微生物菌种的保藏_PPT幻灯片
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菌种保藏技术(药品生物检定课件)
2、自发性 由于自然界环境因素的影响和微生物内在的
生理生化特点，在没有人为诱发因素的情况下，各种遗传 性状低，而且稳定，一般在
10-6～10-9 间。
4、独立性 突变的发生一般是独立的，即在某一群体中，
既可发生抗青霉素的突变型，也可发生抗链霉素或任何其 他药物的抗药性。某一基因的突变，即不提高也不降低其 他任何基因的突变率。突变不仅对某一细胞是随机的，且 对某一基因也是随机的。
原生质体融合
通过人为的方法，使遗传性状不同的两个细胞的原生质 体进行融合，借以获得兼有双亲遗传性状的稳定重组子的 过程，称为原生质体融合。由此法获得的重组子，称为融 合子。原核生物原生质体融合研究是从20世纪70年代后期 才发展起来的一种较有效的遗传物质转移手段。
原生质体融合的主要操作步骤是：先选择两株有特殊价 值，并带有选择性遗传标记的细胞作为亲本菌株置于等渗 溶液中，用适当的脱壁酶（如细菌和放线
一、普遍转导
通过极少数完全缺陷噬菌体对供体菌基因组上任何小片段DNA进 行“误包”，而将其遗传性状传递给受体菌的现象，称为普遍转导。噬 菌体侵入寄主细胞后，通过复制和合成，亦将寄主DNA降解为许多小 片段，进入装配阶段。正常情况下，噬菌体将自身的DNA包裹在衣壳 中，但也有异常的可能。它误将寄主细胞DNA的某一片段包裹进去。 这样的噬菌体称缺陷噬菌体。体内仅含有供体DNA的缺陷噬菌体称完 全缺陷噬菌体。体内同时含有供体DNA和噬菌体DNA的缺陷噬菌体 称为部分缺陷噬菌体。这种异常情况出现的概率很低（10-5～10-8)。
（二）菌种衰退的原因
菌种衰退不是突然发生的，而是从量变到质变的逐 步演变过程。开始时，在群体细胞中仅有个别细胞发生 自发突变（一般均为负变），不会使群体菌株性能发生 改变。经过连续传代，群体中的负变个体达到一定数量， 发展成为优势群体，从而使整个群体表现为严重的衰退。 经分析发现，导致这一现象的原因有以下几方面。
菌种保藏的原理和方法.ppt
2.沙土管干燥保藏法（略）
3.真空冷冻干燥保藏法
是目前常用的较理想的一种方法。其基本原理是在较低温度 下，（-18℃），快速地将细胞冻结，并且保持细胞完整，然后 在真空中使水分升华。在这样的环境中，微生物的生长和代谢 都暂时停止，不易发生变异。一般可保存5~10年左右。
4.液氮保藏法
是适用范围最广的微生物保藏法，其保存期最长。因为液氮的温度 可达-196℃，远远低于菌种新陈代谢作用停止的温度（-130℃）， 故此时代谢活动已停止。保藏期一般为2~3年，长的可达9年之久。
种时，先将原种制成若干管液氮菌种作为长期保藏用菌种，然后 再制一批冷冻保藏菌种作为用户分发用。约经5年后，假定第一 代（原种）的冷冻干燥保藏菌种已分发完毕，就再打开一支液氮 保藏原种制备大量冷冻保藏菌种，这样下去，至少在20年内，凡 获得该菌种的用户，至多只是原种的第二代，从而保证了保藏菌 种与分发菌种的高质量标准。
保藏斜面活化斜面来自2、复壮：使微生物活性恢复的同时，恢复其优良的生产性能。
保藏斜面 平板分离（自然分离，剔除退化菌种） 活化斜面
六、菌种保藏机构
菌种保藏机构的任务是：在广泛收集生产和科研菌种、菌株的基 础上，把它们妥善保藏，使之达到不死、不衰、不乱和便于交换使 用的目的。国际上很多国家都设立了菌种保藏机构。
▲ I FO（发酵研究所，日本大阪. Institute for Fermentation, Osaka, Japan ） ▲ NCTC（国家典型菌种保藏中心,英国伦敦. National Collection of Type Culture. London, United Kingdom） ▲ NRRL（Northern Utilization Research and Development Division, U.S Department of Agriculture. Peoria, U.S.A. 美国农业 部、北方开发利用研究部，美国皮奥里亚市）
菌种传代与保藏PPT
率和产品质量。
食品安全保障
通过菌种传代与保藏技术的优化， 保障食品生产和加工过程中的食品 安全。
环境保护
优化菌种传代与保藏技术，降低生 产过程中的环境污染，促进可持续 发展。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
04 菌种传代与保藏的未来发 展
菌种传代与保藏的技术创新
自动化技术
利用机器人和自动化设备 进行菌种传代与保藏，提 高工作效率和准确性。
基因编辑技术
通过基因编辑技术改良菌 种，提高其生产效率和适 应性。
生物反应器技术
利用生物反应器进行大规 模的菌种培养和保藏，实 现工业化生产。
菌种传代与保藏的科研进展
当菌种长到适宜大小时，可将其保存或进 行下一步实验，同时记录相关信息。
02 菌种保藏
菌种保藏的目的
01
02
03
长期保存菌种
通过保藏菌种，可以在长 时间内保持菌种的遗传稳 定性和活性，避免菌种衰 退或变异。
防止菌种丢失
对于具有重要应用价值的 菌种，通过保藏可以防止 意外丢失或遗忘。
维持菌种多样性
保藏多种类型的菌种，有 助于维持生物多样性，促 进微生物资源的保护和利 用。
新型保藏方法研究
研究更加高效、稳定的菌种保藏方法，如低温、真空、 干燥等。
菌种遗传稳定性研究
探究菌种在传代过程中的遗传稳定性，防止菌种变异 和退化。
菌种互作机制研究
研究不同菌种之间的互作机制，为菌种组合和优化提 供理论支持。
菌种传代与保藏的社会影响
工业生产变革
菌种传代与保藏技术的发展将推 动工业生产的变革，提高生产效
保存菌种
通过传代可以将菌种保存起来，以备将来使 用或进行研究。
食品安全保障
通过菌种传代与保藏技术的优化， 保障食品生产和加工过程中的食品 安全。
环境保护
优化菌种传代与保藏技术，降低生 产过程中的环境污染，促进可持续 发展。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
04 菌种传代与保藏的未来发 展
菌种传代与保藏的技术创新
自动化技术
利用机器人和自动化设备 进行菌种传代与保藏，提 高工作效率和准确性。
基因编辑技术
通过基因编辑技术改良菌 种，提高其生产效率和适 应性。
生物反应器技术
利用生物反应器进行大规 模的菌种培养和保藏，实 现工业化生产。
菌种传代与保藏的科研进展
当菌种长到适宜大小时，可将其保存或进 行下一步实验，同时记录相关信息。
02 菌种保藏
菌种保藏的目的
01
02
03
长期保存菌种
通过保藏菌种，可以在长 时间内保持菌种的遗传稳 定性和活性，避免菌种衰 退或变异。
防止菌种丢失
对于具有重要应用价值的 菌种，通过保藏可以防止 意外丢失或遗忘。
维持菌种多样性
保藏多种类型的菌种，有 助于维持生物多样性，促 进微生物资源的保护和利 用。
新型保藏方法研究
研究更加高效、稳定的菌种保藏方法，如低温、真空、 干燥等。
菌种遗传稳定性研究
探究菌种在传代过程中的遗传稳定性，防止菌种变异 和退化。
菌种互作机制研究
研究不同菌种之间的互作机制，为菌种组合和优化提 供理论支持。
菌种传代与保藏的社会影响
工业生产变革
菌种传代与保藏技术的发展将推 动工业生产的变革，提高生产效
保存菌种
通过传代可以将菌种保存起来，以备将来使 用或进行研究。
《菌种传代与保藏》课件
通过菌种鉴定和纯化，可以了解菌种的属性和特征，如形态、染色、生化反应等，以确定其分类地位 和用途。这有助于保证实验结果的准确性和可靠性。
去除杂菌和变异株
在菌种传代和保藏过程中，难免会混入杂菌或产生变异株。通过鉴定和纯化，可以去除这些杂菌和变 异株，保持菌种的纯度和一致性。这有助于保证实验的可重复性和结果的可靠性。
02 菌种传代技术
液体培养传代法
总结词
通过液体培养基进行菌种传代的方法
详细描述
将菌种接种到液体培养基中，经过一定时间的培养后，再进行菌种分离和纯化 ，用于后续的实验和研究。该方法操作简便，适用于大规模生产。
固体培养传代法
总结词
在固体培养基上进行菌种传代的方法
详细描述
将菌种接种到固体培养基表面，经过一定时间的培养后，形成菌落并进行纯化。 该方法常用于分离和鉴定微生物，能够较好地保持菌种的特性。
真空冷冻干燥保藏法
结合低温与干燥两种保藏方法，通过 真空冷冻干燥技术延长菌种存活时间 的方法。
将菌种在低温下进行真空处理，去除 水分，然后保存在干燥的环境中，这 种方法可以显著延长菌种存活时间， 并保持菌种的活性和稳定性。
液氮保藏法
通过将菌种保存在极低温度的液氮中，以延长菌种存活时间 的方法。
将菌种悬浮在液氮中，利用液氮的超低温特性（-196°C）来 延长菌种存活时间。这种方法可以长期保存菌种，但需要专 业的设备和操作技术，且成本较高。
03
及时发现并处理变异菌株
在菌种传代过程中，应密切关注菌种的生长和性状变化。一旦发现变异
菌株，应及时进行分离和鉴定，并采取相应的措施进行处理，以防止其
扩散和影响后续实验结果。
保持菌种的纯度和活性
定期进行菌种鉴定和纯化
去除杂菌和变异株
在菌种传代和保藏过程中，难免会混入杂菌或产生变异株。通过鉴定和纯化，可以去除这些杂菌和变 异株，保持菌种的纯度和一致性。这有助于保证实验的可重复性和结果的可靠性。
02 菌种传代技术
液体培养传代法
总结词
通过液体培养基进行菌种传代的方法
详细描述
将菌种接种到液体培养基中，经过一定时间的培养后，再进行菌种分离和纯化 ，用于后续的实验和研究。该方法操作简便，适用于大规模生产。
固体培养传代法
总结词
在固体培养基上进行菌种传代的方法
详细描述
将菌种接种到固体培养基表面，经过一定时间的培养后，形成菌落并进行纯化。 该方法常用于分离和鉴定微生物，能够较好地保持菌种的特性。
真空冷冻干燥保藏法
结合低温与干燥两种保藏方法，通过 真空冷冻干燥技术延长菌种存活时间 的方法。
将菌种在低温下进行真空处理，去除 水分，然后保存在干燥的环境中，这 种方法可以显著延长菌种存活时间， 并保持菌种的活性和稳定性。
液氮保藏法
通过将菌种保存在极低温度的液氮中，以延长菌种存活时间 的方法。
将菌种悬浮在液氮中，利用液氮的超低温特性（-196°C）来 延长菌种存活时间。这种方法可以长期保存菌种，但需要专 业的设备和操作技术，且成本较高。
03
及时发现并处理变异菌株
在菌种传代过程中，应密切关注菌种的生长和性状变化。一旦发现变异
菌株，应及时进行分离和鉴定，并采取相应的措施进行处理，以防止其
扩散和影响后续实验结果。
保持菌种的纯度和活性
定期进行菌种鉴定和纯化
《菌种的传代与保藏》课件
微生物菌种的保藏。
04
CATALOGUE
菌种传代与保藏的注意事项
防止菌种污染与变异
01
02
03
严格控制传代过程
在菌种传代过程中，应采 取无菌操作，避免污染。
选择适当的培养基
选择适当的培养基，以保 证菌种的正常生长和代谢 。
避免频繁传代
频繁传代会导致菌种变异 ，因此应合理控制传代次 数。
保持菌种遗传稳定性
通过菌种传代，可以持续获得相同特 性的菌株，为科学研究、产品开发、 质量控制等提供可靠的实验材料。
菌种保藏的原理与重要性
菌种保藏是长期保存菌种的有效方法，其原理在于创造不适宜菌种生长的环境条 件，使其处于休眠状态，从而延长菌种的保存期限。
菌种保藏对于保护生物多样性、防止菌种丢失、保障实验结果的可靠性等方面具 有重要意义。
尊重他人的知识产权，不得侵犯他 人的合法权益。
05
CATALOGUE
菌种传代与保藏的应用前景
在生物科学研究中的应用
要点一
基础生物学研究
菌种传代与保藏技术对于基础生物学研究至关重要，如微 生物分类学、进化生物学和生态学等。通过菌种传代与保 藏，科学家可以深入研究微生物的生理生化特性、基因组 学和蛋白质组学等，以揭示微生物生命活动的奥秘。
03
CATALOGUE
菌种的保藏技术
低温保藏法
总结词
一种常用的菌种保藏方法，通过降低温 度来降低菌种的代谢活性，延长菌种存 活时间。
VS
详细描述
将菌种保存在低温环境下，如冰箱的冷藏 室或冷冻室内，使菌种处于休眠状态，降 低其代谢活性，减少菌种变异和污染的机 会。适用于大多数微生物菌种的短期保藏 。
业的发展。
生物农药和生物肥料
04
CATALOGUE
菌种传代与保藏的注意事项
防止菌种污染与变异
01
02
03
严格控制传代过程
在菌种传代过程中，应采 取无菌操作，避免污染。
选择适当的培养基
选择适当的培养基，以保 证菌种的正常生长和代谢 。
避免频繁传代
频繁传代会导致菌种变异 ，因此应合理控制传代次 数。
保持菌种遗传稳定性
通过菌种传代，可以持续获得相同特 性的菌株，为科学研究、产品开发、 质量控制等提供可靠的实验材料。
菌种保藏的原理与重要性
菌种保藏是长期保存菌种的有效方法，其原理在于创造不适宜菌种生长的环境条 件，使其处于休眠状态，从而延长菌种的保存期限。
菌种保藏对于保护生物多样性、防止菌种丢失、保障实验结果的可靠性等方面具 有重要意义。
尊重他人的知识产权，不得侵犯他 人的合法权益。
05
CATALOGUE
菌种传代与保藏的应用前景
在生物科学研究中的应用
要点一
基础生物学研究
菌种传代与保藏技术对于基础生物学研究至关重要，如微 生物分类学、进化生物学和生态学等。通过菌种传代与保 藏，科学家可以深入研究微生物的生理生化特性、基因组 学和蛋白质组学等，以揭示微生物生命活动的奥秘。
03
CATALOGUE
菌种的保藏技术
低温保藏法
总结词
一种常用的菌种保藏方法，通过降低温 度来降低菌种的代谢活性，延长菌种存 活时间。
VS
详细描述
将菌种保存在低温环境下，如冰箱的冷藏 室或冷冻室内，使菌种处于休眠状态，降 低其代谢活性，减少菌种变异和污染的机 会。适用于大多数微生物菌种的短期保藏 。
业的发展。
生物农药和生物肥料
微生物的菌落形态观察平板菌落计数及菌种保藏PPT精选文档
37
三、平板菌落计数的表述及计算
▪ 因为微生物不易完全分散成单个细胞； ▪ 菌落的来源也并非完全为单个细胞； ▪ 因此其测定结果比实际菌数偏低； ▪ 引入菌落形成单位（colony-forming units，cfu）来表示，
而不以绝对菌体数量来表示样品的活菌含量。
▪ 计算公式：
CFU/g
所取平均菌落数 稀释倍数 所加样品量
15
三、菌落特征描写方法
▪ ① 大小 大、中、小、针尖状。可先将整个平 板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、小的 标准，或由教师指出一个大小范围。
▪ ② 颜色 黄色、金黄色、灰色、乳白色、红色、 粉红色等。
▪ ③ 干湿情况 干燥、湿润、粘稠
▪ ④ 形态 圆形、不规则等
▪ ⑤ 高度 扁平、隆起、凹下
③一般在斜面培养基上以 “之”线划接种（充分利 用斜面，得到最大量的菌 体）；
④有时也进行直线接种划 线（斜面培养特征观察）
24
25
说明：
▪ 注意试管斜面的拿法（手掌向上，斜面 向上），与接种工具的配合使用；
▪ 记号笔标记时，过火烤一下，字不容易 掉；
▪ 挑取单菌落于相应斜面，管口标记学号， 橡皮筋捆扎（三支）；
十分多样
相同
一般不同
可见球状，卵圆状或假 丝状细胞
有时可见细丝状细胞
较快
慢
多带酒香味
常有泥腥味或抗生素气 粗丝状细胞 一般较快
往往有霉味 6
二、细菌菌落形态的多样性（示意图）
7
8
9
10
11
12
13
延展性较强的一些霉菌菌丝（松散）
14
平板中菌落形态
10-2
2
3 平均 1
三、平板菌落计数的表述及计算
▪ 因为微生物不易完全分散成单个细胞； ▪ 菌落的来源也并非完全为单个细胞； ▪ 因此其测定结果比实际菌数偏低； ▪ 引入菌落形成单位（colony-forming units，cfu）来表示，
而不以绝对菌体数量来表示样品的活菌含量。
▪ 计算公式：
CFU/g
所取平均菌落数 稀释倍数 所加样品量
15
三、菌落特征描写方法
▪ ① 大小 大、中、小、针尖状。可先将整个平 板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、小的 标准，或由教师指出一个大小范围。
▪ ② 颜色 黄色、金黄色、灰色、乳白色、红色、 粉红色等。
▪ ③ 干湿情况 干燥、湿润、粘稠
▪ ④ 形态 圆形、不规则等
▪ ⑤ 高度 扁平、隆起、凹下
③一般在斜面培养基上以 “之”线划接种（充分利 用斜面，得到最大量的菌 体）；
④有时也进行直线接种划 线（斜面培养特征观察）
24
25
说明：
▪ 注意试管斜面的拿法（手掌向上，斜面 向上），与接种工具的配合使用；
▪ 记号笔标记时，过火烤一下，字不容易 掉；
▪ 挑取单菌落于相应斜面，管口标记学号， 橡皮筋捆扎（三支）；
十分多样
相同
一般不同
可见球状，卵圆状或假 丝状细胞
有时可见细丝状细胞
较快
慢
多带酒香味
常有泥腥味或抗生素气 粗丝状细胞 一般较快
往往有霉味 6
二、细菌菌落形态的多样性（示意图）
7
8
9
10
11
12
13
延展性较强的一些霉菌菌丝（松散）
14
平板中菌落形态
10-2
2
3 平均 1
PPT-微生物资源的收集和保藏
微生物资源的收集和保藏张道锋上海交通大学农业与生物学院食品安全与微生物实验室2015.1内容提要1.微生物资源分布2.样品收集和处理3.预处理和选择性培养基4.获得纯培养和初步鉴定5.新物种的识别和鉴定6.菌种保藏和编号7.相关机构和网站8.系统分类学简介微生物资源分布普通环境, 33, 21%植物, 5,3%临床样本,85, 55%动物, 27, 18%不详, 5, 3%矿地水池, 1, 1%有机污染土壤, 5, 3%河流, 5, 3%土壤, 20, 13%尘埃, 2, 1%牛, 5, 3%鱼, 8, 5%猴, 2, 1%其他, 12, 8%水苔,5, 3%痰, 28, 19%组织洗液, 9, 6%组织, 31, 21%伤口感染,6, 4%排泄物, 4, 3%其他, 7, 5%分枝杆菌160多个物种的来源分布样品收集和运输原则：避免外源污染；避免长途运输造成目标群体的消亡样品收集样品运输预处理和选择性培养基•分离目的：定向分离，分离未知菌，分离“混合菌”•基本原则：获得目的菌，排除非目的菌•预处理：富集，减少非目的菌，促进萌发，促进释放；干热，湿热，增菌，噬菌体，表面活性剂，机械破碎，震荡均质……•选择性培养基：针对分离目的选择，pH，盐浓度，特殊营养物质，抑制剂•其他因素：氧气、温度、培养时间获得纯培养和初步鉴定•纯培养：只有一种微生物的培养物，都由一个细胞产生（狭义）；广义？•初步鉴定：生理生化反应，分子标记（16S rRNA，特异靶点）新物种的识别和鉴定•可能的新物种：独特的属性（生理生化，分子）•证据：16S rRNA similarity≤97%；DDH ≤ 70%；ANI ≤ 95%•鉴定：生理生化，细胞化学，分子特征：多相分类EZbioCloud菌种保藏和编号•菌株定义：待选，初入选，入选，模式菌株，专利或生产菌株•编号：自己可读：123，a12，a1-2-b ，M2-4-5实验室可读：ABC001-ABC999国际可读：DSM 45643T ，ATCC 25923T ，CCTCC AA 209045，SJTUF10781菌种保藏•悬液保存（常温）•液体石腊保存（常温）•沙土管保存（有孢子或芽胞）•甘油保存（-70℃、-20℃）•冻干保存（5℃）•液氮保存（甘油管）普通冰箱，超低温冰箱，冷库，组合式冷柜，液氮柜相关机构和网站菌种保藏中心---《布达佩斯条约》•中国典型培养物保藏中心（CCTCC ）•中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)•美国典型微生物菌种保藏中心（ATCC)•德国微生物菌种保藏中心（DSMZ ）•台湾生物资源保存及研究中心（BCRC ）•韩国典型菌种保藏中心(KCTC)•法国巴斯德菌种保藏中心(CIP)•日本微生物菌种保藏中心(JCM)国内其它保藏中心•中国医学细菌保藏管理中心：CMCC•中国工业微生物菌种保藏管理中心：CICC •中国农业微生物菌种保藏管理中心：ACCC •中国海洋微生物菌种保藏管理中心：MCCC •YIM，SCSIO，及其它地方单位保藏中心DSMZStraininfoBiosafety Level•一级低个体危害，低群体危害对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植物致病的致病因子。
微生物的分离、培养和菌种保藏 PPT课件
實驗程式7
（微生物的分離—平板塗抹法）
實驗程式8
（微生物的分離—平板劃線法）
每組取無菌培養皿2付，在皿底貼上標籤，注明事項。取已熔化 的牛肉膏蛋白腖培養基，倒入平皿，製成平板。
凝固後，用接種環取相應的 菌液一環（10－5或10－6）在平板上 劃線（教師作示範）。 1.連續劃線法：將挑取有樣品的接種環在平板培養基表面作連續 劃線（圖－5）。完畢後，倒置於28～300C溫室培養。 2.分區劃線法：用接種環以無菌操作挑取土壤稀釋液1環，先在 培養基的一邊作第一次平行劃線3—4條，再轉動培養皿約600C 角，並將接種環上剩餘物燒掉，待冷卻後通過第一次劃線部分作 第二次劃線會，同法依次作第三次和第四次劃線（見圖－5）。 劃線完畢，蓋上皿蓋，倒置於28～300C溫室培養。
液體接種法：包括從斜面菌種接入培養液，或從液體菌 種接入液體培養液，兩種情況都可以用接種環接種。但 在培養量比較大的情況下，液體接種宜採用移液管接種， 同時要求無菌操作。
穿刺接種法：用接種針經火焰滅菌後，沾取少量菌種， 垂直地穿入試管固體培養基中心至底部，然後沿著原接 種線將針拔出，要做到手穩、動作輕巧迅速，最後塞上 棉塞。再將接種針上殘留的菌體在火焰上燒掉。
2. 用無菌的脫脂牛奶將新鮮斜面菌種製成牛奶菌種懸液，無菌 操作裝入安瓿管中（裝量不超過其體積的1/3)。 3. 預凍：將分裝好的安瓿管在－25～－400C之間的乾冰酒精 中進行預凍，1h後即可抽氣進行真空乾燥。 4.真空乾燥：預凍後放入真空乾燥箱中，開啟真空泵進行乾燥。 5.封管前將安瓿管裝入多歧管上，開啟真空泵，當真空度達到 0.01mm汞柱後用火焰熔封。 6.做好的安瓿管放入冰箱中保藏。
實驗程式17
（微生物培養中的氧氣條件－厭氧培養）
常见微生物的菌种保藏及原理ppt课件
要使用菌种时,从液氮罐中取出安瓿瓶,并迅速放到35～40℃温 水中,使之冰冻熔化,以无菌操作打开安瓿瓶,移接到保藏前使用 的同一种培养基斜面上进行培养.从液氮罐中取出安瓿瓶时速度 要快,一般不超过1min,以防其他安瓿瓶升温而影响保藏质量.并 且取样时一定要戴专用手套以防止意外爆炸和冻伤
（三）、菌种保藏的方法
1、斜面低温保藏法 2、石蜡油封藏法 3、砂土管保藏法 4、麸皮保藏法 5、冷冻真空干燥保藏法 6、液氮超低温保藏法
1、斜面低温保藏法
将菌种接种在适宜的斜面培养基上,待菌种生长完全后,置于4℃ 左右的冰箱中保藏,每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面 培养基上,生长后继续保藏,如此连续不断.此法广泛适用于细菌、 放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜 用冷冻干燥保藏的菌种.放线菌、霉菌和有芽孢的细菌一般可保 存6个月左右,无芽孢的细菌可保存1个月左右,酵母菌可保存3个 月左右.如以橡皮塞代替棉塞,再用石蜡封口,置于4℃冰箱中保藏, 不仅能防止水分挥发、能隔氧,而且能防止棉塞受潮而污染.这 一改进可使菌种的保藏期延长.
该法的优点是简便易行,容易推广,存活率高,故科研和生产上对 经常使用的菌种大多采用这种保藏方法.其缺点是菌株仍有一定 程度的代谢活动能力,保藏期短,传代次数多,菌种较容易发生变 异和被污染.
2、石蜡油封藏法
此法是在无菌条件下,将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入 培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上,石蜡油层高出 斜面顶端lcm,使用的液体石蜡要求优质无毒, 化学纯规格,其灭菌条件是：150～170℃烘箱内灭菌lh；或121℃ 高压蒸汽灭菌60～80min,再置于80℃的烘箱内烘干除去水分.
（一）、菌种保藏的目的
微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚 至死亡,因而常常造成菌种的衰退,并有可能使优良菌 种丢失.菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原 有性状和活力的稳定,确保菌种不死亡、不变异、不 被污染,以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需 要.
（三）、菌种保藏的方法
1、斜面低温保藏法 2、石蜡油封藏法 3、砂土管保藏法 4、麸皮保藏法 5、冷冻真空干燥保藏法 6、液氮超低温保藏法
1、斜面低温保藏法
将菌种接种在适宜的斜面培养基上,待菌种生长完全后,置于4℃ 左右的冰箱中保藏,每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面 培养基上,生长后继续保藏,如此连续不断.此法广泛适用于细菌、 放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜 用冷冻干燥保藏的菌种.放线菌、霉菌和有芽孢的细菌一般可保 存6个月左右,无芽孢的细菌可保存1个月左右,酵母菌可保存3个 月左右.如以橡皮塞代替棉塞,再用石蜡封口,置于4℃冰箱中保藏, 不仅能防止水分挥发、能隔氧,而且能防止棉塞受潮而污染.这 一改进可使菌种的保藏期延长.
该法的优点是简便易行,容易推广,存活率高,故科研和生产上对 经常使用的菌种大多采用这种保藏方法.其缺点是菌株仍有一定 程度的代谢活动能力,保藏期短,传代次数多,菌种较容易发生变 异和被污染.
2、石蜡油封藏法
此法是在无菌条件下,将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入 培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上,石蜡油层高出 斜面顶端lcm,使用的液体石蜡要求优质无毒, 化学纯规格,其灭菌条件是：150～170℃烘箱内灭菌lh；或121℃ 高压蒸汽灭菌60～80min,再置于80℃的烘箱内烘干除去水分.
（一）、菌种保藏的目的
微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚 至死亡,因而常常造成菌种的衰退,并有可能使优良菌 种丢失.菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原 有性状和活力的稳定,确保菌种不死亡、不变异、不 被污染,以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需 要.
第六章 菌种复壮衰退及保藏(与“菌种”相关文档)共44张PPT
例如，构巢曲霉如用分生孢子接种易退化； 如用子囊孢子接种则不易退化。
（5）采用有效的菌种保藏方法
菌种保藏的温度、所用的培养基等可影响自发突变。
（二）菌种的复壮（rejuvenation）
1. 定义
狭义的复壮：
是指菌种已发生衰退后，通过纯种分离和测定典型
性状、生产性能等指标，从已衰退的群体中筛选出 少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性状 的相应措施。
（3）淘汰已衰退的个体
S. microflavus“5406”农用抗生菌的分生孢 子，采用－10～－30℃的低温处理5～7天，退 化的个体死亡，留下的10％～20％个体是未退 化的。
二、菌种的保藏
菌种（culture，stock culture）
是一种极其重要和珍贵的生物资源。
菌种保藏（preservation，conservation，maintenance）
纯种分离的方法
粗放
“菌落纯”水平（pure culture in colony lever）
“菌株纯”水平（pure culture in strain lever）
精细
（2）通过宿主体复壮
针对病原菌
衰退的病原菌 接种
活的 “选择性培养基
”
相应的昆虫或动、植物宿主体内
多次选择
从典型的病灶部分分离到恢复原始独立的复壮菌株
（1）定期移植保藏法
操作方法：
将菌种接种在斜面、液体或穿刺培养基上，待生 长完全后，置普通冰箱4℃保藏，湿度50％～70％ 以下，棉塞换成不通气橡皮塞更好。
（国一立） 典国型内菌种收藏馆（NCTC）
抗东生京素 大菌学种应保用藏微管生理物中研心究所（TAM）
创微造生一 物个菌适落合形原态种或的个生体长形条态件的，变就化可；在一定程度上防止菌种衰退 ；
（5）采用有效的菌种保藏方法
菌种保藏的温度、所用的培养基等可影响自发突变。
（二）菌种的复壮（rejuvenation）
1. 定义
狭义的复壮：
是指菌种已发生衰退后，通过纯种分离和测定典型
性状、生产性能等指标，从已衰退的群体中筛选出 少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性状 的相应措施。
（3）淘汰已衰退的个体
S. microflavus“5406”农用抗生菌的分生孢 子，采用－10～－30℃的低温处理5～7天，退 化的个体死亡，留下的10％～20％个体是未退 化的。
二、菌种的保藏
菌种（culture，stock culture）
是一种极其重要和珍贵的生物资源。
菌种保藏（preservation，conservation，maintenance）
纯种分离的方法
粗放
“菌落纯”水平（pure culture in colony lever）
“菌株纯”水平（pure culture in strain lever）
精细
（2）通过宿主体复壮
针对病原菌
衰退的病原菌 接种
活的 “选择性培养基
”
相应的昆虫或动、植物宿主体内
多次选择
从典型的病灶部分分离到恢复原始独立的复壮菌株
（1）定期移植保藏法
操作方法：
将菌种接种在斜面、液体或穿刺培养基上，待生 长完全后，置普通冰箱4℃保藏，湿度50％～70％ 以下，棉塞换成不通气橡皮塞更好。
（国一立） 典国型内菌种收藏馆（NCTC）
抗东生京素 大菌学种应保用藏微管生理物中研心究所（TAM）
创微造生一 物个菌适落合形原态种或的个生体长形条态件的，变就化可；在一定程度上防止菌种衰退 ；
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低温定期移植法：
• 把培养好的斜面菌种放在低温干燥处保存， 定期移植，一般3～6个月移植一次(视菌种 特征而定)。也可以用穿刺培养，定期移植 法保藏细菌，其效果也较好。
• 穿刺培养是将含0.6％～0.8％的琼脂培养 基装试管灭菌后直立冷凝后，用接种针尖 挑取少量菌体，垂直刺入琼脂培养基中心， 放在适当温度下培养，待菌长好后即可放 低温保存，此法较斜面保存有利，大肠杆 菌可保藏2年以上不发生明显变异。
• 甘油管保藏法：是利用微生物在甘油中 生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目 的。其方法是，将40%的甘油高压蒸汽灭 菌待用。将培养好的斜面菌种用无菌种 用 无 菌 水 制 成 高 浓 度 的 菌 悬 液 (108 ～ 1010/ml)。取1ml灭菌甘油放入与甘油充 分混匀，使甘油浓度约为20%，于-20℃ 下冻存。
菌种菌种保藏
伤细胞。 在缓慢冷冻时，胞外基质一般较快结冰而 形成冰晶使基质浓度增高，造成细胞水分 外渗而大量脱水，可能使细胞死亡。如快 速降温，胞内也很快形成冰晶，胞内外渗 透压基本平衡，同时胞内冰晶较小，对细 胞及原生质膜的损伤也较小，菌株不易死 亡，影响也较小。
• 菌种是从事微生物学及生命科学研究的 基本材料.
• 微生物具有生命活力，在传代过程中易 发生变异甚至死亡，因此菌种保藏是一 项重要的基础工作，是微生物学基础工 作的一项重要内容，也是药品微生物工 作中的一项常用技术。
• 工业微生物菌种保藏，是要使菌 种生产能力和与生产工艺相适应 的优良性状保持稳定，当然做不 到绝对不变，只是力求把这种衰 退现象推迟减缓到最低限度。