实验三 丙二醛含量测定

实验三丙二醛含量测定

一、实验目的：

熟悉测定丙二醛含量的常用方法。

二、实验原理

植物在盐胁迫下，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛是其产物之一，通常将其作为脂质过氧化指标，用于表示细胞膜脂过氧化程度和植物对逆境条件反应的强弱。丙二醛（MDA）是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和高温度条件下，可以与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮（三胛川），其最大吸收波长在532nm。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm，532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中MDA—TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。

三、仪器与试剂

分光光度计；离心机；电子天平；研钵两套；试管。

10%三氯乙酸（TCA）；0.6%硫代巴比妥酸；石英砂。

四、实验步骤

1.丙二醛提取

小麦叶片0.5g，加入10﹪三氯乙酸(TCA)5mL(分两次加)和少量石英砂充分研磨，匀浆液以5000r/min离心10min，上清液即为样品提取液。

2.反应体系

取2mL提取液，分别加入2mL 0.6﹪TBA液，混匀，在试管

上加盖塞，置于沸水浴中沸煮15min，迅速冷却，离心。取上清液测定532nm和450nm下的A值。以2mL水代替提取液调零。

3.MDA含量计算：

根据C＝6.45×A532－0.56×A450，计算出样品提取液中丙二醛的浓度C（μmol/L），然后再计算出每克样品中丙二醛的含量(μmol/gFW)。并对数据进行方差分析。