冰冻切片技术原理

四、冷冻切片的制作方法
• 10.也可不使用放卷板，用毛笔轻带组织下方的白边（OCT），随机 器的慢慢转动，用毛笔轻轻从上至下展开组织，使其平坦，组织齐 全满意时，用毛笔轻轻压住切片的下方，右手拿载玻片轻 轻平稳地压组织，使其平整地吸附在载玻片上，迅速放入固 定液，进入染色程序。 • 11.正确地调整使用冷冻切片机的放卷板是获得平展完整 冷冻切片的重要手段，放卷板的正确位置是，与切片刀的 刀刃平行并略微突出于刀刃。
• 一、冷冻切片的标准
• • • • • • • • • • 1.操作正确 2.切片完整 3.厚薄均匀 4.无褶无刀痕 5.组织内无冰晶 6.核质分明，染色适度 7.组织结构清晰 8.脱水透明洁净 9.封裱美观 10.时间迅速
六、冷冻切片的标准及染色的注意事项
• 二、冷冻切片染色的注意事项
• 1.提倡使用新鲜苏木精染液，每天过滤，防止沉渣及结晶 的形成，保证高质量的冷冻切片以利诊断。 • 2.室温过低时，影响着色，可适当加温促进染色。 • 3.盐酸酒精分化应适度，显微镜下控制，否则易造成核着色 不佳，染色质不清晰，影响诊断。
三、冷冻切片组织的取材
• • • • • • • • 1.标本必须新鲜无固定，无液体浸泡； 2.组织块大小厚薄适宜； 3.组织块未受挤压； 4.尽量保持组织的原有形态； 5.选择好组织切面； 6.保持组织的清洁； 7.切除不需要的部分，遇有脂肪组织要剔除； 8.组织内有异物一定要清除。
四、冷冻切片的制作方法
七、冷冻切片机的使用注意事项及日常维护
• 1.切片前，厚度应预先调制好，刀具提前安放好。 • 2.刀的角度调好位置，并多备几个冷冻托，以供速冻组织 块使用。 • 3.切片时，观察窗不可打开过大，以防温度升高影响切片。 • 4.每一例冷冻切片完成后都应及时清理冷冻组织碎屑，以 防造成污染。 • 5.切片污染是病理组织制片的大忌，在冷冻切片粗削后必 须用毛笔清洁碎屑，以防其他组织碎屑沾染到正在进行切 片的标本上。
• 冷冻切片的重要环节是温度。
• 1.冷冻前将恒温冷冻切片机的速冻头温度和箱内温度调整 到适宜的切片温度，一般情况下为-25~-18℃。 • 2.在标本托上涂一层冷冻包埋剂OCT，然后将取材后的新 鲜标本安放在标本冷冻托上并用OCT包埋剂覆盖标本。 • 3.组织较小或较薄，可先将OCT滴加在标本托上，冻成一 个小冷台，将组织放在小冷台上，再覆盖OCT冷冻，并用 冷冻锤轻轻压平。 • 4.标本冷冻完成后将标本托固定在切片机的机头上，调整 机头的位置使其恰好位于切片刀的后方。
四、冷冻切片的制作方法
• 5.以粗切削的方式进行标本的粗切削至暴露标本的最大平 面，用毛笔清除机头、标本托及刀片上的组织碎屑。 • 6.确认切片的厚度，一般6~10um不等，根据组织的不同 可适当调整切片的厚薄。 • 7.放下放卷板使其位置恰好与刀片的刀刃完全平行并略突 出刀刃。 • 8.以转动大轮推进的方式进行切片，良好的切片将在放卷 板下方形成一张完整平坦无褶的薄片，若切片略有弯曲可 用小毛笔轻轻展平。 • 9.打开放卷板，用载玻片平稳的轻压组织，使其平整的吸 附到载玻片上。
冷冻切片制作技术
• • • • • • •
一、冷冻切片的意义 二、恒温冷冻切片机的结构与功能 三、冷冻切片组织的取材 四、冷冻切片的制作方法 五、冷冻切片的固定和染色 六、冷冻切片的标准及染色的注意事项 七、冷冻切片机的使用注意事项及日常维 护
பைடு நூலகம்
一、冷冻切片的意义
• 1.快速诊断：冷冻切片可称之为病理科的急诊工作，常 用于临床手术科室快速组织学诊断，特别是在手术进行当 中取出病变组织，要求病理医师在很短的时间内做出良、 恶性的正确的诊断，为临床医师下一步的手术方案及治疗 提供指导。 • 2.显示组织中脂质 脂肪染色和神经组织髓鞘的染色等 • 3.显示酶活性 主要应用于肌肉活检的检查 • 4.免疫荧光的研究
二、恒温冷冻切片机的结构与功能
• 1.结构：恒温冷冻切片机主要由冷箱体及切片机构成，具 有快速双重制冷、自动除霜、自动消毒、负压等功能。 • 2.功能：利用物理降温的方法将新鲜组织标本冷冻使其产 生一定的硬度进行切片，与石蜡切片相比，冷冻切片不需 要脱水处理，因此制片速度快，是为术中提供快速病理诊 断的良好方法。 • LEICA CM1850
• 3.入苏木精染色2min，水洗。 • 4.1%盐酸酒精分化数秒，水洗。（0.5%氢氧化铵水溶液 返蓝数秒，水洗） • 5.伊红染液20s-1min，水洗。 • 6.70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇逐级脱水。 • 7.无水乙醇脱水2次。 • 8.二甲苯透明两次。 • 9.中性树胶封固。
六、冷冻切片的标准及染色的注意事项
制作人：许艳华
五、冷冻切片的固定和染色
• 一、冷冻切片的固定、固定液的选择
• • • • • • • 1.丙酮液 2.10%中性福尔马林缓冲液 3.95%酒精 4.乙醚、纯酒精等量混合固定液 5.AF液 6.AFA液 可根据工作要求选择适合于本单位的固定液
五、冷冻切片的固定和染色
• 二、冷冻切片染色
• 1.冷冻切片应立即放入固定液中。 • 2.固定1min左右，水洗。