B16细胞培养
二甲双胍和顺铂联用对B16F10黑素瘤细胞的协同抑制效应_梁官钊
黑素瘤是一种黑素细胞来源的高度恶性肿瘤 ， 其 发病隐匿、 转移早、 致死率高， 死于皮肤肿瘤的患者约 80% 为黑素瘤患者
［1 ］
超过 1． 2 亿个
［3 ］
。然而， 现在二甲双胍的抗癌作用正
。 黑素瘤自皮肤形成远端转移
为我们所认识。流行病学研究显示， 二甲双胍降低了 ［4 ］ ［5 ］ 糖尿病患 者 的 患 癌 风 险 和 癌 症 患 者 的 死 亡 率 。 顺铂是临床治疗多种实体瘤的一线用药之一 ， 具有抗 ［6 ］ 癌谱广、 疗效确切等特点 。 临床上， 顺铂经常同其
用效果。
［作者单位］ 1． 承德医学院附属医院皮肤科 ， 河北 承德 067000 ； 2． 承德医学院基础研究所 ， 河北 承德 067000 ； 3． 承德医学院附属医院中心实验 室， 河北 承德 067000 ［通讯作者］ 陆洁， Email： chengdejiel@ 163． com
中国皮肤性病学杂志 2015 年 1 月第 29 卷第 1 期
［ DOI］ 10． 13735 / j． cjdv． 10017089． 2015． 0016 Combination of Metformin with Cisplatin Showed Synergistic Antitumor Effect on B16 F10 Melanoma Cells LIANG Guanzhao1 ， LI Baoqiang1 ， HAN Chenzhu1 ， XU Qian2 ， YANG Ning3 ， XING Enhong3 ， LU Jie1 （ 1 ． Department of Dermatology， Affiliated Hospital of Chengde Medical College， Chengde 067020 ， China； 2 ． Basic Medical Institute of Chengde Medical College， Chengde 067020 ， China； 3 ． Department of Central Laboratory， Affiliated Hospital of Chengde Medical College， Chengde 067020 ， China） ［ Corresponding author］ LU Jie， Email： chengdejiel@ 163． com ［ Abstract］ Objective To investigate the effect of combination therapy of cisplatin and metformin on B16F10 melanoma B16F10 melanoma cells were cultured in vitro and treated with indicated concentrations of The vitality of B16F10 melanoma cells were significantly cells． Methods
B16细胞的培养
细胞增殖快非常好养，但是要及时换液，否则也很容易死亡、或变形。
我养的最
好的时候，天天都在换液，两三天就要消化传代。
我用的消化液一般是消化用
含EDTA的胰酶0.25%，个人感觉效果比较好一点。
消化步骤：吸出培养液，加入PBS洗涤（视培养瓶大小加入相应的量，25CM加
入1-2ML）而后加一次胰酶（25CM培养瓶加0.6ML）作用 2-3分钟，轻轻摇晃使
均匀作用在细胞层面上。
要一直在显微镜下观察，以防消化过头，等细胞从梭形
变成椭圆形（或是棱角变钝），本来连成片的细胞之间开始有小小的空间，细
胞与细胞好象是一粒粒的，界限清楚，这时是消化的最佳时机。
（细胞的活力最
好，又非常容易吹打）加入培养液进行吹打十几次即可。
如果消化到细胞全部飘起来，就消化的稍微有点过了。
如果细胞的形态还是老样
子，就消化的有点不足，吹打起来十分费力，有大片的细胞就会贴在壁上，起不
来，而且很不均匀。
只好重新加胰酶消化。
还有就是细胞长的比较密时，胰酶可以比平时多加一点，消化时间适当延长。
雅吉货号中文名称英文名称种属组织来源形态学生长方式培养基血清
YJ255 小鼠黑色素瘤细
胞
B16 小鼠黑素瘤
成纤维细胞
样
贴壁RPMI-1640 C S
B16用加10%血清，加双抗的RPMI-1640培养液，0.25%胰酶消化对数生长期B16细胞，传代比约1:5.
倒置相差显微镜下，对数生长期品源B16细胞形态为梭形或不规则形。
白藜芦醇美白功效的初步研究
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ
ｔｏ
ｔｈｅ
ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＢＩ ６ ｍｅｌａｎｏｅｙｔｅ。ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
ｄｅｃｒｅａｓｅｄ
ｔｈｅ
ｃｏｎｔｅｎｔ
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ｉｌｇ／ｍＩ。ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｈａｓ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｅｆｆｅｃｔ ｗｉｔｈ ５０ ｐｇ／ｍＩ。ａｒｂｕｔｉｎ ａｎｄ ｅｔｈｙｌ Ｖｃ． ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ｗｈｉｔｅｎｉｎｇ
ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：
血
白藜芦醇美自
酪氨酸酶黑色素 ｔｈｅ
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Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ＺＨ（）【ｒ Ｈｕａｆｅｎ９２
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ＹＡＮ Ｚｅｒｎｉｎ２
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ＨＥ Ｈｏｎｇｘｕａｎ３
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Ｍｉｎｇｘｉｎ９１
白藜芦醇美白功效的初步研究
１．生物膜与膜生物工程国家重点实验室，清华大学生命科学
学院。北京
１０００８４；
２．江苏隆力奇生物科技股份有限公司研发中心，常熟２１５５５５； ３．中国科学院动物研究所，北京
１００１０１
………………………………史先敏“２ …………………………………周华锋２
严泽民２谢静红２ 何宏轩３ 段明星１
研究了白藜芦醇对Ｂ１６黑色素细胞的增殖、细胞内酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。结果表明．白藜芦醇可抑制细胞
非接触式共培养技术在体外细胞实验中的初步应用.
非接触式共培养技术在体外细胞实验中的初步应用[ 07-09-17 10:40:00 ] 编辑：studa20作者：赵学铭，刘易欣，倪春生，赵秀兰，孙涛，古强，孙保存【关键词】 ,间充质干细胞；恶性黑色素瘤；非接触式共培养,［摘要］目的研究与恶性黑色素瘤细胞进行非接触式共培养的间充质干细胞表型变化，从而明确非接触式共培养体系可以应用于两种细胞之间相互作用的研究。
方法利用Transwell进行非接触式共培养，分析间充质干细胞形态变化，利用免疫组织化学与免疫荧光检测其Ⅷ因子和CD34表达。
结果间充质干细胞在非接触式共培养体系中可以被恶性黑色素瘤细胞诱导为多角形或短梭形，同时Ⅷ因子和CD34表达上调。
结论初步表明与恶性黑色素瘤细胞非接触式共培养的间充质干细胞中部分细胞表型发生改变，明确非接触式共培养体系可以应用于MSC和恶性黑色素瘤细胞之间相互作用的研究。
［关键词］间充质干细胞；恶性黑色素瘤；非接触式共培养Primary application of in vitro cell research by indirect coculture system［Abstract］ Objective To study the phenotype change and interactions of mouse bone marrowderived mesenchymal stem cells induced by B16, a mouse malignant melanoma cell line.Methods Indirect coculture was based on transwell system to analyse the phenotype change of MSC. Determination of the expression of Ⅷ factors and CD34 by immunohistochemistry and immunofluorescence.Results MSC was form in polygon and fusiform induced by B16. Then the immunohistochemistry and immunofluorescence staining show Ⅷ factors and CD34 was upregulation of MSC.Conclusion The results of the indirect coculture experiments with B16 cell and MSC in vitro can initially confirm that parts of the MSC transform their phenotype, it means that indirect coculturesystem may used in cell interaction research in vitro.［Key words］ mesenchymal stem cells; malignant melanoma; indirect cocuuture间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSC）是指存在于骨髓基质中的非造血组织的另一类重要的干细胞，它最显著的生物学特征是既有自我更新的能力，又具有向多种中胚层和神经外胚层来源的组织细胞分化的潜能［1,2］。
12746422_2-甲氧基雌二醇对小鼠恶性黑色素瘤B16细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响__
好标记,将 24 孔 板 放 入 孵 箱 内 继 续 培 养 24h。 进
行细胞染色,显微镜下细胞计数。
1.
3.
4 Tr
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l法检测 细 胞 的 迁 移 情 况 实 验 步
骤基本同上述的 Tr
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l细胞侵袭实验,区别为:
① 无需包 被 Ma
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l胶,在 小 室 内 直 接 接 种 细 胞;
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l方法观察 药 物 在 体 外 对 细 胞 趋 化 侵 袭 能
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力的影响。观察药物在体外对细胞迁移能 力 的 影 响。 细 胞 划 痕 实 验 观 察 经 10μmo
l
-ME 处 理 MM B16 细 胞
24h 后划痕愈合程度。结果 与对照组比较,不同浓度 的 2
-ME 处 理 MM B16 细 胞 后 克 隆 形 成 率 差 异 有 统 计 学 意
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培养基诱导B16细胞黑色素合成及机理研究
Ｇｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｌ Ｎｏ ． ９ ２
培养基诱导 Ｂ Ｉ ６细胞黑色素合成及机理研究
陈金妹 ， 林进妹 ｚ ， 黄 家福 ， 欧一新 ， 曹 娜 ， 张 秀芬 １ ， 朱祯 慧 ， 潘裕添
ｆ １ ． 闽南师范大学 茵物产业工程技术 中心， 福建 漳州 ３ ６ ３ ０ ０ ０ ， ； ２ ． 闽南师范大学 化 学与环境 学院， 福建 漳州３ ６ ３ ０ ０ ０ ）
细 胞 中三 种 黑 色 素合 成 相 关 蛋 白质 （ Ｔ ｙ ｏｓ ｒ ｉ ｎ ｓｅ ａ ， Ｔ ｙ ｒ ｏ ｓ ｉ ｎ ｓｅ ａ — ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ １ 和Ｔ ｙ ｍｓ ｉ ｎ ｓｅ ａ － ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ２ ） 在 以上 两 种 培 养 基 中表 达 的 差异 。 发 现 这 三 种蛋 白质 的 ｍＲ Ｎ Ａ转 录水 平 基 本 没 有 差 异 ， 在Ｇ ｉ ｂ ｃ ｏ — Ｄ ＭＥ Ｍ一 １ ２ ８ ０ ０培 养 基 中这 三 种 蛋 白质 的翻 译 水 平 均 明 显提 高 ， 总蛋 白 质 组 也 更 加 多样 ． 结论： Ｇ ｉ ｂ ｃ ｏ — Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ－ １ ２ ８ ０ ０培 养 基 通 过 提 高
Ｃ ＨＥ Ｎ Ｊ ｉ ｎ — ｍｅ ｉ ， Ｌ Ｉ Ｎ Ｊ ｉ ｎ — ｍｅ ｉ ， ＨＵＡＮＧ Ｊ ｉ ａ — ｆ ｕ ， ＯＵ Ｙｉ — ｘ ｉ ｎ ， Ｃ ＡＯ Ｎａ ， Ｚ ＨＡＮＧ Ｘｉ ｕ － ｆ ｅ ｎ ，
中华眼镜蛇毒组分C对B16黑色素瘤细胞生长的抑制作用
中华眼镜蛇毒组分C对B16黑色素瘤细胞生长的抑制作用目的：研究中华眼镜蛇毒组分C（FC）对体外培养的小鼠B16黑色素瘤细胞生长的抑制作用。
方法：采用MTT比色法、生长抑制实验、集落形成实验，探讨FC对小鼠B16黑色素瘤细胞株的毒性作用。
结果：FC对B16细胞有明显的毒性作用，处理细胞48 h，其IC50=1.75 μg/ml。
FC处理B16细胞24、48、72 h后，各时间点的细胞存活数随FC的浓度升高而减少，细胞的生长受到抑制。
FC还显著抑制B16细胞的集落形成，当FC浓度为0.5、1.0、2.0 μg/ml时，其抑制率分别为33.42%、50.57%、77.34%。
结论：中华眼镜蛇毒组分C对B16细胞具有明显的细胞毒性和生长抑制作用。
标签：中华眼镜蛇毒；黑色素瘤；细胞毒眼镜蛇是我国南方常见的毒蛇之一，据文献报道，眼镜蛇毒对多种肿瘤细胞有较好的杀伤作用。
中华眼镜蛇毒组分C是从中华眼镜蛇毒中分离出的具有明显抗癌活性的组分，在聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈单一区带，分子量约6000 Da[1]。
以往研究表明眼镜蛇毒组分C体内外都具有较好的抗白血病和其他肿瘤作用[2-6]。
本文探讨了其对体外培养的小鼠B16黑色素瘤细胞株的毒性作用。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 细胞株小鼠B16黑色素瘤细胞株由广州医学院实验中心提供。
1.1.2 主要试剂噻唑蓝（MTT）：SIGMA产品；二甲基亚枫（DMSO）：天津市化学试剂一厂（分析纯）；RPMI1640：GIBCO产品；新生牛血清：杭州四季青生物工程有限责任公司。
1.1.3 中华眼镜蛇毒组分C（fraction C from naja naja actra venom，FC）由广州蛇毒研究所提供。
1.1.4 主要仪器SW-CJ-1F型洁净工作台：苏净集团安泰公司；自动化酶免分析仪：北京圣健北方医疗仪器有限公司；CO2培养箱：美国QUEUE，Stabil therm；倒置显微镜：重庆光学仪器厂。
侧群分析操作方法
●重悬液（A液）的配制：向RPMI1640培养基中加入2%胎牛血清和10 mM HEPES ●重悬液（B液）的配制：向PBS 缓冲液中加入2%胎牛血清和10 mM HEPES
1.侧群细胞（Side population cells，SP）是利用流式细胞术和Hoechst 染料
进行造血干细胞分离时发现的一群特殊的细胞，这群特殊的细胞具有类似干细胞的自我更新和多向分化的能力。
2.取处于对数生长期的B16F10 细胞制成单细胞悬液，以3 ×105个/孔的
细胞量接种于6 孔板内，置于37 ℃，5% CO2 培养箱中培养过夜。
3.实验分为6 个组别：阳性对照（维拉帕米）组、空白对照组、Das（16.67
μmoL/L）组、ATRA（16.67μmoL/L）组、Das+ATRA（16.67 μmoL/L）组、Das/ATRA-NPs（16.67 μmoL/L）组。
每孔加入750 μL 药液，阳性对照组和空白对照组加等量的RPMI 1640 培养基。
4.药液与细胞共同培养24 h 后，阳性对照组加入浓度为100 μg/mL 的维拉
帕米处理20 min。
弃去孔内药液，PBS 缓冲液洗涤细胞2 次，0.25%胰蛋白酶消化收集细胞。
5.每组各加入1 mL 预热至37 ℃的重悬液（A 液）重悬细胞，再加入5 μL
Hoechst 原液，37 ℃水浴避光孵育90 min。
反应90 min 后，立即用预冷的PBS 缓冲液洗涤细胞2 次，1000 rpm离心5 min 收集细胞。
6.再用预冷的重悬液（B 液）重悬细胞，加入2 μL PI 染色液，充分混匀
后，采用流式细胞仪进行检测分析。
B16F10小鼠黑色素瘤高转移细胞
B16F10小鼠黑色素瘤高转移细胞
Cat Number：KG078 For Research Use Only
一、组成:
二、客户自备试剂:
1、PBS (凯基货号：KGB5001)
2、Complete growth medium (凯基货号：KGM 31800-500)
3、0.25% （W/V） Trypsin-0.53mM EDTA (凯基货号：KGY0012)
三、细胞简介:
四、常见问题及解决方案:
1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。
次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞
活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
客户收到细胞后请务必仔细阅读细胞注意事项，确保细胞的培养条件一致，如果由于培养条件不一致导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。
由于运输的情况，所以极个别细胞会出现不稳定，客户收到细胞后务必第一时间和我们联系，告知细胞具体情况，以便我们技术人员能及时有效的和老师沟通，不胜感谢！。
茶叶提取物EGCG和GCG及ECG对B16细胞内黑色素生成的抑制作用
茶叶提取物EGCG和GCG及ECG对B16细胞内黑色素生成的抑制作用张向娜;林勇;黄建安;刘仲华;梁丹丹【摘要】Inhibitory effects of tea extracts EGCG, GCG and ECG on melanoma cell B16 from mouse were studied in this paper. Cells were treated with different concentrations of GCG, ECG, EGCG and Arbutin, and their morphology was observed in an inverted microscope. The proliferation rate of B16 was determined using MTT method, tyrosinase activity was detected by using L-DOPA as substrate, and NaOH-lysis approach was employed to measure the melanin synthesis. The results showed that EGCG, ECG, GCG could significantly inhibit the melanogenesis and tyrosinase activity in cells B16 with a dose-dependent manner. The proliferation rate would be lower than 50% when the concentration was increased to 60 μg/mL. Compared with the control group, tyrosinase activities affected by the three substances were reduced by 26.67%, 27.27% and 32.71%, respectively, the melanin inhibition rates were all above 30%.In conclusion, tea extracts could efficiently inhibit melanogenesis. The inhibitory effect of GCG was best, followed by ECG, EGCG, and arbutin in turn.%为研究茶叶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)、没食子儿茶素没食子酸酯(gallocatechingallate,GCG)和表儿茶素没食子酸酯(epicatechingallate,ECG)对体外培养B16小鼠黑色素瘤细胞黑色素生成及酪氨酸酶活性的影响,分别用不同浓度的EGCG、GCG、ECG和熊果苷(Arbutin,AR)处理细胞,观察效应物对细胞形态的影响,用溴化二苯四偶氮法(MTT法)测定茶叶提取物对细胞增殖率的影响,以左旋多巴(L-DOPA)为底物,测定细胞内酪氨酸酶的活性,采用氢氧化钠裂解法测定细胞内黑色素的含量.结果显示,EGCG、ECG、GCG能显著抑制B16细胞的黑色素生成和酪氨酸酶的活性,且呈剂量依赖关系;当浓度为60μg/mL时,细胞增殖率均低于50%,酪氨酸酶活性与对照组相比分别降低了26.67%、27.27%和32.71%,黑色素生成抑制率均在30%以上.结果表明,茶叶提取物能通过多种途径抑制黑色素生成,且GCG的作用效果最优,ECG的作用效果次之,三者的作用效果均优于熊果苷的作用效果.【期刊名称】《湖南农业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(043)004【总页数】6页(P405-410)【关键词】茶叶提取物;表没食子儿茶素没食子酸酯;没食子儿茶素没食子酸酯;表儿茶素没食子酸酯;B16黑色素瘤细胞;黑色素生成;酪氨酸酶【作者】张向娜;林勇;黄建安;刘仲华;梁丹丹【作者单位】国家植物功能成分利用工程技术研究中心,湖南长沙 410128;湖南省植物功能成分利用协同创新中心,湖南长沙 410128;湖南农业大学园艺园林学院,湖南长沙 410128;国家植物功能成分利用工程技术研究中心,湖南长沙 410128;湖南省植物功能成分利用协同创新中心,湖南长沙 410128;湖南农业大学园艺园林学院,湖南长沙 410128;国家植物功能成分利用工程技术研究中心,湖南长沙 410128;湖南省植物功能成分利用协同创新中心,湖南长沙 410128;湖南农业大学园艺园林学院,湖南长沙 410128;国家植物功能成分利用工程技术研究中心,湖南长沙 410128;湖南省植物功能成分利用协同创新中心,湖南长沙 410128;湖南农业大学园艺园林学院,湖南长沙 410128;湖南农业大学园艺园林学院,湖南长沙 410128【正文语种】中文【中图分类】Q946.84+1健康、白皙的肌肤是东方女性理想的肌肤状态，而皮肤黑色素的含量及分布很大程度上影响着肌肤的呈色。
树突状细胞与黑色素瘤细胞体外共培养体系对小鼠黑色素瘤形成的影响
树突状细胞与黑色素瘤细胞体外共培养体系对小鼠黑色素瘤形成的影响郑云梅;和晨辰;王世忠;沈万秋;李海东【摘要】目的探讨树突状细胞(DC)与黑色素瘤细胞(B16)体外共培养后对小鼠黑色素瘤生长的影响.方法提取小鼠骨髓细胞,分化DC,培养至第6天,将细胞分为4组,脂多糖(LPS)组、聚肌胞[Poly(IC)]组、Melan-A抗原肽(Melan-A)组分别加入DC佐剂LPS(终浓度100 ng/mL)、Poly(IC)(终浓度20 ng/mL)、Melan-A抗原肽(终浓度5μmol/L)进行处理,未处理组未进行干预.采用流式细胞术检测DC成熟状态.B16细胞与培养第6天的DC共培养2 d.取C57BL/6J小鼠皮下注射B16细胞(8只),DC+B16细胞(8只),LPS(8只)、poly(IC)(8只)、Melan-A抗原肽激活(8只)的DC+B16细胞,接种B16细胞1周再接种DC+B16细胞(5只),对照组(3只)不接种细胞.于接种第14天取部分小鼠处死,取脾脏,镜下观察其组织形态,接种第28天测算肿瘤体积.结果LPS组、Poly(IC)组、Melan-A组成熟DC多于未处理组.接种DC+B16细胞的小鼠未见肿瘤生长;接种第28天,与接种B16细胞的小鼠比较,接种LPS、poly(IC)、Melan-A抗原肽激活的DC+B16细胞及接种B16细胞1周再接种DC+B16细胞的小鼠肿瘤体积减小(P均<0.05).与对照组比较,第14天接种DC+B16细胞小鼠脾脏滤泡结构无明显变化,而接种B16细胞及LPS、poly(IC)、Melan-A抗原肽激活的DC+B16细胞小鼠,脾脏滤泡结构增加.结论 DC与B16共培养的可抑制小鼠黑色素瘤的形成.%Objective To investigate the effect of co-culturing dendritic cells (DC)with melanoma cells (B16)on growth of melanoma in mice.Methods We extracted the bone marrow cells.Mouse DC were cultured for 6 days and then were divided into 4groups:lipopolysaccharide (LPS)group,Poly (IC)group,Melan-A group andthe control group. Cells in the LPS group,Poly (IC)group,Melan-A group were incubated with LPS (LPS with final concentration of 100 ng/mL),poly-inosinic-cytidylic acid [Poly(IC)with final concentration of 20 ng/mL]and Melan-A peptide (with final concentration of 5 μmol/L),respectively.The control group was not treated.Flow cytometry was used to study the matura-tion and activation state of DC.B16-F10 (B16)melanoma cells were co-cultured with DC for 2 days and then were used for inoculation of mice.For melanoma model,C57BL/6J mice were inoculated subcutaneously.Some mice were killed at 14 days after inoculation and their spleens were taken to study the structural changes by histochemistry.Tumor size was meas-ured at 28 days after inoculation.Results More mature DC were produced after LPS,Poly(IC)or Melan-A peptide treat-ment as compared with that of the control group (P <0.05).There was no tumor growth after DC +B16 cell inoculation. Compared with the mice inoculated with B16 cells only,the tumor volume was smaller in the mice inoculated with LPS,Po-ly(IC)or Melan-A peptide-activated DC +B16 cells or the mice inoculated with B16 cells one week later followed by an-other inoculation of DC +B16 cells (all P<0.05).Compared with the control group,there was no structural change of the spleen follicles in the mice inoculated with DC +B16,but the number of spleen follicles was increased in the mice inocula-ted with B16 or with LPS,Poly (IC),or Melan-A peptide-activated DC +B16 cells.Conclusion DC co-cultured with B16 can inhibit the growth of melanoma in mice.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2017(057)005【总页数】3页(P1-3)【关键词】黑色素瘤;树突状细胞;免疫治疗;小鼠【作者】郑云梅;和晨辰;王世忠;沈万秋;李海东【作者单位】天津医科大学基础医学院,天津 300070;天津医科大学药学院;天津医科大学基础医学院,天津 300070;天津医科大学药学院;天津医科大学基础医学院,天津 300070【正文语种】中文【中图分类】R739.5黑色素瘤恶性程度高，转移发生早，病死率高[1]。
小鼠皮下及肺转移肿瘤模型制备
小鼠皮下及肺转移肿瘤模型制备宋天姣;曹倩文;王娜;田雨;郑全辉【摘要】①目的经皮下和尾静脉注射，制备小鼠黑色素瘤细胞增殖、转移模型。
②方法体外培养黑色素瘤细胞，分别经腋部皮下和尾静脉注射接种C57BL／6小鼠，接种剂量分别为1×106／只和3×105／只，2周后观察黑色素瘤形成及肺部转移情况。
③结果黑色素瘤细胞注射2周后，经皮下接种的小鼠腋窝出现明显肿瘤，成瘤率达100％；经尾静脉注射的小鼠肺部出现大量黑色素瘤结节，肿瘤转移率达90％。
④结论经皮下和尾静脉注射方法能够成功制备小鼠的肿瘤细胞增殖和转移模型。
%Objective To prepare tumor proliferation and metastasis mouse models through sub‐cutaneous and tail vein injection of melanoma cells .Methods Melanoma cells (1 × 106/100uL )were subcutaneously injected into C57BL/6 mice from the axillary region to prepare the tumor proliferation mouse model;melanoma cells(3 × 105/100uL)were injected by tail vein to prepare the tumor metasta‐sis mouse model .Melanoma tumor formation and lung metastasis were detected 2 weeks after melano‐ma cell injection .Results The subcutaneously injected mice showed obvious melanoma formation in the axillary region and the tumor formation rate was 100% .The lung of tail vein injected mice showed apparent melanoma nodules and the tumor metastasis rate was 98% .Conclusion Tumor proliferation and metastasis mouse models can be successfully prepared by subcutaneous and tail vein injection of melanoma cells .【期刊名称】《河北联合大学学报（医学版）》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】2页(P1-2)【关键词】肿瘤细胞;黑色素瘤;增殖;转移【作者】宋天姣;曹倩文;王娜;田雨;郑全辉【作者单位】华北理工大学河北唐山 063000;华北理工大学河北唐山 063000;华北理工大学河北唐山 063000;华北理工大学河北唐山 063000;河北省慢性疾病重点实验室【正文语种】中文【中图分类】Q784[ABSTRACT] Objective To prepare tumor proliferation and metastasis mouse models through subcutaneous and tail vein injection of melanoma cells.Methods Melanoma cells(1×106/100uL)were subcutaneously injected into C57BL/6 mice from the axillary region to prepare the tumor proliferation mouse model;melanoma cells(3×105/100uL)were injected by tail vein to prepare the tumor metastasis mouse model.Melanoma tumor formation and lung metastasis were detected 2 weeks after melanoma cell injection.Results The subcutaneously injected mice showed obvious melanoma formation in the axillary region and the tumor formation rate was 100%.The lung of tail vein injected mice showed apparent melanoma nodules and the tumor metastasis rate was 98%.Conclusion Tumor proliferation and metastasis mouse models can be successfully preparedby subcutaneous and tail vein injection of melanoma cells.[KEY WORDS] Tumor cell metastasis.Melanoma.Proliferation.Transfer目前恶性肿瘤已成为一类严重威胁人类健康的多发病和常见病，其发病机制仍未完全阐明，对肿瘤有效的治疗措施还处在不断探索之中。
姜黄素对黑色素瘤B16-F10细胞增殖及线粒体凋亡影响的机制研究
材 料 与 方 法
平研 究姜 黄 素 对 细胞 活 力 、 细胞 内活 性 氧 水平 、 胞 凋 亡 的影 响 。 结 果 ： 黄 素 细 姜
能显 著抑 制 Ｂ ６一Ｆ０细 胞 增 殖 、 进 其 １ １ 促
线 粒 体 凋 亡
ｄ ｉ １ ． ９ ９ ｊ ｉ ｎ １ ０ —６ ４ ． ０ ２ ｏ：０ ３６ ／．ｓ ． ０ ７ ｓ １ｘ ２１．
１ １０ 辽 宁 医学 院 （ 州 市 ） ２０ １ 锦 摘 要 目的 ： 讨 姜 黄素 体 外抗 黑 色 素 探
结论 ： 黄 素 对 黑 色素 瘤 具 有 显 著 抑 制 作 姜
用 ［ 其可 能的 机制 是 通过 提 高细胞 内
，
瘤的药效及作用机制 ， 为姜 黄 素抗 肿 瘤 的 药理 机 制 提 供 实验 依 据 。方 法 ： 黑 色素 以
４ Ｗ ｌ ｚ ｎ ｓ Ｍ ， ａ ｅ Ｉ ｉ ｙ ｋ ｉ Ｊ ｃ ｋ Ｒ． ｍｍ ｎ ｌｇ ｃ ｌ ｎ ｌ ｃ ｕ ｏｏ ｉａ ａ— ａ
ｏ ｙｂ ｔ ｅ ｌ ｇａ ｅ ｊ ｔ ｎ， ｅ ｒｎ ａ ｇ ｅ ｅ ｎ ａ ｏ ｒｆ ｒ ｅ ｉ ｒ ｕ ｒ ｔ — ｗ ｌ ｔ ｃｏ ｅ ｅ
ａｓ ｒＪ ． ｉ Ｅ ｄｃ ｏ ｅａ ，０ ６， ｎｗ ｅ［］ ＪＣｌ ｎ ｏｒｎｌ ｔｂ ２０ ｎ ｉ Ｍ
９１： ５ ０—２ ０ ２ ０ ５ ２．
ｆｉ ｄｐｅｎｎｉｓ Ｊ ． ｕ Ｒ ｅｒｄ ２ ０ ， ａｅ ｒｇａｃｅ ［ ］ Ｈ ｍ ｐｏ ，０ ３ ｌ
１ １ ４ —１ ３ ． ８： ７２ ７ ２
姜 黄 素 对 黑 色 素 瘤 Ｂ ６一Ｆ ０细 胞 增 殖 及 线 粒 体 凋 亡 影 响 的 机 制 研 究 １ １
GHK对B16细胞内黑色素合成的抑制作用
GHK对B16细胞内黑色素合成的抑制作用王昭维;王惠嘉;高恩;赵金礼;杨小琳【摘要】为探讨甘氨酰组氨酰赖氨酸(GHK)对细胞内黑色素合成的抑制作用以及可能的作用机制,为GHK作为美白化妆品的添加剂提供试验依据,采用液相合成方法制备GHK,研究GHK对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用及对小鼠B16黑素瘤细胞(B16)增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响.结果表明,GHK在质量浓度低于5 g/L时,在培养过程中B16细胞的增殖并没有受到影响,且随着GHK浓度的提高,对B16细胞内的酪氨酸酶活性及黑色素合成均呈现质量浓度依赖性的抑制作用.说明GHK对B16细胞内黑色素的合成具有显著的抑制作用,是一种高效的黑色素合成抑制剂,在美白化妆品中具有良好的应用潜力.【期刊名称】《香料香精化妆品》【年(卷),期】2019(000)003【总页数】5页(P29-32,44)【关键词】化妆品添加剂;甘氨酰组氨酰赖氨酸;黑色素合成;酪氨酸酶【作者】王昭维;王惠嘉;高恩;赵金礼;杨小琳【作者单位】陕西慧康生物科技有限责任公司,陕西西安 710000;陕西慧康生物科技有限责任公司,陕西西安 710000;陕西慧康生物科技有限责任公司,陕西西安710000;陕西慧康生物科技有限责任公司,陕西西安 710000;陕西慧康生物科技有限责任公司,陕西西安 710000【正文语种】中文胜肽的生物学活性取决于其氨基酸组成和序列。
人体内各种生理进程几乎都是由特定的氨基酸序列组成的多肽或者蛋白质调控的。
在与皮肤护理相关的自然进程中，肽起着重要的作用，如细胞增殖、细胞迁移、炎症、血管发生、色素形成和蛋白合成及调控等[1-3]。
甘氨酰组氨酰赖氨酸（GHK）是1973年由Pickart等人首先从人血浆中分离得到的一种三肽。
GHK和二价铜离子有很强的亲和力，能自发形成络合物（GHK - Cu）[4]。
有关研究表明，GHK及GHK - Cu能改善血液循环，促进神经和神经营养因子的合成，具有抗氧化、抗炎症、治疗癌症等作用[5- 6]，同时GHK在皮肤再生中也发挥着重要作用 [7- 8]，但GHK对细胞中黑色素合成的影响尚未被人们所认识。