再按科、属、种逐步鉴定下来。
应该利用已具备的条件，尽可能地缩小鉴定范围，这是在作实验设计时必须想到的，要用最小数量的试验方法作出鉴定。
基于鉴定菌的特点，选用合适的鉴定体系，力求方法学简单，反应判断明确，价廉的方法。
血清学鉴定由于操作简便、快速、特异性高，给细菌学鉴定提供了快速诊断方法。
对培养困难的病原菌，可考虑应用基因水平的鉴定技术。
最后还要提示，对检测人员应把知识和经验运用到每一鉴定步骤。
【球菌】球菌主要引起化脓性炎症，故又称化脓性球菌。
包括葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌及淋病奈瑟菌等，根据革兰氏染色可将其分为两类，均无鞭毛和芽孢，少数可形成荚膜。
本实验要求了解化脓性球菌的形态特征及染色性、链球菌溶血素“O”试验；葡萄球菌、链球菌及奈瑟球菌的检验程序和主要的鉴定方法；肺炎链球菌Op—tochin敏感试验。
一、葡萄球菌属葡萄球菌属(Staphylococcus)的细菌常堆聚成葡萄串状。
能引起皮肤粘膜、多种组织器官的化脓性炎症，是最常见的化脓性球菌。
有的菌株还可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征等，又是医院内交叉感染的重要传染源。
近年来，耐药性菌株逐年增多。
临床上首先要与其他革兰氏阳性球菌鉴别，然后再作属内种的鉴定及致病性的检测。
[材料]1．菌种：葡萄球菌培养物。
2．培养基：血琼脂平板，普通琼脂平板，甘露醇发酵管，氧化、发酵(OF)管，甲苯胺蓝核酸琼脂。
3．试剂：兔血浆、3％H2O2、致敏胶乳／红细胞制剂。
4．其他：革兰氏染液、玻片、一次性卡片。
[方法]1．形态学观察：取普通琼脂平板上葡萄球菌培养物少许，涂片，革兰氏染色，镜检。
可见到葡萄状排列的革兰氏阳性球菌。
检验科常见微生物培养与鉴定技巧
检验科常见微生物培养与鉴定技巧微生物培养与鉴定技巧是检验科中常见的一项重要工作。
通过培养和鉴定微生物，可以准确判断病菌的种类和数量，帮助医生制定合理的治疗方案。
下面，我们将介绍一些常见的微生物培养与鉴定技巧，以及相应的实验步骤和注意事项。
一、微生物培养技巧微生物培养是指将微生物样本放入培养基中，为其提供适宜的环境条件，使其快速繁殖。
常见的微生物培养技术包括液体培养和固体培养。
1. 液体培养技巧液体培养是将微生物样本接种到含有适宜营养物质的液体培养基中，利用摇床进行培养。
具体步骤如下：（1）准备好所需的培养基，并进行无菌处理。
（2）取适量的微生物样本，接种到培养基中，并进行混匀。
（3）将培养瓶放入摇床中，设置适宜的温度和摇动速度。
（4）观察培养瓶内的生长情况，并及时记录。
2. 固体培养技巧固体培养是将微生物样本接种到含有琼脂的培养基上，使其在表面上生长形成菌落。
具体步骤如下：（1）准备好所需的琼脂培养基，并进行无菌处理。
（2）将琼脂培养基熔化，并保持在适宜的温度。
（3）取适量的微生物样本，用无菌的匀菌棒均匀涂抹在琼脂培养基表面上。
（4）将培养皿密封，并在适宜温度下进行培养。
（5）观察菌落的形成和生长情况，并及时记录。
二、微生物鉴定技巧微生物鉴定是根据微生物的形态、生理特性以及生物化学反应等来确认其种类的过程。
常用的微生物鉴定技巧包括镜检和生化试验。
1. 镜检技巧镜检是通过显微镜观察微生物的形态特征，如形状、大小、结构等。
具体步骤如下：（1）制备好镜片和薄片。
（2）将微生物样本涂抹在镜片上，并用无菌棉签均匀涂开。
（3）将样本干燥或固定，并进行染色。
（4）使用适宜的镜头放大观察样本，并记录观察结果。
2. 生化试验技巧生化试验是根据微生物对特定化学物质的代谢反应，来鉴别其种类。
常用的生化试验包括酶反应试验和代谢产物分析等。
具体步骤如下：（1）准备好所需的试剂和培养基，并进行无菌处理。
（2）接种微生物样本到含有特定底物的培养基中。
细菌鉴定的经典方法
细菌鉴定的经典方法
1. 剖析方法：根据细菌的生物学特征进行分析，包括细胞形状、大小、染色性质、胞内结构等。
2. 培养方法：将细菌培养在适宜的培养基上，观察其生长速度、形态特征和其他生理特性。
常用的培养方法包括草瓶培养、琼脂平板培养等。
3. 染色方法：常用的染色方法有革兰氏染色、抗酸染色和尼氏染色等，用于观察细菌的细胞壁性质、胞内结构等。
4. 酶学方法：通过观察细菌在特定酶底物上的代谢反应，如氧化酶、脱氢酶等，来判断细菌的酶活性和代谢能力。
5. 免疫学方法：利用抗体与细菌抗原结合的特异性反应来对细菌进行鉴定，包括免疫荧光、酶联免疫吸附试验等。
6. 生化方法：通过检测细菌的生物化学特性，如糖利用、氧耗量、产气等，来判断其代谢特征和生理特性。
7. 分子生物学方法：利用PCR、基因测序等技术，直接检测
细菌的基因组或特定基因片段，从而确定细菌的种属和亲缘关系。
这些经典方法可以单独或结合使用，以确定细菌的鉴定结果。
现代技术的快速发展，例如基因测序和质谱分析等，也为细菌鉴定提供了更准确和快速的手段。
细菌的培养与鉴定方法
无菌操作技术要点
01
实验前需对实验室进行 彻底清洁和消毒，确保 无菌环境。
02
实验人员需穿戴无菌防 护服、手套、口罩等， 避免自身微生物对实验 的干扰。
03
无菌操作应在生物安全 柜内进行，确保实验操 作过程中不受外界微生 物的污染。
误差。在数据分析和报告撰写时，应充分考虑误差范围并给出合理的解释。 • 经验分享：在进行细菌培养与鉴定实验时，保持无菌操作是关键。此外，合理设计实验方案、选择合适的实验
方法和试剂也是提高实验成功率和准确性的重要因素。同时，及时记录实验过程和结果，以便后续分析和报告 撰写。
06
前沿技术展望与挑战
新型检测技术发展趋势
实验室应建立废弃物处理记录制度， 对废弃物的来源、种类、数量及处理 方式进行详细记录，以便于监管和追 溯。
05
结果分析与报告撰写 技巧
数据整理和分析方法
1 2 3
数据整理
将实验数据进行分类、归纳和整理，以便后续分 析。包括菌株生长情况、菌落形态、生化反应结 果等。
统计分析
运用统计学方法对实验数据进行处理，如计算平 均值、标准差、变异系数等，以评估数据的可靠 性和差异性。
支原体培养与鉴定
常用支原体培养基，37℃培养24-72小时，观察菌落形态和溶血现象 ，通过支原体特异性抗体进行鉴定。
04
实验操作规范及注意 事项
实验室安全规范
实验室人员必须严格遵守实验室安全规章制度，掌握基本的安全知识和操作技能。
实验室应配备必要的安全防护设施，如生物安全柜、防护服、护目镜等，确保实验 人员的安全。
核酸杂交技术
利用特异性核酸探针与待检细菌核酸进行杂交，通过检测杂交信 号鉴定细菌种类。
检验科学中的微生物培养与鉴定方法分享
检验科学中的微生物培养与鉴定方法分享微生物培养与鉴定是检验科学中的重要环节，它在医学、食品工业、环境科学等领域都扮演着重要的角色。
本文主要分享微生物培养与鉴定的方法，并对其中的关键步骤和技巧进行详细介绍，以期能够帮助读者更好地理解和应用这些技术。
一、微生物培养方法微生物培养是指将微生物细胞在适当的培养基上进行培养和繁殖的过程。
在进行微生物培养之前，首先需要准备好培养基和培养条件。
常用的培养基有液体培养基和固体培养基两种。
1. 液体培养基液体培养基适用于需大量培养的微生物。
首先，选择适当的液体培养基，如大肠杆菌培养基、葡萄糖盐基培养基等。
然后，在无菌条件下，将培养基倒入培养瓶中，装入适量的微生物接种物。
接种后，使用无菌栓塞或铝箔密封培养瓶，以避免外界的污染。
最后，将培养瓶放置在适当的温度和环境条件下进行培养。
2. 固体培养基固体培养基适用于某些微生物需要在固体表面上进行生长的情况，如霉菌、酵母菌等。
制备固体培养基时，首先在无菌条件下将培养基倒入培养皿中，然后让其凝固。
接种之前，需要将微生物接种环或接种棒进行灭菌消毒，然后用接种环或接种棒沾取微生物接种物，在培养皿上划上一条菌线。
完成接种后，将培养皿倒置放置，以避免水滴对微生物生长的干扰。
最后，将培养皿放置在适当的温度和环境条件下进行培养。
二、微生物鉴定方法微生物鉴定是指利用各种手段对微生物进行种类和数量的鉴定。
鉴定微生物的目的是为了了解其属性、发病机制以及应对措施。
1. 形态学鉴定形态学鉴定是通过观察微生物的形态特征，如细胞形态、菌落形态等来判断其种类。
常用的形态学鉴定方法有显微镜观察、染色技术等。
2. 生理生化鉴定生理生化鉴定是通过检测微生物对不同生理生化特性的反应，如营养需求、产生的酶、代谢产物等来进行鉴定。
常用的生理生化鉴定方法有碳水化合物利用试验、氧需气化试验等。
3. 分子生物学鉴定分子生物学鉴定是基于微生物的遗传物质进行鉴定。
常用的分子生物学鉴定方法包括PCR技术、基因测序等。
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革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
固定的目的：
? 使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固；
? 可改变菌体对染料的通透性； ? 加热固定可杀死细菌，比较安全。
革兰染色程序
初染
媒染
脱色
复染
冲洗
冲洗
冲洗
结晶紫 1' 碘液 1' 95%乙醇 30”复红1'
冲洗 滤纸干燥 油镜观察
龄、门诊号 /住院号、病床号、标本类型、容器、 标识、检验目的等。
? 所有拒收或退回标本均应在登记本上登 记，登记内容包括：病人姓名、病区、床号
送检医师、送检项目、拒收 (退回 )原因、拒收 时间、经手人等
痰标本涂片染色低倍镜下分类
分级 白细胞（个） 上皮细胞（个）
A
>25
<10
B
>25
<25
C
<10
显微镜下的杆菌
革兰染色注意事项
? 标本涂片不宜太厚 ? 固定不宜过热 ? 脱色不宜过度 ? 选用培养18--24小时菌龄的细菌为宜
抗酸染色
? 原理：分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中
主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染 色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性 乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红 的颜色,达到染色目的。
>25
A、B两种情况的痰适合做培养，C不合格，应重新留标 本
常用的培养基种类和用途
? 哥伦比亚血平板 —营养要求高的细菌 ? 巧克力平板 —含V、X因子，主要培养嗜血杆菌、
脑膜炎球菌和淋球菌用 ? 中国蓝/麦康凯平板 —G-杆菌用 ? SS平板—沙门氏菌和志贺氏菌用 ? M-H 平板—细菌药敏用 ? TCBS 平板—弧菌科细菌用
连续划线法
细菌培养法
? 一般培养（需氧培养）： ★培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h ? 二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养
箱 ? 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧
罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等
细菌在固体培养基中的生长现象
? 菌落 ★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形
细菌培养及鉴定思路
标本采集原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.标本容器须无菌，但不得有消毒剂 5.采样后立即送检 6.送检标本应注明来源和检验目的
咳痰方法
– 病人先漱口，清洁口腔，去除表面的菌群 – 病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液 – 无痰可用 3％～5％NaCl 5ml 雾吸约5min 导痰 – 以清晨第二口痰为佳 – 标本采集后放置时间不超过 2小时
革兰染色
甲
紫紫色色（（GG＋＋））
菌
初染 媒染 脱色 复染
革结兰晶氏紫染碘色液步骤乙示醇 意图稀释复红
乙
红色（G-）
菌
革兰染色步骤示意图
【结果】
? 细菌被染成紫色者，称为革兰阳性菌； ? 而细菌染成红色者，称为革兰阴性菌；
阳性菌——紫色（G+b
阴性菌——红色（G-b)
G+ 球菌
G-杆菌
Figure 2 G-ram stain of GramE.- colciells
金属柄约14.5cm
绝缘柄 约7.5cm
安装环(针)的螺口(约8mm)
操作原则：无菌操作（烧灼灭菌）
Aseptic area 10-20cm
外焰 内焰 焰芯
细菌接种的基本程序
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本 沾取标本 接种 灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境
细菌接种法
细菌在半固体培养基中的生长现象
? 有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向 外扩散生长，穿刺线边缘模糊。
? 无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线 边缘清晰。
细菌在半固体培养基中的生长现象
无动力 现象
有动力 现象
斜面接种法
接种斜面后菌落生长示意图（菌苔）
革兰染色
? 原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形
成单一肉眼可见的细菌集团。 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透
明度、湿润度、黏度、溶血性 ★菌落类型：光滑型（ S）、粗糙型（ R）、黏液型
（M） ? 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。
菌落
菌落与菌苔
菌落的三个类型：
1.光滑型菌落（ Smooth type Colony ） ：又称 S 型
2.粗糙型菌落（ Rough type Colony ）：又称R型 3.粘液型菌落（ Mucoid type Colony ）又称M型
S型菌落
01.07.2020
21
Байду номын сангаас
R型菌落
M型菌落
细菌在液体培养基中的生长现象
? 混浊 ? 沉淀：多见于链状排列的细菌 ? 菌膜：多见于厌氧菌
细菌在液体培养基中的生 长现象：
? 沙包氏平板 —真菌培养用 ? 真菌显色平板 —真菌培养用 ? 罗氏培养基 —分枝杆菌用
接种工具
? 接种针和接种环 ：由三部分组成，即环 （针）、金属柄和绝缘 柄
? 接种针：用于穿刺接种细菌 ? 接种环：用于固体、液体培养基的细菌
接种
器具：接种环（上）和接种针（下）
2—5cm
柄约22cm
5—8cm
成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌 由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密， 故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小， 再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，，因 此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫 色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量 高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂 为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡 结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈 无色，再经复红等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌 呈红色。
? 平板划线接种法： ★目的：使混合的细菌呈单个分散生长，
形成单个菌落，以便获得纯菌。 ★方法： ★分区划线法：适用于含菌量较多的标本 ★连续划线法：适用于含菌量较少的标本 ? 液体培养基接种法 ? 穿刺接种法 :用于观察细菌动力 ? 斜面接种法 ? 倾注培养法:用于细菌计数
分区划线法(3区)
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
清洁中段尿液
? 尽量取早晨 第一次尿液 ? 嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水
女性病人 ?收集标本前用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水
冲洗尿道口 ?排出几毫升后， 不停止尿流，采集 中段尿 ? 男性病人 ?翻转包皮，清洗尿道口 ?排出几毫升后，不停止尿流 ,采集中段尿
采集标本后立即送检！
标本接收原则
? 严格实行核对制度 ：包括姓名、性别、年