片段凝胶回收试剂盒(离心柱型).
实验十一DNA凝胶回收
二、实验目的
1. 从含有目的基因片段凝胶块上回收 DNA。
2.回收目的基因片段为下步连接反应 作准备
三、实验仪器、材料和试剂
仪器及耗材：天平、台式离心机、微量移液器及 吸头、EP管。
材
料： 含有目的基因酶切产物的凝胶块
试
剂： AxyPrep DNA 凝胶回收试剂盒 ；无
水ห้องสมุดไป่ตู้醇；
四、实验步骤
2.低熔点琼脂糖
传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，电 泳后切割目的条带，在TE溶液中65度保温融化，用传 统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。这个方法现在用的人已 经不多了。
以前经费紧张，低熔点琼脂糖贵，比较经济方法就是 常规琼脂糖电泳后，在目的条带前方挖槽，灌入低熔 点琼脂糖，凝胶后再电泳一小会儿，等条带进入低熔 点琼脂糖区域再切出来，这样就非常节约了。
1.在紫外灯下切下含有目的 DNA 的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽 凝胶表面液体并切碎。计算凝胶重量（提前记录 1.5 ml 离 心管重量） ，该重量作为一个凝胶体积（如 100 mg=100 μl 体积） 。
2. 加入 3倍凝胶体积的 Buffer DE-A，混合均匀后于 75°C加 热（低熔点琼脂糖凝胶于 40°C加热） ，间断混合（每 23 min） ，直至凝胶块完全熔化（约 6-8 min） 。 * Buffer DE-A为红色溶液。在熔化凝胶的过程中，可以帮 助观察凝胶是否完全熔化。
3. 加 0.5倍Buffer DE-A 体积的 Buffer DE-B，混合均匀。当分 离的 DNA 片段小于 400bp 时，需再加入 1个凝胶体积的 异丙醇。
加Buffer DE-B后混合物颜色变为黄色，充分混匀以保证形成均一的黄色 溶液。
一、实验原理
胶回收QC操作标准
琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（离心柱型）QC标准操作流程1. 实验试剂和耗材1.2 实验试剂1.3 耗材2. 实验操作流程胶回收试剂盒的检测须进行两个实验验证，第一个实验为GelRed染色法，第二个实验为EB染色法。
2.1 GelRed染色法2.1.1 1.5%琼脂糖凝胶的制备（1）准确称取1.5g琼脂糖置于250ml三角锥形瓶中，添加125ml 1×TAE溶液。
（2）轻微混匀后将其置于微波炉中，高火加热6min至溶液沸腾，取出锥形瓶放置室温2min。
（3）添加1×TAE溶液至110ml，再次于微波炉中高火加热3min至溶液沸腾。
（4）室温放置10min后将溶液倒入插有梳子的胶槽内，待胶块凝固后使用。
2.1.2 胶回收实验（1）取6个2ml离心管，依次编号为1-6号，使用分析天平准确称取空离心管的重量。
（2）用干净锋利的手术刀片切下不含核酸染料的1.5%琼脂糖凝胶胶块，放入已称重的2ml离心管中，称取胶块与离心管总重，计算凝胶块的重量。
要求胶块重量不超过200mg 为宜。
（3）添加溶胶液Binding Solution B，要求1、2号管中每100mg琼脂糖凝胶加入200ul Binding Solution B，3、4号管中每100mg琼脂糖凝胶加入300ul Binding Solution B，5、6号管中每100mg琼脂糖凝胶加入400ul Binding Solution B.（4）每管中添加50ul DL2502，混匀后置于60℃水浴5min，期间间断混合，直至凝胶块完全融化。
【注意事项】观察各管内溶胶液溶解胶块的快慢程度。
（5）将上述混合液转移至套放于2ml收集管的GenClean柱中，室温放置2min，10000rpm 室温离心1min，取出GenClean 柱，并倒掉收集管中废液。
（6）将GenClean 柱重新放回收集管中，加入500ul Wash Solution，于12000rpm，室温离心1min，倒掉收集管中废液。
爱思进胶回收说明书
爱思进胶回收说明书
爱思进胶回收试剂盒的使用说明书如下：
1. 制备琼脂糖凝胶电泳：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据Marker 判断PCR产物的大小是否符合要求。
2. 切胶：切下包含目的片段的凝胶，尽量切去上下两端的凝胶，以减少非特异性产物的影响。
3. 胶的融化：将切下的凝胶放入一个离心管中，加入适量的胶融化液，使凝胶完全溶解。
4. 洗涤：将凝胶溶液加入一个离心柱中，离心柱的管底会有一个膜，可以吸附凝胶中的DNA片段。
然后加入洗涤液，将离心柱离心，去除残留的胶融化液。
5. 洗脱：加入适量的洗脱液，离心柱离心，将DNA从膜上洗脱下来。
6. 检测：取洗脱液进行电泳检测，观察电泳结果是否包含目的片段。
以上是爱思进胶回收试剂盒的使用说明书的大致步骤，由于不同版本的产品可能存在差异，因此建议在使用前仔细阅读说明书或咨询专业人士。
AxyPrep DNA 凝胶回收试剂盒 说明书
AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒本试剂盒适合从各种琼脂糖凝胶中提取多至8 μg DNA（70bp-10Kb），回收率为60-85%。
琼脂糖凝胶在温和的缓冲液(DE-A溶液)中溶解，其中的保护剂能防止线状DNA在高温下降解，然后在DE-B溶液的作用下使DNA选择性结合到膜上。
纯化的DNA纯度高，并保持片断完整性和高生物活性，可直接用于连接、体外转录、PCR扩增、测序、微注射等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性说明书，耗材：DNA制备管、2 ml离心管、1.5 ml离心管。
Buffer DE-A：凝胶熔化剂，含DNA保护剂，防止DNA在高温下降解。
室温密闭贮存。
Buffer DE-B：结合液（促使大于70 bp的DNA片段选择性结合到DNA制备膜上）。
室温密闭贮存。
若出现沉淀，应于70°C温育溶解并冷却至室温后再使用。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液，使用前，根据瓶上数量加入乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。
可用100%无水乙醇或95%乙醇。
Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，室温密闭贮存。
二、注意事项1. 在步骤1中，将凝胶切成细小的碎块可大大缩短凝胶熔化时间（线型DNA长时间暴露在高温条件下易于水解），从而提高回收率。
勿将含DNA的凝胶长时间地暴露在紫外灯下，减少紫外线对DNA 造成的损伤。
2. 在步骤2中凝胶必须完全熔化，否则将严重影响DNA回收率。
3. 将Eluent或水加热至65°C，有利于提高洗脱效率。
4. DNA分子呈酸性，建议在2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5洗脱液中保存。
三、实验准备1. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。
2. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。
3. 准备75°C水浴。
四、操作步骤1. 在紫外灯下切下含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面液体并切碎。
Thermo-Scientific-GeneJET-Gel-Extraction-Kit(k069)-product-information
保存和稳定性：试剂盒要保存在室温下（15-25度）。
建议将纯化柱保存在4度，可储存多于一年。
任何在保存过程中产生的沉淀都可以在37度恒温中溶解，然后在使用之前冷却至室温。
说明书The GeneJET™Gel Extraction Kit，设计的目的是从在TAE 或者TBE缓冲液里电泳的标准或者低熔点的琼脂糖凝胶中，高效快速回收纯化DNA片段。
这个试剂盒以便利的旋转层析柱的基础上，应用了基于二氧化硅薄膜的专利技术。
试剂盒可以用于纯化20-25bp大小的DNA片段。
在100bp–10kb DNA 片段大小范围内，回收率提高到95%。
每个GeneJET 纯化柱可纯化高达25μg DNA，可用高达1克的琼脂糖凝胶。
整个过程只用15分钟，分离的DNA片段将用于普遍的下游应用，包括连接反应，限制性设计，PCR，测序和分子标记。
原理：目的DNA片段经琼脂糖凝胶电泳后分割，将其置于微型离心管中，用Binding Buffer 溶解后上柱，Binding Buffer中的促溶剂可以溶解琼脂糖，变性蛋白质，促进DNA结合到层析柱的硅膜上。
另一点方便的是，Binding Buffer中含有颜色指示剂，可以检测DNA结合最好时的溶液PH，杂质经过简单的清洗步骤就可以去除。
纯化的DNA用Elution Buffer 从层析柱中洗脱出来，回收的DNA可用于下游应用。
重要的注意事项:2、加入乙醇后，在盒子的复选框中标记，以注明完成的步骤。
3、每次用之前，检验Binding Buffer是否生成沉淀。
假如有沉淀，将溶液置于37度使其溶解，然后冷却至25度。
4、用Binding Buffer时要带手套，因为里面含有刺激性物质。
5、当提取的DNA直接用于测序时，不能使用重复利用的电泳缓冲液。
额外的材料和需要的设备：96-100%乙醇异丙醇3 M醋酸钠，PH5.2（可能不用）微型离心机1.5或2毫升微型离心管加热器或水浴锅开始前多注意事项：1、开始操作前阅读注意事项。
Gel Extraction Spin Protocol(中文)
琼脂糖凝胶回收操作步骤（离心柱型）●快速- - 用<10分钟从琼脂糖凝胶中回收DNA●可靠- - 优化的缓冲液保证了DNA纯度●优质- - 纯化DNA适于任何下游应用●安全- - 无需有机溶剂2．储存条件及稳定性◆自购买之日起，所有BNT胶回收试剂盒组分在22-25C下都能保质至少24个月。
请确保未使用时结合缓冲液瓶盖紧盖。
★如缓冲液中出现沉淀，于37℃温育即可溶解。
3．结合能力■每个HiBind DNA离心柱能结合多至~ 20 μg DNA■纯化次数基于琼脂糖凝胶浓度及DNA片段大小。
一般来说，<100bp的DNA片段或从>2%的琼脂糖凝胶中回收DNA需要附加的结合缓冲液以达到试剂盒预期的使用次数。
（结合缓冲液能单独购买，货号为Binding-200）。
4．开始回收前强烈建议在开始本操作之前熟悉整个操作步骤。
如果所有步骤都严格遵守，BNT胶回收试剂盒是简单、快捷、可靠的回收方法。
5.BNT胶回收操作步骤（离心柱型）使用者自备材料：▼50 - 55C水浴▼至少耐转速10，000g的微量离心管▼无核酸酶的1.5ml离心管▼无菌去离子水（或TE缓冲液）▼无水乙醇（96%-100%乙醇）▼保护性眼罩▼5M醋酸钠pH5.2⑴进行琼脂糖胶/ EB电泳分离不同DNA片段。
可使用所有类型或级别的琼脂糖。
强烈推荐使用新制TAE或TBE缓冲液作为电泳缓冲液。
不要重复使用电泳缓冲液，其pH会升高，降低回收得率。
⑵各条带分离到恰当位置时，用宽的干净锋利手术刀片仔细切下含有目的片段的琼脂糖胶，尽量切除DNA片段周围多余的琼脂糖胶以使凝胶体积最小。
⑶估计凝胶块体积，将其置于1.5ml微量离心管中称重。
假设凝胶密度为1g/ml，凝胶体积如下推算：质量为0.3g的凝胶块体积为0.3ml。
加入与凝胶等体积的结合缓冲液。
将混合物置于50-65℃7min，或直到凝胶完全溶解。
在溶解过程中每2-3min摇振以促进混合。
胶回收
普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（离心柱型）试剂盒组成平衡液（BL）溶胶液（PN）漂洗液（PW）洗脱缓冲液（EB）储存条件15-25°干燥条件保存12个月2-8°可保存更长时间。
低温贮存时，使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间，必要时可在37°水浴中预热10分钟，以平衡溶液温度。
产品简介试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统，从TAE 或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段，同时除去蛋白质，其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质，回收100bp-10KbDNA片段，回收率高达80%，每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为10微克。
产品特点快速多样可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA高效80%注意事项：1.平衡液BL的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，消除高温、潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。
使用前先检查平衡液BL是否出现浑浊，如果有混浊现象，可在37°水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
2.电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果3.如下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE电泳缓冲液4.切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤5.如果回收率较低，可在胶充分溶解后检测PH值，如果pH大于7.5，可向含有DNA的胶溶液中加10-30微升3M醋酸钠（ph5.2）将ph值调到5-7之间。
6.回收<100bp及>10kb的DNA片段时，应加大溶胶液的体积，延长吸附和洗脱的时间。
7.回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少，洗脱体积越少，回收率越低。
操作步骤：第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明现在15ml漂洗液PW中加入60ml 无水乙醇。
所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心1.柱平衡步骤：向吸附柱CA2中加入500微升平衡液BL，12000 1min2.将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量。
DNA纯化回收试剂盒
DNA纯化回收试剂盒一、试剂盒内容溶液PC 25ml 100ml平衡液BL 30ml 120ml漂洗液PW 15ml 50ml洗脱缓冲液EB 15ml 30ml吸附柱CB2 50个200个收集管（2ml）50个200个说明书1份1份二、操作步骤（一）、从琼脂糖凝胶中回收DNA片段1、柱平衡步骤：向吸附柱CB2中（吸附柱放入收集管）加入500ul 平衡液BL，12000rpm（~13400×g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
（请使用当天处理过的柱子）2、将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入赶紧的离心管中，称取重量。
3、向胶块中加入等倍体积溶液PC（如果凝胶重为0.1g，其体积可视为100ul，则加入100ulPC溶液），50℃水浴放置10分钟左右，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。
（若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块）4、将上一步所得溶液加入到一个吸附柱CB2中（吸附柱放入收集管中），12000rpm（~13400×g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放回收集管中。
5、向吸附柱CB2中加入600ul漂洗液PW，12000rpm（~13400×g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放回收集管中。
6、重复步骤5.7、将吸附柱放入收集管中，12000rpm（~13400×g）离心2分钟，尽量出去漂洗液。
将吸附柱置于室温放置数分钟，彻底晾干。
8、将吸附柱CB2放入一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟。
12000rpm（~13400×g）离心2分钟，收集DNA溶液。
（二）、从PCR反应液或酶切反应液中回收DNA1、柱平衡步骤：向吸附柱CB2中（吸附柱放入收集管）加入500ul 平衡液BL，12000rpm（~13400×g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
02 琼脂糖凝胶回收DNA片段及检测
琼脂糖凝胶回收DNA片段及检测 琼脂糖凝胶回收DNA片段及检测
一、DNA片段的回收纯化 DNA片段的回收纯化
利用DNA凝胶纯化回收试剂盒（离心柱型） 利用DNA凝胶纯化回收试剂盒（离心柱型） 进行DNA纯化回收。 进行DNA纯化回收。 此试剂盒可用于琼脂糖凝胶DNA回收， 此试剂盒可用于琼脂糖凝胶DNA回收， PCR反应产物纯化回收，酶切产物DNA片 PCR反应产物纯化回收，酶切产物DNA片 段纯化回收，探针标记后纯化回收，DNA 段纯化回收，探针标记后纯化回收，DNA 样品浓缩等。
10. 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管 中，在吸附膜的中间部位加40µ 中，在吸附膜的中间部位加40µl洗脱缓冲液 EB（洗脱缓冲液事先在65-70℃ EB（洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中加热 效果更好），室温放置2分钟，12,000rpm离 效果更好），室温放置2分钟，12,000rpm离 心1分钟。
பைடு நூலகம்
灌入水平胶框，插入梳子，自然冷却。 凝胶在室温下放置30min，使其自然凝结， 凝胶在室温下放置30min，使其自然凝结， 小心拔出梳子。 将凝胶放入电泳槽中，向电泳槽中加入电 泳缓冲液，刚好没过凝胶约1mm。 泳缓冲液，刚好没过凝胶约1mm。
2.加样 2.加样
取回收的DNA样品20 取回收的DNA样品20 µl， 加样缓冲液3 加样缓冲液3 µl（6X），混匀，点入琼脂糖 6X），混匀，点入琼脂糖 的样品孔内。 加样DNA 加样DNA marker DL2000 6 µl 。 开始电泳（120V） 开始电泳（120V），当溴酚蓝迁移到距凝 胶下缘2cm时，停止电泳。 胶下缘2cm时，停止电泳。 利用紫外投射仪观察DNA条带。 利用紫外投射仪观察DNA条带。
胶回收试剂盒
产品简介产品简介：：本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA 的硅基质材料和独特的缓冲液系统，从TAE 或TBE 琼脂糖凝胶上回收DNA 片段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。
可回收100 bp–40 kb DNA 片段，回收率可达80%以上（<100 bp 或>10kb 的DNA 片段回收率为30－50%）。
使用本试剂盒回收的DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR 、测序、文库筛选、连接和转化等实验。
产品特点产品特点：：快速快速：：整个操作过程快速方便，几十分钟即可完成回收工作。
多样多样：：可以回收单链、双链DNA 片段以及环状质粒DNA 。
高效高效：：独特的离心柱和精心配制的缓冲液，保证最大量回收到高纯度的目的DNA 。
注意事项注意事项：：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1. 平衡液BL 的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。
使用前请先检查平衡液BL 是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
2. 电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
3. 如下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE 电泳缓冲液。
4. 切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA 造成损伤。
5. 如果回收率较低，可在胶充分溶解后检测pH 值，如pH 值大于7.5，可向含有DNA 的胶溶液中加10–30 µl 3 M 醋酸钠（pH5.2）将pH 值调到5–7之间。
6. 回收<100 bp 及>10 kb 的DNA 片段时，应加大溶胶液的体积，延长吸附和洗脱的时间。
7. 回收率与初始DNA 量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。
操作步骤操作步骤：：第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在15 ml 漂洗液PW 中加入60 ml 无水乙醇! 所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
现代分子生物学实验重点
现代分⼦⽣物学实验重点现代分⼦⽣物学实验考试复习重点⼀．判断题1.Maker(分⼦量标准)在DNA电泳中起荧光染料（对照）的作⽤。
（错）2.⽤作DNA⽚段克隆的载体除质粒外，还有噬菌体和⼈⼯染⾊体等。
（对）3.PCR扩增的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性。
（对）4.碱变性发提取质粒是根据碱性条件下染⾊体DNA不变性（变性）⽽质粒DNA变性（不变性）的原理。
（错）5.基因⼯程中常⽤的限制性内切酶可对DNA进⾏特异性的识别和切割。
（对）6.⽤于感受态细胞制备的⼤肠杆菌菌株⼀般为限制-修饰系统缺陷的变异株。
操作中需要⽆菌、低温且动作要轻柔。
（对）7.⼤肠杆菌转化过程中，细菌在LB液体培养基中进⾏恢复培养时，（不）应添加相应的抗⽣素。
（错）8、转化中的蓝⽩颜⾊筛选，在LB固体培养基的平⽫中添加IPTG 的作⽤是作为β-半乳糖苷酶作⽤的底物（诱导）。
（错）X-Gal为⽣⾊底物。
9.CTAB(⼗六烷基三⼄基溴化铵)是⼀种去污剂，可破坏细胞膜，当低离⼦强度的溶液中CTAB与蛋⽩质和多聚糖形成复合物，⽽不（可以）能沉淀核酸，因此将核酸与蛋⽩质等细胞内容物分开。
（错）⾼离⼦强度的溶液不能沉淀核酸。
10.⼀般可以⽤异丙醇和⼄醇沉淀DNA和RNA。
（对）⼆．问答1.PCR实验原理：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）简称PCR技术，是⼀种体外扩增特异DNA⽚段的技术。
PCR技术实际上是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。
PCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性。
反应分为三步：1.变性：在⾼温条件下，DNA双链解离形成单链DNA；2.退⽕：当温度突然降低时引物与其互补的模板在局部形成杂交链；3.延伸：在DNA聚合酶、dNTPs和Mg2+存在的条件下，聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应。
以上三步为⼀个循环，每⼀循环的产物可以作为下⼀个循环的模板，⼏⼗个循环之后，介于两个引物之间的特异性DNA⽚段得到了⼤量复制，数量可达到~106~7个拷贝。
凝胶DNA回收试剂盒使用说明
DNA凝胶回收试剂盒50TCat#：GV-GX-50本试剂盒可从各种浓度琼脂糖凝胶中回收DNA片段，不含盐、蛋白质、RNA等杂质。
500bp以上片段，回收率80%以上，200bp～500bp回收率70%以上，100bp～200bp回收率60%。
可回收单链、双链DNA 片段以及环状质粒DNA。
本试剂盒采用一种独特的平衡液处理吸附膜，该试剂能够激活硅基质膜，改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，专一吸附DNA的作用，同时还可消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。
1试剂盒组成、储存、稳定性成分规格注意事项Buffer GA60mlBuffer BL12mlWash buffer13ml使用前加入52ml无水乙醇Elution4ml离心柱50个单个最大吸附量20μg1.5ml离心管50个说明书1份Buffer GA：溶胶液。
室温密闭贮存。
若出现沉淀，应于65℃温浴溶解并冷却至室温后再使用。
Buffer BL：平衡液，平衡液的加入能够激活硅基质膜，改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，专一吸附DNA的作用，同时还可消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。
Wash buffer：去盐液。
使用前，第一次使用前根据瓶上指定的体积加入无水乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。
Elution：10mM Tris-HCl，pH8.0。
室温密闭贮存。
二、注意事项1：将洗脱液或双蒸水加热至65℃，有利于提高洗脱效率2：DNA呈酸性，建议在10mM Tris-HCl，pH8.0洗脱液中保存3：用平衡液处理过的柱子最好当天使用，放置时间过长会影响效果4：在步骤1中，将凝胶切成细小的碎块可大大缩短溶胶时间（线型DNA长时间暴露在高温条件下易水解），从而提高回收率。
勿将含有DNA的凝胶长时间暴露在紫外灯下，减少紫外线对DNA造成的损伤。
三、实验前试剂准备Wash buffer第一次使用前加入52ml无水乙醇。
实验四-DNA片段的回收
3. 胶块一定要充分融化，否则将会严重影响DNA的回收率。
4. 把洗脱液加热，使用时有利于提高洗脱液效率
鲁东大学 生命科学学院
School of Life Sciences
五、思考题
1.回收胶的目的是什么？
2.胶回收前所切取的胶块大小对胶回收效果有何影响？
在离心吸附柱内使用一种特殊的硅基质滤膜，这种滤膜在低PH值、高 浓度盐（盐酸胍，NaI, NaClO4等）存在的条件下，可以选择性吸附DNA片 段，而蛋白质和其它杂质不会被吸附。再通过一系列漂洗、离心等步骤 将残留的引物、核苷酸、蛋白质等杂质去除。最后用低盐、高PH值的洗 脱缓冲液或水从滤膜上将纯净的DNA洗脱下来。回收DNA大小100bp-50kb
鲁东大学 生命科学学院
School of Life Sciences
实验四
DNA片段的回收
鲁东大学 生命科学学院
Sch验目的
掌握吸附膜回收琼脂糖凝胶中DNA片段的方法
二、实验原理
首先利用低熔点琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段，然后紫外光下切割
含目的DNA条带的胶块，再利用胶回收试剂盒回收纯化DNA片段。
在紫外灯下切分含DNA的琼脂糖块，尽可能除去多余的琼脂糖．称重后放入 1.5ml离心管中。
2. 加入3-6倍体积溶胶液（600μ l NaI 溶液）， 55℃温浴10 min，期间不时振摇。
3. 将溶胶后溶液加入树脂柱中混匀。 4. 10000 rpm 离心1 min，弃去收集管中液体。 5. 加入500 μ l 漂洗缓冲液，振荡混匀后10000 rpm 离心1 min，弃去收集管中液体。此过程重复 一次。 6.将吸附柱放回空收集管中，12000rpm空转2-3min， 去除残液。
DNA片段的胶回收
DNA片段的胶回收
PCR或酶切产物经1%琼脂糖凝胶电泳，用胶回收试剂盒回收目的片段。
操作步骤：
（1）向吸附柱CB2加入500μL平衡液BL，12000rmp离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中；
（2）将目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下放入干净的离心管中，称取重量；
（3）向胶块中加入等倍体积溶液PC（如果凝胶重0.1g，其体积可视为100μL，则能加入100μLPC溶液），50℃水浴放置10min左右，确保胶块充分溶解；
（4）将上一步所得溶液加入吸附柱CB2中，12000rmp离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放入收集管中；
（5）向吸附柱CB2中加入600μL漂洗液PW，12000rmp离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放入收集管中；
（6）向吸附柱CB2中加入600μl漂洗液PW，12000rmp离心1min，倒掉收集管中的废液；
（7）将吸附柱CB2放入收集管中，12000rmp离心2min，尽量除去漂洗液，吸附柱置于室温放置数分钟，彻底晾干；
（8）将吸附柱CB2放入干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液EB，室温放置2min，12000rmp离心2min，收集DNA溶液。
实验五 琼脂糖凝胶DNA片段回收
入500ul 平衡液BL，12,000 rpm，1min，倒掉收集 管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中，备用。 2）称取空离心管的质量，记为M1。 3）在紫外灯下，将目标DNA片段从琼脂糖凝胶中 切下（尽量切去多余部分），放入1.5ml离心管中， 再次称重，记为M2； 4）计算凝胶质量M=M2-M1，如凝胶重0.1g，其体 积可视为100ul，不足0.1g的按0.1光度法测定DNA的浓度
与纯度？
从琼脂糖凝胶中回收DNA片段
实验原理
在生物技术试验中，PCR反应获得的目的片段、
酶切后所得特定的DNA序列、分子杂交中所制 备的探针等，经过琼脂糖凝胶电泳后，目的片 段与其他的DNA分开，这就需要有一套方法将 目的DNA从凝胶中分离出来，通过处理后得到 春花的目的DNA，以用于以后分子杂交，重组 子构建，序列分析等。
DNA溶液浓度与纯度的测定
取待测DNA溶液20 ul，加入1980ul ddH2O
（相当于稀释100倍），混匀，在紫外分光 光度计上分别测定A260和A280 计算A260/A280. DNA浓度（ug/ml）=A260×50×稀释倍数 A260/A280显示核酸纯度，应为1.7~1.9。
1min，倒掉收集管中的废液。此步重复一遍。
8）将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm离心2 min，倒
掉收集管中的废液，将吸附柱室温放置，彻底晾干。 （漂洗液中乙醇的残留会影响后续酶切、PCR等实验）
实验步骤
9）将晾干的吸附柱放到一个干净的离心管中，向
吸附柱中间位置悬空滴加 ddH2O 50 ul，室温放置 2 min，12,000 rpm离心2 min； 10）将离心管中的液体重新加回吸附柱中，向吸附 柱中间位置悬空滴加，室温放置2 min，12,000 rpm离心2 min，保留离心管。
离心柱型dna提取试剂盒的基本流程
离心柱型dna提取试剂盒的基本流程
1. 样品的准备
在进行DNA提取之前，首先需要准备样品。
样品可以是血液、唾液、组织、细胞等，但
是需要根据样品的性质选择合适的提取方法。
一般来说，采用离心柱型DNA提取方法的
样品需要先经过离心、洗涤等处理，去除其中的细胞碎片、蛋白质和其他杂质。
2. DNA的溶解
将样品中的细胞溶解在含有离子表面活性剂的缓冲液中，使DNA从细胞核中溶解出来。
通常情况下，使用蛋白酶K进行细胞溶解，加速DNA的释放。
3. DNA的结合
将DNA溶解液加入离心柱中，离心柱上的硅胶膜能够特异性地结合DNA，将其分离出来。
此步骤是离心柱提取法的关键步骤，也是DNA提取的核心步骤。
4. 杂质的去除
经过上一步骤，DNA和其他细胞组分已经成功地分离出来，接下来需要对离心柱中的杂
质进行去除。
通常会使用洗涤缓冲液进行洗涤，从而将杂质彻底去除。
5. DNA的洗脱
经过洗涤之后，将离心柱插入含有洗脱缓冲液的离心管中，通过离心将DNA洗脱出离心柱。
此时，得到的洗脱液中含有纯度较高的DNA，可以用于后续的分子生物学实验。
6. DNA的保存
将洗脱后的DNA溶液保存在-20℃或更低的温度下，以防止DNA的降解。
此外，也可以
将DNA进行分装，并标记好相关信息以便后续实验使用。
总结来说，离心柱型DNA提取试剂盒的基本流程包括样品的准备、DNA的溶解、DNA的
结合、杂质的去除、DNA的洗脱和DNA的保存。
通过这些步骤，可以快速、高效地从样
品中提取出高质量的DNA，为后续的实验研究提供充分的保障。
凝胶DNA回收试剂盒使用说明
凝胶DNA回收试剂盒使用说明一、试剂盒组成1.碱性ELUTION缓冲液：用于回收DNA片段。
2.DNA绑定胶柱：用于吸附DNA片段。
3.洗涤缓冲液：用于去除琼脂糖凝胶残渣和其他杂质。
4.电子式试剂盒设备：用于快速洗脱DNA片段。
二、凝胶DNA回收试剂盒使用步骤1.准备工作：a.将碱性ELUTION缓冲液加热至65℃，并保存在试剂盒中。
b.手套和面具是使用过程中必需的，以确保实验环境的干净。
c.严格遵守实验室的安全操作规程。
2.凝胶切割：a. 切割需回收的DNA片段：将琼脂糖凝胶切割为片段大小约为50-5000 bp的目标DNA。
b.将切割好的琼脂糖凝胶片段放入微量离心管中，注意不要弄混不同大小的DNA片段。
c.记录每个DNA片段的位置和大小。
3.DNA回收：a.将切割好的琼脂糖凝胶片段放入DNA绑定胶柱中。
b.将绑定胶柱放入收集管中，通过离心将DNA片段吸附到胶柱上。
c.倒掉废液，并使用洗涤缓冲液洗脱胶柱上的残驻琼脂糖凝胶和其他杂质。
重复此步骤1-2次以确保彻底洗脱。
4.DNA洗脱：a.将洗柱放回空的收集管中。
b.加入预热的碱性ELUTION缓冲液（65℃），封闭试管盖，并放入电子式试剂盒设备中。
c.按照设备操作说明进行启动，并设置相应的洗脱温度和时间。
d.在洗脱完成后，将洗脱液转移到新的离心管中。
可以使用适当的方法（如乙醇沉淀或其他纯化方法）进一步纯化DNA。
5.质量检测：a.使用电泳进行质量检测，以确认回收的DNA片段大小和纯度。
b.如果需要，可以定量将DNA溶液保存在冰箱中以备后续实验使用。
三、注意事项1.使用前确保熟悉试剂盒的组成和使用步骤。
2.使用过程中务必佩戴手套和面具，确保操作环境的洁净。
3.严格按照试剂盒的说明进行操作，并遵循实验室的安全操作规程。
4.需要注意的是，琼脂糖凝胶切割和回收过程极易受到外源DNA污染，因此要确保实验环境的洁净，并尽量避免不必要的接触。
5.回收的DNA片段应尽快进行下一步的实验处理，以避免DNA降解和污染。
DNA片段的纯化与回收
DNA片段的纯化与回收实验目的1.掌握DNA片段纯化与回收的原理。
2.熟悉从不同介质中回收DNA片段的方法。
实验原理单一条带的PCR产物、酶切过的DNA片段可采用DNA纯化回收试剂盒进行回收纯化。
对于含有杂带的PCR产物或从质粒上酶切下的目的片段，可先将产物进行琼脂糖凝胶电泳，使目的条带分离，在紫外灯下切下目的片段，再使用DNA纯化回收试剂盒进行DNA片段的回收。
DNA纯化回收试剂盒的原理是在特定溶液环境下，使DNA分子吸附在固相介质上（如硅胶膜），然后用清洗液洗去杂质，最后使DNA分子在纯水或洗脱缓冲液中。
实验器材高速离心机、移液器、移液器吸头、1.5ml离心管、离心管架、水浴锅、凝胶成像系统、电子天平等。
实验试剂（1）无水乙醇。
（2）通用型DNA纯化回收试剂盒（离心柱型），试剂盒的产品组成如下：1）溶液PC。
2）平衡液BL。
3）漂洗液PW。
4）洗脱缓冲液EB。
5）吸附柱CB2。
6）2ml收集管。
实验操作1.从琼脂糖凝胶中回收DNA片段（1）柱平衡步骤：向吸附柱CB2中（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
（2）将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量。
（3）向胶块中加入等倍体积溶液PC，50℃水浴放置10min，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。
（4）将上一步所得溶液加入一个吸附柱CB2中（吸附柱放入收集管中），12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放入收集管中。
（5）向吸附柱CB2中加入500μl漂洗液PW，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放入收集管中。
（6）重复操作步骤（5）。
（7）将吸附柱CB2放入收集管中，12000rpm离心2min，尽量除去漂洗液。
将吸附柱置于室温放置数分钟，彻底晾干。
凝胶回收目的片段
一，凝胶回收试剂盒分别回收各目的片段:1.试剂，耗材及设备：(1)QIAquick® Gel Extraction Kit(#28704)# 回收70bp-10Kb# 使用前向Buffer PE加无水乙醇(96–100%)（按瓶指示）# 每柱最大可处理400 mg agarose胶溶解液# 把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。
# 所有离心步骤均在室温17,900 x g (13,000 rpm)column.Buffer PEBuffer QGBuffer EBQIAquick spin column2mL收集管(2)异丙醇(100%)(3) 3 M醋酸钠（pH 5.0）(4)金属浴/水浴（50°C）(5)涡漩振荡仪(6) 1.5/5 mL EP管（干净/高压）(7)分光光度计/凝胶成像仪(8)高速离心机(9)其它2. 步骤：(1)尽量小地切胶（不要多余的不含目的条带的胶），根据目的胶条的重量（100 mg=100 μl)，向装有胶条的1.5 mL EP管中加入3 倍体积的Buffer QG，50°C金属浴/水浴10 min，期间可每2-3 min取出涡漩振荡。
（直至胶条完全溶解）(2)完全溶解后，检查溶解混合液颜色是否为黄色（或与Buffer QG同色）。
如为橙或紫色，加入10 μl 3 M醋酸钠（pH 5.0）混合, 则颜色变黄。
(3)加入一胶体积的异丙醇(100%)，涡漩振荡混合。
(4)取QIAquick spin column，侧顶标号，放入配套的2mL收集管。
(5)将完全溶解后液样加入QIAquick spin column中（如体积大，>800 μl,，可分次上样），离心1 min。
弃掉收集管中液体，将空柱放回对应收集管。
(6)加0.75 ml Buffer PE于空柱（静置2–5 min），离心1 min，弃掉收集管中液体，将空柱放回对应收集管。
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1． 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜 ,柱与柱之间吸附量差异极小,可 重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2． 使用了优质溶胶液,不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反 应。
3． 独特的溶胶液/结合液配方,将溶胶和结合两种功能统一,因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖 DNA 回收,也可以 PCR 产物清洁纯化,酶切产物纯化回收等多种功能。
2． 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在 37℃水 浴加热几分钟，即可恢复澄清。使用前应该恢复到室温。
3． 储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－ 25℃）进行。
4． 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
24 ml
48 ml
120×2 ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
1ml
5 ml
10 ml
50 ml
5个
50 个
100 个
500 个
收集管（2ml） 室温
说明书
ห้องสมุดไป่ตู้室温
5个 1份
50 个 1份
100 个 1份
500 个 1份
本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
注意事项
1． 第一次使用前在漂洗液 W 中按 4：7 的比例加入无水乙醇，如包装为 24ml 漂洗液 W 中，应加入 42ml 无 水乙醇。加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入 !
如果凝胶浓度大于 2％，应加入 6 倍体积溶胶液。凝胶块最大不能超过 400mg,如果超过 400mg，请 用多个离心柱进行回收。 4．50-60℃水浴放置 10 分钟（或直至胶完全溶解）。每 2-3 分钟涡旋振荡一次或颠倒离心管 2 次帮助 加速溶解。
5．将上一步所得溶液冷却后加入吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中）, 12,000 rpm 离心 1 分钟， 倒掉收集管中的废液。如果总体积超过 750μl，可分两次将溶液加入同一个吸附柱 AC 中。
（一）、以下为琼脂糖凝胶 DNA 回收操作步骤。 1．在长波紫外灯下，用干净刀片将所需回收的 DNA 条带切下，尽量切除不含 DNA 的凝胶，得到凝胶
体积越小越好。 2．将切下含有 DNA 条带凝胶放入 1.5ml 离心管，称重。
先称一个空 1.5ml 离心管重量，然后放入凝胶块后再称一次，两次重量相减，得到凝胶的重量。 3. 加三倍体积溶胶/结合液 BD。 如果凝胶重为 0.1g，其体积可视为 100μl，则加入 300μl 溶胶液。
4． 快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
四、注意事项（实验前必须首先阅读这部分 ！）
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.溶胶液/结合液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染 皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
2. 回收的 DNA 量和起始 DNA 的量，洗脱体积，DNA 片断大小有关。一般回收的量为 5-25μg，大小为 100bp-10kb 的 DNA 片段，回收率可达 85％－95％。更大或更小回收效率较低。特别是大于 50kb 或 小于 10bp 效率更低。
3. 切胶回收时，紫外灯观察对 DNA 片段有损坏作用，应该尽可能使用能量低的长波紫外线，并且尽可 能的缩短紫外线下处理的时间。
9. 取出吸附柱 AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 50μl 洗脱缓冲液 EB（洗脱缓 冲液事先在 65-70℃水浴中加热效果更好）,室温放置 2 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟。如果需 要较多量 DNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心 1 分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要 DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积 不应少于 30μl，体积过小降低 DNA 洗脱效率，减少产量。 （二）、以下为 PCR 产物或者酶切片段等 DNA 纯化操作步骤。 1． 每 100μl PCR 扩增后体系或者酶切后体系加入 300μl 溶胶/结合液 DB，充分混匀。（如果初始体 系小于 100μl，请事先用双蒸水调整至 100μl）。 2．将上一步所得溶液加入吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中）,室温放置 1 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液。
6．加入 550μl 漂洗液 W，12,000rpm 离心 1 分钟后，弃去废液； （请先检查是否已加入无水乙醇!）
7．重复步骤 6 一次（小于 500bp 或浓度低的样品，不重复此步骤。一般样品不需要此步骤纯度完 全可以）；
8．将吸附柱 AC 放回空收集管中，12,000 rpm 空离心 2 分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙 醇抑制下游反应。
二、原理简介
三博远志自用琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒，是经过大量实验得出的最佳制品，该试剂盒回收差异小、 得率高、操作简便、质量稳定，三博远志 PCR 测序成功率高有试剂盒的功劳！可大量供货！ Sunbiotech DNA 片段凝胶回收试剂盒，利用硅胶膜在低 pH 值高盐状态下可特异性吸附 DNA，在低盐高 pH 值洗脱的原理，可从 TAE 或 TBE 琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段，可去除 PCR 反应中的 dNTPs、引物、 矿物油和聚合酶等及 DNA 样品中的其它杂质，得到的 DNA 片段可用于酶切、连接、测序、PCR 反应模 板等后续操作。
4. 洗脱液 EB（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，PH 8.0）有可能影响下游酶切、连接、测序等反应，可以 使用水洗脱。用水洗脱 DNA 片段应该保存在 -20℃。
五、操作步骤
* 第一次使用前在漂洗液 W 中按 4：7 的比例加入无水乙醇，如包装为 2.4ml 漂洗液 W 中，应加入 4.2ml 无水乙醇!
DNA 片段凝胶回收试剂盒(离心柱型)
一、试剂盒组成、储存、稳定性
试剂盒组成 保存
溶胶结合液 BD 室温
漂洗液 W
室温
洗脱液 EB 吸附柱 AC
室温 室温
5次
50 次
100 次
500 次
SE010 试用装 （SE011） （SE012） （SE014）
4ml
40 ml
80 ml
400 ml
2.4ml