超薄切片技术原理
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超薄切片技术的应用：除了单独应用于 组织细胞的结构观察外，还可与放射性同位 素自显影、细胞化学、免疫电镜和电镜原位 杂交等技术结合，用于不同目的的研究。
一、超薄切片技术
超薄切片分为两大类：
1、普通超薄切片术 2、半薄切片术。
一、超薄切片技术 一、普通超薄切片术
一、普通超薄切片术
普通超薄切片术指不需要特殊的冷冻条件的
同一台电镜，谁的样品制备得好，它就能使细 节观察得更确切，更清晰，拍出更真实的照片。
对于研究生物医学的工作者来说，研究和熟练 地掌握制样技巧是极为重要的一环。
一、超薄切片技术
石腊切片机的最高水平可以把片子切到1-2微米 。
现代的超薄切片机从改进石腊切片机出发寻求途 径。目前的超薄切片机可以以连续切片的方式把一 个细胞切成几十片或几百片来进行电镜观察。
超薄切片技术原理
2020年4月21日星期二
一、超薄切片技术
透射电镜是利用电子束作为照明源，通过几级电磁透 镜放大成像于荧光屏上，因而电子束本身的穿透力弱， 在电镜观察之前，必须把样品切成700埃或更薄的切片； 或把样品(细菌、病毒、单细胞之类)制成悬液；或把样品 （如较硬样品）的表面制成复型等，
我们把电镜观察的样品制备方法总称为样品制 备技术。
一、超薄切片技术
用超薄切片法，可得到25埃左右的分辨率； 同电镜本身早已达到2-3埃的分辨本领相比，还 有相当大的“差距”。
这种差距意味着许多结构细节尚未被人们发现 和认识，同时也告诫人们不能满足现今已有的制 样技术。
一、超薄切片技术
在电镜技术中，有两种分辨率： 一种是电镜本身的分辨率， 二是样品制备上的分辨率，
一、超薄切片技术
目前使用的超薄切片机主要是热膨胀式（瑞典LKB
公司制造）和机械推进式（美国的Porter-Blum）两 种，的为代表，
与此同时，许多固定、包埋和染色技术的发展和应
用，使超薄切片;去成为样品制备中最普遍，而又最基 本的方法。
超薄切片制样过程同石腊切片过程大体相似，它分
为取材、固定、漂洗、脱水、渗透与聚合、切片等几 个环节。
（一）、取材和固定
一、取材和固定
1、操作原则：
取材和固定要遵照四大原则：“准”、“快”、“轻”、“优” 的操作原则。
准：样品块一般约有1mm3，要求取材的部位要准。 快：动物被处死之后，机体内的组织细胞就脱离了正常的生存环境，细
胞的自溶作用会导致其坏死，致使超微结构发生改变，为了把这种 损伤减到最小，处死动物后，要争取在1—2分钟内完成取材(超过5 分钟的样品最好不要再用)，并立即把样品浸入固定液中。
一、超薄切片技术
超薄切片技术—— 是为透射电子显微镜观察提供超
薄样品的专门技术。它是生物学中研究细胞、组织超微结 构常用的技术，也是生物学中其它电子显微镜技术，如电 镜放射自显影、电镜组织化学以及免疫电镜技术等关键性 的技术。
这种技术在生物学的发展过程中占据重要的位置，目 前有关生物体的各种细胞、组织的超微结构知识几乎都是 这种技术提供的。
一、超薄切片技术
超薄切片术——一般厚度在10-100毫微米的切片称为
超薄切片，制作这种切片的技术，叫做超薄切片技术。 超薄切片过程一般与光学显微镜的石腊切片过程原则上
基本相似，也包括取材、固定、脱水、渗透、包埋、 聚合、切片和染色等几个环节（图）。
超薄切片操作过程更为细致与复杂，要求更为严格，而 且所用的试剂及配制方法也有所不同。
一5％戊二醛进行前固定，并用锋利的双面刀片将样品剁成1mm3的碎块 ，于4℃固定1小时以上。(如果需要更长时间的前固定，需适时更换新鲜 的固定液，并尽可能在4℃冰箱中保存。)接着用缓冲液冲洗处理10—30 分钟，以洗去前固定液，然后在4℃下，用1％四氧化锇(即锇酸)进行后 固定l一2小时。
一、取材和固定
一、超薄切片技术
长度单位的概念:
光学显微术中常用的长度单位是：“微米”（μ）,电镜是研究超微观 物体的工具,其分辨能力比普通显微镜大1000倍以上。
在电子显微术中,通常用“埃”（A）或毫微米（nm或mm）来表示 。它们之间的换算关系如下：
1毫米（mm）=1000微米（μ） 1微米（μ）=1000毫微米（nm或mu） 1毫微米（nm或mu）=10埃（A） 1毫米=103微米=106毫微米=107埃
常规包埋切片技术。 普通超薄切片的每一部分都是重要环节，都直
接与样品的质量相关，而样品质量的优劣又与观 察结果密切相关；为了得到可靠和满意的切片结 果，需要步步谨慎和认真。
一、普通超薄切片术
（一）、取材和固定 （二）、脱水和浸透 （三）、包埋和聚合 （四）、超薄切片 （五）、电子染色
一、普通超薄切片术
一、超薄切片技术
超薄切片术—— 是最基本的透射电镜样品制备技术。需要借助
超薄切片机制备样品；切片的厚度小于100毫微米（一般在30-70毫微 米）；被广泛用于揭示样品的超微结构。
超薄切片术—— 是电镜细胞化学、免疫电镜、电镜放射自显影
、X—射线微区元素分析等技术的基础，是研究生物医学样品的超微结 构及其功能的有力工具。
一、取材和固定
轻：样品的超微结构脆弱，为防止各种人为的损伤，
在操作过程中要格外小心，最好选用新的锋利的 解剖工具，操作尽量轻巧，以避免挤压。
优：优质的固定是关键环节之一，遇到特殊情况时最
好根据样品本身的要求，经过反复实验选用百度文库佳 的固定条件。
一、取材和固定
2．操作方法：
(1)动物组织块处理方法： 用乙醚使动物轻微麻醉，迅速解剖，准确地取下材料，立即浸入2％
(2)单细胞的处理方法： 一般指人工培养的细胞（包括悬浮或贴壁生长），对贴
壁生长的细胞需要先用0.5％胰酶处理若干分钟，或用薄 橡胶刷轻轻刮下，使细胞脱落。先离心，1000g，5—10 分钟，弃上清液，加入缓冲液后再离心1次（条件同前） ，弃上清液。
超薄切片技术的步骤路线
（1）取材与固定 （2）梯度脱水 （3）浸透与包埋 （4）修块 （5）超薄切片 （6）染色
一、超薄切片技术
染色
[目的]将重金属原子结合到细胞结构上使 造成图像反差
常用染色液
重金属：铅盐（Pb）蛋白质，糖元，脂类（膜看得清楚）
铀盐（U）大多数细胞成分均可
超薄切片技术的应用
一、超薄切片技术
超薄切片分为两大类：
1、普通超薄切片术 2、半薄切片术。
一、超薄切片技术 一、普通超薄切片术
一、普通超薄切片术
普通超薄切片术指不需要特殊的冷冻条件的
同一台电镜，谁的样品制备得好，它就能使细 节观察得更确切，更清晰，拍出更真实的照片。
对于研究生物医学的工作者来说，研究和熟练 地掌握制样技巧是极为重要的一环。
一、超薄切片技术
石腊切片机的最高水平可以把片子切到1-2微米 。
现代的超薄切片机从改进石腊切片机出发寻求途 径。目前的超薄切片机可以以连续切片的方式把一 个细胞切成几十片或几百片来进行电镜观察。
超薄切片技术原理
2020年4月21日星期二
一、超薄切片技术
透射电镜是利用电子束作为照明源，通过几级电磁透 镜放大成像于荧光屏上，因而电子束本身的穿透力弱， 在电镜观察之前，必须把样品切成700埃或更薄的切片； 或把样品(细菌、病毒、单细胞之类)制成悬液；或把样品 （如较硬样品）的表面制成复型等，
我们把电镜观察的样品制备方法总称为样品制 备技术。
一、超薄切片技术
用超薄切片法，可得到25埃左右的分辨率； 同电镜本身早已达到2-3埃的分辨本领相比，还 有相当大的“差距”。
这种差距意味着许多结构细节尚未被人们发现 和认识，同时也告诫人们不能满足现今已有的制 样技术。
一、超薄切片技术
在电镜技术中，有两种分辨率： 一种是电镜本身的分辨率， 二是样品制备上的分辨率，
一、超薄切片技术
目前使用的超薄切片机主要是热膨胀式（瑞典LKB
公司制造）和机械推进式（美国的Porter-Blum）两 种，的为代表，
与此同时，许多固定、包埋和染色技术的发展和应
用，使超薄切片;去成为样品制备中最普遍，而又最基 本的方法。
超薄切片制样过程同石腊切片过程大体相似，它分
为取材、固定、漂洗、脱水、渗透与聚合、切片等几 个环节。
（一）、取材和固定
一、取材和固定
1、操作原则：
取材和固定要遵照四大原则：“准”、“快”、“轻”、“优” 的操作原则。
准：样品块一般约有1mm3，要求取材的部位要准。 快：动物被处死之后，机体内的组织细胞就脱离了正常的生存环境，细
胞的自溶作用会导致其坏死，致使超微结构发生改变，为了把这种 损伤减到最小，处死动物后，要争取在1—2分钟内完成取材(超过5 分钟的样品最好不要再用)，并立即把样品浸入固定液中。
一、超薄切片技术
超薄切片技术—— 是为透射电子显微镜观察提供超
薄样品的专门技术。它是生物学中研究细胞、组织超微结 构常用的技术，也是生物学中其它电子显微镜技术，如电 镜放射自显影、电镜组织化学以及免疫电镜技术等关键性 的技术。
这种技术在生物学的发展过程中占据重要的位置，目 前有关生物体的各种细胞、组织的超微结构知识几乎都是 这种技术提供的。
一、超薄切片技术
超薄切片术——一般厚度在10-100毫微米的切片称为
超薄切片，制作这种切片的技术，叫做超薄切片技术。 超薄切片过程一般与光学显微镜的石腊切片过程原则上
基本相似，也包括取材、固定、脱水、渗透、包埋、 聚合、切片和染色等几个环节（图）。
超薄切片操作过程更为细致与复杂，要求更为严格，而 且所用的试剂及配制方法也有所不同。
一5％戊二醛进行前固定，并用锋利的双面刀片将样品剁成1mm3的碎块 ，于4℃固定1小时以上。(如果需要更长时间的前固定，需适时更换新鲜 的固定液，并尽可能在4℃冰箱中保存。)接着用缓冲液冲洗处理10—30 分钟，以洗去前固定液，然后在4℃下，用1％四氧化锇(即锇酸)进行后 固定l一2小时。
一、取材和固定
一、超薄切片技术
长度单位的概念:
光学显微术中常用的长度单位是：“微米”（μ）,电镜是研究超微观 物体的工具,其分辨能力比普通显微镜大1000倍以上。
在电子显微术中,通常用“埃”（A）或毫微米（nm或mm）来表示 。它们之间的换算关系如下：
1毫米（mm）=1000微米（μ） 1微米（μ）=1000毫微米（nm或mu） 1毫微米（nm或mu）=10埃（A） 1毫米=103微米=106毫微米=107埃
常规包埋切片技术。 普通超薄切片的每一部分都是重要环节，都直
接与样品的质量相关，而样品质量的优劣又与观 察结果密切相关；为了得到可靠和满意的切片结 果，需要步步谨慎和认真。
一、普通超薄切片术
（一）、取材和固定 （二）、脱水和浸透 （三）、包埋和聚合 （四）、超薄切片 （五）、电子染色
一、普通超薄切片术
一、超薄切片技术
超薄切片术—— 是最基本的透射电镜样品制备技术。需要借助
超薄切片机制备样品；切片的厚度小于100毫微米（一般在30-70毫微 米）；被广泛用于揭示样品的超微结构。
超薄切片术—— 是电镜细胞化学、免疫电镜、电镜放射自显影
、X—射线微区元素分析等技术的基础，是研究生物医学样品的超微结 构及其功能的有力工具。
一、取材和固定
轻：样品的超微结构脆弱，为防止各种人为的损伤，
在操作过程中要格外小心，最好选用新的锋利的 解剖工具，操作尽量轻巧，以避免挤压。
优：优质的固定是关键环节之一，遇到特殊情况时最
好根据样品本身的要求，经过反复实验选用百度文库佳 的固定条件。
一、取材和固定
2．操作方法：
(1)动物组织块处理方法： 用乙醚使动物轻微麻醉，迅速解剖，准确地取下材料，立即浸入2％
(2)单细胞的处理方法： 一般指人工培养的细胞（包括悬浮或贴壁生长），对贴
壁生长的细胞需要先用0.5％胰酶处理若干分钟，或用薄 橡胶刷轻轻刮下，使细胞脱落。先离心，1000g，5—10 分钟，弃上清液，加入缓冲液后再离心1次（条件同前） ，弃上清液。
超薄切片技术的步骤路线
（1）取材与固定 （2）梯度脱水 （3）浸透与包埋 （4）修块 （5）超薄切片 （6）染色
一、超薄切片技术
染色
[目的]将重金属原子结合到细胞结构上使 造成图像反差
常用染色液
重金属：铅盐（Pb）蛋白质，糖元，脂类（膜看得清楚）
铀盐（U）大多数细胞成分均可
超薄切片技术的应用