汞的形态分析

液相色谱-原子荧光光谱联用测定鱼样中甲基汞的含量

——LC-AFS法

1、目的

建立一个前处理操作方便，准确可靠的测定鱼类样品中甲基汞的方法

2、主题内容及适应性

本方法规定了鱼类中甲基汞测定的液相色谱-原子荧光光谱法，本法适用于鱼类中甲基汞的测定。

3、原理

样品中的甲基汞用提取液提取后，通过C18色谱柱，由于C18柱对无机汞、甲基汞和乙基汞的吸附能力不同，流动相将无机汞、甲基汞和乙基汞依次洗脱，洗脱的溶液首先和氧化剂混合，再和空气混合，通过紫外光照射，将有机汞都氧化成无机汞，最后混合还原剂和盐酸发生氢化反应，进入原子化器，与原子荧光联用进行数据收集和处理。

4、试剂与材料

除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相当者；液相色谱流动相所用溶剂均为色谱纯并经过0.45μm滤膜过滤。

4.1 试剂

4.1.1 流动相：5%乙腈jing（HPLC级）+0.5%乙酸胺+0.1%半胱氨酸，经溶剂过滤器过滤后，放在超声波清洗器中超声20min，除去气泡。

4.1.2 载流：7%HCl（优级纯）

4.1.3 还原剂：0.5%KOH +1.5% KBH4

4.1.4 氧化剂：0.5%KOH +1%K2S2O8

4.1.5 清洗液：CH3OH-H2O（1+1）

4.1.6 提取液：10%HCl+1%硫脲+0.15%KCl

4.2 标准溶液

4.2.1 标准储备溶液：用水配制1000μg/L的Hg2+-MeHg-EtHg的混合标准溶液100mL，保存于4℃冰箱。

4.2.2 标准工作溶液：标准工作液根据需要用混合液逐级稀释配置（混合液包括提取液：流动相：水=3：4：3）

5、仪器与设备

5.1 岛津高压液相泵-SAP10形态分析预处理装置-原子荧光光谱仪

5.2 溶剂过滤器

5.3 超声波清洗仪

5.4 旋涡混合器

5.5 离心机

6、样品处理

称取0.25g鱼样，加入2mL的提取液，旋涡混合5min，然后离心沉淀取上清液，再加2mL 提取液提取一次，两次提取液合并，再用过滤头过滤，然后用氨水中和PH至2-8（加氨水0.7mL），过C18小柱净化处理，再用4mL流动相分两次洗脱，每次2mL，最后定容至10mL 测定，为保护色谱柱再离心一次。

测定

7.1 仪器条件

7.1.1 液相色谱条件

色谱柱：C18柱150×4.6mm（i.d），5μm

流速：1mL/min

进样量：100μL

7.1.2形态分析预处理装置条件

泵速：50转/分

紫外灯（UV）：开

液体进样流程：氧化剂---空气---还原剂----载流

7.1.3 色谱-原子荧光联用条件

总电流：30mA负高压：270V

载气流速：600mL/min 屏蔽气流速：1000mL/min

7.2 样品测定

将处理好的样品溶液用进样针吸取0.3-0.5mL，采用手动进样器进行测定

8、定性标准

8.1.1 保留时间

待测样品中甲基汞的色谱峰保留时间与标准溶液相比变化范围应在±5%之内。

9 结果计算和表达

定量测定

用数据处理软件中的外标法，绘制标准工作曲线，将标准工作曲线保存，然后将样品峰分析处理，用外标校正，即可得到待测溶液中的甲基汞浓度，按式（1）计算可得试样中甲基汞

的浓度：

c= c0×V/m (1)

c—样品中甲基汞的浓度，μg/kg；

c0—待测液中甲基汞的浓度，μg/L；

m—取样量，g；

V—测定液体积，mL；

10 相对标准偏差、最小检出浓度与回收率

10.1 相对标准偏差（RSD）

将配好的标准混合溶液连续进样7针，然后用数据分析软件处理后分别得到无机汞、甲基汞、

乙基汞的相对标准偏差，要求三种汞形态的RSD<5%

RSD Hg2+ = 4.3% ；RSD MeHg = 3.4% ；RSD EtHg= 2.5%

10.2最小检测浓度

最小检出浓度的定义为：2倍的基线噪音乘以汞形态的浓度，然后除以汞形态的峰高，如公式（2）所示：

C最小检出浓度= 2σC0/H (2)

σ—基线噪音值

C0—待测液中汞形态的浓度，μg/L；

H—汞形态的峰高

三种汞形态的C

=0.2μg/L

最小检出浓度

10.3 甲基汞加标回收率

添加浓度为3.9μg/L时，回收率为：87%

添加浓度为7.8μg/L时，回收率为：88%