实验九人体X染色质的观察
人类X-染色质的观察
实验材料与药品
材料：女性口腔颊部粘膜细胞（ 材料：女性口腔颊部粘膜细胞（用牙 签刮取） 签刮取） 试剂：,1NHcl,2％硫堇 试剂： ％
实验步骤
取材
牙签刮取口腔粘膜 细胞， 细胞，涂于洁净 的载玻片， 的载玻片，凉干 或烘干（ ℃ 或烘干（40℃）
解离
加入1NHCl水解 加入 水解 10min(37-40℃) ℃
漂洗
流水淋洗、 流水淋洗、凉干
漂洗
染色
2％硫堇染色 ％ 15min（室温） （室温）
观察
流水淋洗、 流水淋洗、烘干 或自然干燥
作业
• 绘制粘膜细胞、指出X-小体 绘制粘膜细胞、指出 小体
人类X-染色质的观察 人类 染色质的观察
•
实验目的 实验原理 实验材料与药品 实验步骤 作业
•
•
•
•
实验目的
初步掌握观察和鉴别X-染色质的简 初步掌握观察和鉴别 染色质的简 易方法，识别其形态特征和所在部位。 易方法，识别其形态特征和所在部位。
•
实验原理
• 人类正常染色体组成： 人类正常染色体组成：男性为 22AA+XY;女性为 女性为22AA+XX性染色体。女 性染色体。 女性为 性染色体 性的两条X染色体，在间期有一条呈异固缩 性的两条 染色体， 染色体 形式，保持高度浓缩状态， 形式，保持高度浓缩状态，因此易于用适 当的染料加以显示， 当的染料加以显示，成为便于观察的性染 色质（ 小体 小体， 氏小体）。 色质（X-小体，Barr氏小体）。 氏小体
中山大学人类X染色质标本的制备与观察报告
人类X染色质标本的制备与观察张皓予15335203一、实验目的1.掌握人体口腔黏膜上皮细胞制备的方法。
2.正确识别巴氏小体的特征及其所在位置。
3.说明人体细胞中核内X染色体的数目和性染色体数目之间存在的关系。
二、实验原理X染色质呈现于女性体细胞间期细胞核内。
在口腔黏膜细胞、羊水脱落细胞、皮肤结缔组织等细胞中均可检出。
用苯酚品红改良染液染色后，便可观察到染色较浓，多位于核膜内侧缘，呈凸平形、卵圆形、扁平或三角形，直径约1μm大小的小体。
女性细胞核中出现率为40%~60%。
Barr和Bertram首先（1949）在雌性猫的神经细胞核中发现，在多数核中部有一个小的深染的小体，而在雄性猫的同样细胞中只能偶而观察到这种小体，此后许多人的研究指出这种与性别有关的两型现象在有袋类、偶蹄类、食肉类和灵长类等动物的多数组织细胞中存在，而在噬齿类中只在少数组织中可以观察到。
这种染色质小体现在称为“性染色质”(sex chromatin)，或称为“巴氏小体”(Barr body)。
这种小体常位于核膜的内表面，呈Feulgen阳性反应，表明是DNA的成分，有证据表明，性染色质的存在是由于在雌性哺乳动物核中存在两个X染色体，其中一个X染色体处于失活状态。
雄性个体只有一个X染色体。
因此原则上男性不应有性染色质。
但如果一个男人有XXY染色体，那就会有一个性染色质，虽然表现为男性。
同样，XXX的三体应当有两个巴氏小体。
因此，性染色质实质上是一个失活的X 染色体。
为什么失活的X染色体会以巴氏小体的形式显示出来?目前，已有许多证据证明，在雌性个体中那根失活的X染色体已经异染质化，成为功能性异染质。
使用放射自显影的方法已经证明，失活的X染色体的固缩周期与其它染色体是不同步的，它在S期是晚复制的。
此外，人们也已发现，晚复制的这根X染色体常位于核的边缘，这个位置也正好是巴氏小体出现的位置。
三、实验仪器与试剂1.仪器与用具显微镜，水浴锅，牙签，载玻片，盖玻片，镊子，吸水纸。
人X染色质的观察
实验原理 实验目的 主要仪器、材料及试剂 实验方法及实验步骤
思考题
实验原理
• 1949年，Barr和Bertram在雌猫神经细胞核 内发现了一种浓染小体，直径约1.5um，雄 猫神经细胞核中则没有这种结构。进一步 研究发现，除猫以外，其他雌性哺乳动物 及正常女性间期细胞核中均存在这种结构， 当时称之为Bar小体，又叫X染色质(X chromati)或X小体(X body)。
Lyon剂量补偿学说认为:女性有两条X染色 体，但所表达的绝大部分遗传物质与只有 一条X染色体的男性是一样多的。这是因为 女性的X染色体中只有一条保持活性，而另 一条以巴氏小体的形式存在，遗传上无活 性，结果X连锁基因得到剂量补偿。
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实验目的
第一,初步掌握观察和鉴别染色质的方法,识 别Barr小体的形态特征及所在部位． 第二， 了解Ｘ染色体失活的有关理论假说以及失 活染色体上的基因所控制的遗传性状的特 点。
（1） 清水漱口三次以上，用灭菌牙签的钝 头刮取口腔颊部细胞(将第一次刮取物弃 去），涂于干净的载波片上使成一薄层，空 气中干燥。
（2）固定：60%冰醋酸中固定20min. （3）染色：加几滴改良苯酚品红染液染色
10-15min.清水冲去浮色。
（4）镜检： 在低倍镜下，可见口腔粘膜上皮细胞核为圆形或 卵圆形．细胞质不着色；换油镜，选择典型的可 计数细胞进一步观察，可计数细胞的判断标准是： 核较大、染色清晰、轮廓清楚、无皱褶及缺损， 染色质为细丝状或均匀的细粒，核膜周围无细菌 污染：在可计数细胞内，仔细寻找X染色质：X染 色质的特征是：染色深，轮廓消晰，平凸形、半 圆形、扁平形或三角形，大小为1—1.5um．多位 于核膜内侧缘：统计X染色质的阳性率(至少应观 察100个细胞)。
人类X染色质的制备与观察
人类X染色质的制备与观察摘要X染色质（巴氏小体）是除一条X染色体外，其余的X染色体常浓缩成染色较深的染色质体。
本实验选取口腔粘膜细胞和毛囊细胞，通过解离、染色、压片等方法观察巴氏小体在细胞核内的分布及形态等特征，并且通过显微观察对巴氏小体进行计数，估计巴氏小体在不同性别和不同性格人体细胞中的出现率。
此外，了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点也是本实验的目的之一。
关键词X染色质（巴氏小体）口腔黏膜细胞毛囊细胞1.引言X染色质小体（巴氏小体）是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm、贴近于核膜边缘的染色小体。
巴氏小体在细胞分裂间期细胞核中出现异固缩现象，表现出浓缩、染色深、无活性的特点。
巴氏小体在不同细胞中呈现不同的形态，有卵圆形，三角形，月牙形，线性等。
一般来说，正常女性口腔粘膜细胞中约30-50%有一个巴氏小体，男性则低于1-2%。
1949年，加拿大学者Barr在雌性猫神经元核仁附近发现一种染色很深的小体，而在雄性猫中则极少出现，Barr称这种小体为“核仁随体”，并推测小体是由两条性染色体的异染色质衍化来的。
1955年，Barr在女性的口腔细胞中发现Barr body（巴氏小体），Moor与Barr 用口腔黏膜上皮细胞检测Barr body，制作出日后被广泛使用的颊涂片。
1959年，人们把性染色体异常造成的畸形与巴氏小体的研究联系起来。
1960年，Ohno和Hauschka发现，X染色质小体实际上是一条在细胞分裂间期，收缩的、异染色质化的X染色体，与核仁并无关系，也不是Barr推测的那样由两条性染色体各贡献一部分异染色质形成。
受此启发，Lyon（1961，1962）研究了小鼠X染色体连锁的皮毛颜色基因突变体，进一步指出异染色质化的X染色体可以来自父方，也可以来自母本；异染色质化的染色体在遗传上没有活性（后来的研究表明异染色质化的染色体中还是有部分基因保持活性）；这种随机失活是性别决定为XX-XY的动物为平衡两性之间性染色体上的基因剂量而采取的一种特殊的调控方式（因为Y染色体上的基因数量很少，因此雌性个体必须通过减少X染色体上基因剂量的方式使两性个体间基因剂量取得均衡），即所谓的“剂量补偿”，这是X染色体失活的意义所在。
人X染色质的观察
染色质是细胞间期核周期不同阶段的存在形式。染色质主 要有两种类型：在细胞分裂期凝缩而在间 期松散(成为弥散状)的称为常染色质；在所 有时期一直凝缩着的称为异染色质。
• 实际上异染色质又可分为两类：一类是在 各种细胞中都处于凝缩状态，最晚进行复 制的异染色质，这类异染色质不含有结构 基因，没有什么“功能”，称之结构异染 色质；另一类则是在有些细胞或在一定的 发育时期和生理条件下才表现为凝缩状态 的异染色质，这类异染色质虽含有结构基 因，但从生理上讲，绝大多数基因是失活 的，称为兼性异染色质。如X染色质就是一 种兼性异染色质
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主要仪器、材料及试剂
（１）材料 口腔上皮细胞
（２）主要仪器 显微镜、载玻片、盖玻片、牙签、滤纸、 吸管。
（３）主要试剂 ①固定液 ②染色液
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主要仪器、材料及试剂
（１）材料 口腔上皮细胞
（２）主要仪器 显微镜、载玻片、盖玻片、牙签、滤纸、 吸管。
（３）主要试剂 ①固定液 ②染色液
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实验方法及实验步骤
（1） 清水漱口三次以上，用灭菌牙签的钝 头刮取口腔颊部细胞(将第一次刮取物弃 去），涂于干净的载波片上使成一薄层，空 气中干燥。
（2）固定：60%冰醋酸中固定20min. （3）染色：加几滴改良苯酚品红染液染色
10-15min.清水冲去浮色。
（4）镜检： 在低倍镜下，可见口腔粘膜上皮细胞核为圆形或 卵圆形．细胞质不着色；换油镜，选择典型的可 计数细胞进一步观察，可计数细胞的判断标准是： 核较大、染色清晰、轮廓清楚、无皱褶及缺损， 染色质为细丝状或均匀的细粒，核膜周围无细菌 污染：在可计数细胞内，仔细寻找X染色质：X染 色质的特征是：染色深，轮廓消晰，平凸形、半 圆形、扁平形或三角形，大小为1—1.5um．多位 于核膜内侧缘：统计X染色质的阳性率(至少应观 察100个细胞)。
人类X染色质的制备与观察
人类X染色质的制备与观察摘要：人类X染色质（巴氏小体）是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。
根据X染色体失活与Lyon假说，雌性哺乳动物的两条X染色体中，只有一条X染色体有转录活性，另一条X染色体无转录活性，呈固缩状，形成X染色质。
失活发生在胚胎发育早期，且失活是随机的。
本实验以人口腔颊部粘膜细胞、发根毛囊细胞为材料制备X染色质标本，通过硫瑾染色、压片等方法观察巴氏小体。
本次试验的目的是掌握鉴定人类X染色质的方法，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位，了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
1.引言1.1巴氏小体人类有23对染色体，其中22对为常染色体，另一对为性染色体。
女性为XX，男性为XY。
X与Y染色体有一部分是同源的，在减数分裂时可以相互配对，其余部分则不同源。
Y 染色体含有很少的基因，而X染色体则含有大量的基因。
男性与女性的常染色体数目是一样的，所含有的基因数目也相等；但是女性含有两条X染色体，而男性一条X一条Y，因此女性性染色体所携带的基因剂量远高于男性，然而研究发现女性伴性遗传基因的表达剂量与男性是大体相同的，其原因可以用剂量补偿效应解释。
剂量补偿效应(dosage compensation effect)的定义: 在XY性别决定机制的生物中，使性连锁基因在雌、雄性别中有相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。
也就是说，在雌性和雄性细胞里，由X染色体基因编码产生的酶或其它蛋白质产物在数量上相等或近乎相等。
剂量补偿存在两种情况，雌性哺乳动物一条X染色体异染色质化(失活)，只有一条X 染色体具有活性，使雌雄动物虽然X染色体数目不同但基因产物的剂量是平衡的；另一种是X染色质的转录速率不同，如果蝇雌性细胞中两条X染色体都有活性，但它们的转录速率低于雄性细胞X染色体的转录速率。
人类X染色质（巴氏小体）制备与观察
⼈类X染⾊质（巴⽒⼩体）制备与观察⼈类X染⾊质（巴⽒⼩体）的制备与观察摘要巴⽒⼩体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染⾊体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态，贴近于核膜边缘的染⾊⼩体，在遗传学、细胞观察⽅⾯有重要意义。
实验中作者取⼈⼝腔颊部上⽪细胞与发根⽑囊细胞进⾏硫瑾染⾊操作，通过显微观察对巴⽒⼩体进⾏识别与计数，描述巴⽒⼩体的形态，并统计其在不同性别⼈体细胞中的出现率。
引⾔在哺乳动物体细胞间期细胞核中，除⼀条X染⾊体外，其余的X染⾊体失活并呈异固缩状态，此即为巴⽒⼩体。
⼜称X⼩体、性染⾊质，直径约1µm，通常位于间期核膜边缘。
1949年，加拿⼤学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现⼀种染⾊很深的⼩体，⽽在雄性猫中则极少出现[1]。
通常⼈类男性细胞核中很少或没有巴⽒⼩体，⽽⼥性有1个，性染⾊体异常的患者如XXY、XXYY、XXX、XXXY等，巴⽒⼩体的数量＝X染⾊体数量－1。
综合巴⽒⼩体与哺乳动物性染⾊体的剂量补偿效应，Lyon M．F 于1961年提出Lyon 假说，主要内容有：(1)正常的雌性哺乳动物两条X染⾊体只有⼀条在遗传上有活性，另外⼀条失活；(2)X染⾊体失活是随机的。
因此表达是随机的，结果在杂合⼦中会出现嵌合现象（mosaic）。
例外：有袋类失活的X染⾊体全部是⽗⽅的。
(3)失活发⽣在胚胎发育的早期，如⼈在受精后的16天（5000-6000个细胞时）。
⼀个细胞的⼀条染⾊体⼀旦失活，这个细胞的后代细胞中该染⾊体均失活。
Lyon假说虽然可以解释⼀些问题但不是全部，如⼈类中的44AXO型个体表现为Turner 综合症、44AXXY表现为Klinefelter综合症。
随着⽣物学和医学的发展⼈们已经认识到单条X染⾊体失活现象是普遍存在的，但失活的染⾊体上存在失活区和⾮失活的。
如⼈类中位于X染⾊体上的基因，G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶⾎第Ⅷ因⼦）等是⾮失活的，⽽Xg⾎型基因是失活的。
实验十 人类X-染色
六、作业
1. 观察男女性可数细胞各50个，分别计算 显示X-染色质细胞所占的百分比。 2. 观察中选绘4-5个典型细胞，示明X-染 色质的形态部位。如下图：
附：2%乳酸醋酸地衣红的制备方法：
• 取45 ml冰醋酸置于250 ml的三角瓶中， 瓶口加一棉塞，在酒精灯上加热至微沸， 缓慢加入2 g地衣红使其溶解，待冷却后 加入55 ml蒸馏水，振荡5-10分钟，过滤 到棕色试剂瓶中备用。或在烧瓶中放入 100 ml 45 %的冰醋酸，在酒精灯加热至 沸，慢慢溶入2 g地衣红，继续回流煮沸1 小时后过滤备用。 • 临用前，取等量的2 %乳酸醋酸地衣红与 70 %乳酸液混合，过滤后使用。
五、实验方法步骤
（二）毛发根部细胞涂片的制备
1. 取材：拔取一根带有毛根的头发，自基部截取 2cm左右置载片上。 2. 预染：在毛根部加一滴地衣红染液预染片刻。 3. 软化：再加一滴50%醋酸，低倍镜下观察，待 毛根稍软化后拔去毛干。 4. 染色压片：重新加一滴染液，复以盖片，在酒 精灯上轻微加热后静置5分钟，复以吸水纸用手 指轻度加压后待检。
实验十 人类X-染色质的观察 （X-Chromatin）
齐向英
一、实验目的
1、初步掌握X-染色质标本的制作方法；
2、识别人类细胞X-染色质的形态特征及
所在位置，为进一步研究人体染色体
的畸变与疾病提供参考条件。
二、实验原理
• [1949年Barr等发现，在雌猫的神经细胞 核内有一个浓缩的深染小体，在雌性的细 胞中没有。后来了解，在雌体细胞中的两 条X-染色体在间期是有一条，（或这条的 大部分）处于凝集而不活动状态，从而形 成了这种X-染色质（或称性染色质， Barr’s body）后来进一步发现]。
实验九 人体X-染色质的观察
2.莱昂氏假说 (Lyon hypothesis)
1961年 M.F.Lyon提出：
① 正常雌性哺乳动物体细胞中的两条 X染色体之一在遗传性状表达上是 失活的；
② 在同一个体的不同细胞中， X染色 体失活是随机而恒定的；
5. X染色质检查的应用
X染色质检查广泛应用于临床，作为性别鉴定 和性染色体异常的一种辅助诊断方法。 例如：克氏综合症（XXY）、特纳氏综合征 （XO） 、其它性染色体异常的患者如XXX， XXYY等。
三、实验材料、器具和药品
材料：女性口腔黏膜细胞、发根细胞。
器具：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌 牙签等。
药品： 60%醋酸 、45%的醋酸 、 石炭酸品红。
四、实验方法
1.口腔黏膜细胞X染色质（Barr小体）显示方法
⑴ 取材：漱口3~4次后，用无菌牙签从面颊部内侧刮取 口腔黏膜细胞，第一次的刮取物弃去，在原位重复刮 2~3下，涂在载玻片上； ⑵ 固定：加一滴60%醋酸固定5min，用滤纸吸去多余 醋酸； ⑶ 染色：加一滴石炭酸品红染色2min； ⑷ 制片：盖上盖片，垫上滤纸用拇指压片； ⑸ 镜检：低倍→高倍。
一、实验目的
1. 掌握观察与鉴别X染色质的简易方法； 2. 识别X染色质的形态特征及所在部位。
二、实验原理
1. X-染色质的发现
1949年M.L.Barr等研究发现： 雌猫神经元细胞间期核内——凝缩的深染小体。
进一步发现：其它雌性哺乳动物（包括人类）也同样有这种 结构。
而且在其它细胞的间期核中也可以见到这一结构，称之为 Barr小体（巴氏小体）。
六、作业
人体X-性染色质的观察一
6、Barr小体大小、形态、位置：
X-染色质的形态表现为一结构致 密的浓染小体，轮廓清楚。
大小约1μ m左右。 常附着于核膜边缘或靠近内侧。
形状有微凸形（馒头形）、 三角形、卵形、短棒形（长方形）、 圆球形等。
7、鼓槌状突出物
在血液的多形核白细胞分裂形成过 程中，裂出形成有一细缝连结的鼓槌 状突出物（ Barr小体）。
8、性别异常
正常女性口腔粘膜细胞中约有3050%的Barr小体。
男性中偶尔可见不典型者。大于3% 即性别异常。
Y小体：
用 荧 光 染 料 如 盐 酸 阿 的 平 、 QH 染色后，可在间期核中看到一个直 径约0.3微米的强荧光小体，即 Y小 体
或在中期核中看到Y染色体的长 臂发出强荧光。
三、实验步骤
一实验目的1通过实验初步掌握观察与鉴别x染色质的简易方法识别其形态特征及所在部位
实验四、人体X-性染色质的观察
一、实验目的 1、通过实验初步掌握观察与鉴别X-染
色质的简易方法，识别其形态特征及所在 部位。
2、为进一步研究人的染色体畸变与疾 病（性别异常）、鉴别胎儿性别（羊水细 胞涂片）提供参考条件。
1、核质呈网状细颗粒状分布； 2、核膜清晰，核膜无破损； 3、染色适度； 4、周围无杂菌。
四、作业
绘制口腔粘膜细胞图，示X-染色 质的形状和部位。
Hale Waihona Puke 二、实验原理1、性染色体：和性别决定有明显的
直接关系的染色体。
2、性染色质发现： 1949年Barr等发现，在雌猫的神经 细胞核内有一个凝缩的深染小体， 在雄性的细胞中没有。
3、X-性染色质形成：
进一步了解到，雌体细胞中的两 条X-染色体在间期时有一条处于凝集 而不活跃的状态（异固缩状态），形 成明显的染色中心，染色中心这就叫 X-性染色质、 又叫Barr小体。
人类性染色质体观察
姓名班级同组人科目遗传实验题目人类性染色质体观察组别第五组一、研究背景1949年，美国人Barr发现，雌猫神经元细胞核中在间期有一个深染的小体，而雄猫没有。
以后在其他哺乳动物中发现同样现象。
称为Barr’s body，巴氏小体。
研究发现巴氏小体的数目＝x染色体数-11961年Mary Lyon提出巴氏小体是通过异固缩形成异染色体而失活的X染色体，是达到雌雄两性X染色体上活性基因剂量平衡的一种补偿方式。
巴氏小体也被称为性染色质体或 X染色质体。
Lyon假说的要点：1. X染色体失活发生在胚胎发育的早期（受精后的16天左右，胚胎的细胞数达到5000～6000左右，植入子宫壁时），一旦失活，其上的大部分基因也失去表达活性；2. 每一体细胞中哪一条x染色体失活是随机的；3. X染色体的失活状态可以通过有丝分裂传递，即一旦某条X染色体失活，在其所有子细胞中都是同样一条X染色体失活。
修正：失活的X染色体上并非全部基因都呈莱昂化（失活）：①呈莱昂化（失活）的基因如G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶血Ⅷ因子）；这些基因表现了完全的失活，即XGXG≈XGY②非莱昂化基因：如Xg血型基因、MIC2抗原基因等，这些基因无论在有活性还是在无活性的X染色体上都能够表达。
即 XGXG≈XGY的2倍③不完全的剂量补偿效应：如 XSXS 的产物是 XSY 产物的1.3倍，而没有达到2倍。
二、研究目的1、确定巴氏小体的位置，观察巴氏小体的形态；2、尝试通过观察巴氏小体的有无进一步验证性别三、实验原理巴氏小体形态：在间期也表现为浓缩致密的、深染的结构，在DNA复制期表现为晚复制。
大小约1～1.5微米。
女性细胞中观察到的频率为13～39％，正常男性0～2％。
但是：1.生殖细胞中不发生X染色体失活。
2.失活的X染色体上有活性基因似乎是与失活基因相嵌存在。
因此，哺乳动物的雌性就X染色体上基因的作用来说是嵌合体。
四、实验器材1、女生的口腔上皮细胞2、载玻片姓名班级同组人科目遗传实验题目人类性染色质体观察组别第五组五、实验试剂95%乙醇水溶液、1 mol/L 的HCl、改良酚红液六、实验步骤1. 涂片(1) 清洁口腔:细胞提供者需重复两三次用水漱口,以便去掉松动的上皮细胞和细菌.(2) 然后用清洁灭菌的牙签或适当的刮片,从女性口腔两颊刮取上皮黏膜细胞, 涂抹在干净载玻片上,每次可涂1～3 片,涂抹范围大约1～2 张盖玻片大小.2. 滴加1 mol/L 的HCl水解10 min。
实验九 人类染色质体的检测
实验九人类染色质体的检测
一、实验目的
1．了解X染色质体形成的机理；
2．观察巴氏小体的位置和形态并绘制几种巴氏小体；
3．观察男性Y小体的特征。
二、实验准备
（按每实验小组2人准备）
1．仪器
显微镜1台、倒置显微镜一台（通用）、冰箱1台（通用）、荧光显微镜一台（通用）干燥箱1台（通用）
2．器械（均放在小磁盘内）
镊子2、解剖针2、剪子2、玻片架1、
3．药品（4人一套）
醋酸洋红、1mol HCl、0.05%吖啶橙（通用）、二甲苯（通用）[均分装在60ml滴瓶]、蒸馏水10L（通用）
4．耗材
载玻片4、盖玻片6、滤纸2、牙签2、口杯1、擦镜纸1本（通用）、
5．材料
口腔上皮细胞
三、实验原理
Lyon假说：
1．哺乳动物雌性动物个体中的2条X染色体必定有一条失活，成异固缩状态——X染色质体；
2．失活的X染色体来源是随机的，可能来自父亲，也可能来自母亲；
3．失活发生在4000~6000个细胞时。
一旦X染色体失活，不再发挥作用。
四、实验步骤
1．X染色质体的鉴定
清水漱口→用牙签刮取少许口腔上皮细胞→涂于干净玻片上→洋红染色20~30min→盖盖玻片→覆滤纸→压片→吸去多余染液→低倍观察→高倍镜下绘图→计算女性中有X染色质体的数目和百分率。
另：可分别拔取男、女各一头发→将发根毛囊细胞涂与干净玻片上，其他方法同上。
2．Y小体的观察
清水漱口→用牙签刮取少许口腔上皮细胞→涂于干净玻片上→滴一滴吖啶橙染液→迅速在荧光显微镜下观察Y小体→绘图
五、作业
1．绘女性X染色质体图
2．计算正常女性具有X染色质体的数目
3．描述Y小体的结构和特征。
9人类性染色质小体的制备与观察
人类在受精后的第16天（受精卵分裂到 5000-6000），植入子宫壁时发生lyon化。
剂量补偿：
由于雌性细胞中的两个X染色体中的一 个发生异固缩（也称Lyon化），失去活性， 这样保证了雌雄两性细胞中都只有一条X染 色体保持转录活性，使两性X连锁基因产物 的量保持在相同水平上。这种效应称为X染 色体的剂量补偿。
➢ 进一步研究发现，其他雌性哺乳动物（包括人 类）也同样有这种显示性别差异的结构。而且不 仅是神经元细胞，在其他细胞的间期核中也可以 见到这一结构，称之为巴氏小体，也称为X染色 质。大小在1µm左右，呈三角形、卵形、短棒形 等。
研究发现，间期核内X染色质的数目总是 比X染色体的数目少1。
进一步研究表明： X染色质是一条异染 色质化（兼性异染色质）的X染色体，在间 期复制要比其他的染色体晚。
知识回顾 Knowledge Review
祝您成功！
实验十 人类性染色质小体 的制备与观察
实验目的 实验原理 实验材料与药品 实验方法 注意事项 实验作业 思考问题
掌握莱昂假说和X染色体剂量补偿的含义。
掌握观察与鉴别X染色质的简易方法，识别 其形态特征及所在部位，为进一步研究人 体染色体的畸变与疾病提供参考依据。
发现
➢ 1949年，Barr在雌猫的神经元间期细胞核中首 次发现一种染色较深的浓缩小体，而在雄猫则没 有。
达，则产生橙黄色毛斑。
Y染色质
正常男性的间期细胞用荧光染料染色后， 在细胞核内可出现一荧光小体，直径为0.3-1μm左右，称为Y染色质。 Y染色质在间期 也呈现异固缩状态。Y染色体长臂远端部分 为异染色质，可被荧光染料染色后发出荧 光。这是男性特有的，女性细胞中不存在。 细胞中Y染色质的数目与Y染色体的数目相 同。
中山大学人类X染色质标本的制备与观察报告
人类X染色质标本的制备与观察张皓予1533５20３一、实验目的1.掌握人体口腔黏膜上皮细胞制备的方法。
２、正确识别巴氏小体的特征及其所在位置。
3、说明人体细胞中核内Ｘ染色体的数目与性染色体数目之间存在的关系。
二、实验原理Ｘ染色质呈现于女性体细胞间期细胞核内。
在口腔黏膜细胞、羊水脱落细胞、皮肤结缔组织等细胞中均可检出。
用苯酚品红改良染液染色后,便可观察到染色较浓,多位于核膜内侧缘,呈凸平形、卵圆形、扁平或三角形,直径约１μm大小的小体。
女性细胞核中出现率为40％~60%。
Baｒr与Berｔｒam首先(1949)在雌性猫的神经细胞核中发现,在多数核中部有一个小的深染的小体,而在雄性猫的同样细胞中只能偶而观察到这种小体,此后许多人的研究指出这种与性别有关的两型现象在有袋类、偶蹄类、食肉类与灵长类等动物的多数组织细胞中存在,而在噬齿类中只在少数组织中可以观察到。
这种染色质小体现在称为“性染色质”(sex ｃhｒomaｔin),或称为“巴氏小体”(Baｒｒboｄy)。
这种小体常位于核膜的内表面,呈Fｅｕlｇe ｎ阳性反应,表明就是DNA的成分,有证据表明,性染色质的存在就是由于在雌性哺乳动物核中存在两个X染色体,其中一个X染色体处于失活状态。
雄性个体只有一个X染色体。
因此原则上男性不应有性染色质。
但如果一个男人有XXY染色体,那就会有一个性染色质,虽然表现为男性。
同样,ＸXＸ的三体应当有两个巴氏小体。
因此,性染色质实质上就是一个失活的X 染色体。
为什么失活的X染色体会以巴氏小体的形式显示出来？目前,已有许多证据证明,在雌性个体中那根失活的X染色体已经异染质化,成为功能性异染质。
使用放射自显影的方法已经证明,失活的X染色体的固缩周期与其它染色体就是不同步的,它在S期就是晚复制的。
此外,人们也已发现,晚复制的这根X染色体常位于核的边缘,这个位置也正好就是巴氏小体出现的位置。
三、实验仪器与试剂１.仪器与用具显微镜,水浴锅,牙签,载玻片,盖玻片,镊子,吸水纸。
人类X染色体的制备与观察
人类X染色质的制备与观察摘要：本实验旨在掌握鉴定人类X染色质的方法，通过将人体口腔颊部粘膜细胞和毛囊细胞解离、染色等步骤制片，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位。
同时了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
1引言：1949年加拿大学者Barr和Bertram在一些雌猫神经原细胞核中, 发现在核膜内缘有一个染色较深的近似三角形的小体, 在雄猫中没有发现。
根据后来的深入研究发现，这个染色较深的小体和性别有关。
直到1971年巴黎会议上正式被命名为X 染色质。
以后的研究表明巴氏小体是一个异染色质化的失活的x 染色体。
在正常的男性细胞中只有一个X 染色体,是正常有活性的, 因此男性细胞中没有巴氏小体。
而在正常女性细胞中有二个X 染色体, 其中一个正常, 另一个异染色质化因此在女性细胞中可见到一个巴氏小体。
巴氏小体的个数= X 染色体个数一1 ，大都出现在核膜边缘。
性染色质在人类中，正常男性个体出现的比例约为1%，正常女性约为17-39%，在由性染色体数目异常而引起的性别畸型( X O 除外) 患者的细胞中, 可见到一个或一个以上巴氏小体。
因而通过巴氏小体检查可鉴别胎儿的性别和诊断性染色体异常引起的遗传疾病。
1961 年, 英国遗传学家Lyon 根据前人和自己的研究发表了莱昂假说, 明确提出了单个X染色体随机失活从而在两性间保证X 连锁基因转录水平一致的论点, 并为现在的科学家所普遍接受。
普遍认为, 巴氏小体的形成是与一个非编码RNA XIST 的大量且特异表达有关, 大量的XIST 顺式作用在其中一条X染色体上, 引发了该条染色质的广泛甲基化从而导致异染色质的形成, 使其上的基因出现表达沉默现象。
2 实验材料和方法：2.1实验材料和仪器：1）显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸、牙签；2）硫瑾染液；3）1mol/L的HCl、蒸馏水；4）口腔颊部粘膜细胞和毛囊细胞。
人类X染色质的制备与观察
人类X染色质的制备与观察摘要人类X染色质（巴氏小体）是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），贴近于核膜边缘的染色小体，其观察和研究在遗传学中具有重要意义。
（引用课件）本实验中，以人口腔颊部上皮细胞与发根毛囊细胞作为材料进行硫瑾染色。
通过实验，我掌握了鉴定人类X染色质的方法，在显微镜下观察了巴氏小体的所在部位和形态特征；并了解了X染色体失活的有关假说。
1.引言1949年，加拿大学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现一种染色很深的小体（现在称为巴氏小体），而在雄性猫中则极少出现。
此后的研究表明在哺乳动物体细胞间期细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体失活并呈异固缩状态，即为巴氏小体，又称X小体、性染色质，直径约1μm，通常位于间期核膜边缘，在DNA复制期表现为晚复制。
巴氏小体的数目=X染色体数目—1。
关于X染色体失活，Lyon M．F 于1961年提出Lyon假说，主要内容有：①雌性哺乳动物的两条X染色体中，只有一条X染色体有转录活性，另一条X染色体无转录活性，呈固缩状，形成X染色质。
②失活发生在胚胎发育早期。
③失活是随机的。
Lyon假说虽然可以解释一些问题但不是全部。
例如XO的Turner综合征患者会有各种异常。
多X患者还会有各种异常，而且X染色体越多症状越严重。
Lyon假说的补充：X染色体非随机失活。
生殖细胞中不发生X染色体失活。
失活的X 染色体上有活性基因与失活基因镶嵌存在。
因为X染色体的失活是个比较复杂的生物学问题，目前对这一现象仍然存在着一些难以解释的疑点。
在临床和法医学上可用巴氏小体鉴定性别。
在本次实验中，通过对口腔颊部上皮细胞与发根毛囊细胞的染色制片，可以观察巴氏小体在细胞中的分布和形态。
其参考值为：正常女性口腔粘膜细胞中，X染色质约15%左右，平均16.4%，不超过30～35%，仅含1个X染色质。
男性只有0～3%，平均0.7%。
2.实验材料2.1实验材料生物材料：人体口腔颊部上皮细胞，人体发根毛囊细胞。
人类性染色质检查与观察
仪器、材料
显微镜、染色缸、载玻片 试剂
实验步骤
X染色质制片与观察 1女性口腔粘膜细胞制片：清水漱口，用牙签的 钝头刮口腔颊部黏膜，将刮起的细胞均匀涂布在 干净的载玻片中间，不等晾干，立即将涂片放入 甲醇：冰醋酸=3：1的固定液中固定15分钟，晾 干，染色。 2染色：在涂片处加上数滴硫堇染液，染色5-10 分钟，用水冲洗，晾干，镜检。 3观察：用低倍镜观察紫蓝色的细胞核，看清楚 间期核的形态特征，找到X染色质。X染色质一般 紧贴在细胞核核膜内缘，大约1-1.5µm，染色深， 常呈三角形、馒头形、梭形或其他形态。
试验报告 性染色质标本 预习试验报告 实验考试
实验考试题
染色体标本制备时，低渗与固定有何意义？ 试述核型分析时应注意哪些问题？ 某男性口腔粘膜细胞检查X染色质和Y染色 质均为阳性，试分析其核型。
人类性染色质检查与观察实验目的了解人类间期细胞核中x染色质和y染色质的检查方法及意义实验原理人类女性口腔粘膜细胞的核膜内缘常可发现一个浓染小体而正常男性则无
人类性染色质检查与观察
实验目的
了解人类间期细胞核中X染色质和Y染色质 的检查方法及意义
实验原理
人类女性口腔粘膜细胞的核膜内缘常可发 现一个浓染小体，而正常男性则无。这一 浓染小体是一条X染色体失活异固缩形成 的，现在通称为X染色质或X小体。男性间 期细胞核中经特殊染色方法染色后在荧光 显微镜下可见一个0.3µm的强荧光小体， 为Y染色体长臂末端被荧光染料着色而成， 称为Y染色质。X染色质和Y染色质的检查 可作为性别测定的依据和性染色体数目异 常的一种辅助诊断方法。
注意事项
人类X染色质的观察
人类X染色质的观察摘要：本实验学习掌握掌握X染色质标本的制备、观察与分析方法，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位。
了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
前言：1949年，加拿大学者Barr等人在雌猫的神经元细胞核中首次发现一种染色较深的浓缩小体，而在雄猫则没有这种结构。
进一步研究发现，除猫外，其他雌性哺乳动物（包括人类）也同样有这种显示性别差异的结构。
而且不仅是神经元细胞，在其他细胞的间期核中也可以见到这一结构。
称之为巴氏小体，也称为X染色质。
巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。
Barr小体出现在哺乳动物雌性个体细胞的细胞核边缘，这主要是因为这条染色体处在失活状态所致。
Morishima 等利用放射性标记的方法证实了失活状态的性染色体与其他异染色质(heterochromatin)一样，在DNA 复制时总落后于其他常染色质，且大多出现在核膜边缘。
性染色质在人类中，正常男性个体出现Barr 小体的比例约为1%，正常女性的细胞只可能出现一个Barr 小体，比例为17～39%。
对于具有性染色体畸变的个体来说，Barr 小体出现的数目等于细胞内X 染色体的数目减1。
如下表rr小体)；间期细胞核中，Barr小体大小约1μ，呈三角形或椭圆形，紧贴核膜内缘，染色较深。
X染色质的数目是X染色体数目减一。
正常女性间期细胞中，X染色质阳性检出率为20%~70%，男性细胞中则平均低于1%（0~10%）。
但在Kliefelter综合征（47，XXY）患者细胞核中可见到X染色质。
因此，通过X染色质数目的检查，可以鉴定性别和性别畸形。
本实验取口腔粘膜细胞进行染色观察，正常女性口腔粘膜细胞中，X染色质约15%左右，平均16.4%，不超过30～35%，仅含1个X染色质。
人类X染色质的制备与观察
姓名系年级学号日期科目遗传学实验题目人类X染色质的制备与观察人类X染色质的制备与观察摘要：巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态，贴近于核膜边缘的染色小体，在遗传学、细胞观察方面有重要意义。
希望通过实验掌握鉴定人类X染色质的方法，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位；了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
本实验中通过取人口腔颊部上皮细胞与发根毛囊细胞进行硫堇染色、显微观察识别巴氏小体并进行计数，来描述巴氏小体的形态，并统计其在不同性别人体细胞中的出现率。
引言1949年，加拿大学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现一种染色很深的小体，而在雄性猫中则极少出现。
他以更多的动物组织做了深入的研究，结果发现有袋类、偶蹄类、食肉类、灵长类（包括人类）等动物的不同组织的体细胞中，同样显示这种性别差异。
Barr称这种小体为核仁随体，现在我们通常称之为巴氏小体。
Barr推论这种小体是由性染色体的异染色质衍化来的。
20世纪60年代前后，根据对性染色体异常病人的X染色体与X染色质数目的关系的研究发现，X染色质数等于一个个体的X染色体数减1。
进一步的研究表明，一个X染色质是一条异染色质化的X染色，在间期其DNA的复制要比其他的染色体晚（Morishima，1962）。
在一个个体中，究竟是来自父本还是来自母本的X染色体失活，则是随机的，这种随机失活是生物体内的剂量补偿机制（Lyon，M.，1962）。
从上述我们可以看出X染色质是一种包含结构基因的异染色质，这种异染色质通常称为兼性异染色质（facultative chromatin）。
因为X染色体的失活是个比较复杂的生物学问题，目前对这一现象仍然存在着一些难以解释的疑点。
例如：是否所有组织的全部细胞中，在任何时间都存在这种X小体？失活的X小体是如何进行复制的?虽然对X小体存在着一些不同看法，但目前X染色质的检查，在医学遗传的研究中，临床和法医诊断上仍具有一定的意义。
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形态：微凸形、三角形、卵形、短棒形等，常附于核 膜边缘或靠近内侧。
X可染编色辑p质pt
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箭头所示为巴氏小体
（女性细胞[左]中存可在编，辑p男pt 性细胞[右]中没有）
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从理论上讲，正常女性的间期细胞中都应该有一 个X染色质，但事实上由于个体的生理状态、染色 方法、染色技术以及X染色质在细胞核中的位置不 同，实际检查中不可能在每个细胞中都看到。
1961年 M.F.Lyon提出：
① 正常雌性哺乳动物体细胞中的两条 X染色体之一在遗传性状表达上是 失活的；
② 在同一个体的不同细胞中， X染色 体失活是随机而恒定的；
③ 失活现象发生在胚胎发育的早期。
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3.剂量补偿效应 (dosage compensation)
由于雌性体细胞中的两个X染色体中的一个发生异固缩（也 称为Lyon化现象），失去活性，这样保证了雌雄两性体细胞 中都只有一条X染色体保持转录活性，使两性X连锁基因产物 的量保持在相同水平上，这种效应称为X染色体的剂量补偿。
⑶ 染色：加一滴石炭酸品红染色2min； ⑷ 制片：盖上盖片，垫上滤纸用拇指压片；
⑸ 镜检：低倍→高倍。
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2. 发根毛囊细胞的X染色质（Barr小体）显示方法
⑴取材：拔取女性带毛囊细胞的头发，置于载玻片上； ⑵固定：在毛囊上滴加一滴45%的醋酸（或5mol/L盐酸）
固定5min，吸掉多余的醋酸； ⑶染色：用镊子将软化的毛囊剥下，加一滴石炭酸品红
Barr小体的数目 ＝ X染色体数目 － 1
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4.莱昂氏假说的修正（新莱昂氏假说）
（1）提出：1967年，美国的遗传学家Ohno 提出45，X≠46，XX；47XXY≠46，XY， 这两个不等式是否成立的疑问。
（2）按照莱昂假说应该是两者完全相同，但 45，X与47，XXY实际是两种综合症。
进一步发现：其它雌性哺乳动物（包括人类）也同样有这种 结构。
而且在其它细胞的间期核中也可以见到这一结构，称之为 Barr小体（巴氏小体）。
研究表明，巴氏小体是X染色体异固缩的结果，也称为X染 色质或X小体，在细胞周期中比有活性的X染色体复制稍晚。
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2.莱昂氏假说 (Lyon hypothesis)
染色2~3min； ⑷制片：盖上盖片，垫上滤纸用拇指压片； ⑸镜检：低倍→高倍。
五、观察结果
X染色质的辨别：
（1）低倍镜下检出典型的可数细胞，标准是：
① 核质呈网状或细颗粒状分布 ② 核膜清晰，核无缺损 ③ 染色适度 ④ 周围无杂菌
在高倍镜下进一步观察。
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Байду номын сангаас
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（2）高倍镜下观察X染色质的形态特征及所在部位：
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三、实验材料、器具和药品
材料：女性口腔黏膜细胞、发根细胞。
器具：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌 牙签等。
药品： 60%醋酸 、45%的醋酸 、 石炭酸品红。
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四、实验方法
1.口腔黏膜细胞X染色质（Barr小体）显示方法
⑴ 取材：漱口3~4次后，用无菌牙签从面颊部内侧刮取 口腔黏膜细胞，第一次的刮取物弃去，在原位重复刮 2~3下，涂在载玻片上； ⑵ 固定：加一滴60%醋酸固定5min，用滤纸吸去多余 醋酸；
正常女性间期细胞核中X染色质阳性率一般约为 10~30%，有的可高达50%以上，在男性间期 细胞核中则平均低于1%。
六、作业
1. 观察50个女性可数的细胞，并计算巴氏小 体细胞所占的百分比。
2. 绘制3个典型的显示X染色质的细胞。
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实验九 人类X染色质的观察
哈尔滨师范大学 生命科学与技术学院 遗传学教研室 2010年3月
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一、实验目的
1. 掌握观察与鉴别X染色质的简易方法； 2. 识别X染色质的形态特征及所在部位。
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二、实验原理
1. X-染色质的发现
1949年M.L.Barr等研究发现： 雌猫神经元细胞间期核内——凝缩的深染小体。
（3）修正：1974年，失活的X染色体上并非 全部基因都呈莱昂化失活。
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5. X染色质检查的应用
X染色质检查广泛应用于临床，作为性别鉴定 和性染色体异常的一种辅助诊断方法。 例如：克氏综合症（XXY）、特纳氏综合征 （XO） 、其它性染色体异常的患者如XXX， XXYY等。
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