液相色谱技术及应用
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毛细管电泳 Capillary Electrophoresis(CE)
毛细管电色谱 Capillary Electrochromatography(CEC)
影响因素：柱效、选择性、容量因子
tR(A)
tR(B)
Detecto r Response Inject
A：涡流扩散; B：分子扩散; C：传质阻力;
液相色谱高级培训班
高效液相色谱技术及应用
林子俺 博士
福州大学化学化工学院 食品安全分析与检测教育部重点实验室 福建省食品安全分析与检测技术重点实验室 2011-9-15
林子俺，1977年出生，博士，副教授，
硕导，师从色谱专家张玉奎院士，药物分 析硕士学位点负责人。
研究方向：
（1）新型色谱整体材料/磁性纳米材料/生 物大分子印迹材料的制备及其在蛋白组学 中的应用研究;
1
2
=
2.15 1.85
=
1.16
1.95 = 1.63 = 1.20
改变流动相的组成 改变不同流动相
改变流动相pH值 改变柱温 应用特殊的化学效应
改变固定相
Need Not Be Greater Than 1.2
不同分离度比较
R=1 R = 1.5 R = 0.5 R=4
Poor efficiency Moderate selectivity
t0
A
B
t0
t WA
R Time
WB
容
RS＝
2(tR2－tR1 tW1＋tW 2
)
量 因 子
k
t R
t 0
t' R
tt
0
0
R=
t=
1/4
W
分离选择性
N
x
柱效
-1
x
选择性
(α)
=
k' B k'A
k' 1 + k'
容量因子
AB
AB
AB
2
3
t0=1 =
k' B k' A
=
2.64 2.58
=
1.02
1
2
Poor efficiency Good selectivity
Excellent efficiency Poor selectivity
Excellent efficiency Moderate selectivity
（1） 分配系数
KA≠KB 或k’A≠k’B 是色谱分离的前提!
（2）容量因子“kHale Waihona Puke Baidu”：
k’值的范围：0.4＜k’＜20～30； k’＝2～5为佳，过大则耗时太长。
（2）面向蛋白质组学的液相色谱/毛细管 电泳/电色谱联用技术研究；
主持科研项目：
1.国家自然科学基金
长 期 担 任 Journal of Chromatography A,
Analyst, Talanta, Journal of Separation Science,
Recent Patents on Nanotechnology,Separation
色谱法：利用组分在两相间分 配系数不同而进行分离的技术；
流动相：携带样品流过整个系 统地流体；
固定相：静止不动的一相，即 色谱柱；
色谱分类
色谱分类
定义不同
➢ 分配色谱：是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。分离 过程是一个分配平衡过程。 ➢ 吸附色谱：分离过程是一个吸附－解吸附的平衡过程。常用的吸附剂为硅胶或 氧化铝。
内容简介
§1 液相色谱基本概念
➢ 色谱发展概况 ➢ 色谱分离原理 ➢ 色谱基本理论
§2 液相色谱仪器系统及应用
➢ 输液系统 ➢ 进样系统 ➢ 分离系统 ➢ 检测系统 ➢ 数据输出系统
§3 液相色谱方法开发和优化
➢ 色谱方法的选择 ➢ 色谱条件的优化 ➢ 案例分析
§4 液相色谱常见问题及其解决方法
➢ 化学因素 ➢ 机械因素
目前已发表SCI论文二十余篇，代表性论文：
(1) Anal.Chem, 2006,78,5322-5328(IF=5.9); (2)J.Chromatogr.A, 2007,1170,118-121.(IF=4.2) (3)J.Chromatogr.A, 2009,1216,8612-8622.(IF=4.2); (4) J. Mater. Chem., 2011,21,518-524. (IF=5.1) (5)J.Chromatogr.A, 2010, 1217, 4507-4510.(IF=4.2); (6)Chem.Commun., 2011,47, 9675-9677.(IF=5.8) ;
色谱研究方向
高效液相色谱 High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
气相色谱 Gas Chromatography (GC)
薄层色谱 Thin-Layer Chromatography (TLC)
凝胶电泳 Gel Electrophoresis(GE)
色谱起源
M. S. Tswett ➢ 1906年，俄国植物学家M.S. Tswett 命名这种应用吸附原理分离物质的新方 法为色谱(Chromatography)； ➢ 1952年，James和Matrin发明了气 相色谱法； ➢ 60年代末，高效液相色谱（HPLC） 崛起； ➢21世纪，超高压色谱、多维色谱等出现 使得色谱技术进入了飞速发展阶段；
液相色谱分离原理
吸附：物质在两相界面上浓集的现象
≠
色谱法的分离原理：溶于流动相(mobile phase)中的 各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子交换、排阻、亲 和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同， 从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。
Science & Technology, Current Pharmaceutical
Analysis,《环境化学》等国内外知名刊物评 审人。目前，已在国际权威刊物上发表 SCI论文20多篇，申请国家发明2项。
2.教育部博士点（新教师类）基金 3.中国博士后基金 4.福建省自然科学基金 5.福建省教育厅基金 6.校科技发展基金
k
'＝
溶质在固定相中的量 溶质在流动相中的量
k ,＝ tR－t或0 ： t0
k’
思考：为什么要优
化流动相比例？
k’
k’β
“ k’ ”是比“ tR”还常用的保留值，它与柱子的大小及流速无关，只与溶 质在固定相和流动相的分配性质、柱温以及相空间比（即固定相和流动相 之体积比）有关。“ k’ ”又定义为在分配平衡时某溶质在两相中绝对量之 比，消除了保留值的波动因素，而分配系数“ K ”是平衡时物质在两相中 的浓度比。
毛细管电色谱 Capillary Electrochromatography(CEC)
影响因素：柱效、选择性、容量因子
tR(A)
tR(B)
Detecto r Response Inject
A：涡流扩散; B：分子扩散; C：传质阻力;
液相色谱高级培训班
高效液相色谱技术及应用
林子俺 博士
福州大学化学化工学院 食品安全分析与检测教育部重点实验室 福建省食品安全分析与检测技术重点实验室 2011-9-15
林子俺，1977年出生，博士，副教授，
硕导，师从色谱专家张玉奎院士，药物分 析硕士学位点负责人。
研究方向：
（1）新型色谱整体材料/磁性纳米材料/生 物大分子印迹材料的制备及其在蛋白组学 中的应用研究;
1
2
=
2.15 1.85
=
1.16
1.95 = 1.63 = 1.20
改变流动相的组成 改变不同流动相
改变流动相pH值 改变柱温 应用特殊的化学效应
改变固定相
Need Not Be Greater Than 1.2
不同分离度比较
R=1 R = 1.5 R = 0.5 R=4
Poor efficiency Moderate selectivity
t0
A
B
t0
t WA
R Time
WB
容
RS＝
2(tR2－tR1 tW1＋tW 2
)
量 因 子
k
t R
t 0
t' R
tt
0
0
R=
t=
1/4
W
分离选择性
N
x
柱效
-1
x
选择性
(α)
=
k' B k'A
k' 1 + k'
容量因子
AB
AB
AB
2
3
t0=1 =
k' B k' A
=
2.64 2.58
=
1.02
1
2
Poor efficiency Good selectivity
Excellent efficiency Poor selectivity
Excellent efficiency Moderate selectivity
（1） 分配系数
KA≠KB 或k’A≠k’B 是色谱分离的前提!
（2）容量因子“kHale Waihona Puke Baidu”：
k’值的范围：0.4＜k’＜20～30； k’＝2～5为佳，过大则耗时太长。
（2）面向蛋白质组学的液相色谱/毛细管 电泳/电色谱联用技术研究；
主持科研项目：
1.国家自然科学基金
长 期 担 任 Journal of Chromatography A,
Analyst, Talanta, Journal of Separation Science,
Recent Patents on Nanotechnology,Separation
色谱法：利用组分在两相间分 配系数不同而进行分离的技术；
流动相：携带样品流过整个系 统地流体；
固定相：静止不动的一相，即 色谱柱；
色谱分类
色谱分类
定义不同
➢ 分配色谱：是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。分离 过程是一个分配平衡过程。 ➢ 吸附色谱：分离过程是一个吸附－解吸附的平衡过程。常用的吸附剂为硅胶或 氧化铝。
内容简介
§1 液相色谱基本概念
➢ 色谱发展概况 ➢ 色谱分离原理 ➢ 色谱基本理论
§2 液相色谱仪器系统及应用
➢ 输液系统 ➢ 进样系统 ➢ 分离系统 ➢ 检测系统 ➢ 数据输出系统
§3 液相色谱方法开发和优化
➢ 色谱方法的选择 ➢ 色谱条件的优化 ➢ 案例分析
§4 液相色谱常见问题及其解决方法
➢ 化学因素 ➢ 机械因素
目前已发表SCI论文二十余篇，代表性论文：
(1) Anal.Chem, 2006,78,5322-5328(IF=5.9); (2)J.Chromatogr.A, 2007,1170,118-121.(IF=4.2) (3)J.Chromatogr.A, 2009,1216,8612-8622.(IF=4.2); (4) J. Mater. Chem., 2011,21,518-524. (IF=5.1) (5)J.Chromatogr.A, 2010, 1217, 4507-4510.(IF=4.2); (6)Chem.Commun., 2011,47, 9675-9677.(IF=5.8) ;
色谱研究方向
高效液相色谱 High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
气相色谱 Gas Chromatography (GC)
薄层色谱 Thin-Layer Chromatography (TLC)
凝胶电泳 Gel Electrophoresis(GE)
色谱起源
M. S. Tswett ➢ 1906年，俄国植物学家M.S. Tswett 命名这种应用吸附原理分离物质的新方 法为色谱(Chromatography)； ➢ 1952年，James和Matrin发明了气 相色谱法； ➢ 60年代末，高效液相色谱（HPLC） 崛起； ➢21世纪，超高压色谱、多维色谱等出现 使得色谱技术进入了飞速发展阶段；
液相色谱分离原理
吸附：物质在两相界面上浓集的现象
≠
色谱法的分离原理：溶于流动相(mobile phase)中的 各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子交换、排阻、亲 和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同， 从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。
Science & Technology, Current Pharmaceutical
Analysis,《环境化学》等国内外知名刊物评 审人。目前，已在国际权威刊物上发表 SCI论文20多篇，申请国家发明2项。
2.教育部博士点（新教师类）基金 3.中国博士后基金 4.福建省自然科学基金 5.福建省教育厅基金 6.校科技发展基金
k
'＝
溶质在固定相中的量 溶质在流动相中的量
k ,＝ tR－t或0 ： t0
k’
思考：为什么要优
化流动相比例？
k’
k’β
“ k’ ”是比“ tR”还常用的保留值，它与柱子的大小及流速无关，只与溶 质在固定相和流动相的分配性质、柱温以及相空间比（即固定相和流动相 之体积比）有关。“ k’ ”又定义为在分配平衡时某溶质在两相中绝对量之 比，消除了保留值的波动因素，而分配系数“ K ”是平衡时物质在两相中 的浓度比。