组织DNA提取原理和步骤 详细概述
提取dna的方法及原理
提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA提取是生物学和遗传学研究中的一项基础操作，它是获取DNA样本的过程。
DNA提取的方法有很多种，下面将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。
1. 高盐法高盐法是一种简单且常用的DNA提取方法。
其原理是利用高盐溶液中DNA与其他细胞组分（如蛋白质）之间的亲和性差异。
在高盐环境下，DNA更容易溶解而不与蛋白质结合，从而实现DNA的提取。
具体步骤包括细胞破碎、加入高盐溶液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA提取方法。
其原理是利用酚和氯仿两种溶剂的密度差异，将DNA从细胞中分离出来。
具体步骤包括细胞破碎、加入酚/氯仿混合液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法。
其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性差异。
DNA样本在经过一系列处理后，通过硅胶柱，DNA能够与硅胶颗粒结合，而杂质则被洗脱。
最后，通过洗脱DNA，即可获得高纯度的DNA。
硅胶柱法的优点是提取纯度高、操作简单，适用于分子生物学研究和临床诊断。
4. 磁珠法磁珠法是一种高效、快速的DNA提取方法。
其原理是利用带有亲和基团的磁珠与DNA之间的亲和性，实现DNA的选择性吸附和洗脱。
具体步骤包括磁珠悬浮液制备、样本加入、磁珠与DNA结合、磁珠分离、洗脱DNA等。
除了上述常用的DNA提取方法外，还有其他一些特殊的DNA提取方法，如酶解法、离心法、凝胶切割法等。
这些方法在不同的实验和应用中具有各自的特点和优势。
总结起来，DNA提取的方法多种多样，选择适合的方法取决于实验目的、样本类型和实验条件等。
无论采用哪种方法，都需要严格控制实验操作，以确保提取到高质量的DNA样本。
DNA提取的成功与否直接影响到后续的实验结果，因此在进行DNA提取时，需要注意样本的保存、细胞破碎的方式、溶解液的选择等因素，以获得可靠且高纯度的DNA。
dna粗提取和鉴定的原理
dna粗提取和鉴定的原理
DNA粗提取和鉴定主要是通过以下原理进行的：
1. 粗提取：DNA粗提取是将DNA从生物样本（如血液、唾液、组织等）中分离出来的过程。
最常用的方法是细胞裂解，以释放DNA。
细胞裂解可以通过物理方法（如机械切割、超声波
处理）或化学方法（如蛋白酶消化、洗涤剂裂解）来实现。
裂解后，可进行离心等步骤以去除细胞残渣和其他杂质，得到含有DNA的提取液。
2. 鉴定：DNA鉴定是通过比较DNA序列的相似性或特征来确定个体的身份、亲缘关系等。
主要有以下鉴定方法：
- 聚合酶链式反应（PCR）：PCR是通过复制特定DNA片段的方法，使得起始数量较少的DNA可以被扩增到足够数量以
进行分析。
PCR需要通过引物选择性扩增特定的DNA序列，
然后通过酶切、电泳等技术进行分析。
- DNA测序：DNA测序是确定DNA序列的方法。
常用的测
序技术有Sanger测序和下一代测序（如Illumina、Ion Torrent 等）。
测序后得到DNA的碱基序列，可以与数据库中的已知
序列进行比对，从而确定DNA的来源、身份等信息。
- DNA指纹技术：DNA指纹技术是根据DNA上的多态性位
点进行鉴定。
常用的方法是通过PCR扩增多个DNA位点，然后通过电泳等技术进行分析。
与其他个体相比较，每个个体的DNA指纹是独特的，可以用于身份鉴定、亲缘关系判定等。
这些原理在DNA粗提取和鉴定过程中相互作用，可以帮助科学家从生物样本中提取和鉴定DNA，为研究、法医学和医学诊断等领域提供有力的技术支持。
组织dna提取实验步骤
组织dna提取实验步骤-概述说明以及解释1.引言1.1 概述DNA提取实验是分子生物学中一项重要的实验操作，通过该实验可以从细胞或组织中提取出DNA分子，为后续的分子生物学研究提供基础材料。
DNA的提取可以应用于许多领域，如基因检测、遗传学研究以及犯罪调查等。
DNA提取实验通常包括几个关键步骤，包括实验准备、样品收集、细胞破碎和DNA提取步骤。
在实验准备阶段，我们需要准备所需的试剂、器材和实验条件等。
样品收集要求从既定的细胞或组织样品中采集到足够的细胞数量以及完整的DNA。
细胞破碎是为了破坏细胞膜，使DNA释放出来。
最后，通过一系列的化学处理和离心等步骤，可以得到纯净的DNA 样品。
DNA提取实验的成功与否对后续实验的结果具有重要影响，因此实验步骤的正确和严谨非常重要。
本文将详细介绍DNA提取实验的步骤及其操作要点，并对实验结果进行分析和讨论。
通过本实验的学习和掌握，读者将能够熟练进行DNA提取实验，并为科研工作和应用研究提供有力的支持。
总之，本文旨在介绍DNA提取实验的步骤和操作要点，帮助读者了解和掌握该实验的基本原理和操作流程，同时也展望了进一步的研究方向。
通过本文的学习，相信读者将能够更好地应用这一技术，为科研工作和生物学领域的发展做出贡献。
文章结构部分的内容如下:1.2 文章结构本文将按照以下结构进行撰写：1. 引言：首先对DNA提取实验的背景和意义进行概述，介绍该实验在生物学研究中的重要性和应用领域。
2. 正文：详细介绍组织DNA提取实验的步骤及各个步骤的操作方法和注意事项。
正文将包括以下几个部分：2.1 实验准备：介绍进行实验所需的器材和试剂准备工作，确保实验的顺利进行。
2.2 样品收集：说明如何选择合适的生物组织样品，并介绍收集样品的方法和注意事项。
2.3 细胞破碎：详细介绍如何破碎细胞以释放DNA，并介绍各种细胞破碎方法的选择和操作步骤。
2.4 DNA提取步骤：逐步介绍DNA提取的各个步骤，包括细胞裂解、蛋白质酶处理、DNA沉淀、洗涤和溶解等过程，重点强调每个步骤的关键操作和注意事项。
简述dna提取过程及原理
简述dna提取过程及原理
DNA提取是从细胞中分离纯化DNA的过程，常用于生物学研究、基因检测、法医学等领域。
DNA提取的原理基于细胞膜的破裂和DNA
的溶解、沉淀、洗涤等步骤。
DNA提取的一般步骤如下：
1. 细胞破裂，通过物理或化学方法破坏细胞膜，使DNA暴露在
溶液中。
物理方法包括机械剪切、超声波破碎等，化学方法包括洗
涤剂、酶等的使用。
2. 蛋白质消化，加入蛋白酶或蛋白酶K等，消化蛋白质，使其
不干扰DNA的提取。
3. DNA溶解，加入盐溶液和螯合剂，使DNA从蛋白质中解离出来。
4. DNA沉淀，通过加入酒精或其他沉淀剂，使DNA在溶液中沉
淀下来。
5. DNA洗涤，用酒精洗涤去除杂质，使DNA纯化。
6. DNA溶解，用缓冲液溶解沉淀下来的DNA，得到纯化的DNA 溶液。
DNA提取的原理主要依靠细胞膜的破裂和DNA与其他物质（如蛋白质、RNA等）的物理化学性质差异。
细胞破裂方法可以通过机械剪切细胞壁或超声波破碎细胞膜，使DNA释放到溶液中。
蛋白质消化通过加入蛋白酶或蛋白酶K等酶类，消化蛋白质，以防止其干扰DNA的提取。
DNA溶解过程中，盐溶液和螯合剂的加入可以使DNA 从蛋白质中解离出来。
DNA沉淀是通过加入酒精或其他沉淀剂，使DNA在溶液中沉淀下来。
洗涤步骤则利用酒精洗涤去除杂质，以获得纯化的DNA。
最后，通过溶解沉淀下来的DNA，得到纯化的DNA溶液。
总结而言，DNA提取的过程和原理主要包括细胞破裂、蛋白质消化、DNA溶解、DNA沉淀、DNA洗涤和DNA溶解等步骤，通过这些步骤可以从细胞中分离纯化DNA。
提取dna的原理及步骤
提取dna的原理及步骤提取DNA的原理及步骤。
DNA提取是分子生物学实验中的重要步骤，它是从细胞中分离出DNA并纯化的过程。
DNA提取的原理是利用细胞膜的特性，通过物理、化学或生物学的方法将DNA从细胞中释放出来，然后通过沉淀、洗涤和溶解等步骤将DNA纯化。
下面将详细介绍DNA提取的原理及步骤。
原理：DNA提取的原理主要包括细胞破裂、DNA释放和DNA纯化三个步骤。
首先，通过细胞破裂的方式破坏细胞膜，释放出细胞内的DNA。
然后，利用生物学或化学方法使DNA与其他细胞组分分离，最终通过沉淀、洗涤和溶解等步骤将DNA纯化。
步骤：1. 样品的准备，首先需要准备含有DNA的样品，可以是血液、组织、细胞等。
样品的质量和纯度对提取DNA的效果有很大影响，因此在提取之前需要对样品进行适当的处理和检测。
2. 细胞破裂，将样品加入到细胞破裂缓冲液中，通过机械破碎、酶解或超声波等方式破坏细胞膜，释放出细胞内的DNA。
破裂后的混合液中包含了DNA、蛋白质、RNA等多种细胞组分。
3. DNA沉淀，将破裂后的混合液加入到盐溶液中，盐的作用是中和DNA分子上的负电荷，使DNA分子间的静电排斥力减小，从而使DNA分子聚集成沉淀。
通过离心将DNA沉淀下来，去除其他细胞组分。
4. DNA洗涤，将DNA沉淀洗涤数次，去除盐溶液和其他杂质，使DNA更加纯净。
5. DNA溶解，最后将洗涤后的DNA沉淀溶解在适当的缓冲液中，得到纯化后的DNA样品。
通过以上步骤，可以从样品中成功提取出纯化的DNA。
DNA提取的关键在于细胞破裂和DNA的纯化，不同的提取方法会有所不同，但总体原理是相似的。
总结：DNA提取是分子生物学实验中的重要步骤，它是分离出DNA并纯化的过程。
DNA提取的原理是利用细胞膜的特性，通过细胞破裂、DNA释放和DNA纯化等步骤将DNA从细胞中提取出来。
在实际操作中，需要根据样品的不同选择合适的提取方法，并严格按照步骤进行操作，以确保提取出高质量的DNA样品。
DNA提取 Protocol
DNA提取是将生物体中的DNA分子从细胞或组织中分离出来，并将其纯化成为一个可进行分析的过程。
下面是DNA提取的实验原理、所需试剂和耗材、实验仪器、准备工作、实验方法、注意事项、常见问题及解决方法。
一、实验原理DNA提取的实验原理是基于DNA分子的特性，它具有以下几个特点：1.DNA分子是细胞核中的主要遗传物质，它与蛋白质等其他物质结合成染色体。
2.DNA分子具有极性，即亲水基团和疏水基团。
在细胞中，DNA分子的疏水基团与蛋白质结合，亲水基团暴露于水中。
3.在一定浓度的氯化钠溶液中，DNA分子会从细胞中释放出来，并与蛋白质等其他物质分离。
4.通过加入一些化学试剂，如苯酚、氯仿等，可以将DNA分子进一步纯化，去除蛋白质等杂质。
二、所需试剂和耗材1.试剂：o氯化钠：用于溶解细胞中的DNA分子。
o苯酚：用于沉淀DNA分子。
o氯仿：用于去除蛋白质等杂质。
o乙醇：用于沉淀和洗涤DNA分子。
o氢氧化钠、盐酸：用于调整pH值。
2.耗材：o移液器及枪头：用于精确加样。
o离心管和盖子：用于混合和离心溶液。
o过滤器：用于过滤溶液中的杂质。
o无菌水：用于稀释和配制溶液。
o无菌塑料袋：用于保存样品。
三、实验仪器1.实验室搅拌器：用于混合溶液。
2.高速冷冻离心机：用于离心和分离DNA分子。
3.水浴锅：用于加热溶液。
4.无菌工作台或超净工作台：用于进行无菌操作。
5.分光光度计：用于测量DNA浓度和质量。
6.电泳仪和电泳槽：用于分析DNA样品。
7.显微镜：观察细胞生长状态和DNA提取过程。
四、准备工作1.仔细阅读实验步骤和注意事项，了解所需的试剂和耗材及其使用方法。
2.准备好所需的试剂和耗材，并确保它们处于保质期内。
3.检查实验室内是否具备上述实验仪器，并确保其正常运行。
4.用70%乙醇擦拭实验台面，以确保无菌环境。
5.用高压蒸汽灭菌法灭菌所有的实验器具，包括离心管、移液器等，需在适当的压力和温度下进行灭菌处理，以消除所有潜在的污染源。
实验七 植物组织中DNA的提取
五、思考题：
核酸提取过程中的注意事项？
核酸提取过程中的注意事项： （1）避免过酸过碱或高温环境，合适的T：0－4℃，
而CTAB溶于异丙醇。
三、实验材料、仪器和试剂：
1、实验材料：三叶草
2、仪器：
(1)电热恒温水浴锅 (3)液氮罐 (2)离心机 (4)研钵等
3、试剂： （1）CTAB分离缓冲液：
2%CTAB，1.4M NaCl，
20mM EDTA，100mM Tris-HCl (pH8.0),0.2%巯基乙醇共100ml
pH4-9；
（2）防止机械力的切割作用，避免剧烈振荡；
（3）防止核酸酶的降解作用，可加入抑制剂－EDTA， 柠檬酸钠；
（4）整个操作步骤应尽量简化，缩短实验过程，降 低，减少核酸变性、降解、机械切割的机会。
终于下课了！！
5、用开口较大的滴管取出上层水相于另一离心管中，加入2/3体 积预冷的异丙醇，轻轻混匀，使DNA沉淀，并与CTAB分离。 （注意现象）
4、加入等体积的氯仿－异戊醇，轻轻摇动，混匀， 4000r/min，离心10分钟。
6、收集DNA：
（1）如呈可见的丝状DN状，再2000r/min离心2min，小心倒去 上清液。
（2）洗涤缓冲液：75%乙醇，100mM
乙酸铵共100ml
（3）氯仿：异戊醇＝24：1
（4）异丙醇
四、实验步骤：
（一）植物组织DNA的提取：
1、取8mlCTAB分离缓冲液加入离心试管中，于60℃水浴预热。 2、称取2g新鲜叶片于预冷的研钵中，加入液氮研磨细粉末。 3、将叶片粉末直接加入预热的CTAB分离液中，混匀，60℃水浴 保温30分钟。 4、加入等体积的氯仿－异戊醇，轻轻摇动，混匀，4000r/min， 离心10分钟。
dna提取课件
dna提取课件DNA提取课件DNA提取是生物学实验中常见的一项技术，它可以从细胞中分离出DNA分子，为后续的实验研究提供基础。
本文将介绍DNA提取的原理、步骤以及在科学研究和医学应用中的重要性。
一、DNA提取的原理DNA提取的原理基于细胞的结构和化学性质。
细胞是生物体的基本单位，其中包含了DNA分子。
DNA分子是由碱基、糖和磷酸组成的巨大分子，它们通过特定的键结合在一起，形成螺旋状的双链结构。
DNA提取的过程主要包括细胞破碎、蛋白质去除和DNA沉淀。
首先，细胞膜需要被破坏，以使DNA从细胞中释放出来。
这可以通过机械破碎、酶解或化学方法来实现。
接下来，蛋白质需要被去除，以避免对DNA的干扰。
最后，通过加入盐和酒精等物质，可以使DNA沉淀下来，从而分离出纯净的DNA。
二、DNA提取的步骤DNA提取的步骤可以分为样本准备、细胞破碎、蛋白质去除和DNA沉淀等几个阶段。
首先，需要准备样本。
样本可以是植物组织、动物组织、细菌或真菌等。
样本的选择和处理对于提取DNA的质量和效果至关重要。
接下来，进行细胞破碎。
这可以通过机械方法（如研磨或振荡）或化学方法（如酶解）来实现。
破碎后的细胞释放出DNA分子。
然后，进行蛋白质去除。
蛋白质会干扰DNA的提取和纯化过程，所以需要将其去除。
这可以通过加入蛋白酶等物质来实现。
最后，进行DNA沉淀。
通过加入盐和酒精等物质，可以使DNA分子沉淀下来。
沉淀后的DNA可以通过离心等方法分离出来。
三、DNA提取的重要性DNA提取在科学研究和医学应用中具有重要的意义。
首先，DNA提取是进行分子生物学实验的基础。
无论是基因克隆、PCR扩增还是基因测序，都需要从细胞中提取纯净的DNA。
DNA提取的质量和纯度直接影响后续实验的结果和可靠性。
其次，DNA提取在遗传学研究中起着关键作用。
通过提取DNA，可以分析基因的组成和结构，研究基因在遗传传递中的作用和变异。
这对于理解遗传性疾病的发生机制、进行基因治疗以及种群遗传学研究等方面具有重要意义。
提取dna原理
提取dna原理
提取DNA的原理是利用细胞壁、细胞膜的分解，进而释放细胞内的DNA分子。
DNA提取通常包括以下步骤：
1.细胞破破裂：通过物理方法（如高速离心、超声波处理或磨研等）或者化学方法（如微生物酸、氢氧化钠等）将样品中的细胞破开，使细胞壁和细胞膜破裂。
2. 细胞核的分离：混合分离物并添加盐和洗涤液，可以使细胞核膜破裂并释放DNA。
碱/酸（如NaOH或SDS）可以破坏核酸外的蛋白质纤维素和部分DNA 的二级结构，使DNA在水溶性并更易于提取。
3. DNA与其他生物分子的分离：通过不同的方法，如乙醇或异丙醇的加入，以沉淀DNA，或使用硅胶柱（如QIAgen或E.Z.N.A）或树脂（如渗透法）等吸附和分离DNA。
DNA提取可以用于各种需要DNA样品的实验，如PCR、测序、克隆等。
浅析DNA提取步骤及注意事项
浅析DNA提取步骤及注意事项DNA提取是分子生物学中的一个核心步骤，它涉及从生物样本中分离出DNA。
这个过程通常包括细胞裂解和核酸纯化两个主要阶段。
细胞裂解旨在破坏细胞膜和核膜，释放出DNA，而核酸纯化则是通过物理化学方法将DNA与其他细胞组分分离。
常用的DNA提取方法包括有机溶剂提取法、硅胶柱提取法和磁珠法。
在实际工作中，需要根据不同的样本类型和实验需求，选择不同的提取方法。
一、常见的DNA提取步骤（详细实验操作根据方法不同有所差异）1.细胞破碎：使用物理或化学方法破坏细胞膜和细胞壁，释放细胞内的DNA。
物理方法包括研磨、冻融循环等，化学方法包括使用去污剂（如SDS-十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K。
2.去除蛋白质和其他杂质：常用的方法包括酚氯仿抽提法、盐析法和使用硅胶柱层析法。
这些方法可以去除蛋白质、RNA和其他细胞组分，从而净化DNA。
3.DNA纯化：通过乙醇沉淀或使用硅胶柱等方法进一步纯化DNA，去除残留的杂质。
4.DNA浓缩：使用乙醇沉淀法或离心浓缩等方法将提取的DNA 浓缩到适宜的体积和浓度。
5.质量检测：通过紫外光谱吸收值（OD260/OD280比值）、凝胶电泳和qPCR等方法评估DNA的纯度和浓度。
二、特殊样本的提取方法对于特定类型的样本，如植物组织和血液，可能需要特别设计的提取方法。
例如，植物DNA提取中常用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵，Hexadecyl trimethyl ammonium Bromide)法，该方法利用CTAB与核酸形成复合物，在低盐溶液中沉淀，而在高盐溶液中解离，从而分离DNA和多糖。
血液样本中的DNA提取则可能采用非离子变性剂NP40和蛋白酶K的组合来裂解细胞和去除蛋白质。
注意事项：在进行DNA提取时，应注意避免核酸酶污染，确保样品新鲜并妥善保存，避免反复冻融，以保证DNA完整性，以及严格按照协议操作以保证结果的一致性和可重复性。
优化提取条件、样本预处理、温度控制和充分混匀或使用专用试剂盒等策略可以提高提取的效率和质量。
DNA提取原理和方法
DNA提取原理和方法DNA提取是指从细胞、组织或物质中分离纯化出DNA的过程。
DNA提取的目的是得到足够纯度和数量的DNA样品，以便进行后续的分子生物学实验如PCR、DNA测序等。
本文将详细介绍DNA提取的原理和常用方法。
1.细胞破碎：通过破坏细胞壁、膜结构和核膜来释放DNA。
这可以通过物理力学方法如机械剪切、研磨、高压破碎等实现，也可以通过化学方法如溶解细胞膜或核膜来实现。
2.蛋白质去除：DNA提取过程中要去除蛋白质、核酸酶等杂质，以保持DNA的完整性和纯度。
常用的蛋白质去除方法包括蛋白酶K处理、酸性酚/氯仿萃取等。
3.DNA纯化：通过离心、柱层析或溶剂沉淀等方法去除杂质，纯化DNA。
1. 高盐法（Salting out）：高盐法是最常用的DNA提取方法之一，适用于多种样品类型。
该方法利用高浓度盐溶液沉淀DNA，蛋白质和其他杂质则溶解于上清液中。
经过离心后，可得到沉淀的DNA。
该方法操作简单、成本低，提取的DNA质量较高。
2. 硅胶柱层析法（Silica column method）：硅胶柱层析法是一种常见的PCR级别DNA提取方法。
该方法利用硅胶柱吸附DNA，去除其他杂质。
样品首先与硅胶柱连接，经过洗涤和离心，DNA负载在硅胶柱上，然后通过洗脱液溶解DNA，最终得到纯化的DNA。
该方法提取的DNA质量较高，适用于小样本量、高纯度要求的实验。
3. 酚/氯仿法（Phenol/chloroform method）：酚/氯仿法是一种传统的DNA提取方法，适用于多种样品类型。
该方法通过酚与蛋白质结合，氯仿溶解蛋白质，并去除其他有机溶剂和杂质。
经过离心，得到上清液含有DNA，再经过异丙醇沉淀，可得到DNA。
该方法提取的DNA质量较高，但操作相对复杂且使用有机溶剂。
4.商业试剂盒：商业DNA提取试剂盒已被广泛使用，提供了便捷、快速、高效的DNA 提取方法。
这些试剂盒采用特定的缓冲液和离心柱，通过离心步骤去除杂质，并在柱上固定DNA，最后用洗脱液溶解DNA。
DNA提取过程及原理
DNA 提取过程及原理一、实验原理从细胞中别离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA，其中还含有大量RNA，即核糖核蛋白。
如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键。
盐溶法是提取DNA的常规技术之一。
在制备核酸时，通常是用研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。
利用DNA不溶于的NaCl溶液而RNA能溶于的NaCl溶液这一性质可以将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品破碎细胞液中分开。
别离得到核蛋白后，还需进一步将蛋白等杂质除去。
去除蛋白的方法有3种：①用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除去变性蛋白质。
用这种方法处理时，蛋白质停留在水相和氯仿相中间，而DNA那么溶于上层水相，用两倍体积95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。
②用十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性，从而使其与核酸别离，也可从材料中直接提取出DNA。
③用苯酚处理，然后离心分层，一样可以将DNA 与蛋白质别离开来。
这时DNA溶于上层水相，蛋白变性后那么停留在酚层内，吸出上层水相，参加两倍体积的95%乙醇即可得到白色纤维状DNA沉淀。
反复使用上述方法屡次处理DNA核蛋白溶液，就能将蛋白等杂质较彻底地除去，得到较纯的DNA 制品。
本实验采用CTAB法从植物幼苗中提取基因组DNA。
为了彻底除去DNA制品中混杂的RNA杂质，可用RNA酶进行处理。
另外，生物材料中还含有大量的脂肪物质和多糖，这些物质在用盐溶液别离核蛋白和用乙醇或异丙醇分级沉淀时即可被除去。
核酸纯化目标：纯化后的核酸样品中不应该存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的重金属离子；其它生物大分子物质如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降到最低程度；排除RNA分子污染。
操作考前须知：尽量简化操作步骤，缩短提取过程减少各种有害因素对核酸的破坏；减少化学因素对核酸的降解，一般pH4-10；减少物理因素如机械切力、高温对核酸的降解。
提取步骤：破碎细胞，去除与核酸结合的蛋白质、多糖和脂类分子，去除RNA，去除盐类、有机溶剂等杂质。
专业资料 DNA提取原理及步骤简述
DNA提取原理及步骤简述
DNA提取的步骤主要有裂解、结合、洗涤和洗脱。
以下是各步骤的作用原理：
1.裂解：这一步是必须的，因为DNA通常从细胞或其他生物
物质中被释放出来。
细胞裂解可以通过机械作用、化学作用、酶作用等方法实现。
其中，酶作用主要是通过加入溶菌酶或蛋白酶使细胞破裂，核酸释放。
蛋白酶还能降解与核酸结合的蛋白质，促进核酸的分离。
2.结合：磁珠表面带负电荷，磁珠buffer是高盐环境有带
正电荷的盐离子，样本被buffer影响，磷酸基团带负电荷。
3.洗涤：核酸的高电荷磷酸骨架使其比蛋白质、多糖、脂肪
等其他生物大分子物质更具亲水性，根据它们理化性质的差异，用选择性沉淀、层析、密度梯度离心等方法
可将核酸分离、纯化。
用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。
乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此
是理性的沉淀剂。
当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。
4.洗脱：加水或者EB破坏高盐环境，形成低盐环境，使
DNA从磁珠上脱落。
请注意，以上步骤的作用原理可能因具体实验条件和设备而有所不同。
在进行实验时，请根据具体情况调整步骤和参数。
组织DNA提取原理和步骤详细
4.冰无水乙醇（Absolute ethonal）和70%乙醇(70% Ethonal): ❖ 无水乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失去水而易于聚合；可除去残余的氯仿。 ❖ 70%乙醇洗涤可去除残余的盐离子，盐离子的存在会使之不易溶解，并可抑制酶反应。
5.TE 缓冲液 （TE Buffer）： 10mmol/L pH8.0 Tris-HCl 1mmol/L EDTA
各种碱基的紫外吸收光谱
2）荧光光度法 荧光染料溴化乙锭（ethidium bromide，EB），可嵌入到碱基平面，而发出荧光，且 荧光强度与核酸含量呈正比。 适用于低浓度核酸溶液的定量分析。（1-5ng）
EB与DNA的结合
500l全血提取的基因组DNA电泳 动物组织提取基因组DNA
纯度鉴定(purity identification)
取水相 加5M NaCl至终浓度0.3M NaCl, 加2.5倍体积 冰无水乙醇 ，摇匀
见白色沉淀,玻棒挑起
DNA 70%乙醇洗涤一次
沉淀溶于1ml TE 适当稀释
紫外分光光度计测A260nm,A280nm
定量
吸取DNA原液 μl，用ddH2O稀释至 μl ，在紫外分光光度计上测定A260nm及A280nm，计 算A260nm/A280nm比值及DNA浓度。一般以A260nm/280nm≈1.8为标准。 A260nm/A280nm若＜1.6，提示有蛋白质或酚污染，应进一步纯化。
应用 机体软组织
动物韧性组织 细菌、酵母 细胞混悬液 培养细胞 细菌、病毒 红细胞 细菌、酵母 组织、培养细胞 细菌、酵母
破裂细胞 、释放核酸
DNA酚抽提法示意图
DNA鉴定(DNA identification)
浓度鉴定(concentration) 纯度鉴定(purity) 完整性鉴定(integrity)
实验8植物组织总DNA的提取
04 结果与数据分析
DNA的检测与鉴定
检测方法
使用紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度，通过观察DNA在260nm和280nm 处的吸光度值，判断DNA的含量和蛋白质污染程度。
鉴定结果
提取得到的DNA样品在紫外分光光度计下显示出明显的吸收峰，说明成功提取出 了DNA。
DNA质量的评估
完整性评估
02
植物基因组DNA相对较大，由多个重复序列和基因组成。
03
通过破碎植物细胞，释放出细胞核中的DNA，再经过一系列的沉淀、洗涤和纯化 步骤，可以获得较纯的植物基因组DNA。
实验步骤概览
1. 准备实验材料和试剂。 2. 选取新鲜的植物组织，清洗并切成小块。 3. 用液氮或预冷的研钵将植物组织研磨成粉末。
干燥
将洗涤干净的DNA沉淀物 进行干燥处理，以便于后 续的溶解与储存。
DNA的溶解与储存
选择合适的溶解方法
根据实验要求选择适当的溶解方法，如水浴溶解、加热溶 解等。
控制溶解条件
确保溶解过程中使用的温度、时间和溶液浓度等条件适宜， 以避免对DNA造成损伤。
储存与保存
将溶解后的DNA溶液进行分装，并选择适当的储存容器和 条件进行保存，确保DNA的稳定性和长期保存。
实验步骤概览
4. 加入缓冲液和酶混合物，破碎细胞 并释放出细胞核。
6. 将上清液转移至新的离心管中，加 入等体积的酚-氯仿混合液，充分混匀。
5. 通过离心分离出细胞核和细胞碎片。
实验步骤概览
7. 通过离心分离出上层水相和 下层有机相。
8. 将上层水相转移至新的离心 管中，加入等体积的异丙醇，
沉淀DNA。
3
释放细胞核
破碎细胞组织后，通过洗涤、离心等方法将细胞 核内的DNA释放出来。
组织DNA提取步骤说明书
组织DNA提取步骤1. 组织培养细胞1）收集细胞并转移到1.5ml 离心管中。
如果是贴壁细胞，收集前用胰蛋白酶消化。
2）13,000-16,000 x g 离心10 分钟沉淀细胞。
3）移弃上清，剩下沉淀和10-50ul 残留液体。
4）加入200ul PBS 清洗细胞。
按步骤1.2）, 离心并弃去PBS。
使用涡旋振荡器剧烈振荡使细胞重悬。
注释：有些细胞（比如PC12）在核细胞裂解液中裂解不够充分，对这样的细胞，在进行步骤1.5)之前，可按下面操作先进行冻融：按照步骤1.4)清洗细胞；随即在液氮中冷冻。
然后95oC 水浴融解细胞。
如此循环4 次。
5）加入600ul 核裂解液，反复吸放以裂解细胞，直到可见的细胞块消失。
6）非必须：向核裂解物中加入3ul RNA 酶溶液，颠倒离心管2-5 次混匀。
37oC 孵育15-30 分钟。
室温冷却5 分钟后再进行下一步操作。
7）向室温的样品中加入200ul 蛋白沉淀液并使用涡旋振荡器高速剧烈振荡20 秒钟。
然后置冰上冷却5 分钟。
8）13,000-16,000 x g 离心4 分钟，形成白色致密的蛋白沉淀。
9）在一个干净的1.5ml 小离心管中，加入600ul 室温异丙醇。
小心移取上步中的上清（含DNA）至此小离心管，不要吸到蛋白沉淀。
注释：为避免DNA 被蛋白污染，保留剩余上清，上清勿吸取得过于彻底。
10）轻轻颠倒混匀溶液，直至白色线状DNA 形成块状沉淀。
11）13,000-16,000 x g 室温离心1 分钟。
可见白色小块状DNA 沉淀。
小心弃去上清。
12）加入600ul 室温70%乙醇，轻轻颠倒离心管数次清洗DNA 沉淀，13,000-16,000 x g 室温离心1 分钟。
13）使用巴斯德吸管或测序加样枪头小心吸走乙醇溶液，此时DNA 沉淀十分松弛，需格外小心，避免将沉淀吸入管中。
14）将离心管倒置在干净的吸水纸上，自然干燥10-15 分钟。
15）向离心管中加入100ul DNA Rehydration Solution，65oC 孵育1 小时溶解DNA。
DNA提取过程及原理
DNA提取过程及原理1.样品收集：收集待提取DNA的样品，可以是人体组织、血液、细菌培养物等。
2.细胞破碎：将样品中的细胞破碎开来，有多种方式可以实现，如机械破碎、化学破碎或热力破碎。
机械破碎通常使用搅拌器、超声波打碎器等设备，化学破碎则使用酶（如蛋白酶和蛋白酶K）或洗涤剂（如肌苷）、盐等化学试剂。
热力破碎则是通过高温处理来破坏细胞膜。
3.去除蛋白质：使用蛋白酶等酶类或具有蛋白溶解/去除功能的试剂，将破碎的细胞中的蛋白质降解或去除。
酶类操作在室温下进行，可选择随后使用室温下酶解、冷冻酶解或热酶解。
此步骤一般在细胞破碎后立即进行，以免DNA被酶降解。
4.DNA沉淀：加入盐溶液和异丙醇/冷乙醇等试剂，将DNA分离出来。
该过程中DNA会在溶液中以线状凝聚体的形式出现，通过离心将DNA沉淀到离心管底部。
5.洗涤：将DNA经过洗涤步骤，去除其他杂质。
洗涤可使用700-900mL/L的酒精或酒精/乙醚，其目的是去除未溶解的溶质和高浓度盐。
6.干燥：用乙醇或丙酮将样品溶解，并在低真空或加热条件下蒸发溶剂，使DNA干燥。
1. 为避免DNA在提取过程中受到污染，操作室需要经过RNAse的去污染处理，使用无腺病毒和试剂。
同时，使用无菌手套和无菌环境进行操作。
2. 提取试剂的选择：不同实验需求可以选择不同的DNA提取试剂盒，如常见的酚-氯仿法（phenol-chloroform extraction）或柱式DNA提取试剂盒（column-based DNA extraction kits）等。
3.注意细胞破碎方法的选择：细胞破碎时需根据待提取样品的特点选择合适的方法，如易破裂的细菌可以选择化学破碎，而较为坚硬的植物细胞则需要机械破碎。
DNA提取是分子生物学研究的基础工作之一、虽然有多种DNA提取方法和试剂可供选择，但其基本步骤和原理基本相同。
通过合理的操作和选择适合的提取试剂，可以获得高质量和纯度的DNA，为后续的分子生物学研究提供可靠的基础。
TRIZOl提取组织DNA详细步骤
Trizol提组织DNA按照RNA 分离操作方案在完全移去水样层后，匀浆中的DNA 存在于中间层和苯酚层中也可以被分离出来。
在沉淀和多次洗脱后，DNA 溶解在8 mM NaOH中。
用TRIZOL试剂从组织和培养细胞中完全回收的DNA 可以用来做样品中DNA 含量的测定。
同时抽提的基因组DNA 可以用于对Northern analysis的结果进行标准化，因为DNA 变异程度比总RNA 或组织重量要小。
[由于来源的不同，所得到的DNA 沉淀在进一步应用前可能需要额外的纯化步骤（例如苯酚抽提等等）。
实验所需但试剂未提供的物品：* 酒精、* 0.1 M柠檬酸钠（用10%酒精配制）、* 75%酒精、8 mM NaOH 如无例外，以下操作均应在15―30℃下完成。
组织：研磨组织，每50-100mg组织加0.75ml trizol1.DNA 的沉淀移除中间层上残余的水样层，用酒精从中间层和苯酚层中沉淀DNA 。
按最初匀浆化时每1 ml TRIZOL加0.3 ml的无水乙醇，反复颠倒来混合样品。
然后将样品置于15―30℃下2―3分钟，再在2―8℃下以不超过2,000×g的离心力离心5分钟沉淀DNA 。
小心移除水样层对抽提的DNA 的质量至关重要。
2.DNA 的洗脱移除离心后苯酚层中的上清液，如有必要，可以将其保留用于抽提蛋白。
用0.1 M柠檬酸钠（用10%酒精配制）洗涤DNA 沉淀两次。
按最初匀浆化时每1 ml TRIZOL加1 ml柠檬酸钠溶液。
每次洗涤时洗涤液要和DNA 沉淀在15―30℃下作用30分钟（期间周期性混匀）再在2―8℃下以2,000×g的离心力离心5分钟。
在两次洗涤完成后，用75%的酒精重悬DNA 沉淀（每1 ml TRIZOL加1.5―2 ml75%酒精），在15―30℃下放置10―20分钟（期间周期性混匀）然后再在2―8℃下以2,000×g的离心力离心5分钟。
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A260×稀释倍数×50＝
μg/ml
(A值等于1时，相当于50μg/ml双链DNA， 40μg/ml单链DNA或RNA， 20μg/ml单链寡核苷酸）
紫外分光光度法只用于测定浓度大于0.25ug/ml的核酸溶液。
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各种碱基的紫外吸收光谱
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2）荧光光度法 荧光染料溴化乙锭（ethidium bromide，EB），可嵌 入到碱基平面，而发出荧光，且荧光强度与核酸含量 呈正比。 适用于低浓度核酸溶液的定量分析。（1-5ng）
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EB与DNA的结合
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500l全血提取的基因组DNA电泳
动物组织提取基因组DNA
污染应降低到最低程度；
3 核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶
剂和过高浓度的金属离子； 4 其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。
上海交通大裂解细胞膜、核膜 DNP 苯酚、氯仿 DNA（RNA） RNA酶 Protase Ｋ 苯酚、乙醇
纯DNA
紫外定量
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DNA
70%乙醇洗涤一次 沉淀溶于1ml TE 适当稀释 紫外分光光度计测A260nm,A280nm
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定量
吸取 DNA 原液 μl，用 ddH2O 稀释至 μl ， 在 紫 外 分 光 光 度 计 上 测 定 A260nm 及 A280nm， 计 算 A260nm/A280nm 比 值 及 DNA 浓 度 。 一 般 以 A260nm/280nm≈1.8为标准。 A260nm/A280nm 若＜ 1.6 ，提示有蛋白质或 酚污染，应进一步纯化。
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浓度计算
DNA浓度（μg/ml）= A260nm× 50 × 稀释倍数 × 1/光径 *1OD 值相当于 50 μg/ml dsDNA，40μg/ml ssDNA 或 RNA， 2Oμg/ml寡核苷酸。
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试剂及其作用
1.裂解液（Homogenization buffer）: 10mmol/L pH8.0 Tris-HCl 1mmol/L EDTA 0.1mol/L NaCl 1%SDS EDTA:抑制DNA酶活性
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纯度鉴定(purity identification)
紫外分光光度法：
在260nm和280nm处测定DNA溶液的光吸收，纯的DNA，
A260与A280之比应在1.80；低于此值表明制备物中留有蛋 白质成份。高于此值表明有RNA的残留量。 纯的RNA A260与A280之比应在2.0。 A260/A280比值是纯度检测的重要指标。
每克组织 + ml裂解液 组织匀浆器，匀浆 取2.0ml匀浆，加等体积苯酚-氯仿，摇匀5min， 2,500rpm 10min 取水相
加等体积氯仿-异戊醇,摇匀5min, 2,500rpm 10min
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取水相 加5M NaCl至终浓度0.3M NaCl, 加2.5倍体积 冰无水乙醇 ，摇匀 见白色沉淀,玻棒挑起
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SDS是离子型表面活性剂，主要功能： ①溶解细胞膜蛋白而破坏细胞膜； ②解聚细胞中的核蛋白； ③与蛋白形成复合物
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2.苯酚-氯仿(Phenol-Chloroform): 苯酚：强蛋白变性剂 氯仿：蛋白变性剂，与水不互溶，与苯酚 互溶，可以带走残余的酚。
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各种组织细胞破碎方法
细胞破碎方法 应用
机体软组织
动物韧性组织 细菌、酵母 细胞混悬液 培养细胞 细菌、病毒 红细胞
Ⅰ机械法
1匀浆法
2捣碎法 3研磨法
Ⅱ物理法
1超声法 2反复冻融法 3冷热交替法 4低渗裂解
Ⅲ化学法
1有机溶剂
2去垢剂 3酶解法
细菌、酵母
组织、培养细胞 细菌、酵母
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破裂细胞 、释放核酸
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4 . 冰 无 水 乙 醇 （ Absolute ethonal） 和 7 0 % 乙 醇 (70% Ethonal): 无水乙醇会夺去 DNA 周围的水分子，使 DNA失去水 而易于聚合；可除去残余的氯仿。 70%乙醇洗涤可去除残余的盐离子，盐离子的存在 会使之不易溶解，并可抑制酶反应。
为什么苯酚要重蒸饱和后才能用于DNA的分离？ 苯酚在空气中经常被氧化生成醌，它能够产生自
由基，直接用于DNA分离，会使磷酸二酯键断裂，
造成DNA降解。
氧化苯酚需要经过高温重蒸以除去氧化物，并用
Tris-Hcl饱和酚，并调节至中性。
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3.氯仿-异戊醇（Isoamyl-alcohol）： 能降低分子表面张力，所以能减少抽提过 程中泡沫的产生，同时异戊醇有助于分相，使 离心后的上层水相、中层变性蛋白质及下层有 机溶剂相维持稳定。
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完整性鉴定(integrity identification)
凝胶电泳法：
基因组DNA电泳，在电场中泳动慢，如果发生降解，可出现电
泳图谱脱尾现象； 总RNA电泳，观测各条带的含量，提示是否存在RNA降解；如 加样槽中存在条带，可能是DNA污染。
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核酸的贮存——DNA保存 (storage)
1）短期贮存： 4℃或-20℃存放于TE（tris和EDTA）缓冲液中。 TE缓冲液的pH 与DNA 贮存有关， pH为 8时，可减少DNA
脱氨反应，pH低于7.0时DNA容易变性。
2）长期贮存：
TE缓冲液中-70℃保存数年；在DNA溶液中加一滴氯仿
可有效防止细菌和核酸的污染。
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方法：
组织DNA提取
Tissue DNA Extraction
/
[实验目的] 学习从生物组织中提取 DNA，为研究 DNA 的理化 性质与结构功能打好基础。
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提取DNA总的原则：
1 保证核酸一级结构的完整性；
2 其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的
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DNA酚抽提法示意图
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DNA鉴定(DNA identification)
浓度鉴定(concentration)
纯度鉴定(purity)
完整性鉴定(integrity)
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浓度鉴定 (concentration identification)
1）紫外分光光度法(ultraviolet spectrophotometery)