实验五实验六酵母菌形态观察显微计数法
酵母菌大小的测定及计数实验流程
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微生物学实验教程
微生物学实验内容实验一 . 显微镜的使用及细菌的简单染色实验二 . 细菌的革兰氏染色实验三 . 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别实验四 . 酵母菌的数量测定实验五 . 酵母菌的大小测定实验六 . 微生物菌落的观察实验实验七 . 霉菌的形态观察实验八 . 培养基的制备与灭菌实验九 . 放线菌的形态及菌落特征的观察实验十 . 微生物的纯种分离培养实验一 . 普通光学显微镜的使用一、目的要求1. 学习并掌握油镜的原理和使用方法。
2. 复习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。
二 . 显微镜的基本结构及油镜的工作原理现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。
它们由机械装置和光学系统两大部分组成。
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。
而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。
与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，这主要有如下二方面的原因：1. 增加照明亮度油镜的放大倍数可达 100Χ，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。
从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。
所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的油镜（通常用香柏游，其折射率 n=1.52）。
2. 增加显微镜的分辨率显微镜的分辨率或分辨力 (resolution or resolving power) 是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。
从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，可表示为：（公式 P16 ）式中λ= 光波波长；NA=物镜的数值孔径值。
光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（ 0.4--0.7μm），而数值孔径值则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率，可表示为： NA=n × sin α式中α为光线最大入射角的半数。
实验五实验六酵母菌形态观察显微计数法
每毫升菌液中的菌数 = A ——×25（16）×10×1000×B 5
A：5个中方格中的酵母菌数 B：稀释倍数
三、实验材料
1.菌种：啤酒酵母 2.染色液：0.1%吕氏碱性美蓝 3.器材：载玻片，显微镜、血球计数 板、盖玻片 、吸水纸、计数器、滴 管、擦镜纸。
四、内容及方法
（一）.酵母菌个体形态观察
（二）、显微镜直接计数法
1.镜检计数室，熟悉计数器的使用方法 2.对稀释5倍的啤酒酵母悬液进行计数
3.注意：
（1）血球计数板必须洗干净，勿刷
（2）注意勿损坏计数器
计数原则： 1、 稀释浓度要合适，每个小方格5-10个 酵母菌 2、压线的酵母菌，一般计上和右 3、对于出芽的菌体，如果芽体超过母体的 一半，算2个菌
实验五 实验六
酵母菌的形态观察及死活 细胞鉴定 微生物显微镜直接计数法
一、目的要求
1.学习自制水浸片法观察酵母菌的方法 2.观察酵母菌形态和出芽生殖方式 3.学习并掌握区分酵母菌死活细胞的染色方法 4.了解血球计数板的构造、计数原理和计数方 法，掌握显微镜下直接计数的技能
二、实验原理
1.酵母菌可以用单纯的水制成水浸片观察， 也可以用染色液制成水浸片观察。 2.美兰是一种无毒性染液，有两种形态 还原型：无色 氧化性：蓝色 活细胞因新陈代谢而有强还原力使美兰从氧 化型变为还原型；死细胞无此能力，而被美 兰染成蓝色。以此可以区分死活细胞。 3.测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用 的有显微直接计数法和平板计数法。
五、实验结果
1.酵母个体形态，芽体（绘图） 2.计算死活细胞的比率，说明吕氏碱性美 蓝染液浓度和作用时间对死活细胞数的 影响
3.计数结果
酵 母 个 体 形 态
微生物实验@实验6 霉菌的形态观察
手术刀取菌丝，在50%乙醇中浸泡一下，然 后置于染液中，用手术刀和回形针小心将菌 丝分开，去掉培养基，盖上盖玻片，用低倍 镜和高倍镜镜检。
透明胶带法
载玻片培养观察法
搭片法培养霉菌
霉菌的有些结构在制片过程中易被破坏，影响
观察，可采用载片培养法。此法便于直接在显 微镜下观察，尤其适用于根霉的假根、曲霉的 足细胞及分生孢子链等结构的着生和生长情况 的观察。并且还可以在同一标本上观察到微生 物发育的不同阶段的形态。
观察黑根霉
菌丝情况和 子囊孢子情 况（着重辨 认孢子囊、 包囊梗、假 根）：
观察黑曲霉菌丝
分隔情况和分生 孢子着生情况 （着重辨认分生 孢子梗、足细胞 和分生孢子）：
观察青霉菌
丝和分生孢 子着生情况：
1.单轮生青霉群；2.对称二轮 生青霉群；3.多轮生青霉群； 4.不对称生青霉群
五、实验结果
实验三
霉菌的形态观察
一、实； 了解常见霉菌（根霉、毛霉、曲霉、青 霉）的基本形态特征；
学习掌握霉菌染色的基本方法。
二、实验原理
霉菌菌丝比较粗大（菌丝和孢子的直径达到
3~10μm），通常是细菌菌体宽度的几倍至 几十倍，因而可用低倍、高倍镜观察。霉菌 菌丝细胞容易收缩变形，孢子容易飞扬，在 制备霉菌标本时，常用乳酸石炭酸溶液作为 介质，具有不使细胞变形，可杀菌防腐，不 易干燥，能保持较长时间等优点。若加入棉 蓝，又具有一定的染色效果。
六、问题与讨论
1.为何要用乳酸石炭酸棉兰染液对 霉菌进行染色?
三、实验材料
• 菌种：根霉（Rhizopus sp.）、毛霉（Mucor sp.）、曲霉（Aspergillus sp.）、青霉 （Penicillium sp.）的平板培养物，
实验六 微生物细胞大小的测定
实验六微生物细胞大小的测定一、目的要求1.学会测微尺的使用和计算方法。
2.掌握酵母菌细胞大小测定的方法。
二、基本原理微生物细胞大小, 是微生物的形态特征之一,也是分类鉴定的依据之一。
由于菌体很小, 只能在显微镜下测量。
用来测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片。
一般将1mm等分为100格（或2mm等分为200格）,每格长度等于0．01mm（即106μm）。
是专用于校正目镜测微尺每格长度的。
目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片, 其中央刻有精确的刻度, 有等分50小格或100小格两种, 每5小格间有一长线相隔。
由于所用接目镜放大倍数和接物镜放大倍数的不同, 目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同, 因此,目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小, 在使用前必须用镜台测微尺进行校正, 以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值, 然后才可用来测量微生物的大小。
三、器材枯草芽孢杆菌染色玻片标本, 目镜测微尺, 镜台测微尺, 显微镜, 擦镜纸, 香柏油等。
四、操作步骤1. 目镜测微尺的标定(1)放置目镜测微尺取出接目镜, 旋开接目镜透镜, 将目镜测微尺的刻度朝下放在接目镜筒内的隔板上（图Ⅳ-4, B）, 然后旋上接目透镜, 最后将此接目镜插入镜筒内（图Ⅳ-4, C）。
(2)放置镜台测微尺将镜台测微尺置于显微镜的载物台上, 使刻度面朝上。
(3)校正目镜测微尺先用低倍镜观察, 对准焦距, 当看清镜台测微尺后, 转动接目镜, 使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行, 移动推动器, 使目镜测微尺和镜台测微尺的某一区间的两对刻度线完全重合, 然后计数出两对重合线之间各自所占的格数（图Ⅳ-6）。
根据计数得到的目镜测微尺和镜台测微尺重合线之间各自所占的格数, 通过如下公式换算出目镜测微尺每小格所代表的实际长度。
目镜测微尺每小格长度（μm）=同法校正在高倍镜和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。
微生物实验思考题南京工业大学生物与制药工程学院
微⽣物实验思考题南京⼯业⼤学⽣物与制药⼯程学院实验⼀细菌的简单染⾊和细菌形态的观察⼀、实验原理简单染⾊采⽤⼀种染料对菌体进⾏染⾊，常⽤结晶紫、美蓝、碳酸复红等碱性染料。
染⾊后，菌体与背景形成鲜明对⽐，在显微镜下很容易被识别。
通过简单染⾊⽅法可以观察细菌的菌体形态特征和菌体的排列⽅式。
观察菌体形态简单染⾊（只⽤⼀种染料）观察菌体排列⽅式染⾊⽅法⾰兰⽒染⾊鉴别鉴别染⾊抗酸性染⾊（利⽤两种染料）芽孢染⾊观察特殊结构荚膜染⾊鞭⽑染⾊⼆、实验步骤：涂⽚⼲燥固定染⾊⽔洗⼲燥镜检三、思考题1、制备细菌染⾊标本时，应该注意哪些环节答；（1）涂⽚：开始所加⽆菌⽔液滴不要太⼤，否则不易⼲燥；取菌量要适宜且要涂抹均匀，避免过⼤造成堆积，⽽难以看清细胞个体形态同时也应避免取菌量太少⽽难以在显微镜视野中找到细胞。
（2）⽆菌操作取菌：⼀定要等接种换冷却后再取菌，以免⾼温使菌体变形；（3）⼲燥固定：否则细胞会破裂或变形；（4太长，否则菌体形态则会发⽣改变。
（5）⽔洗：倾去染⾊液后，⽤⽔沿着菌膜四周冲洗，注意勿使⽔流直接冲洗菌膜部位，⽔流不宜过急，过⼤，⾄流出⽔⽆⾊为⽌；2、为什么要求制⽚完全⼲燥才能⽤油镜观察答：使⽤油镜时，物镜与标本间的介质为⾹柏油（N=），不仅增加了透明度，⽽且会提⾼了分辨率。
若制⽚不完全⼲燥后，就⽤油镜观察，则N会减⼩，分辨率D也会变⼩。
⽽且还会造成油⽔两相不互溶，所以制⽚要求完全⼲燥后才能⽤油镜观察。
3、如果涂⽚未经加热固定，将会出现什么问题如果加热温度过⾼，时间太长，⼜会怎样呢答：加热固定的作⽤是使细胞质凝固，使细胞固定在载玻⽚上，这种加热处理还可以杀死⼤多数细菌⽽且不破坏细胞形态，⽽且还可增加细胞对染料亲和⼒。
（1）如果图涂⽚未经加热固定，则细胞⽆法固定在载玻⽚上，在染⾊⽔洗后会被⽔流冲⾛。
（2）如果加热温度过⾼，时间太长，则会使细菌形态发⽣变化甚⾄破裂。
4、为什么细菌染⾊常⽤碱性染料什么情况下⽤酸性染料答：（1）细菌染⾊常⽤碱性染料，原因在于微⽣物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中通常带负电荷，⽽碱性染料电离后染⾊部分带正电荷，很容易与细胞结合使其着⾊。
实验六 微生物的大小测定和显微直接计数
五、实验结果
1、微生物大小测定实验结果
（1）将目镜测微尺校正结果填入下表： ）将目镜测微尺校正结果填入下表：
接物镜 低倍镜 高倍镜 油 镜 接物镜倍数 目镜测微尺格 数 镜台测微尺格 数 目镜测微尺每格代表 的长度(μm)
接目镜的放大倍数________
（2） 酵母细胞大小的测量结果： ） 酵母细胞大小的测量结果：
血球计数板是由一块比普通载玻片厚的 特制玻片制成的。 特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的 构成三个平台。中间的平台较宽， 槽，构成三个平台。中间的平台较宽， 其中间又被一短横槽隔为两半， 其中间又被一短横槽隔为两半，每半边 上面个刻有一个方格网。 上面个刻有一个方格网。 方格网上刻有9个大方格 个大方格， 方格网上刻有 个大方格，其中只有中间 的一个大方格为计数室， 的一个大方格为计数室，供微生物计数 这一大方格为边长为1mm正方形， 正方形， 用。这一大方格为边长为 正方形 深度为0.1mm，其体积为 深度为 ，其体积为0.1mm3。 。
微生物 名称 目镜测微尺每 格代表的长度 /µm 宽 目镜测微 尺格数 宽度 /µm 目镜测微 尺格数 长 长度/将结果记录于下表中， 将结果记录于下表中，A表示五个中方格中的总 菌数； 表示菌液稀释倍数。 菌数；B表示菌液稀释倍数。
各中格中菌数 1 第一室 第二室 2 3 4 5 A B 二室平 菌数/ml 均值
(1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻 目镜测微尺的构造 其中央刻有精确的等分刻度，有等分为50小 片，其中央刻有精确的等分刻度，有等分为 小 格和100小格两种。刻度的大小是随使用的接目 小格两种。 格和 小格两种 镜和接物镜的放大倍数而改变， 镜和接物镜的放大倍数而改变，用前必须用镜台 测微尺来标定。 测微尺来标定。 (2)镜台测微尺的构造 镜台测微尺为一块特制 镜台测微尺的构造 的载玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度， 的载玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度， 将长1mm的直线等分为 小格，每小格等于 的直线等分为100小格 小格， 将长 的直线等分为 10µm。 。
显微镜观察微生物形态的实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除显微镜观察微生物形态的实验报告篇一：微生物实验报告：微生物形态观察实验一微生物形态观察一、实验目的1．巩固显微镜的使用方法，重点练习油镜的使用；2．认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构；3．练习手绘微生物图片。
二、实验原理1．细菌基本形态细菌是单细胞生物，一个细胞就是一个个体。
细菌的基本形态有3种：球状，杆状和螺旋状，分别称为球菌、杆菌、螺旋菌。
球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等。
杆菌分为单杆菌、双杆菌、链杆菌等，是细菌中种类最多的。
螺旋菌分为弧菌和螺菌。
除此之外，还有一些特殊形态的细菌。
2．细菌特殊结构细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质，具有抗干燥、抗吞噬和附着作用。
鞭毛是某些细菌表面着生的1至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体，具有运动功能，在菌体上的着生位置、数目因菌种而异。
菌毛（又称纤毛）是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬，且数量较多的丝状体，与细菌吸附或性结合有关。
芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段，在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体，具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性。
3．真菌的结构特征菌丝是构成真菌营养体的基本单位，是一种管状细丝。
可伸长并产生许多分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。
根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。
为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要，许多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态，这些特化的形态称为菌丝变态。
比如吸器、假根、子实体。
4．放线菌的结构特征放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞生物。
链霉菌是典型的放线菌，其细胞呈丝状分枝，菌丝直径很小，在营养生长阶段，菌丝内无隔，故一般呈多核的细胞状态。
当其孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分支并以放射状向基质表面和内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝，同时在其上又不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗的分枝菌丝，这就是气生菌丝。
微生物学实验(详细介绍)
（2）镜检： 1）毛霉和黑根霉的孢子的形状、颜色、大 小、孢子囊、中轴体的形状，有无假根和葡 萄菌丝。 2）黑曲霉的分生孢子的形状、颜色、大小、 顶囊的形状、小梗排列隔膜。 3）青霉的分生孢子的形状、颜色、大小、 小梗的排列方式，菌丝的隔膜。
.
（3）将观察结果绘图，并注意各部分名称。
霉菌的静孢子 左：毛霉的孢子囊；中：孢子囊壁破裂，露出静 孢子；右：囊轴
旋仔细地从上到下进行观察。
.
厚标本和薄标本
4 - 5 um
2um
.
基础知识
三、 实验步骤
• (一) 显微镜的使用 • 1. 观察前的准备工作 • (1)观察者要养成显微镜镜检的工作习惯，观察时要
双眼同时睁开，一边观察一边进行记录或描绘。 • (2)观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备
好。 • (3)显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否
.
五、记录实验结果
• 绘图
.
六、 思考题
• 1.使用油镜时，为使么选用香柏油或液体石蜡作 为物镜与玻片间的介质？其他液体行吗？
• 2.油镜用毕后，为什么必须把镜油擦净？用过多 的二甲苯或用酒精擦镜有什么危害？
• 3.什么是物镜的同焦现象？他在显微镜观察中有 什么意义？
• 4.观察时为什么要用左眼，并且两眼都应睁开？
.
四、显微镜保养和使用中的注意事项
1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以
保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最
后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油 镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片 或损伤镜面。 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座 ，不可单手拿，更不可倾斜拿。 5.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉 菌而腐蚀镜片。
环境工程微生物学实验
（1）试管编号；
（2）2只试管分别穿刺接种大肠杆菌和变形杆菌； （3）37 ℃ ，培养24h 3、柠檬酸盐利用试验
（1）试管编号；
（2）2只试管分别划线接种大肠杆菌和枯草杆菌； （3）37 ℃ ，培养24h
四、实验结果观察与记录
1、将实验结果填入下表，＋表示阳性，－表示阴性。 2、思考题：微生物生理生化反应的意义何在？
三操作步骤1微生物大小的测量1枯草杆菌标本片的制作2目镜测微尺的标定放置镜台测微尺放置目镜测微尺校正目镜测微尺计算不同放大倍数下目镜测微尺每格代表的长度3枯草杆菌大小的测量四实验报告1将目镜测微尺校正结果填入下表接物镜接物镜倍数目镜测微尺目镜测微尺每格代表的长度2在高倍镜下测量枯草杆菌大小的实验结果填入下表菌体编号长度的目镜测微尺格数宽度的目镜测微尺格数平均值菌体大小平均值m3分析实验结果一实验目的明确显微镜计数的原理
酵母菌的形态构造
线 粒 体 芽体液泡 芽 体 核 液 泡 膜 细 胞 壁 细 胞 膜
根霉（Rhizopus)
青霉（Penicillum):
曲霉(Aspergillus)
四、实验报告
1. 分析实验结果，绘制酵母菌、青霉、黑曲霉的形
态图，并注明各部位名称，。 2. 怎样才能观察到较为完整的霉菌形态，各种霉菌 制片过程中分别有哪些注意事项？
121℃,灭菌20~30min
使用时, 将培养基加热融化, 待温度降至50 ℃左右时在 100mL培养基中加入1%链霉素0.3mL
糖发酵培养基：
蛋白胨2g，葡萄糖10g， K2HPO4 0.2g, NaCl 5g, 琼脂5～6g， pH7.0～7.2 ，蒸馏水1L ， 1%溴百里酚蓝 3ml. 分装试管，每管4～5cm， 112℃,灭菌30min.
实验六、 酵母菌的形态观察及
颜色（正面、反面、边沿、中心）
气味
实验内容（二）四大类微生物培养特征观察
细菌：菌落湿润、小而凸起或大而扁平，透明或不透明，通常与 培养基不结合，菌落颜色多样，菌落正反面颜色相同，一般有臭 味
酵母菌：菌落较湿润，大而凸起，稍透明或不透明，通常与培养 基不结合，一般呈乳脂或矿烛色，少数红色或黑色，菌落正反面 颜色相同，多带酒香
同一种微生物特定的条件下形成特定的培养特征
微生物分类鉴定的重要依据之一
实验内容（二）四大类微生物培养特征观察
菌落培养特征观察的主要指标
菌落形态：形状，边缘情况
大小：菌落直徂 表面状况：湿润、粘稠或干燥，隆起或扁平，厚或薄， 是否粉末状，是否有金属光 泽 质地：致密或疏松 蔓延程度： 与培养基结合程度
酵母菌简介
繁殖方式: 无性繁殖：芽殖、裂殖、产生无性孢子（节孢子、掷孢子和厚垣 孢子） 有性繁殖：子囊孢子
酵母菌简介
假菌丝
酵母菌在一定条件下培养，产生的芽体与母细胞不分离形成的特 殊形态
实验内容（一）
用水浸片法（美兰染色液）观察酵母形态结构特征（出芽生殖），区分 死活细胞，并分析讨论其中的原因。
实验要求
观察和描述酵母菌、细菌、放线菌、霉菌的培养特征（已知和未知 菌落）P37
请预习下一次实验
培养基配制及消毒与灭菌（实验指导书中的实验1&2）
放线菌：干燥或较干燥，小而紧密，不透明，与培养基结合牢固， 菌落颜色多样，菌落正反面颜色一般不同，常有泥腥味； 霉菌：干燥，大而疏松或大而紧密，不透明，与培养基结合较牢 固，菌落颜色多样，菌落正反面颜色一般不同，往往有霉味
实验内容（二）四大类微生物培养特征观察
未知菌落的形态特征描述 初步鉴定 最终确证：显微镜观察
革兰氏染色
4、酵母菌和原生质体能进行革兰氏染色吗？结果如何? 为什么？
5、实验结果讨论
Leifson染色法
1、制片：涂片 自然干燥 2、Leifson染色液染色10分钟，倾去多余染料
（勿水洗） 3、硼酸钠美蓝染色5分钟，水洗，自然干燥 4、油镜下观察：菌体呈蓝色，荚膜呈红色
四、实验报告
1、革兰氏染色的原理是什么？关键步骤是什么？影响革 兰氏染色结果的因素有哪些？
2、在给出G+、 G-标准菌株的情况下，如何确保待检测菌 株的革兰氏染色结果的准确性？
碘液媒染1分钟，水洗
乙醇脱色20～30秒，水洗 关键！
番红复染2分钟，水洗 （3）镜检 干燥后，用油镜观察
革兰氏阳性菌—产气荚膜梭菌（ × 80 革兰氏阴性菌—大肠杆菌（ × 500）
（二）荚膜染色
1、原理
荚膜是某些细菌在生活过程中形成的，分泌于细胞壁外 的一层松散透明的、富含水分的、多糖类粘液性物质， 其折光性低，与染料的亲合力弱，不易着色，也不能强 制着色，故常用负染色法，即使菌体和背景着色而荚膜 不着色，染色后荚膜在菌体周围呈透明圈状。
生命科学学院微生物学系
电话：8242908
实验内容
实验一、显微镜的使用与单染色法 实验二、革兰氏染色与荚膜染色 实验三、放线菌形态观察与芽孢染色 实验四、霉菌形态观察与各大类微生物菌落特征 实验五、酵母菌形态观察、显微计数与显微测量技术 实验六、培养基的制备 实验七、菌种分离纯化技术与平板菌落计数 实验八、水质微生物学检测 实验九、消毒与灭菌技术
实验二、革兰氏染色与荚膜染色
一、实验目的
1、掌握细菌革兰氏染色及荚膜染色的原理与操作 2、进一步熟练掌握显微镜的使用、细菌染色技术及无菌操作
微生物实验酵母菌的计数形态观察
微生物学实验开课时间： 2015 年3 月20 日实验名称：功能微生物的形态观察（三）酵母菌的形态观察、大小测定和直接计数1.实验记录（包括实验现象和原始记录）1）观察酵母菌形态。
①取一干净的载玻片，滴一滴蒸馏水，轻轻挑取老师准备好的酵母菌适量，蘸于蒸馏水上制成水玻片，盖上盖玻片，直接在显微镜下观察②先在10倍镜下找到酵母菌，然后40倍镜拍照下图为酵母菌的形态（放大倍数：15×40）2）酵母菌的大小测定①将盒子里的镜台测微尺置于载物台上，注意刻度朝上，分别在4、10、40倍下数出它与目镜测微尺的重合格数，完成目镜测微尺的校正②记录观察到的酵母菌大小，主要数酵母菌的长与宽所占的格数，注意尽量找大小不同，范围较大的酵母菌10个③酵母菌的数量计数取清洁无油的血细胞计数板，盖上盖玻片，将酵母菌液摇匀，在盖玻片边缘滴几小滴，注意让菌液自行渗入计数室内，静置5min，在40倍镜下计数，选取9宫格中央的小室，计数如下（只数上边和左边的酵母菌）A室注：上面的图片均摄于2015 年4月10 日。
2.结果与分析1）酵母菌在显微镜下要比细菌大得多，不具有鞭毛，明显有细胞核，在显微镜下形成一个明亮的光圈2）校正目镜测微尺后，根据公式：目镜测微尺每格长度（um）=两重和线间镜台测微尺格数*10/两重合线间目镜测微尺格数，计算出每格长度分别是4倍（25）、10倍（10）、40倍（2.5），即酵母菌大小计算每格为2.5um因此菌体大小范围为（4.8—9.5）×（5.3-11.8）um3）酵母菌的计数结果如下图3.结论1）酵母菌的形态特征：对比细菌，酵母菌要大得多，并且酵母菌细胞核而细菌只有拟核，有些细菌还有鞭毛而酵母菌没有，呈椭圆状2）酵母菌的大小：酵母菌的大小经实验得出，大概范围为（4.8—9.5）×（5.3-11.8）um3）酵母菌数量：本实验中酵母菌的数量大致为7.9×108 个/ml4.思考题1）当接目镜不变，目镜测微尺也不变，只改变接物镜，目镜测微尺每格所量的镜台上物体的实际长度是否相同？为什么？答：不同，物镜成实像于目镜前方，标尺即位于物镜所成实像的位置（在对好焦后），目镜成虚像于明视距离，所以物镜倍数增大以后，原来占一个单位长度的实像现在会占不同的单位，即测微尺每格所代表的长度不同2）结合你的实验体会，总结哪些因素会造成血细胞计数板的计数误差，应如避免？答：1.活细胞和死细胞不易分开，数出来的是活死细胞的总和2.细胞溶液必须均匀，再用之前要震荡均匀，否则细胞沉在试管底部，容易出现误差应该避免操作误差，实验时每次使用细胞溶液都要震荡均匀5.认识与体会1）熟练操作显微镜，并可以在观察时计数2）掌握了血细胞计数法的使用3）了解了酵母菌一般的大小和形态特征。
酵母菌数量的测定—显微镜直接计数法
五、数据处理
各中格中的菌数（个）
二室 平均
菌数
A
B
值 （个/
1
2
3
4
5
（个 mL）
） 第一
室 第二
室
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六、思考题 能否利用显微镜直接计数的方法测定
酵⺟菌菌液中的死细菌与活细菌？如果可 以，如何进行？如果不可以，请说明原 因。
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式1：总菌数（个/mL）=A/5×16×10000×B 式2：总菌数（个/mL）=A/5×25×10000×B
三、实验器材 血球计数板、显微镜、盖玻片、滴管、 酿酒酵⺟菌液
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四、实验步骤
1、加样品
•取净洁干燥的血球计数板盖上盖玻片。 •将菌悬液适当稀释（稀释1倍），摇匀。
•用滴管吸取菌悬液，加1～2滴于盖玻片边 缘，让菌液靠毛细渗透作用进入计数室。 •放置5 min左右让计数室充满菌液。
• 如遇酵⺟出芽，芽体大小达到⺟细胞一般时，即作 为两个菌体计算。
• 计算一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来 计算样品的含菌量。
• 菌体在血球计数板处于不同空间，要在不同焦距下 才能看全，所以，观察时必须不断调节细螺用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷； •镜检观察是否清洗干净； •洗后干燥（晾干、吹干，或乙醇、丙酮等有 机溶剂脱水干燥）。
4
5
血球计数板规格
计数室高度：0.1mm 大方格边⻓：1mm。 每个大方格分成400个小方格。
规格一：每个大方格分成16个中方格，每个中方格又分 成25个小方格。 规格二：每个大方格分成25个中方格，每个中方格又分 成16个小方格。
设五个中方格的总菌数为A，菌液的稀释倍 数为B，规格一、规格二计数板，分别采用式 1、式2计算。
实验五实验六酵母菌形态观察显微计数法-PPT文档资料
三、实验材料
1.菌种：啤酒酵母 2.染色液：0.1%吕氏碱性美蓝 3.器材：载玻片，显微镜、血球计数板、
盖玻片 、吸水纸、计数器、滴管、 擦镜纸。
四、内容及方法
（一）.酵母菌个体形态观察
用美兰浸片法观察啤酒酵母个体形态及死活 细胞区别
1、在载玻片上各滴加一滴染色液和酵母菌培养液，
盖上盖玻片，（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻
片） 2、将制好的水浸片放置2分钟后镜检。先用低倍镜 观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽 情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细 胞。 3、染色半小时后，再观察一下死细胞数是否增加。 4、染色一小时后，再观察一下死细胞数是否增加。
（二）、显微镜直接计数法
1.镜检计数室，熟悉计数器的使用方法 2.对稀释5倍的啤酒酵母悬液进行计数 3.注意： （1）血球计数板必须洗干净，勿刷 （2）注意勿损坏计数器
计数原则： 1、 稀释浓度要合适，每个小方格5-10个
酵母菌 2、压线的酵母菌，一般计上和右 3、对于出芽的菌体，如果芽体超过母体的
一半，算2个菌
五、实验结果
2.美兰是一种无毒性染液，有两种形态 还原型：无色 氧化性：蓝色 活细胞因新陈代谢而有强还原力使美兰从氧 化型变为还原型；死细胞无此能力，而被美 兰染成蓝色。以此可以区分死活细胞。
3.测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用 的有显微直接计数法和平板计数法。
血球计数板是一块特制的厚型载玻 片，载玻片上有4条槽构成3个平台. 中间的平台较宽，其中间又被一短 横槽分隔成两半，每个半边上面各 有一个计数区。
血 球 计 数 板
计数区的刻度有两种：
一种是25×16：计数区分为16个大方格 （大方格用三线隔开），而每个大方格又 分成25个小方格；
初中观察酵母菌实验报告
一、实验目的1. 认识酵母菌的基本形态和结构。
2. 掌握显微镜的使用方法。
3. 了解酵母菌的繁殖方式。
二、实验材料1. 酵母菌培养液2. 盖玻片3. 载玻片4. 滴管5. 显微镜6. 酵母菌培养基7. 灭菌棉签8. 烧杯9. 玻璃片10. 酒精11. 洗涤剂三、实验步骤1. 将酵母菌培养液倒入烧杯中，加入适量的洗涤剂，用无菌棉签搅拌，使酵母菌悬浮在液体中。
2. 用滴管吸取少量酵母菌培养液，滴在载玻片上。
3. 用盖玻片覆盖在载玻片上，确保盖玻片与载玻片之间没有气泡。
4. 将载玻片放在显微镜载物台上，调整显微镜的焦距，观察酵母菌的形态。
5. 观察酵母菌的细胞结构，包括细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核等。
6. 观察酵母菌的繁殖方式，如出芽生殖。
7. 记录观察结果。
四、实验结果与分析1. 酵母菌的形态通过显微镜观察，我们发现酵母菌呈椭圆形或卵圆形，细胞壁明显，细胞质清晰，细胞核较大，呈圆形或椭圆形。
2. 酵母菌的细胞结构酵母菌细胞壁主要由几丁质组成，细胞膜包裹着细胞壁，细胞质内含有多种细胞器，如线粒体、内质网、高尔基体等，细胞核内含有遗传物质DNA。
3. 酵母菌的繁殖方式酵母菌主要通过出芽生殖进行繁殖，即在母细胞的一侧产生一个新的细胞，新细胞逐渐长大，最终与母细胞分离。
五、实验结论1. 酵母菌是一种单细胞真菌，具有明显的细胞结构和繁殖方式。
2. 显微镜是观察微生物的重要工具，可以清晰地观察到酵母菌的形态和结构。
3. 通过本次实验，我们了解了酵母菌的基本特征，为后续学习微生物学奠定了基础。
六、实验心得1. 实验过程中，我学会了使用显微镜观察微生物，提高了自己的动手能力。
2. 通过观察酵母菌的形态和结构，我对微生物有了更深入的了解，增强了学习微生物学的兴趣。
3. 实验过程中，我学会了如何记录实验数据，提高了自己的实验报告撰写能力。
七、实验改进1. 在实验过程中，可以尝试使用不同倍数的显微镜观察酵母菌，以便更全面地了解其特征。
酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定
实验六酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定一、目的要求1. 通过观察了解酵母细胞的形态结构及出芽繁殖。
2. 掌握鉴别酵母细胞死活的染色技术。
二、基本原理酵母菌细胞较大，不必染色即可用显微镜观察其形态。
用美蓝染色液可对酵母细胞进行死活染色鉴别。
美蓝是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。
活的酵母细胞，因新陈代谢的不断进行，具有一定的还原能力，能将进入细胞的美蓝还原，而细胞呈无色；而死细胞已失去还原能力，则被染料染成蓝色。
需要注意的是，一个活酵母菌的还原能力是有限的，必须严格控制染料的浓度和染色时间。
三、材料及器材1. 菌种：酵母菌。
2. 溶液和试剂：0.05%和0.1%吕氏美蓝染色液。
3. 仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片，滴管，试管，蒸馏水等。
四、方法与步骤1. 在干净载玻片上加一滴吕氏美蓝染色液，以无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在美蓝液中，混合均匀。
2. 取一块盖玻片，先将一边与染液接触，然后慢慢将盖玻片放下，避免产生气泡，将多余染液用吸水纸吸干。
3. 将载玻片置于载物台上，先用低倍镜，然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
4. 染色约0.5h后再进行观察，注意死细胞数量是否增加。
5. 用0.05%吕氏美蓝染色液重复上述操作。
五、实验作业及实验报告1. 绘图说明你所观察到的酵母形态特征。
2. 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌?3. 酵母水浸片制作时应注意什么?4. 吕氏美蓝染色液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。
六、实验结束、检查试验仪器破损情况，清理实验室。
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（二）、显微镜直接计数法
1.镜检计数室，熟悉计数器的使用方法 2.对稀释5倍的啤酒酵母悬液进行计数 3.注意： （1）血球计数板必须洗干净，勿刷 （2）注意勿损坏计数器
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计数原则： 1、 稀释浓度要合适，每个小方格5-10个
酵母菌 2、压线的酵母菌，一般计上和右 3、对于出芽的菌体，如果芽体超过母体的
另一种是16×25：一个计数区分成25个 大方格（大方格之间用双线分开），而每 个大方格又分成16个小方格。
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每毫升菌液中的菌数 = —A—×25（16）×10×1000×B 5
A：5个中方格中的酵母菌数 B：稀释倍数
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三、实验材料
1.菌种：啤酒酵母 2.染色液：0.1%吕氏碱性美蓝 3.器材：载玻片，显微镜、血球计数板、
一半，算2个菌
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五、实验结果
1.酵母个体形态，芽体（绘图） 2.计算死活细胞的比率，说明吕氏碱性美
蓝染液浓度和作用时间对死活细胞数的 影响 3.计数结果
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酵 母 个 体 形 态
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六、思考题
1.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征 区别于一般的细菌？
2.某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌 存活率，请设计1-2种可行的检测方法。
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实验五 实验六
酵母菌的形态观察及死活 细胞鉴定
微生物显微镜直接计数法
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一、目的要求
1.学习自制水浸片法观察酵母菌的方法 2.观察酵母菌形态和出芽生殖方式 3.学习并掌握区分酵母菌死活细胞的染色方法 4.了解血球计数板的构造、计数原理和计数方
法，掌握显微镜下直接计数的技能
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二、实验原理
盖玻片 、吸水纸、计数器、滴管、 擦镜纸。
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四、内容及方法
（一）.酵母菌个体形态观察
用美兰浸片法观察啤酒酵母个体形态及死活片上各滴加一滴染色液和酵母菌培养液，
盖上盖玻片，（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻
片）
2、将制好的水浸片放置2分钟后镜检。先用低倍镜 观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽 情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细 胞。 3、染色半小时后，再观察一下死细胞数是否增加。 4、染色一小时后，再观察一下死细胞数是否增加。
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血球计数板是一块特制的厚型载玻 片，载玻片上有4条槽构成3个平台. 中间的平台较宽，其中间又被一短
横槽分隔成两半，每个半边上面各 有一个计数区。
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血 球 计 数 板
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计数区的刻度有两种：
一种是25×16：计数区分为16个大方格 （大方格用三线隔开），而每个大方格又 分成25个小方格；
1.酵母菌可以用单纯的水制成水浸片观察， 也可以用染色液制成水浸片观察。
2.美兰是一种无毒性染液，有两种形态 还原型：无色 氧化性：蓝色 活细胞因新陈代谢而有强还原力使美兰从氧 化型变为还原型；死细胞无此能力，而被美 兰染成蓝色。以此可以区分死活细胞。
3.测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用 的有显微直接计数法和平板计数法。