卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟影响的

燕山大学

课程设计说明书

卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟影响的设计

学院（系）：

年级专业：0

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燕山大学课程设计（论文）任务书

说明：学生、指导教师、基层教学单位各一份。

年月日

2010-2011 秋季学期

生物工程专业课程设计

结题论文

卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟影响的设计

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摘要

卵丘细胞是影响卵母细胞成熟的重要因素，尤其是包裹在卵母细胞周围的卵丘细胞。本设计主要探讨卵丘细胞对牛卵母细胞体外成熟的影响。设计内容主要分为两部分：卵丘细胞存在对猪卵母细胞体外成熟影响的设计；卵丘细胞层数对猪卵母细胞体外成熟影响的设计。第一部分设计拟定探索出卵丘细胞的存在能够提高卵母细胞体外培养成熟；第二部分设计是在第一部分的基础上分析卵丘细胞层数对母细胞成熟的影响。通过本次设计，拟定探讨卵丘细胞的存在和不同形态对猪卵母细胞的成熟率的影响。为提高卵母细胞的质量，使体外受精、细胞核移植、转基因及胚胎干细胞等技术研究的顺利进行，而作为这些研究基础环节的卵母细胞体外成熟技术尤为重要。

关键词：卵丘细胞；猪卵母细胞；体外成熟

目录

第一部分文献综述 (1)

1.哺乳动物卵母细胞体外成熟研究进展 (1)

1.1卵母细胞体内成熟的生理机理 (1)

1.2卵母细胞体外成熟的机理 (1)

2. 影响猪卵母细胞体外成熟的因素 (2)

2.1影响猪卵母细胞体外成熟的生理性因素 (2)

2.1.1 卵巢来源猪的年龄、品种及健康状况 (2)

2.1.2所采集卵巢所处的性周期 (2)

2.1.3采集卵巢离体时间及保存温度 (3)

2.1.4采集卵母细胞的方法 (3)

2.2影响猪卵母细胞体外成熟的物理性因素 (3)

2.2.1 体外成熟培养条件 (4)

2.2.2体外成熟培养时间 (4)

2.2.3体外成熟培养方式 (4)

2.3影响猪卵母细胞体外成熟的化学性因素 (4)

2.3.1成熟培养基 (4)

2.3.2激素 (5)

2.3.3血清 (5)

2.3.4卵泡液 (6)

2.3.5细胞生长因子 (6)

3.卵丘细胞与卵母细胞关系的研究进展 (7)

3.1卵丘细胞与卵母细胞在卵母细胞成熟过程中的结构与功能联系 (7)

3.2卵丘扩展对卵母细胞体外成熟的影响 (8)

3.3卵丘细胞层数对卵母细胞体外成熟的影响 (9)

3.4去除卵丘细胞的卵母细胞在体外成熟过程中的超微结构变化 (10)

第二部分课程设计部分 (11)

1.实验材料 (11)

1.1 卵巢 (11)

1.2 实验用的仪器 (11)

1.3 实验试剂 (12)

2.方法 (12)

2.1 卵丘-卵母细胞复合体（COCs）的收集 (12)

2.2猪卵母细胞的分级 (12)

2.3卵母细胞的成熟培养 (13)

2.4各组卵母细胞的成熟观察 (13)

3. 设计 (13)

3.1卵丘细胞存在对卵母细胞体外成熟的影响 (13)

3.2卵丘细胞层数对卵母细胞体外成熟的影响 (13)

4.分析与总结 (14)

4.1卵丘细胞存在对卵母细胞体外成熟的影响 (14)

4.2卵丘细胞层数对卵母细胞体外成熟的影响 (14)

5.设计体会 (15)

参考文献 (16)

第一部分文献综述

1.哺乳动物卵母细胞体外成熟研究进展

1.1卵母细胞体内成熟的生理机理

卵母细胞成熟是指卵母细胞恢复和完成第一次减数分裂，进入并停滞于第二次减数分裂中期，此间伴随着胞浆成熟，即卵母细胞的成熟包括其核成熟和胞浆成熟两个方面[v]。核成熟是核膜破裂，同源染色体分离和排出第一极体；胞浆成熟是胞浆内各种蛋白组成达到一定水平及线粒体的有效重排。

1.2卵母细胞体外成熟的机理

卵母细胞体外成熟（IVM）是指在体外人工给定的条件下，哺乳动物次级卵母细胞经过一系列的生长发育最终形成有受精能力的成熟卵母细胞的过程。卵母细胞的体外成熟包括细胞核的成熟、细胞质的成熟、卵丘细胞的成熟、透明带的成熟以及其卵丘-卵母细胞复合体的发育成熟等一系列复杂的变化过程，主要表现在细胞核成熟和细胞质成熟两个方面。在形态学方面表现为纺锤体形成，核仁致密化，染色质高度浓缩成染色体，第一极体释放，细胞器重组，卵丘细胞扩展、膨胀和透明带软化等一系列生理变化[vii]。

细胞核成熟即卵母细胞恢复减数分裂，发生生发泡破裂(genninal vesiclebreakdown，GVBD)并发育到第一次减数分裂中期；与此同时，卵母细胞进一步跨越第一次减数分裂中期，排出第一极体(第一极体含有极微量的细胞质，不久就退化)并停止于第二次减数分裂的中期，直到受精(或激活)后才完成第二次减数分裂并排出第二极体。

细胞质的成熟包括细胞器的变化和细胞基质的变化，皮质颗粒在胞质合成后，逐渐迁移到质膜下的皮质区。高尔基复合体最初位于核的周围，成熟过程中移向皮质，皮质颗粒完全形成后，高尔复合体在皮质中消失。发育早期的线粒体为圆形或椭圆形等，主要分布于皮质部，卵母细胞成熟后，线粒体又移向核周围，形成幼稚型线粒体。随着卵母细胞的成熟，粗面内质网减少，而滑面内质网增多，到成熟晚期，滑面内质网变得很少。胞质成熟一个非常重要的特点是积累一些稳定的mRNA，并在卵母细胞成熟到一定阶段进行蛋白质翻译。