(25)--重组人白介素-18基因工程菌的构建预习测试

重组人白介素-18基因工程菌的构建实验预习试题库

一、填空题

1、目的基因产物和质粒载体酶切是使用的同尾酶是（ ）和（ ），反应温度是（ ）℃，实验中的反应时间是（ ）hr。

2、两个双酶切产生的DNA片段连接时使用的酶为（ ），连接反应的温度是（ ）。

3、感受态细胞的制备时细菌OD600大约为（ ），处于（ ）生长期。

4、感受态细胞的制备时，热击的温度是（ ），原因是（ ）；感受态细胞转化时，感受外源DNA的温度是（ ）℃，目的是（ ）。

5、PCR扩增目的基因片段共分3步，分别是（ ）、（ ）和（ ）。

6、质粒DNA的三种存在方式是（ ）、（ ）和（ ），它们在琼脂糖凝胶电泳时的迁移率由大到小的顺序是（ ）。

7、用M13 Primer M4和M13 Primer RV为引物进行重组质粒的阳性鉴定时，含重组质粒的阳性克隆PCR产物大小为（ ）bp，含pUC18自连产物的假阳性克隆PCR产物大小为（）bp，若PCR反应后电泳没有任何条带说明（ ）或（ ）。

8、DNA分子结构外侧（ ）带（ ）电荷，琼脂糖凝胶电泳时DNA样品时应把置于电泳槽的（ ）极；电泳时为获得最好分辨率，电压最大不超过（ ）V/cm。

9、在连接产物转化时，Amp的作用是（ ），X-gal的作用是（ ），IPTG的作用是（）。感受态细胞的转化效率用（ ）评价。

10、用M13 Primer M4和M13 Primer RV为引物进行重组质粒的阳性鉴定时，若PCR产物大小为100 bp，则说明该质粒是（ ），若PCR产物大小为600 bp，则说明该质粒是（），若PCR反应后电泳没有任何条带说明（ ）或（ ）。

11、从原理上讲，蓝白斑筛选时的白斑是含（ ），兰斑是含（ ）。

12、两个双酶切产生的DNA片段连接时使用的酶为（ ），连接反应的温度是（ ）。

13、蓝白斑筛选时的X-gal的作用是（ ），IPTG的作用是（ ）

14、碱裂解法制备质粒DNA共分3步，分别是（ ）、（ ）和（ ）。

15、琼脂糖凝胶电泳时应把DNA样品置于电泳槽的（ ）极，电泳时为获得最好分辨率，电压最大不超过（ ）V/cm，电泳缓冲液中的（ ）能够指示电泳前沿。

16、两个双酶切产生的DNA片段是（ ）末端，连接时使用的酶为（ ），连接反应的

温度是（ ）。

17、PCR是（ ）的缩写，一般分为（ ）三步。

18、PCR反应中用于扩增DNA的酶为（ ），引物在反应中所起的作用是（ ），用于扩增DNA的底物是（ ）。

参考答案：

1、BamHI； BglII； 37； 3

2、T4DNA连接酶； 16 ℃或4 ℃

3、0.4； 对数

4、42； 促进细胞吸收DNA复合物； 37； 细胞复原并分裂增殖

5、变性； 退火； 延伸

6、超螺旋； 线性； 开链环状； 超螺旋>线性>开链环状

7、600； 100； PCR反应失败； 琼脂糖电泳失败

8、磷酸骨架； 负； 阴； 5

9、选择性筛选标记； β-半乳糖苷酶的反应底物； β-半乳糖苷酶表达的诱导剂； 转化子总数／感受态细胞总数

10、载体自连产物； 带有目的基因的重组质粒； PCR反应没成功； 琼脂糖电泳有问题

11、目的基因的重组子转化产物； 质粒自连产物的转化产物

12、T4 DNA连接酶； 16 ℃或4 ℃

13、β-半乳糖苷酶的反应底物； β-半乳糖苷酶表达的诱导剂

14、变性； 退火； 延伸

15、阴； 5； 溴酚蓝

16、粘性； T4 DNA连接酶； 16 ℃或4 ℃

17、polymerase chain reaction； 变性，退火，延伸

18、Taq DNA聚合酶； 形成引物-模板复合物并沿着引物延伸 ； 模板

二、简答题

1、简述核酸电泳的过程以及注意事项。（5分）

2、在感受态细胞的转化实验中要加入何种对照来解释实验结果？（7分）

3、简述碱裂解法小量提取质粒DNA的主要步骤。（8分）

4、简述PCR反应的过程。（7分）

5、简述琼脂糖凝胶制备时的主要过程和需要注意问题。（8分）

6、简述DNA琼脂糖凝胶回收的主要操作过程和注意事项。（7分）

7、简述DNA连接酶在本实验中的用途以及常用的反应条件。（4分）

8、我们学过的检测核酸分子量和存在形态的方法是什么？简述其主要过程和需要注意问题。（8分）

9、在平板中加入的Amp、X－gal和IPTG的作用是什么？（5分）

10、感受态细胞的转化效率是如何评价的？（5分）

11、简述PCR反应的过程。（7分）

12、在感受态细胞的转化实验中要加入何种对照来解释实验结果？（5分）

13、简述PCR反应体系的组成、加入顺序和主要注意问题。（8分）

14、简述碱裂解法小量提取质粒DNA的主要步骤。（6分）

15、如何检测核酸分子量和存在形态，简述其主要流程和注意事项。（8分）

16、简述CaCl2法制备感受态细胞的过程及注意的问题？（6分）

17、简述蓝白斑筛选的基本原理？（10分）

18、PCR的中文全称是什么？简述PCR反应体系的组成、加入顺序和主要注意问题。（8分）

19、常用的感受态细胞的制备方法有哪些？介绍我们在实验中使用的感受态细胞制备过程及注意的问题。（8分）

参考答案：

1、主要过程：制备琼脂糖凝胶，电泳加样，进行琼脂糖凝胶电泳，溴酚蓝前沿至胶长约2/3处停止电泳，照相保存。注意问题：琼脂糖溶解时要使用相应的缓冲液，加热煮沸的火候；插梳子时要避免气泡的产生；加样时样品在阴极；电压不大于5 V/cm。

2、阳性对照pUC18评价感受态细胞的转化效率；阴性对照无菌水评价氨苄抗生素是否失活；空菌对照无菌水（无氨苄抗性）评价大肠杆菌正常。

3、细菌的收获和裂解；质粒DNA的提取；质粒DNA的纯化。

4、模板DNA变性；引物退火形成引物-模板复合物；引物沿着模板由5’-3’端扩增。

5、主要过程：制胶平板调水平；根据琼脂糖凝胶浓度称取琼脂糖，并用TAE缓冲液溶解，加热煮沸，冷却至50-60℃加入核酸染料，倒胶，插梳子；胶凝固；注意问题：琼脂糖溶解时要使用相应的缓冲液；加热煮沸的火候；插梳子时要避免气泡的产生。

6、主要操作过程：切胶，溶胶，DNA吸附、纯化和洗脱；注意事项：切胶要尽量小，溶