冰冻切片技术原理
石蜡切片、冰冻切片实验技术服务
石蜡切片、冰冻切片实验技术服务
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷冻到一定的硬度，然后进行切片的一种方法。
制作过程较石蜡切片快捷、简便，因而多应用于手术中的快速病理诊断。
【技术原理】
组织经固定后，含有大量水分，使用乙醇从低浓度到高浓度将组织内的水分逐渐置换出来，以利于透明剂和石蜡的进入，这个过程称为脱水。
组织脱水后，必须经过一种既能与乙醇相结合，又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用使石蜡浸入组织，这种溶剂使组织呈现出不同程度的透明状态，这个过程称为透明。
组织经过脱水、透明后用石蜡作为支持剂浸入组织内，使组织变硬并将组织包裹在内，有利于切片，这个过程称为浸蜡。
浸蜡后的组织块用石蜡包成块，使组织达到一定的硬度和韧度有利于切片。
【实验流程】
案例展示
技术总结
【常见问题】
1、切片上卷或皱起
切片刀角度过大或过小，调整角度以5°为宜。
2、切片有空洞及破碎不齐
切片时慢一点，轻削组织。
3、切片有褶皱
切片时对准蜡块表面轻轻哈气。
【注意事项】
1、组织硬度较大，容易发生切片碎裂，需经软化或脱钙；
2、摊片时间过长，组织中心易开裂；
3、摊片时间过短，组织有褶皱，影响后续染色拍照；
4、特殊组织的切片，在后续染色过程中容易出现掉片的情况，比如皮肤、脑组织；
5、切片太厚，容易导致染色程度过深。
冷冻切片技术课件ppt
现代的冷冻切片技术已经实现了自 动化、数字化和标准化，为医学研 究和诊断提供了强有力的支持。
应用领域
临床病理诊断
冷冻切片技术可用于手术中的快 速病理诊断，帮助医生确定病变 的性质和范围，为手术方案提供
重要依据。
教学
冷冻切片技术可用于制作教学标 本，为医学生和病理医生提供直
观的学习材料。
科学研究
二氧化碳冷冻喷射固定设备。
03
冷冻固定设备的特点
冷冻固定设备具有操作简便、冷冻速度快、温度低等特点，能够有效地
保持组织或细胞的结构和成分不变。
切片机与刀片
切片机
切片机是用于将冷冻固定的组织或细胞样品进行切片的仪器。其工作原理是通过将组织或 细胞样品放置在切片机的工作台上，利用机械或激光等方式将样品切成薄片。
生物科学研究
利用冷冻切片技术进行细胞结构和功能的深入研 究。
药物研发
利用冷冻切片技术评估药物对细胞的作用机制。
发展前景展望
自动化与智能化
01
通过自动化与智能化技术的引入，降低冷冻切片制备的难度和
操作成本。
高分辨成像
02
发展高分辨成像技术，以获得更清晰、更深入的细胞结构和功
能信息。
跨学科，如生物工程、神经科学
将切片贴在载玻片上
将切好的切片贴在预处理的载玻片上，使其平整、无气泡。
干燥与固定
使切片在室温下干燥，并进行必要的固定处理，如用醛类化合物 进行醛化处理，以增强切片的稳定性。
染色与观察
染色
根据研究或诊断需求，选择适当 的染色方法对切片进行染色，如 H&E染色、免疫染色等。
观察
用显微镜观察染色后的切片，根 据需要调整焦距和光源强度，观 察并记录组织结构和细胞成分等 细节信息。
冷冻超薄切片原理和使用
冷冻超薄切片原理和使用冷冻超薄切片原理和使用冷冻超薄切片技术是一种为了研究更接近于生物生活状态结构和功能而发展起来的电镜样品制备技术。
它是把样品进行冷冻固定后，进行超薄切片，省去了经典超薄切片法的长时间的固定、脱水和也埋等处理。
样励在切片前后，不经过强烈的化学处理，约胞结构能得到很好的保存；尤其是可溶性成分小会被抽提，使得电镜图像更接近于生物的生活状态。
可用于细胞免疫化学、可溶性成分自显影、尤其在X射线微区成分分析等研究中。
冷冻超薄切片机操作：在超薄切片机上加上高压冷冻仪冷冻附件就可进行。
冷冻超薄切片的制备程序可为两类：1.无溶液制备法：包括取材、快速冷踪、冷冻替代、切片、干燥、染色或不染色、镜检等几个步骤。
主要用于可溶性物质的放射白显影和X射线微区分析。
2.固定样品制备法：包括取材、醛类阑定、样品包埋或不包埋、冷冻保护处IR、快速冷冻切片、染包及镜检等步骤。
适用于进行形态学、细胞化学和免疫细胞化学研究。
用户经培训后取得资格可自行使用超薄切片机，使用步骤如下：1）开机2）检查是否处于切片模式，检查顶光底光是否亮度正常；3）将包埋块放入适当夹头并用六角扳手旋紧，以固定包埋块；（然后将夹头安装在修快台进行修快）；4）将夹头放入机械臂，并用手旋好螺丝上紧夹头（不可用六角扳手）；5）将玻璃刀/钻石刀安装在刀台上，用手旋好螺丝以固定刀，并注意检查刀台是否固定于底座上；6）检查刀间隙角，调整刀台角，选择适当的夹头角度等；7）设定切片窗口（上下范围）；8）对刀；9）选择所用切片速度和厚度；10）在刀槽内注水，注意水面平整；11）切片、捞片；12）关机、清理切片机，拿走个人物品，保持切片台面整洁；13）登记使用记录。
一文带你了解冰冻切片_1
一文带你了解冰冻切片发布时间：2021-03-22T13:16:34.660Z 来源：《医师在线》2020年11月21期作者：宋体梅[导读] 一文带你了解冰冻切片宋体梅（蓬安县人民医院；四川蓬安637800）冰冻切片指的是采用切片机对冷冻状态下的组织进行直接切片，实际上是通过水作为包埋剂，冰冻组织至坚硬状态后切片。
在冰冻切片前，不采用化学药品处理或加热组织，以此大大缩短纸片时间。
同时该纸片法无需脱水透明和浸蜡等步骤，多用于脂肪、神经组织和部分组织化学的纸片，作为一种高效的切片方式在临床诊断中广泛应用。
一、术中为何要做冷冻切片？众所周知，手术病理诊断中通常会做快速冷冻切片，但是很多人不一定了解为什么要做冷冻切片，其他切片也可以代替冷冻切片吗？常标准石蜡切片是临床病理检查中最常用的方法。
通常的做法是将脏器切除，并进行一系列后续的技术处理，包括固定、脱水、石蜡浸渍、包埋、切片、染色。
正常切片过程至少需要24小时完成，检查医师用显微镜观察分析，做出病理诊断，前后约需要3天。
一些外科医生没有太多的等待时间，需要在手术过程中立即了解病变的性质，从而缩小手术范围，进行合理的处理，这需要手术中的医生进行病理诊断，因此需要活检诊断速度快、效率高，冷冻切片时间短，通常需要30分钟左右的时间来完成整个诊断过程，外科医生可根据病理诊断改进手术方式，避免多次二次麻醉和手术，大大降低了患者的重复费用。
二、如何开展冷冻切片？（一）取材应尽可能地在短时间内取得新鲜的材料，避免组织产生死后变化。
（二）速冻为了保护细胞内的酶活性，缩短切片标本的制备时间，通常需要在取样后冷冻组织块，降低组织温度，缩短冷却时间，避免冰晶的形成。
实验室冷冻切片最常用的方法为液氮冷冻切片法，具体操作方式为将软塑料帽或专用小盒放入组织中，如组织块过小，则加入COT浸泡包埋介质组织，准备小杯、液氮，将小盒放入小杯中，当小盒底部与液氮沸腾气化反应时，保持小盒原位避免浸入液氮中，但是10到20秒，组织就会迅速冻结成碎片。
第三节冰冻切片介绍
第三节冰冻切片介绍冰冻切片术是一种常用的组织学技术，可以用于研究人体组织和动物组织的结构和功能。
它可以提供组织的横断面，便于观察不同结构的细胞和组织。
本文将介绍冰冻切片的原理、步骤和应用。
一、冰冻切片的原理冰冻切片是通过将组织固定在低温下进行切割，从而得到组织横切面的方法。
冷冻技术能够减少组织的变性和破坏，可以保留细胞和组织原有的形态和结构。
在常温下，组织中的脂质和蛋白质会被破坏，切片过程中也容易产生伤口和变形。
而低温冷冻可以减少这些问题的发生，使切片更加准确和可靠。
二、冰冻切片的步骤1.组织固定：将新鲜组织（或已加工处理的组织）固定在适当的固定液中，如4%的甲醛。
固定的时间根据组织的性质和要研究的问题而定，一般在几小时到几天之间。
2.组织置于冰箱中冷冻：将固定的组织置于冷冻器中进行冷冻，通常是在-20摄氏度以下。
冷冻的时间根据组织的大小和要研究的问题而定，约为几小时到一天。
3.制备冰冻切片：将冷冻的组织取出，放在切片机的架子上。
使用冰冷的刀片对组织进行切割，得到所需的冰冻切片。
切片的厚度根据组织的性质和要研究的问题而定。
4.切片上薄片：将冰冻切片绕在切片刀上，并用玻璃刀刮去多余的细胞和组织。
然后将切片放在玻璃片上，并以适当浓度的甘油溶液滴在切片上，使切片保持湿润。
5.染色和保存：根据需要将切片进行染色，使用常用的染色方法如血液染色、免疫染色等。
染色完成后，将切片放在一个干燥的玻璃片上，然后用封闭剂将切片封闭，以防止切片的变形和损坏。
最后，将切片保存在适当的环境中，避免阳光暴晒和湿气侵入。
三、冰冻切片的应用冰冻切片技术在医学研究和临床诊断中有广泛的应用。
1.病理学研究：冰冻切片可以用于观察组织的病理变化，如细胞增生、坏死和变异等。
通过冰冻切片技术，可以更加准确地诊断和鉴定疾病。
2.免疫组化染色：冰冻切片可以进行免疫组织化学染色，用于检测和定位特定蛋白质的表达。
通过这种方法，可以研究细胞和组织中特定分子的分布和功能。
制作冰冻切片的体会
制作冰冻切片的体会无论是在组织胚胎学等医学基础课中，还是在临床检验工作中，冰冻切片都有着举足轻重的作用，冰冻切片被广泛的运用在科研、教学和临床诊断中。
所谓冰冻切片就是组织在低温状态下在很短的时间内变硬并进行切片。
在临床外科手术中常常需要进行快速病理诊断，而冰冻切片就是一个很好的方法。
标签：冰冻切片；制作；体会冰冻切片是一种在低温的条件下使组织快速冷冻到一定的硬度然后进行切片的方法。
其制作过程简单方便快捷，在手术中快速进行病理诊断从而为手术在中快速确定组织性质，对医生的手术方案具有指导意义。
冰冻切片的组织在送检前不需要进行处理，其组织没有发生变化，使得原来的生活形态得以保持，特别是在免疫组织化学染色中，组织中的糖、酶、抗原、脂类等成分由于没有受到干扰而存在，组织中的细胞抗原的免疫性也得到了保存，对于需要检测糖、酶、抗原、脂类的不会受到影响。
但是，冰冻切片的制作过程要比普通的蜡切片难度大、要求高，而且组织冰冻的程度不好把握，在切片的过程中组织较易破碎，很难切成符合要求的薄片，在染色的过程中很容易脱片，所有以上这些因素都会影响到切片的质量，从而影响到了检测结果。
对于如何能有效快速高质量的制作符合要求的冰冻切片一直使我们面对的问题。
1材料和方法1.1 材料：恒冷切片机，切片刀，固定液，胶水，实验用用的新鲜组织如肝、肾、脾、皮肤、食管、胃、淋巴结、心肌、脑、卵巢、小肠等组织。
1.2 方法：采用新鲜的实验用的新鲜组织，取一块大小为1.5cm×1.5cm×3cm 的新鲜实验用组织，去除组织中的脂肪组织，在取组织的时候要注意保持干燥以免引起组织细胞发生变性和变化，把组织放在低温液氮中快速冷冻放置于冰冻台上。
在切片机内快速冰冻2分钟之后待切。
如果组织的体积较大冰冻时间相应延长，如果所取组织体积较小则相应的缩短冰冻时间，切片刀的温度控制在零下25℃-零下30℃之间。
在开始切片之前要对切片刀和防卷板之间的角度进行调整以防切出来的组织薄片卷曲。
冰冻切片制作方法与注意事项
冰冻切片制作方法与注意事项冰冻切片是一种常见的制备生物组织切片的方法，其原理是将生物组织迅速冷冻并切割成极薄的切片，用于研究组织的形态结构和组织学变化。
下面是冰冻切片的制作方法和注意事项。
一、冰冻切片的制作方法：1.组织采集：选择需要研究的组织，如动物器官或植物部位，通常用组织固定剂进行固定处理，以保持组织的形态结构。
2.组织预处理：将固定的组织转移到含有蔗糖或蔗糖与聚乙二醇的冰冻液中，浸泡一定的时间使组织与冷冻液充分均匀接触，便于组织快速冷冻。
3.冰冻：使用液氮或刀片冷冻架等快速冷冻设备，将组织迅速冷冻至-20℃以下，使组织中的水分迅速形成冰晶，避免组织的形态结构变化。
4.切割：将冷冻的组织置于切片机或切片微波机上，用冷冻刀片将组织切割成薄片，通常厚度为10-30μm。
5.将切割好的切片用刷子或微型镊子移至载玻片上，通常用蛋白质固定剂或聚甲醛进行固定处理，以保持切片的形态结构。
6.干燥：将固定好的切片置于干燥器中，用适当的温度和时间干燥切片，使其充分固定在玻片上。
7.染色：根据需要可对切片进行染色处理，常见的染色方法有HE染色、银染色、免疫组化染色等。
二、冰冻切片的注意事项：1.快速冷冻：为了保持组织的形态结构和避免变形，必须采用快速冷冻的方法，将组织迅速冷冻至-20℃以下。
液氮和刀片冷冻架是常用的设备。
2.切片设备：选择适合的切片设备，如切片机或切片微波机。
刀片的选择也十分重要，常见的冰冻刀片有钢刀、玻璃刀和蜡刀，选择合适的刀片可以提高切片质量。
3.切片厚度：切割时要控制好切片的厚度，通常为10-30μm。
切片太薄容易导致组织切面不完整，切片太厚则不能得到清晰的显微镜图像。
4.切片技巧：切片技巧也很重要，需要稳定的手部技巧和耐心。
在切割时要保持刀片的稳定，避免划伤或碎裂组织。
5.切片保存：切好的切片需要妥善保存，可以用普通干燥器或冷冻干燥器进行干燥，避免切片变形和水分损失。
6.染色方法：根据需要选择合适的染色方法。
冰冻切片技术原理
冰冻切片技术原理冰冻切片技术是生物学领域中常用的一种技术，用于获得活体组织的高分辨率、高质量的切片样品。
这种技术能够保留组织的细胞结构和功能状态，并且可以用于进一步的光学显微观察、免疫染色和分子生物学分析。
冰冻切片技术主要包括冰冻、固定和切割三个步骤。
首先，冰冻是冰冻切片技术的第一步。
样品通常是通过浸泡在液氮中或使用特殊冷冻剂使之迅速冷冻。
在快速冷冻的过程中，水分子会形成冰晶，冻结组织细胞内的各种分子和结构，并起到了一个固定的作用，以保留细胞结构的完整性。
其次，固定是冰冻切片技术的第二步。
固定可以用于进一步固定组织内的分子和结构，以增加样品的稳定性和可视性。
常用的固定剂有乙醛、戊醛和混合溶液等。
固定可以通过交联细胞中的蛋白质和核酸，以防止其在切割过程中的失去或变性。
最后，切割是冰冻切片技术的第三步。
切割一般使用切片机或显微镜下的微操纵器进行。
切割机通常可以根据需要调整切片的厚度，一般为几微米至几十微米。
在切割过程中，样品需要保持冷冻状态，以保持细胞结构的完整性。
切割的刀片也需要保持锋利和无尘，以避免样品受到污染或结构损坏。
冰冻切片技术的原理主要是基于快速冷冻和固定的原理。
在快速冷冻过程中，组织内的水分子迅速形成冰晶，使细胞和组织的分子结构被固定，以保持其形态和功能的完整性。
同时，固定剂的使用可以进一步固定组织内的分子和结构，增加样品的可视性和稳定性。
通过冰冻切片技术可以获得高分辨率、高质量的切片样品，并可在进一步的显微观察、免疫染色和分子生物学分析中使用。
冰冻切片技术的优点在于它能够保留细胞和组织的细微结构和功能状态。
相比于传统的石蜡包埋切片技术，冰冻切片技术更适用于需要保留细胞结构和功能的研究。
此外，冰冻切片技术还可以用于多种组织类型的切割，如生物样本、植物组织、动物组织等。
总之，冰冻切片技术通过快速冷冻和固定的原理，可以获得高分辨率、高质量的切片样品。
它保留了组织的细胞结构和功能状态，并可用于进一步的显微观察、免疫染色和分子生物学分析。
冷冻切片冰晶产生的原理
冷冻切片冰晶产生的原理冷冻切片技术是一种重要的电镜样品制备方法，常被用于生物学和材料科学研究中。
冷冻切片的原理是通过将样品迅速冷冻，并在低温下切割出薄片，从而保持样品的原貌和结构。
在冷冻切片过程中，样品中的水分子会形成冰晶结构，这对于保护和凝固样品起到关键作用。
本文将深入探讨冷冻切片冰晶产生的原理。
冷冻切片技术的核心是将样品快速冷冻到低温下。
常用的冷冻方法有液氮冷冻、液氮芯片冷冻和冷冻-断裂法等。
液氮冷冻是将样品浸泡在液氮中冷冻，通常需要采用液氮罩或特殊设备进行冷冻固定。
液氮芯片冷冻是将样品置于特制的冷冻芯片上，然后使用液氮进行冷冻。
冷冻-断裂法是将样品冷冻至玻璃化温度，然后突然断裂，产生薄片。
冷冻切片的冷冻过程中，水分子将逐渐形成冰晶结构。
水是一种极其特殊的物质，其冰晶结构与其他物质的固态结构有很大不同。
一般的物质固态结构是由分子或原子紧密排列而成的晶格，而水的冰晶结构则是由水分子之间的氢键相连而成。
在水分子中，氧原子具有一定的负电性，氢原子具有一定的正电性。
当水分子靠近时，氧原子与氢原子之间会形成氢键。
氢键是一种弱的相互作用力，但由于水分子数量庞大，氢键的总和变得相当强大。
这种氢键的特性使得水分子的冰晶结构具有稳定性和特殊性。
水的冰晶结构为六角形密排结构，也被称为六角网格结构。
在这种结构中，每个水分子都与六个相邻的水分子通过氢键相连。
冷冻过程中，水分子逐渐放慢并停止了在样品中的运动，氢键开始形成并产生稳定的六角网格结构。
冷冻过程中的快速降温和氢键的形成是导致冰晶产生的关键因素。
快速降温使得水分子无法按照常规的升温方式释放能量，从而迫使水分子形成冰晶结构。
而氢键的形成则是冰晶结构的基础。
由于氢键的存在，冰晶具有稳定且结实的特性，能够维持样品的原貌和结构。
冷冻切片的原理是在低温下切割冰晶样品，使得切割出的薄片保持样品的原貌和结构。
冷冻切片技术通常使用金刚砂刀片或钻石刀片进行切割。
这些硬度高的刀片能够在低温下保持锋利，并将冰晶样品切割成所需的形状和厚度。
冰冻切片的原理和流程
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冰冻切片是一种组织学技术，通过在低温下将组织快速冷冻，然后在低温下切成薄片来制备组织切片。
冰冻切片快速病理你了解多少？
冰冻切片快速病理你了解多少？冰冻切片快速病理是一种常见的病理学检查方法，它可以在手术中快速地对组织进行病理学检查，以指导手术的进行和治疗方案的制定。
那么，冰冻切片快速病理到底是什么？它有哪些优点和缺点？下面就来一起了解一下。
1.冰冻切片快速病理的定义冰冻切片快速病理是一种在手术中对病变组织进行冷冻、切片、染色和显微镜检查的技术，可以在短时间内帮助外科医生确定病变的性质和扩散情况，从而制定合适的手术方案。
1.冰冻切片快速病理的原理冰冻切片快速病理的原理是利用低温冷冻技术，将新鲜组织样本迅速固定和切片，并用切片机切成薄片，经过染色和封片后，用显微镜观察组织的形态和结构，从而快速做出病理诊断。
一般来说，冰冻切片快速病理的结果可以在30分钟内给出。
1.冰冻切片快速病理在临床中的具体应用冰冻切片快速病理在临床中有广泛的应用，主要包括以下几个方面：确定病变性质，如肿瘤或非肿瘤、良性或恶性肿瘤等，以便选择合适的手术方式和范围。
例如，乳腺肿块、甲状腺结节、卵巢肿瘤等。
了解恶性肿瘤的扩散情况，如是否浸润相邻组织、有无区域淋巴结转移等，以便进行适当的清扫和切除。
例如，胃癌、结直肠癌、乳腺癌等。
确定肿瘤部位的手术切缘有无残留肿瘤组织，以便评估手术是否彻底，是否需要再次切除或补充其他治疗。
例如，乳腺癌、口腔癌、皮肤癌等。
确认切除的组织，如甲状旁腺、输卵管、输精管及异位组织等，以便避免误切或误诊。
例如，甲状旁腺功能亢进、输卵管妊娠、异位胰岛细胞等。
1.冰冻切片快速病理的优点和局限性4.1冰冻切片快速病理的优点冰冻切片快速病理有哪些优点呢？首先，它具有较高的准确率。
相关数据表明，冰冻切片快速病理诊断准确率在大约在95%-97%之间，是一种准确率较高的病理学检验方法。
其次，它可以避免二次手术的风险和不必要的创伤。
例如，如果乳腺肿块的冰冻切片结果是良性的，那么就可以结束手术；如果是恶性的，那么就需要扩大手术范围，甚至切除整个乳房和淋巴结。
《冰冻切片法》课件
近年来，冰冻切片技术不断改进，如冷冻保护剂的选择、制冷剂的种类和切片刀 的材质等方面都有所突破，提高了制片质量和效率。同时，冰冻切片法与其他技 术如免疫荧光、原位杂交等结合使用，为科学研究提供了更多手段。
02
冰冻切片法的技术原理
冰冻切片的制作过程
01
02
03
样本准备
将待检测组织固定在冷冻 台上，用冷丙酮或包埋剂 进行冷冻。
细胞结构和超微结构。
冰冻切片法的缺点
技术要求高
冰冻切片技术要求高，需要熟练的操 作技巧和经验，才能获得高质量的切 片。
设备昂贵
冰冻切片机等设备较为昂贵，增加了 制片成本。
容易产生冰晶
在冷冻过程中，组织内部容易形成冰 晶，影响切片的清晰度。
制片质量不稳定
由于制片过程中涉及多个步骤，且每 个步骤都可能影响制片质量，因此制 片质量有时不太稳定。
切片制作
使用冷冻切片机将冷冻的 组织切成5-10微米厚的切 片。
贴片与固定
将切片贴在载玻片上，并 用丙酮固定。
冰冻切片的质量控制
切片厚度
确保切片厚度均匀，一般 在5-10微米之间。
组织完整性
确保组织结构完整，无破 碎或裂痕。
染色效果
染色效果应均匀，无沉淀 或悬浮物。
冰冻切片的染色方法
苏木精-伊红染色法
基因表达研究
03
通过冰冻切片技术，可以对组织中的基因表达进行快速检测和
分析，有助于研究基因功能和疾病机制。
在其他领域的应用
食品安全检测
冰冻切片技术可用于快速检测食品中的有害物质和微生物， 保障食品安全。
环
05
冰冻切片法的优缺点及展望
冰冻切片法的优点
冷冻切片机基本原理(二)
冷冻切片机基本原理(二)冷冻切片机基本原理1. 介绍冷冻切片机，是一种常用于生物组织切片的设备。
它采用冷冻技术，能够将组织样本中的细胞结构冻结并切割成薄片，以方便进一步的研究和分析。
2. 冷冻原理冷冻切片机的基本原理是利用低温将生物组织中的水分冻结成冰晶，使得组织变硬，从而使得切割过程更加容易。
冻结的过程中，冰晶的形成会使细胞和组织的结构得到保护，以避免切割过程中的破坏。
3. 切片原理冷冻切片机通过将冷冻的组织样本放置在一个称为切片支撑体的平台上，然后使用一把称为切片刀的器具切割下去。
切片刀通常是非常锋利的，并且能够进行精确的移动，以便获得所需的切片厚度。
4. 切片流程切片过程包括以下步骤：•将待切割的组织样本固定在切片支撑体上。
•将切片支撑体放置在冷冻切片机中，使其达到适当的温度冷冻。
•调整切片刀的位置和角度，使得切割的切片厚度符合实验要求。
•通过控制切片刀的移动，逐步将组织样本切割成薄片。
•使用杂质清除工具清除切片上的杂质，以获得干净的切片。
•将切片转移到载玻片上，用于后续的染色和观察。
5. 注意事项在使用冷冻切片机时，需要注意以下事项：•确保待切割的组织样本完全冷冻，以保证切片的质量。
•调整切片刀的位置和角度时要小心谨慎，避免伤到自己。
•坚持使用干净的载玻片，并及时清理和更换。
•定期对冷冻切片机进行维护和清洁，以保证其正常工作和延长使用寿命。
6. 应用领域冷冻切片机广泛应用于医学、生物学、组织学等领域的研究和实验中。
它能够提供高质量的组织切片样本，为研究细胞结构和功能、诊断疾病等提供重要参考。
结论冷冻切片机是一种基于冷冻和切割原理的设备，能够将组织样本切割成薄片，为后续的研究和分析提供便利。
它在医学和科研领域具有重要的应用价值，并且需要正确使用和维护，以保证切片样本的质量和设备的使用寿命。
冰冻切片技术原理 ppt课件
冰冻切片技术原理
• 冷冻切片的重要环节是温度。
• 1.冷冻前将恒温冷冻切片机的速冻头温度和箱内温度调整 到适宜的切片温度，一般情况下为-25~-18℃。
• 2.在标本托上涂一层冷冻包埋剂OCT，然后将取材后的新 鲜标本安放在标本冷冻托上并用OCT包埋剂覆盖标本。
• 3.组织较小或较薄，可先将OCT滴加在标本托上，冻成一 个小冷台，将组织放小冷台上，再覆盖OCT冷冻，并用 冷冻锤轻轻压平。
• LEICA CM1850
冰冻切片技术原理
• 1.标本必须新鲜无固定，无液体浸泡； • 2.组织块大小厚薄适宜； • 3.组织块未受挤压； • 4.尽量保持组织的原有形态； • 5.选择好组织切面； • 6.保持组织的清洁； • 7.切除不需要的部分，遇有脂肪组织要剔除； • 8.组织内有异物一定要清除。
冰冻切片技术原理
• 二、冷冻切片染色
• 1.冷冻切片应立即放入固定液中。 • 2.固定1min左右，水洗。
• 3.入苏木精染色2min，水洗。 • 4.1%盐酸酒精分化数秒，水洗。（0.5%氢氧化铵水溶液
返蓝数秒，水洗）
• 5.伊红染液20s-1min，水洗。 • 6.70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇逐级脱水。 • 7.无水乙醇脱水2次。 • 8.二甲苯透明两次。 • 9.中性树胶封固。
防造成污染。 • 5.切片污染是病理组织制片的大忌，在冷冻切片粗削后必
须用毛笔清洁碎屑，以防其他组织碎屑沾染到正在进行切 片的标本上。
• 2.室温过低时，影响着色，可适当加温促进染色。 • 3.盐酸酒精分化应适度，显微镜下控制，否则易造成核着色
不佳，染色质不清晰，影响诊断。
冰冻切片技术原理
• 1.切片前，厚度应预先调制好，刀具提前安放好。 • 2.刀的角度调好位置，并多备几个冷冻托，以供速冻组织
冷冻切片机
冷冻切片机冷冻切片机：提高食品加工效率的利器引言：随着食品加工业的不断发展，工业化生产成为了食品加工领域的主流趋势。
在食品加工过程中，切割工作是一个必不可少的环节，尤其是对于肉类、鱼类等大块食材的切割工作更加重要。
冷冻切片机作为一种现代化、高效能的切割设备，为食品加工业提供了重要的支持。
本文将介绍冷冻切片机的工作原理、特点以及在食品加工过程中的应用。
一、工作原理冷冻切片机通过采用冷冻技术对食材进行冷冻处理，使食材变得坚硬，然后通过传动装置将食材推送到切片部位，最后利用高速旋转的刀片对食材进行切割。
冷冻切片机的刀片采用高硬度的材质制成，具有出色的切割性能和耐磨性。
切割速度和刀片厚度可以根据加工需要进行调整，以满足不同的加工需求。
二、特点1. 高效能：冷冻切片机利用冷冻处理使食材变硬，从而可以实现高速切割。
在相同时间内，冷冻切片机能够完成更多的切割任务，提高加工效率。
2. 切割质量高：冷冻切片机的刀片采用高硬度材质制成，切割食材时刀片的锋利度高，切割的食材表面更加光滑，能够保持食材的原有质量和口感。
3. 操作简便：冷冻切片机的操作界面简单直观，只需要进行简单的设置即可开始加工。
同时，切割速度和刀片厚度可根据需要进行调整，非常方便。
4. 安全可靠：冷冻切片机在操作过程中具有多重安全装置，如过载保护、切割部位防护等，能够有效保护操作人员的安全。
三、应用领域冷冻切片机在食品加工业中有着广泛的应用。
首先，冷冻切片机适用于肉类的切割，无论是鸡肉、牛肉、猪肉还是羊肉，冷冻切片机都能够实现高效、快速的切割，提高加工效率。
其次，冷冻切片机还适用于鱼类的切割，刀片的高硬度和切割速度可确保鱼肉切开后不会破损或变形，保持鱼肉的完整性。
此外，冷冻切片机还可以用于蔬菜、水果等食材的切割。
在食品加工厂、餐饮企业和超市等场所，冷冻切片机都有着广泛的应用。
结论：冷冻切片机作为食品加工领域的重要设备，通过其高效能、切割质量高和操作简便等特点，为食品加工业提供了重要的支持。
冷冻切片操作指南
冷冻切片操作指南在医学、生物学和食品科学等领域中，冷冻切片是一种重要的技术，用于将样品冷冻固化后，切割成薄片以供进一步观察和研究。
本文将为读者提供一份冷冻切片操作指南，介绍冷冻切片的基本原理、实验室操作步骤和注意事项。
一、冷冻切片的基本原理冷冻切片是将样品通过快速冷冻技术使其迅速固化，然后使用切片机或显微切片机将固化的样品切割成薄片。
冷冻切片的目的是保留样品的形态和结构，避免切片过程中的伤害和变形。
冷冻切片一般适用于需要保留细胞和组织结构的实验。
二、实验室操作步骤1. 样品准备：将待切割的样品准备好，可以是细胞、组织或食物等。
样品处理过程中需要注意保持样品的完整性和活性。
2. 冷冻固化：将样品放置在冷冻剂中，例如液氮或冷冻盒中的冰水混合物中，进行快速冷冻固化。
冷冻时间需要根据不同样品的特性进行优化，一般在几分钟至数小时之间。
3. 选用切片仪器：根据实验需求，选择合适的切片仪器，可以是手动的切片机或半自动/全自动的显微切片机。
4. 切片调整：根据实验需求，调整切片仪器的切割参数，例如切片厚度和速度等。
通常，薄片的厚度在几微米至数十微米之间。
5. 切片过程：将冷冻固化的样品放置在切片仪器的切片台上，固定好，并且调整好切割参数。
使用手动或电动操作切片仪器，将样品切割成所需的薄片。
6. 切片收集：将切割好的薄片收集起来，可以使用切片刷或显微镊子等工具进行操作。
注意保持薄片的完整性和干燥，避免受到污染和损坏。
7. 切片处理：根据实验需求，进行切片的进一步处理，例如染色、免疫组化等。
三、注意事项1. 样品处理过程中需要注意保持样品的完整性和活性，避免样品受到损伤和变性。
在样品处理过程中，可以使用缓冲液或甘油等物质进行保护。
2. 冷冻固化的时间和温度需要根据不同样品的特性进行优化。
过长或过短的冷冻时间都可能导致样品质量下降。
3. 在选择切片仪器时，需要根据实验需求和预算等因素进行权衡。
手动切片机相对便宜，但操作较为繁琐；半自动/全自动的显微切片机操作更为方便，但价格较高。
冰冻切片
其他信息
其他信息
冰冻干燥 原理 为冰冻组织保持高度真空，直到去除组织中的水分。 过程 小块组织骤冷→立即在真空干燥脱水（－30～－40℃）冰升华，水气去除，不会发生酶的弥散→材料干后， 升到室温浸于石蜡或碳蜡包埋。 特点 能出色地保存组织的酶活性，还有助于保持组织的结构。但仪器贵，需时长。 冰冻替代法 原理 低温下用液体脱水剂取代组织中的水分。
应用
应用
（1）在手术进行中，突然发现病人的病变与原诊断，原定手术方案不相符合，或者怀疑时，需要病理确定。 （2）了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞，或者转移的程度，以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其 它的治疗措施。 （3）对于已确定为恶性肿瘤的患者，则需要了解其手术范围是否足够，上下切缘是否有残存的肿瘤组织。 （4）在做剖腹探查时所发现的肿块或者异样的组织。 （5）显示组织中的脂肪和脂类物质，这常见于某些病例如脂肪瘤及肉瘤，某些科研组织等。 （ 6 ） 某 些 酶 的 显 示 如 AT P 酶 ， 琥 珀 酸 脱 氢 酶 等 。 （7）神经病理学技术中的某些染色法如：Eager氏法，Marchi氏法，Cajal氏法，Hortega氏法和Holzer氏 法等。 （8）对某些物质所进行的免疫荧光的研究。
冰冻切片
在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法
01 定义
03 使用原因
目录
02 应用 04 制作方法
05 优缺点
07 其他信息
目录
06 注意事项
基本信息
在手术台上取下的组织放到冷冻机里面-20度左右冻成硬块，制成切片用于快速诊断,该诊断仅作参考，应以 石蜡诊断为主。
定义
定义
冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。因其 制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻 切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法等。这些方法，随着时代的变迁，科技的发展，许多年 前被认为是非常重要的技术，也逐步被淘汰了。当然有些技术，如低温恒冷箱冰冻切片法，正在受到重视。
冰冻组织保藏和切片方法
冰冻组织保藏和切片方法实验方法原理：冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片。
它实际上是以水为包埋剂，将组织进行冰冻至坚硬后切片的。
在冰冻切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程，大大缩短了制片时间。
同时，由于此法不需要经过脱水、透明和浸蜡等步骤，因而较适合于脂肪、神经组织和一些组织化学的制片，并作为快速切片的方法应用在临床诊断。
实验材料：新鲜组织试剂、试剂盒：H2O2酒精丙酮PBSDAPI工作液中性树胶仪器、耗材：OCT速冻架恒冷箱切片机烘箱荧光显微镜实验步骤：一取材应尽可能快地采取新鲜的材料，防止组织发生死后变化。
二速冻1、将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约2cm）。
2、如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内。
3、当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。
4、在制成冻块后，即可置入恒冷箱切片机冰冻切片。
5、若需要保存，应快速以铝箔或塑料薄膜封包，立即置入-80℃冰箱贮存备用。
三固定1、样品托上涂一层OCT包埋胶，将速冻组织置于其上，4℃冰箱预冷5-10min让OCT胶浸透组织。
2、取下组织置于锡箔或者玻片上，样品托速冻。
3、组织置于样品托上，其上再添一层OCT胶，以完全覆盖为宜，速冻架（PE）上30min。
四切片1、恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机，其基本结构是将切片机置于低温密闭室内，故切片时不受外界温度和环境影响，可连续切薄片至5-1 0μm。
2、切片时，低温室内温度以-15℃~ -20℃为宜，温度过低组织易破碎，抗卷板的位置及角度要适当，载玻片附贴组织切片，切勿上下移动。
3、切好室温放置30min后，入4℃丙酮固定5-10min，烘箱干燥20min。
PBS洗5min×3。
4、进行抗原热修复，微波热修复也可，室温自然冷却。
可用3%H2O2孵育5-10min，消除内源性过氧化物酶的活性。
冰冻切片技术
冰冻切片技术1：实验原理：利用物理降温的方法将新鲜组织标本冷冻产生一定的硬度进行切片，与石蜡切片相比，冷冻切片不需要脱水处理。
因此制片速度快，是术中进行快速病理争端的良好方法。
2：实验步骤：①取材：从新鲜的小鼠中剖取肝、肺、心、胰腺、肾等组织器官至载玻片上②冷冻前将恒温冷冻切片机的速冻住头温度和箱内温度调至-20--15℃，将组织器官移到涂了一层耦合剂的组织支承器冻面上，用镊子压平，再挤上一层耦合剂覆盖标本。
放至冰冻机中降温处理③标本冷冻后将组织支承器固定在切片机的机头上，调整机头的位置使其正好位于切片刀的后方。
④以粗修的方式粗修到暴露标本的最大平面，用毛笔清除机头、组织支承器及刀片上的组织碎屑。
⑤确认切片的厚度，一般为4到5vm不等，根据组织的不同可适当调整切片的厚薄。
⑥放下放卷板使其位置恰好与刀片的刀刃完全平行并略突出刀刃⑦以转动大轮推进的方式进行切片，良好的切片将在放卷板的下方形成一张完整平坦无褶的薄片，若切片略有弯曲，可用毛笔轻轻展平。
⑧打开放卷板，将标记好的载玻片平稳的轻压组织，使其平整的吸附到载玻片上。
⑨将切好的标本薄片迅速放入95％的乙醇固定液中进行3min的固定，再经过1min的流水冲洗，进入染色程序⑩按照：苏木素（1min）→流水冲洗（3min）→伊红染液（30s）→流水冲洗（1s）→85％乙醇→95%乙醇（10s）→无水乙醇①（30s）→无水乙醇②（1min）→二甲苯①（1min）→二甲苯②（1min）①将染色完成的标本使用树胶与盖玻片进行封片操作②将标本放到显微镜下，观察拍照记录10×、40×的镜下观3：实验结果：在镜下可观察到小鼠的肝细胞，细胞核被染成蓝色，胞质及细胞间隙被染成淡红色，同时可见大多数细胞中脂肪将细胞核挤到细胞一侧。
4：结果分析及讨论：①切片前先预调好厚度，提前准备好要使用的工具。
②切片时，观察窗不可打开过大，预防温度升高影响切片③在每一次切片之后都应该要注意清理碎屑，以防污染④严格把握染色时间，避免因染色时间太短或太长而影响实验观察5：思考题：①什么时候做冰冻切片：1：在手术:进行中，突然发现病人的病变原及诊断，判断病变是否为肿瘤2：判断肿瘤的良恶性2：了解淋巴结是否有转移的肿瘤细胞，或者转移的程度，以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其他的治疗措施。
冰冻切片的原理、流程和注意事项
冰冻切片的原理、流程和注意事项1冰冻切片的原理冰冻切片是指新鲜组织不经过任何固定、脱水、透明等处理，不需要石蜡包埋，直接在低温恒冷切片机冷冻后马上进行切片的一种方法。
冰冻切片具有操作简单、对环境污染小和对组织抗原损伤小的特点。
又因制作时间和材料有限，保证高质量的冰冻切片非常重要，直接影响病理诊断的正确率。
2冰冻切片的操作流程整体流程：送检和取材要求：•送检标本及时新鲜，组织无需固定，不能遇水，防止冰晶空洞等现象在切片过程中产生•取材的器械要保持干燥，取材时所取的范围应尽量避开出血坏死区域及脂肪区域•所取组织块大小应合适。
组织过大切片时阻力加大，难免产生刀痕及褶皱，加大了制片的难度包埋：•包埋剂一般使用OCT或普通胶水•包埋时将包埋剂涂抹均匀，并根据组织情况和医生的要求确定包埋方向，如管腔、皮肤、囊壁等要立埋•组织体积较小，可先挤入少许胶在包埋托上形成一个”平台“，再放入小组织进行包埋冰冻温度与时间：冰冻的温度与时间时制作冰冻切片的关键因素，需要根据组织的种类、厚度和大小来调节。
如果温度过低，会造成组织过硬、切片破碎；温度过高会造成组织硬度不够，难以切片切片和染色：•在组织和包埋机冻到发白后可以开始切片•是否使用防卷板可根据操作者的习惯，如使用防卷板，一般将其调整到与切片呈5度夹角•切片时右手摇轮转要力道均匀、柔和、缓慢，切片厚度掌握在5微米，左手持毛笔在切片形成时按住组织边缘，使其不发生卷曲•将切片展平粘贴在结晶载玻片上后，应当立即放入固定液中加以固定，如固定不及时，会发生细胞蜕变，切片中细胞核显示不清，呈”云雾状“表现冰冻切片HE染色流程：3冰冻切片的注意事项1. 组织取材要规范冰冻切片的组织要尽可能新鲜，不触碰谁，取材要及时，动作要迅速。
2.取材大小要厚薄适中在确保渠道主要病变的前提下，尽量避开钙化、坏死、脂肪等。
3. 保持取材台面和器材的干净，防止污染4. 组织表示及编号要明确5. 切片固定要及时制片过程要求快速冷冻、快速切片、快速固定。
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• 3.入苏木精染色2min，水洗。 • 4.1%盐酸酒精分化数秒，水洗。（0.5%氢氧化铵水溶液 返蓝数秒，水洗） • 5.伊红染液20s-1min，水洗。 • 6.70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇逐级脱水。 • 7.无水乙醇脱水2次。 • 8.二甲苯透明两次。 • 9.中性树胶封固。
六、冷冻切片的标准及染色的注意事项
四、冷冻切片的制作方法
• 10.也可不使用放卷板，用毛笔轻带组织下方的白边（OCT），随机 器的慢慢转动，用毛笔轻轻从上至下展开组织，使其平坦，组织齐 全满意时，用毛笔轻轻压住切片的下方，右手拿载玻片轻 轻平稳地压组织，使其平整地吸附在载玻片上，迅速放入固 定液，进入染色程序。 • 11.正确地调整使用冷冻切片机的放卷板是获得平展完整 冷冻切片的重要手段，放卷板的正确位置是，与切片刀的 刀刃平行并略微突出于刀刃。
• 冷冻切片的重要环节是温度。
• 1.冷冻前将恒温冷冻切片机的速冻头温度和箱内温度调整 到适宜的切片温度，一般情况下为-25~-18℃。 • 2.在标本托上涂一层冷冻包埋剂OCT，然后将取材后的新 鲜标本安放在标本冷冻托上并用OCT包埋剂覆盖标本。 • 3.组织较小或较薄，可先将OCT滴加在标本托上，冻成一 个小冷台，将组织放在小冷台上，再覆盖OCT冷冻，并用 冷冻锤轻轻压平。 • 4.标本冷冻完成后将标本托固定在切片机的机头上，调整 机头的位置使其恰好位于切片刀的后方。
冷冻切片制作技术
• • • • • • •
一、冷冻切片的意义 二、恒温冷冻切片机的结构与功能 三、冷冻切片组织的取材 四、冷冻切片的制作方法 五、冷冻切片的固定和染色 六、冷冻切片的标准及染色的注意事项 七、冷冻切片机的使用注意事项及日常维 护
一、冷冻切片的意义
• 1.快速诊断：冷冻切片可称之为病理科的急诊工作，常 用于临床手术科室快速组织学诊断，特别是在手术进行当 中取出病变组织，要求病理医师在很短的时间内做出良、 恶性的正确的诊断，为临床医师下一步的手术方案及治疗 提供指导。 • 2.显示组织中脂质 脂肪染色和神经组织髓鞘的染色等 • 3.显示酶活性 主要应用于肌肉活检的检查 • 4.免疫荧光的研究
二、恒温冷冻切片机的结构与功能
• 1.结构：恒温冷冻切片机主要由冷箱体及切片机构成，具 有快速双重制冷、自动除霜、自动消毒、负压等功能。 • 2.功能：利用物理降温的方法将新鲜组织标本冷冻使其产 生一定的硬度进行切片，与石蜡切片相比，冷冻切片不需 要脱水处理，因此制片速度快，是为术中提供快速病理诊 断的良好方法。 • LEICA CM1850
四、冷冻切片的制作方法
• 5.以粗切削的方式进行标本的粗切削至暴露标本的最大平 面，用毛笔清除机头、标本托及刀片上的组织碎屑。 • 6.确认切片的厚度，一般6~10um不等，根据组织的不同 可适当调整切片的厚薄。 • 7.放下放卷板使其位置恰好与刀片的刀刃完全平行并略突 出刀刃。 • 8.以转动大轮推进的方式进行切片，良好的切片将在放卷 板下方形成一张完整平坦无褶的薄片，若切片略有弯曲可 用小毛笔轻轻展平。 • 9.打开放卷板，用载玻片平稳的轻压组织，使其平整的吸 附到载玻片上。
制作人：许艳华
三、冷冻切片组织的取材
• • • • • • • • 1.标本必须新鲜无固定，无液体浸泡； 2.组织块大小厚薄适宜； 3.组织块未受挤压； 4.尽量保持组织的原有形态； 5.选择好组织切面； 6.保持组织的清洁； 7.切除不需要的部分，遇有脂肪组织要剔除； 8.组织内有异物一定要清除。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
四、冷冻切片的制作方法
• 一、冷冻切片的标准
• • • • • • • • • • 1.操作正确 2.切片完整 3.厚薄均匀 4.无褶无刀痕 5.组织内无冰晶 6.核质分明，染色适度 7.组织结构清晰 8.脱水透明洁净 9.封裱美观 10.时间迅速
六、冷冻切片的标准及染色的注意事项
• 二、冷冻切片染色的注意事项
• 1.提倡使用新鲜苏木精染液，每天过滤，防止沉渣及结晶 的形成，保证高质量的冷冻切片以利诊断。 • 2.室温过低时，影响着色，可适当加温促进染色。 • 3.盐酸酒精分化应适度，显微镜下控制，否则易造成核着色 不佳，染色质不清晰，影响诊断。
七、冷冻切片机的使用注意事项及日常维护
• 1.切片前，厚度应预先调制好，刀具提前安放好。 • 2.刀的角度调好位置，并多备几个冷冻托，以供速冻组织 块使用。 • 3.切片时，观察窗不可打开过大，以防温度升高影响切片。 • 4.每一例冷冻切片完成后都应及时清理冷冻组织碎屑，以 防造成污染。 • 5.切片污染是病理组织制片的大忌，在冷冻切片粗削后必 须用毛笔清洁碎屑，以防其他组织碎屑沾染到正在进行切 片的标本上。
五、冷冻切片的固定和染色
• 一、冷冻切片的固定、固定液的选择
• • • • • • • 1.丙酮液 2.10%中性福尔马林缓冲液 3.95%酒精 4.乙醚、纯酒精等量混合固定液 5.AF液 6.AFA液 可根据工作要求选择适合于本单位的固定液
五、冷冻切片的固定和染色
• 二、冷冻切片染色
• 1.冷冻切片应立即放入固定液中。 • 2.固定1min左右，水洗。