天然产物化学实验之植物原花色素与蛋白质的络合反应

天然产物化学实验

植物原花色素与蛋白质的络合反应

一、实验目的：

本实验的目的是考察植物中不同原花色素的差异，并间接论证其与生物酶的结合性、生物膜的透过特性。以进一步了解植物原花色素的特性。

二、实验原理：

植物原花色素与蛋白质结合能力的大小可用平衡渗析法

（Equilibrium Dialysis）、微比色

法（Microcalorimetry）、酶抑制法（Enzyme Intibition）、以及蛋白质沉淀法（Protein Precipitation）等方法测定[1]。此外，紫外吸收-沉淀法[2]是研究植物多酚与蛋白质反应能力的一种简便、快速、有效的方法。

利用植物原花色素含有大量的活性酚羟基能与蛋白质分子上的羧基等发生络合反应。依据分子大小差异、羟基量不同、以及分子量分布不同，它们的络合能力与反应强度不同。依据这一原理。

实验利用不同的原花色素试样，配制成不同浓度，在不同pH条件下，与不同浓度的明胶发生络合反应。然后通过高速离心，使与原花色素-明胶络合物沉降除去，测定上清夜中存留的原花色素含量以确定二者的反应能力。

依据朗伯-比尔定律[3]： A= εCL

对同种物质，由于ε与L相同，A与C成线性关系，测定反应前原花色素的A0值，再测定反应后离心液中原花色素的A1值，则原花色素与明胶反应沉淀的多少可用相对沉淀率求出：

R A=（A0- A1）/ A0×100%

R A值越大，沉淀越多，表明原花色素与明胶的结合越强。

三、材料、试剂与仪器：

3.1材料

3.2试剂：

1)、明胶蛋白质（10分子量）作为蛋白质代表物或模型化合物。

2)、磷酸盐缓冲液。

3.3仪器：

1)、高速离心机；2)、pH-3型酸度计；3)、紫外-可见分光光度计（带扫描）

4)、恒温水浴震荡器。

四、实验内容与方案：

4.1、预备实验

目的：探索有关反应条件如：（1）原花色素浓度、（2）明胶浓度、（2）最大吸收波长（λmax）以选取实验的较优条件。

方案：

4.2、正式实验

目的：用A组试样作材料，研究它们与明胶蛋白的络合反应的特性，重点考察分子量大小、酚羟基多少、类型与反应的关系。

方案：

五、结果与讨论：

请根据实验情况来进行讨论

六、结论：

请根据实验情况来下结论

七、参考文献

略